硒对心脏移植大鼠外周血单个核细胞免疫分子、基因表达的影响

 目的探讨微量元素硒对大鼠异体异位心脏移植后免疫排斥反应过程中免疫分子和基因表达的影响。方法大鼠分为对照及药物干预组。干预组分别于心脏移植术前后每天灌胃给予硒(40μg·kg^-1)及环孢素A(15mg·kg^-1),对照组给予同等体积生理盐水。3组分别在移植术前及术后1,3,7,10和12d取外周血,分离单个核细胞(PBMC)。荧光单克隆抗体(mAb)标记,流式细胞仪检测MHC-Ⅱ,CD4,CD8,IL2-R和ICAM-Ⅰ免疫分子表达水平。荧光基因差异显示分析法检测多基因表达水平。国际器官移植排斥反应病理诊断标准对移植心肌组织进行病理分级。结果①对照组移植心脏存活率于术后3d时下降,7～12d急剧下降;硒组移植心脏存活率术后7d时下降,10～12d存活率为43%;环孢素A组术后3d移植心脏存活率下降50%,12d时为30%。②对照组及环孢素A组术后24h移植心肌组织分别有12.5%和33.3%发生Ⅱ级以上病理损伤,硒组术后7d出现Ⅱ级以上病理损伤。③与对照组比较,心脏移植术前后,硒对PBMC表面免疫分子MHC-Ⅱ,CD8,IL-2R及ICAM-Ⅰ的表达均有抑制作用(P<0.05或P<0.01),环孢素A对IL-2R有较强的抑制作用。④硒及环孢素A对心脏移植术后2,3-bis-phosphoglycerate的mRNA表达均有抑制作用。与对照组比较,硒对gig18的mRNA为负调表达,环孢素A为正调表达。结论微量元素硒可能通过调节2,3-bisphosphoglycerate和gig18等细胞代谢和凋亡相关基因的转录,抑制PBMC表面免疫分子MHC-Ⅱ,CD8,IL-2R和ICAM-Ⅰ的表达,从而对心肌细胞起到保护作用,提高大鼠移植心脏存活率。     

环孢素A，庆大霉素和硒制剂对大鼠外因淋巴细胞分子和基因表达的影响

 目的为比较环孢素A，庆大霉素和硒制剂对细胞免疫功能的不同影响，本实验观察了大鼠短期服用环孢素A，庆大霉素和硒制剂后外周血多种淋巴细胞分子和基因的表达水平变化，并对3组药物进行了对比。方法将24只大鼠分为4组，分别ig给药。于第3天取血并分离淋巴细胞。用荧光单克隆抗体(mAb)标记淋巴细胞分子并提取淋巴细胞总RNA。流式细胞仪检测淋巴细胞分子MHC-Ⅱ，CD4，CD8，ICAM-Ⅰ和IL2-R的表达水平，基因差异显示分析法检测多基因表达水平。免疫组化法检测各组心肌组织中CD4⁺，CD8⁺淋巴细胞数。结果与对照组相比，环孢素A，庆大霉素和硒制剂都抑制淋巴细胞分子ICAM-I，CD4和CD8的表达，同时3组心肌组织中CD4⁺和CD8⁺淋巴细胞数降低，心肌组织中CD4⁺淋巴细胞数与CD4分子表达水平明显正相关(P＜0.000 1)。3组的细胞分子表达和心肌淋巴细胞数的降低程度依次为环孢素A＞庆大霉素＞硒制剂。不同的是，环孢素A还负调MHC-Ⅱ和IL2-R的表达水平，而庆大霉素却正调MHC-II和IL2-R的表达，硒制剂负调MHC-Ⅱ，正调IL2-R的表达。3组都表现出对凋亡基因gig18和一个450 bp左右的待测基因的正调表达。结论①短期服用环孢素A，庆大霉素和硒制剂，都抑制大鼠外周血淋巴细胞对ICAM-I，CD4和CD8等细胞分子的表达，但抑制程度不同；②三者对淋巴细胞MHC-II和IL2-R的表达调控具有明显差异；③三者都正调淋巴细胞凋亡基因gig18的表达。     

环孢素对心脏移植大鼠外周血淋巴细胞多基因mRNA表达的影响

 目的 对大鼠心脏移植前后不同时间点外周血淋巴细胞mRNA差异表达的研究,探讨环孢素对免疫排斥反应过程中基因表达的影响.方法 心脏移植前后以15 mg·kg^-1·d^-1环孢素灌胃的大鼠,分别在移植前、移植后24,72 h,7,10,12d取血,提取总RNA,用mRNA差异显示法找出差异表达条带,克隆测序,用灰度扫描法计算差异表达基因的比密度。结果 对照组移植心脏存活率于移植后的10d内降至为0%,而此阶段环孢素组的移植心脏存活率始终保持在50％.移植后第10天,对照组与凋亡信号传导和线粒体蛋白构象重构与蛋白转运相关基因Ribosomal—12S和S25,MHC—Ⅲ(Hst-70)的表达水平显著高于移植前,与移植心脏存活率最低点同步.其2,3-bisphosphoglycerate和gig18基因表达水平的变化无统计学意义。环孢素组与细胞凋亡有关的gig18和Thbsl,以及T细胞受体(TCR)等基因的表达水平于移植后10 d内持续低于移植前,2,3-bisphosphoglycerate基因的表达水平于移植后24 h降低,只有钠通道β-1基因的表达水平于移植后10 d内高于移植前。结论 环孢素可负调心脏移植后大鼠外周血淋巴细胞凋亡相关基因gig18和Thbsl,正调钠通道基因的转录。     

左旋咪唑诱导实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脊髓内单个核细胞上CD4，CD28和CD152表达的实验研究

目的观察左旋咪唑（LMS）对实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）大鼠脊髓肉单个核细胞上CD4,CD28和CD152表达的影响,并探讨LMS诱发炎性脱髓鞘白质脑病发病机制。方法采用流式细胞术检测EAE大鼠脊髓单个核细胞上CD4，CD28和CD152的表达水平。结果LMS同时给药组和预处理的EAE组大鼠脊髓内单个核细胞上CD4和CD28的表达水平，均明显高于非LMS处理的EAE模型组。结论LMS能促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞上CD4和CD28的表达，提示LMS上调CD4和CD28的表达与可能LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病有关。     

苏木乙酸乙酯提取物对大鼠慢性排斥移植心脏心肌生长因子含量的影响

目的:通过观察苏木提取物对心脏移植模型大鼠心肌病理形态学及生长因子表达的影响,探讨苏木提取物对慢性排斥反应的作用机理,为从中药学中研发出新型的免疫抑制剂奠定工作基础。方法:应用改良Ono术式行大鼠腹腔心脏移植,结合Cs A灌胃建立心脏移植慢性排斥动物模型。选择移植心脏跳动良好的大鼠随机分为3组。苏木组予苏木乙酸乙酯提取物溶液灌胃;环孢素组予Cs A溶液灌胃;模型对照组按体质量计算予等体积橄榄油灌胃,连续灌胃7 d后取下移植心脏。观察移植术后受体的一般情况,移植心脏收缩力情况,移植心脏心肌病理形态学改变,并进行慢性排斥反应诊断分级;采用Real-time-PCR法检测各组大鼠移植心脏心肌生长因子PDGF-A、VEGF-C、FGF-1、FGF-2的基因表达水平。结果:与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组PDGF-A的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);苏木组和环孢素A组移植心脏心肌组织PDGF-A的表达水平相当,差异无统计学意义(P0.05);与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组VEGF-C的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);苏木组和环孢素A组移植心脏心肌组织VEGF-C的表达水平相当,差异无统计学意义(P0.05);与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组FGF-1的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);与苏木组相比,环孢素A组FGF-1的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。与模型对照组相比,苏木组和环孢素A组FGF-2的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05);与苏木组相比,环孢素A组FGF-2的表达水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论:苏木乙酸乙酯提取物能降低大鼠慢性排斥模型移植心肌PDGF-A、VEGF-C的基因表达,作用与Cs A相当。苏木乙酸乙酯提取物能降低大鼠慢性排斥模型移植心肌FGF-1、FGF-2的基因表达,作用不及Cs A。     

左旋咪唑诱导实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠脊髓内单个核细胞上CD4,CD25和CD152表达的实验研究

目的 观察左旋咪唑(LMS)对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)大鼠脊髓内单个细胞上CD4,CD28和CD152表达的影响,并探讨LMS诱发炎性脱髓鞘白质脑病发病机制.方法 采用流式细胞术检测EAE大鼠脊髓单个核细胞上CD4,CD28和CD152的表达水平.结果 LMS同时给药组和预处理的EAE组大鼠脊髓内单个核细胞上的CD4和CD28的表达水平,均明显高于非LMS处理的EAE模型组.结论 LMS能促进EAE大鼠脊髓内单个核细胞上CD4和CD28的表达,提示LMS上调CD4和CD28的表达与可能LMS诱发的炎性脱髓鞘白质脑病有关.     

二黄胶囊对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠中枢神经系统细胞因子和淋巴细胞亚群免疫组化表达的影响

目的: 观察大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis, EAE)模型脑、脊髓组织转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)免疫组化和T淋巴细胞亚群的表达,比较二黄方两种剂型(汤剂、胶囊剂)作用差异。 方法: 用髓鞘碱性蛋白(Myelin Basic Protein,MBP)免疫Lewis大鼠诱导EAE模型,随机分为正常组、模型组、泼尼松组、二黄汤组及二黄胶囊组,分别于免疫后15 d(急性期发病)和免疫后27 d(缓解期)随机选取各组大鼠,取脑和脊髓组织切片进行IFN-γ,TGF-β,MMP-9,CD4⁺,CD8⁺,CD3⁺,CD19⁺免疫组化染色。 结果: 与模型组比,二黄汤(免疫后27 d)和二黄胶囊(免疫后15 d和27 d)显著提高脑组织TGF-β表达;二黄汤和胶囊均能显著降低免疫后15 d,27 d脑和脊髓组织IFN-γ,MMP-9表达。二黄汤、二黄胶囊组免疫后15 d,27 d脑和脊髓组织IFN-γ、免疫后15 d脑和脊髓组织MMP-9表达降低作用强于泼尼松组。与模型组比,二黄汤组免疫后15 d、27 d 脑组织CD4⁺表达显著降低、CD8⁺表达显著升高,CD4⁺/CD8⁺显著降低,免疫后15 d CD19⁺表达降低;二黄胶囊组除免疫后15 d脑组织CD8⁺与模型组无显著差异外,其他均同二黄汤组。与模型组比,二黄汤组免疫后15 d、27 d脊髓组织CD4⁺表达显著降低、CD8⁺表达显著升高,CD4⁺/CD8⁺显著降低,二黄胶囊组免疫后15 d,脊髓组织CD4⁺表达显著降低、CD8⁺表达显著升高,CD4⁺/CD8⁺显著降低,27 d CD4⁺表达显著降低、CD4⁺/CD8⁺显著降低。二黄汤和二黄胶囊组间比较无显著差异。 结论: 二黄汤、二黄胶囊可上调EAE大鼠中枢神经系统TGF-β表达,作用同泼尼松。两者均可显著降低脑和脊髓组织IFN-γ、MMP-9表达,作用优于泼尼松。二黄汤、胶囊均可降低CD4⁺表达、升高CD8⁺表达,改善CD4⁺/CD8⁺比值。二黄方对上述指标的影响,可能是其减轻EAE神经损伤,改善患者临床症状的部分机理所在。     

苏木乙酸乙酯提取物对大鼠心脏移植慢性排斥模型血清IL-1O水平的影响

目的：通过观察苏木乙酸乙酯提取物对大鼠同种异位心脏移植慢性排斥反应血清中IL-10水平的影响,为进一步探讨苏木乙酸乙酯提取物对慢性排斥反应的作用机制奠定工作基础。方法：以Wistar大鼠为供体,以SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型。将手术成功后连续灌服21天环孢素A的大鼠,随机分为对照组、苏木组、环孢素A组,对照组按体质量计算等容量橄榄油灌胃;环孢素A组按12mg／kg／d环孢素A溶于橄榄油给药;苏木组按含生药量1．15g／kg／d溶于橄榄油中给药。灌胃7天后采血,用ELISA法检测血清中IL-10的含量。结果表明：1）与对照组相比,环孢素A组与苏木组血清中IL-10的含量明显增高（P〈0．01,P〈0．05）。2）环孢素A组与苏木组相比有显著差异（P〈0．01）。结论：苏木乙酸乙酯提取物能够升高移植心脏的大鼠血清IL-10的含量,这可能是抗慢性排斥反应的原因之一。     

苏木有效成分免疫抑制作用的实验研究

目的:探讨苏木提纯物对淋巴细胞转化功能的影响及抗心脏移植急性排斥反应的机制。方法:用两种苏木提纯物给小鼠灌胃8d,取脾后应用MTT法测定T、B淋巴细胞的增殖情况;建立大鼠腹腔同种异位心脏移植模型。供体雄性Wistar大鼠,受体雄性SD大鼠,分别设模型对照组、环孢素A组和苏木乙酸乙酯提取物组。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定移植心脏心肌组织FasL mRNA的表达情况。结果:苏木乙酸乙酯提取物35g/kg组具有较强的抑制淋巴细胞增殖的作用;在抑制心脏移植后FasL mRNA相对量表达水平方面,苏木乙酸乙酯提取物组与对照组相比有显著性差异,与环孢素A组相比无显著性差异。结论:苏木乙酸乙酯提取物有较强的免疫抑制作用,具有良好的开发前景。     

苏木乙酸乙酯提取物对大鼠心脏移植慢性排斥模型血清IL-10水平的影响

目的:通过观察苏木乙酸乙酯提取物对大鼠同种异位心脏移植慢性排斥反应血清中IL-10水平的影响,为进一步探讨苏木乙酸乙酯提取物对慢性排斥反应的作用机制奠定工作基础。方法:以Wistar大鼠为供体,以SD大鼠为受体,建立大鼠腹腔异位心脏移植模型。将手术成功后连续灌服21天环孢素A的大鼠,随机分为对照组、苏木组、环孢素A组,对照组按体质量计算等容量橄榄油灌胃;环孢素A组按12 mg/kg/d环孢素A溶于橄榄油给药;苏木组按含生药量1.15g/kg/d溶于橄榄油中给药。灌胃7天后采血,用ELISA法检测血清中IL-10的含量。结果表明:1)与对照组相比,环孢素A组与苏木组血清中IL-10的含量明显增高(P0.01,P0.05)。2)环孢素A组与苏木组相比有显著差异(P0.01)。结论:苏木乙酸乙酯提取物能够升高移植心脏的大鼠血清IL-10的含量,这可能是抗慢性排斥反应的原因之一。     

环孢素A对小鼠髓源性树突状细胞的影响

 目的研究环孢素A(CsA)对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)的影响。方法以小鼠BMDC为对象,在其培养过程中加入不同质量浓度的CsA(0,0.5和1 mg·L^-1)、脂多糖(LPS)诱导细胞成熟,流式细胞分析其免疫表型的改变,氚-胸腺嘧啶核苷(³H-TdR)掺入法和ELISA法检测其刺激同种T细胞增殖能力和分泌细胞因子等功能变化。结果CsA处理后的树突状细胞(DC),其表面共刺激分子CD80,CD86表达下调,抑制性分子B7-DC表达进一步上调,而另一抑制性分子B7-H1表达无明显变化,该DC刺激同种T细胞增殖能力下降,TNF-α和IL-12P70分泌降低,IL-10分泌增加。结论在BMDC的分化过程中,CsA能直接作用于DC,使其具有不成熟DC的特性,该DC可以诱导免疫耐受,这种作用是通过共刺激分子CD80,CD86表达下调和抑制性分子B7-DC表达上调实现的。     

黄连素合用环孢素A对小鼠皮肤移植排斥反应的影响

目的观察黄连素合用环孢素A抗同种异体小鼠皮肤移植排斥反应的影响,探讨其作用机制。方法以BALB/c小鼠为供体,以C57BL/6小鼠为受体,采用背-背皮肤移植手术法制备模型。将受体小鼠按随机数字表法分为模型组、黄连素组、环孢素A组、联合组,每组20只;另取20只健康C57BL/6小鼠作为假手术组。造模后黄连素组小鼠腹腔注射黄连素100 mg/kg,环孢素A组小鼠腹腔注射环孢素A注射液10 mg/kg,联合组腹腔注射黄连素100 mg/kg及环孢素A注射液5 mg/kg,假手术组和模型组小鼠腹腔注射等体积0.5%羧甲基纤维素钠。1次/d,连续10 d。记录受体小鼠移植皮片的存活时间;采用ELISA法检测血浆Th1类细胞因子[IL-2、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)]和Th2类细胞因子(IL-4、IL-10)水平;采用流式细胞术检测脾脏T淋巴细胞亚群CD4+CD25+比例。结果与模型组比较,各给药组受体小鼠移植皮片的存活时间延长(P<0.01);联合组移植皮片存活时间较黄连素组或环孢素A组延长(P<0.01)。与模型组比较,联合组血浆IL-2[(11.55±3.14)pg/ml比(19.85±2.42)pg/ml]、IFN-γ[(26.41±6.20)pg/ml比(57.23±10.15)pg/ml]水平降低,IL-4[(192.45±70.12)pg/ml比(61.09±21.61)pg/ml]、IL-10[(106.79±27.83)pg/ml比(40.08±11.23)pg/ml]水平升高(P<0.05),脾脏CD4+CD25+调节性T细胞比例[(7.65±2.42)%比(3.69±0.83)%]升高(P<0.01)。结论黄连素合用环孢素A通过促使Thl向Th2细胞的偏移、诱导免疫耐受、刺激CD4+CD25+调节性T细胞的表达等途径,抑制同种异体小鼠的皮肤移植排斥反应。     

环孢素与他克莫司对肾移植术后患者IL-2,IL-4蛋白表达的影响

 目的研究钙调酶抑制剂环孢素(CsA)与他克莫司(tacrolimus)对肾移植术后患者细胞因子IL-2,IL-4蛋白表达的影响。方法分离血浆,利用双抗体夹心ABC-ELISA法测定患者血浆中细胞因子IL-2和IL-4的蛋白表达量。结果CsA服药前后可明显降低IL-2的蛋白表达水平[(263.43±64.50)和(228.99±78.84 ng·L^-1],明显增加IL-4的蛋白表达水平[(54.78±17.40)和(61.44±13.22)ng·L^-1(P<0.05)];他克莫司对IL-2[(162.79±60.56)和(164.59±68.66)ng·L^-1]和IL-4[(50.73±7.07)和(53.36±9.17)ng·L^-1]无明显影响(P>0.05),但他克莫司对细胞因子IL-2与IL-4的抑制能力较CsA强,且服用CsA的个体差异比他克莫司明显;两用药组血药浓度与IL-2,IL-4均无相关性。结论CsA和他克莫司可以通过同时影响细胞因子IL-2和IL-4的蛋白表达发挥免疫抑制作用,而且他克莫司比CsA能更好地抑制肾移植患者的机体免疫,安全性也较CsA好。     

强肌健力口服液对大鼠肝移植术后IL-2和IL-10的影响

目的：探讨强肌健力口服液对大鼠肝移植术后受体的白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-10（IL-10）的影响。方法：应用二袖套技术建立大鼠原位肝移植模型80只,并将其分为强肌健力口服液（QJJL）组、环孢素A（CsA）组和QJJL＋CsA组和未治疗组（对照组）各20只;用双抗体夹心ABC—ELISA法和逆转录多聚酶链反应（PCR）技术,对术前及术后不同时相点采集的各组大鼠外周血的IL-2、IL-10水平及受体肝组织内的IL-2mRNA、IL-10mRNA进行检测,对结果进行比较。结果：外周血IL-2、IL-10水平检测显示：QJJL组、CsA组和QJJL＋CsA组的IL-2和IL-10的术前含量低于术后各时相,但差异无显著性意义（P〉0．05）;对照组术后5天血清IL-2的含量明显高于术前和治疗组（P〈0．05）,IL-10术后5天的含量明显低于术前和各治疗组（P〈0．05）。PCR检测显示：各治疗组的IL-2 mRNA的表达明显低于对照组（P〈0．01）;IL-10 mRNA在各治疗组的表达显著高于对照组（P〈0．01）。各治疗组的急性排斥反应的发生率明显低于对照组（P〈0．05,P〈0．01）。结论：IL-2和IL—10的基因表达与大鼠肝移植术后的免疫反应有关,强肌健力口服液联合免疫抑制剂有助于移植大鼠术后免疫紊乱的防治。     

黑睛排斥汤防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的机理研究

目的探讨黒睛排斥汤在大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中作用的机理。方法角膜缝线法诱导角膜新生血管,建立大鼠高危角膜移植模型,随机分为A组(模型对照),B组(灌服黒睛排斥汤4 g/(kg.d)),C组(灌服黒睛排斥汤4 g/(kg.d)+CsA 10 mg/(kg.d))。行封闭群大鼠SD-Wistar组间同种异体全板层角膜移植,观察植片存活状况;应用流式细胞分析,免疫荧光组织化学等方法对受体局部和全身免疫状态机制进行检测。结果 1.角膜植片存活时间:A组(10.38±1.69)d,B组(13.00±2.03)d,C组(22.50±3.07)d,3组比较差异有统计学意义(P<0.01)。2.外周血淋巴细胞CD4+和CD8+亚群:术后7 d,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+各组之间比较均无明显差别(P>0.05);术后14 d,C组CD4+、CD4+/CD8+与A组比较明显降低(P<0.05);术后21 d,B、C组CD4+、CD4+/CD8+与A组比较明显降低(P<0.05),但各组CD8+比较无明显差异(P>0.05)。3.ConA诱导的脾淋巴细胞的增殖:B组、C组脾T淋巴细胞的增殖被明显抑制,与A组比较差异有统计学意义(P<0.01),其中以C组更为明显。结论黒睛排斥汤对高危角膜移植排斥反应模型大鼠术后免疫排斥反应的抑制作用主要是通过抑制T淋巴细胞的增殖来实现的。     

中药安胎养血合剂对肾移植大鼠IL-2的影响

目的:研究中药安胎养血合剂(Antai YangxueMixture,ATYXM)对肾移植大鼠存活时间和血IL-2(白介素2)的影响,探讨ATYXM免疫抑制作用的可能机制。方法:建立大鼠异体肾移植急性排斥反应模型(SD→Wistar),随机分为4组,每组12只。Ⅰ组,生理盐水对照组(NS组),NS灌胃10mg/(kg.d)。Ⅱ组,ATYXM组,中药灌胃10mL/(kg.d)。Ⅲ组,CsA(cyclosprorine,CsA)组,CsA灌胃10mg/(kg.d)。Ⅵ组,中西医结合组,中药和CsA灌胃,中药10mL/(kg.d)、CsA2.5mL/(kg.d),两者间隔30min。观察各组肾移植大鼠的存活时间,术后第6天取血测定血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的水平,酶联免疫法(ELISA)检测受体鼠血IL-2水平。结果:ATYXM可以延长受体鼠的存活时间,降低受体鼠血IL-2水平,对移植肾功能具有保护作用,并与低剂量CsA产生显著的协同效应。结论:ATYXM免疫抑制作用机制可能是抑制Th1细胞产生IL-2。