咖啡酸对高同型半胱氨酸引起的小鼠软脑膜细静脉内白细胞滚动和黏附的抑制作用

目的:研究咖啡酸(CA)对同型半胱氨酸(Hcy)引起的小鼠软脑膜细静脉内滚动和黏附白细胞的抑制作用。方法:取雄性C576J/BL小鼠(体重18~22g)分成3组,每组5只,Hcy组皮下注射Hcy(0.1mg/g体重)0.2ml,Hcy+CA组皮下注射Hcy(0.1mg/g体重)0.1ml后即刻肌肉注射CA(10mg/kg体重)0.1ml,Control组皮下注射生理盐水0.2ml,4h后采用研磨法建立脑非创伤性观察窗,用动态微循环观察系统观测各组小鼠软脑膜细静脉内滚动和黏附的白细胞数量。之后取脑组织,石蜡切片,用免疫组织化学方法观察脑皮层组织中微血管内皮细胞E-选择素(E-selectin)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达。结果:与Control组相比,Hcy组小鼠软脑膜细静脉内滚动和黏附的白细胞数量显著增加(P<0.01),且脑皮层微血管内皮E-selectin及ICAM-1的阳性区域也增加。Hcy+CA组小鼠软脑膜细静脉内白细胞的滚动和黏附数量明显少于Hcy组(P<0.05),微血管内皮的E-selectin及ICAM-1表达也明显下调。结论:CA可以抑制Hcy引起的小鼠软脑膜细静脉内白细胞的滚动和黏附,该作用与其抑制脑微血管内皮E-selectin及ICAM-1的表达有关。     

环状RNA hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞凋亡中的作用

背景：同型半胱氨酸水平上升会诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡，但机制尚不清楚。目的：探讨hsa-circ-0001360在同型半胱氨酸诱导人脐静脉内皮细胞发生凋亡中的作用。方法：体外培养人脐静脉内皮细胞，将其分为对照组、同型半胱氨酸组、干扰对照组、干扰对照+同型半胱氨酸组、干扰hsa-circ-0001360组、干扰hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组、过表达对照组、过表达对照+同型半胱氨酸组、过表达hsa-circ-0001360组和过表达hsa-circ-0001360+同型半胱氨酸组，同型半胱氨酸的干预浓度均为100μmol/L。干预细胞72 h后，应用Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达；流式细胞仪检测细胞的凋亡率；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-circ-0001360的表达水平。结果与结论：(1)与对照组相比，同型半胱氨酸组人脐静脉内皮细胞中Caspase-3和Bax的表达明显升高(P <0.01),Bcl-2的表达明显降低(P <0.01)，细胞凋亡率明显增高(P <0.01)；(2...     

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的:研究同型半胱氨酸(Hcy)对培养的人脐静脉内皮细胞(hUVEC)凋亡的影响。方法:原代培养hUVEC,通过Hoechst 33258荧光染色观察细胞核形态改变,琼脂糖凝胶电泳检测 DNA片段,流式细胞术检测Annexin V/PI联合标记的细胞凋亡率, Western blot检测P53、Bax的表达及比色法测定caspase 3活性。 结果: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC出现明显的凋亡形态学改变。琼脂糖凝胶电泳检测可见明显的"DNA ladder"图谱。Hcy诱导凋亡细胞数明显增加。同时促进Bax、P53的表达,使caspase 3活性显著增强。结论: 同型半胱氨酸诱导培养的hUVEC凋亡。     

益脑通络胶囊对大鼠白细胞黏附和血液流变性的影响

目的 研究“益脑通络胶囊”对大鼠白细胞黏附和血液流变性的影响。方法 从大鼠静脉内注射内毒素后30min、1、2h，通过微循环显微摄像技术，观察、记录、分析微循环的变化，2h后各剂量组和正常组经快速心脏取血5ml，进行血液流变学检测。结果 内毒素能引起白细胞黏附和内皮损伤，而益脑通络各剂量组对内毒素引起白细胞黏附和内皮损伤有预防作用，并且益脑通络胶囊可显著降低大鼠的全血黏度和红细胞聚集指数。结论 益脑通络胶囊能改善微循环，其作用机理主要与改善血液流变性、血液流态和抑制内毒素诱导的白细胞黏附有关。     

高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡的机制研究进展

目的探讨和研究高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡的机制,及其对高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡起协同作用的因素,和加剧或缓解高同型半胱氨酸诱导的神经细胞凋亡的因素。方法对近年来的有关文献进行分析,归纳。结论高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡的机制,及其对高同型半胱氨酸诱导神经细胞凋亡起协同作用的因素,和加剧或缓解高同型半胱氨酸诱导的神经细胞凋亡的因素值得进一步探讨和研究。     

羟乙基淀粉130／0．4对脂多糖诱导大鼠肠系膜微循环障碍的改善作用

目的探讨羟乙基淀粉（Hydroxyethyl Starch，HES）130／0．4后投入对脂多糖诱导大鼠肠系膜微循环障碍的改善作用。方法连续输注脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）2mg／kg 60 min建立大鼠微循环障碍模型。在LPS输注30min后，经颈静脉连续输注生理盐水或HES 15 ml／（kg·h），至60min结束。用活体微循环观测技术，观察肠系膜细静脉血管内径和红细胞流速、滚动和黏附白细胞数、细静脉白蛋白漏出的动态变化和血管外周肥大细胞脱颗粒。用流式细胞仪测定大鼠外周血粒细胞黏附分子CD11b和CD18的表达。结果LPS在不影响血压的情况下，显著增加了细静脉内白细胞滚动和黏附数目、血浆白蛋白漏出和肥大细胞脱颗粒率，降低了细静脉红细胞流速。输注HES，可以明显改善LPS诱导的上述变化。结论HES后投入可以明显改善LPS引起的微循环障碍。     

同型半胱氨酸促进内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α

单核细胞迁入动脉内皮下问隙是动脉粥样硬化(AS)发生的早期事件。巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)对单核细胞有趋化作用。高同型半胱氨酸血症是AS的一个独立危险因子。我们观察同型半胱氨酸(HCY)是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)表达MIP-1α,探讨HCY在AS形成中的作用。     

同型半胱氨酸硫内酯-内质网应激途径促进HUVECs黏附

目的探讨同型半胱氨酸硫内酯(HTL)通过内质网应激途径促人脐静脉内皮细胞(HUVECs)黏附的可能机制。方法取HTL处理的大鼠胸主动脉,检测NF-κB p65的表达;用Western blot检测HUVECs中HTL,分别对其进行时效与量效处理后,所谓检测内质网应激蛋白Bip和Chop及黏附蛋白VCAM-1和ICAM-1的表达,以及内质网应激激动剂与抑制剂对HTL诱导的HUVECs黏附因子表达的影响;用"STRING"预测Bip(HSPA5)和Chop(DDIT3)与黏附因子VCAM-1和ICAM-1的相互作用。结果 HTL诱导大鼠胸主动脉血管的内皮细胞NF-κB p65表达,促HUVECs的内质网应激蛋白Bip和Chop及黏附因子VCAM-1和ICAM-1的表达(P0.05),内质网激动剂上调HTL对黏附因子的表达,内质网抑制剂抑制HTL对黏附因子的表达(P0.05);"STRING"软件预测内质网应激蛋白Bip和Chop与黏附因子VCAM-1和ICAM-1具有相互作用。结论 HTL可能通过内质网应激途径促进HUVECs黏附。     

同型半胱氨酸对培养内皮细胞损伤的研究

目的:本研究拟探讨同型半胱氨酸对培养人脐静脉内皮细胞的损伤效应,以揭示同型半胱氨酸致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将人脐静脉内皮细胞暴露于不同浓度的同型半胱氨酸24h后,观察细胞形态并测定细胞的乳酸脱氢酶释放率、总蛋白含量、凋亡及脂质过氧化的程度。结果:(1)同型半胱氨酸不仅可诱导细胞凋亡而且在较高浓度时可致细胞坏死;(2)同型半胱氨酸有较强的促脂质过氧化的效应,并呈量效关系;(3)同型半胱氨酸的上述效应因加入LDL而增强,示同型半胱氨酸与LDL有协同作用。结论:同型半胱氨酸可能是通过氧化应激机制导致内皮细胞出现坏死,凋亡等损伤的改变。     

铁死亡参与高蛋氨酸饮食诱导ApoE^(-/-)小鼠肝损伤的发病过程北大核心

背景:高同型半胱氨酸可以通过氧化应激、炎症反应和内质网应激等机制促进肝损伤的发生。高蛋氨酸饮食诱导的E型载脂蛋白基因敲除(ApoE^(-/-))小鼠可以引起肝损伤以及体内同型半胱氨酸水平升高,铁死亡是一种依赖于细胞内的铁并引起脂质过氧化物过量蓄积的细胞调节性死亡途径。然而,它是否参与了高蛋氨酸饮食诱导肝损害的形成需进一步研究和探讨。目的:探讨铁死亡在ApoE^(-/-)小鼠高同型半胱氨酸致肝损伤中的作用。方法:12只6-8周龄雄性ApoE^(-/-)小鼠,体质量20-25 g,随机分为对照组和高蛋氨酸组,每组6只,分别采用普通饲料和高蛋氨酸饲料喂养13.5周。喂养结束后通过病理学观察以及肝组织中天冬氨酸转氨酶、丙氨酸转氨酶活性检测评估小鼠肝损伤情况;组织铁检测试剂盒测定小鼠肝组织中的铁离子含量;通过肝组织中丙二醛含量和荧光强度评估小鼠肝组织中脂质过氧化程度;实时荧光定量PCR与Western blotting方法分别检测两组小鼠肝组织中P53和谷胱甘肽过氧化物酶4的mRNA和蛋白表达水平。结果与结论:①与对照组相比,高蛋氨酸组发现大量肝细胞排列紊乱,间隙增大,胞浆疏松的典型肝损伤组织病理学改变;天冬氨酸转氨酶以及丙氨酸转氨酶活性升高(P<0.01);肝组织中铁离子含量增加(P<0.01),丙二醛含量(P<0.01)及荧光强度均增加;②实时荧光定量PCR与Western blotting检测发现,高蛋氨酸组小鼠肝组织中谷胱甘肽过氧化物酶4的表达水平降低(P<0.01),P53的表达水平升高(P<0.05);③提示铁死亡参与高蛋氨酸饮食诱导ApoE^(-/-)小鼠肝损伤的发病过程。     

高同型半胱氨酸血症对ApoE-/-小鼠脑组织的损伤

目的:探讨高同型半胱氨酸血症(HHcy)对小鼠神经损伤的病理学基础。方法:ApoE^-/-小鼠分为对照组(control)、HHcy组(HHcy)和HHcy、叶酸及维生素B12干预组(MFB)。通过高蛋氨酸饮食诱发HHcy小鼠模型,采用组织学、组织化学、电子显微镜等观察小鼠脑组织结构和神经细胞超微结构变化,免疫组化染色观察nestin和一氧化氮合酶(NOS)表达。结果:高蛋氨酸饮食导致ApoE^-/-小鼠血浆同型半胱氨酸水平显著升高,脑组织基本结构未见明显异常,对照组、HHcy组和MFB组之间尼氏体平均光密度值无显著性差异。免疫组化染色可见,对照组、HHcy组和MFB组脑微血管分布均匀,未见明显差异。超微结构可见,HHcy组脑毛细血管内皮细胞出现多个微绒毛样突起;HHcy组神经元自噬体及空泡化线粒体显著多于对照组和HHcy组(P<0.05)。HHcy组和MFB组TUNEL阳性细胞比例明显多于对照组(P<0.05)。免疫组化可见,HHcy组室管膜下区nestin阳性细胞比例明显低于对照组(P<0.05),MFB组与对照组及HHcy...     

Intermedin通过减轻内质网应激和炎症反应而抑制同型半胱氨酸诱导的心肌纤维化

<正>目的:探讨intermedin(IMD)1-53在apoE-/-小鼠心肌纤维化中的作用和机制。方法:同型半胱氨酸(Hcy)处理apoE-/-小鼠和心脏成纤维细胞。结果:IMD1-53显著抑制Hcy处理apoE-/-小鼠心肌间质胶原沉积、Ⅰ型和Ⅲ型胶原mRNA和蛋白表达,直接抑制Hcy诱导的心脏成纤维细胞Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白表达,抑制心脏成纤维细胞向肌成纤维细胞分化。此外,     

同型半胱氨酸对培养的人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白1α表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸是否诱导培养的人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α。方法:在内皮细胞培养基中分别加入终浓度为0.1mmol/L、0.5mmol/L、和1mmol/L的同型半胱氨酸, 孵育8h, 用原位杂交法检测其巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA的表达, 用细胞酶联免疫吸附实验(ELISA)检测其巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白的表达。结果:原位杂交显示, 培养的人脐静脉内皮细胞能低水平表达巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA, 为胞质内紫蓝色颗粒。培养的内皮细胞暴露于梯度浓度的同型半胱氨酸后其胞质内的巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA明显增加, 并呈剂量依赖关系, 组间差异极为显著(P＜0.01);细胞ELISA显示, 随着同型半胱氨酸浓度的升高, 各实验组内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白1α蛋白的表达逐步升高, 组间差异亦极显著(P＜0.01)。结论:同型半胱氨酸能诱导内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA和蛋白, 可能在单核细胞向动脉内膜的募集中起重要作用。     

同型半胱氨酸增强血白细胞粘附分子的表达

用免疫荧光流式细胞仪检测同型半胱氨酸是否改变体外健康人血单核细胞,中性粒细胞,及淋巴细胞表达粘附分子CD11b,CD18和L－选择素（L-selectin)的表达。结果显示,同型半胱氨酸在低浓度20μmol/L时明显增加CD11b和CD18在各种白细胞表面的表达,同时也增加了CD14在单核及中性粒细胞的表达。这种作用随同型半胱氨酸浓度升高而增强,但当浓度升至等于或大于1mmol/L时,各种粘附分子的表达反而降低。同型半胱氨酸使各种细胞类型表面L-selectin降低。此结果表明同型半胱氨酸可改变白细胞表面粘附分子的表达,可能在体内通过此途径导致白细胞粘附并游出血管内皮。     

通心络对同型半胱氨酸损伤的内皮细胞的基因表达谱的影响

目的: 探讨通心络对同型半胱氨酸(Hcy)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的基因表达谱的影响。方法: 原代培养的HUVECs,随机分为对照组、Hcy组和通心络组,提取总RNA并纯化,反转录合成荧光分子(Cy3/Cy5)标记的cDNA探针,采用高通量Affymetric人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片(含47 000个基因或基因片段)杂交,杂交信号经扫描和数字化处理,通过生物信息学数据分析推测通心络对同型半胱氨酸损伤的HUVECs细胞功能的影响以及可能的信号通路。结果: 与对照组相比,Hcy组有4 343个基因表达上调,316个基因表达下调;与Hcy组相比,通心络组有3 409个基因表达上调,121个基因表达下调。这些共同的差异基因生物功能涉及转录因子调控、激酶、细胞骨架与蛋白合成、转运功能、细胞因子、细胞-细胞受体相互作用和细胞黏附因子等。参与的信号通路主要是与血管新生、凋亡、氧化应激、凝血纤溶和炎症等相关的信号通路,如mTOR信号通路、MAPK信号通路和Toll样受体信号通路。结论: 通心络能导致同型半胱氨酸损伤内皮细胞基因表达谱的改变,这些基因改变可能参与了细胞凋亡、氧化应激和凝血纤溶等过程。     

脑缺血再灌注后血管内血栓形成与血浆纤维蛋白原水平的变化

目的 :观察脑缺血再灌注后血管内血栓形成与血浆纤维蛋白原水平的变化。方法 :在动物活体模型上 ,连续观察脑缺血 /再灌注时脑软膜微血管内血栓形成的过程并测量了缺血 /再灌注不同时期血浆纤维蛋白原的变化。结果 :单纯缺血期 ,血流速度明显减慢 ,血管内血细胞呈粒流或泥沙流 ,细静脉内白细胞贴壁滚动逐渐增多。微血管管径缩小 ,有部分毛细血管血流停滞。再灌注后 ,血流速度较缺血期明显加快 ,但细静脉内白细胞粘附贴壁也明显增多 ,随着再灌时间的延长 ,白细胞粘附贴壁越来越多且牢固 ,血管内皮增厚 ,管腔内壁变得粗糙 ,纤维蛋白形成 ,呈丝…     

非黏附骨髓间充质干细胞移植改善脑缺血小鼠的学习记忆功能

背景：非黏附骨髓间充质干细胞在体外培养中具有自我更新能力,可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞,表现出多分化潜能,在移植到缺血损伤脑内可存活并且部分可分化为神经细胞或神经胶质细胞。 目的：观察小鼠非黏附骨髓间充质干细胞移植到缺血小鼠脑内对神经功能的修复作用。 方法：全骨髓法分离β-Gal转基因小鼠总骨髓细胞,采用反复转移非黏附骨髓细胞的培养法收集纯化的第3代非黏附骨髓间充质干细胞。20只C57BL/6J小鼠建立大脑中动脉阻塞模型,随机区组法分为2组,造模后7 d,细胞移植组将第3代非黏附骨髓间充质干细胞悬液3 μL定向移植到小鼠脑损伤处,对照组注射等量生理盐水。移植28 d后进行Morris水迷宫实验,连续8 d。 结果与结论：在定位航行实验中细胞移植组小鼠的逃避潜伏期及游泳总路程均较对照组明显缩短(P < 0.05),空间探索实验中细胞移植组小鼠穿越原平台次数较对照组明显增多(P < 0.05)。提示非黏附骨髓干细胞移植能够提高脑缺血模型小鼠的学习记忆能力,改善神经功能。     

脑梗死患者血浆Hcy与ET的相关性分析

目的:通过对31例脑梗死患者血浆同型半胱氨酸(Homocyste ine,Hcy)与内皮素(Endothelin,ET)的观察,探讨它们与脑梗死的关系,以及同型半胱氨酸和内皮素之间的相关性。方法:用化学发光法测定血浆同型半胱氨酸和用放射免疫分析测定血浆内皮素,进行对比分析和直线相关分析。结果:脑梗死组同型半胱氨酸(17.09±8.39)μmol/L,内皮素(59.24±15.99)ng/L,对照组同型半胱氨酸(8.92±2.69)μmol/L,内皮素(40.39±10.26)ng/L,两组比较均为P<0.01,脑梗死组同型半胱氨酸与内皮素呈正相关,相关系数(r)为0.4615(P<0.01)。结论:同型半胱氨酸可能造成血管内皮损伤及功能改变,促进内皮素的释放,对脑梗死发生发展有促进作用。     

深圳市青年同型半胱氨酸及其他临床指标与MTHFR C677T基因的多态性CSCD

背景:N5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylenetetrahydro-fotate reductase,MTHFR)基因发生突变,易引起高同型半胱氨酸血症,而高同型半胱氨酸血症为脑卒中的独立危险因素。目的:分析深圳地区青年人群同型半胱氨酸水平与MTHFR C677T基因多态性之间的关系,并探讨高同型半胱氨酸血症与其他临床资料之间是否具有相关性。方法:分别收集101例高同型半胱氨酸血症患者作为实验组,101例同型半胱氨酸血值正常者作为对照组(20-45岁)。收集入组人员的口腔唾液标本,用纳米磁珠法提取DNA,PCR扩增目的片段,并将扩增产物送与公司测序。结果与结论:实验组和对照组MTHFR C677T基因的CC型、CT型、TT型3种基因型总体分布频率具有显著性意义(P<0.01),说明深圳地区青年人群同型半胱氨酸水平与MTHFR C677T的多态性具有一定的相关性。实验组中TT型基因频率及T等位基因频率均明显高于对照组,且实验组TT基因型的受试者同型半胱氨酸水平明显高于CT基因型及CC基因型受试者,差异均有显著性意义(P<0.05),说明TT型比CT型更能影响同型半胱氨酸水平。实验组收缩压、舒张压值显著高于对照组(P<0.05),表明高同型半胱氨酸血症可引起血压值增高;试验并不能确定高同型半胱氨酸血症能增高血脂水平。     

同型半胱氨酸对培养的人单核细胞株THP-1 表达巨噬细胞炎性蛋白-1α的影响

目的: 探讨同型半胱氨酸对人单核细胞株THP-1细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA和蛋白的影响。 方法:在体外培养的THP-1单核细胞培养基中加入终浓度为0.05 mmol/L、0.1 mmol/L和0.2 mmol/L的同型半胱氨酸,孵育8 h;或加入终浓度0.1 mmol/L的同型半胱氨酸,分别孵育4、8、16 h。用逆转录聚合酶链反应检测THP-1单核细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA,并测序;用免疫细胞化学法检测巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达。结果:对照组THP-1单核细胞表达较低水平的巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA,加同型半胱氨酸后巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达随浓度增加而增强;在浓度为0.1 mmol/L时,巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达于4 h开始升高,8 h后逐渐降低。反应产物真实性经测序反应证实。免疫细胞化学图像分析结果显示,各组细胞平均吸光度值随浓度和时间递增而增加(P＜0.01)。结论:同型半胱氨酸能诱导THP-1单核细胞表达巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA和蛋白。