胃癌患者hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化状态及其与蛋白表达的关系

目的：探讨胃癌组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌生物学行为的关系,并分析hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化与其蛋白表达的相关性。方法：采用甲基化特异性PCR（methylation-specific PCR,MSP）技术和免疫组织化学SP法检测45例患者胃癌组织、正常胃组织中hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况及蛋白的表达。结果：hMLH1基因启动子区CpG岛在胃癌及正常组织中的甲基化阳性率分别为33.3%和0（P〈0.05）;hMLH1蛋白在胃癌及正常组织中的阳性率分别为57.8%和95.2%（P〈0.05）;hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化及蛋白的表达与胃癌的临床病理参数无关（P〉0.05）;hMLH1基因启动子甲基化与hMLH1蛋白表达呈明显的负相关（P〈0.05）。结论：hMLH1基因启动子区CpG岛的异常甲基化是引起蛋白表达缺失的主要原因,hMLH1蛋白表达缺失与胃癌的发生有关。     

Maspin在大肠癌中的表达及其启动子5'CpG岛甲基化状态的研究

目的探讨Maspin基因启动子5′CpG岛异常甲基化及蛋白表达与大肠癌及其临床病理特征的关系。方法采用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫组织化学方法分别检测91例大肠癌组织及91例癌旁组织中Maspin基因的5′CpG岛甲基化和蛋白表达。结果大肠癌和癌旁组织中,Maspin蛋白表达率分别为72.5%,92.3%,CpG岛甲基化率分别为20.9%,9.9%,两者差异均有显著性(P<0.01,P<0.05)。肿瘤组织中的Maspin蛋白表达与大肠癌分化程度、Duke’s分期及浸润深度相关,Maspin甲基化与大肠癌的Duke’s分期及浸润深度相关。大肠癌Maspin蛋白阳性与阴性表达的组织之间,CpG岛甲基化率的差异有显著性(P<0.01)。结论Maspin基因异常甲基化是其蛋白表达缺失的主要原因之一,并在大肠癌的发生发展中起重要作用。     

宫颈癌细胞FHIT基因启动子CpG岛甲基化状态分析

FHIT基因是一种与凋亡有关的肿瘤抑制基因,广泛存在于各种细胞凋亡系统中,在多种肿瘤及细胞系中失活,其启动子部位CpG岛甲基化是FHIT基因失活的主要机制之一。本研究应用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)对不同宫颈鳞癌细胞系FHIT基因启动子CpG岛甲基化状态进行检测,在分子水平上了解FHIT异常甲基化与宫颈癌的相关性,为宫颈癌去甲基化治疗提供依据。     

乳腺癌细胞中PNRC基因启动子区CpG岛甲基化状态的研究

目的 研究乳腺癌细胞中富含脯氨酸核受体辅活化子(proline-rich nuclear receptor coactivator protein,PNRC)基因启动子CpG岛的甲基化状态及在PNRC转录调节中的作用.方法 应用PT-PCR检测PNRC基因在正常乳腺细胞与乳腺癌细胞中的表达情况,并运用"MethPrimer"软件对PNRC启动子区进行分析,预测CpG岛,通过甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)检测PNRC启动子区CpG岛的甲基化状况;PT-PCR及Northern杂交检测乳腺癌细胞经甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dc)作用后,PNRC基因mRNA的表达情况;Westernblot检测5-Aza-dc干预对PNRC蛋白表达的影响;将含PNRC启动子序列的报告质粒转染乳腺癌细胞,再经5-Aza-dc处理后,检测PNRC基因启动子的活性.结果 PNRC基因在乳腺癌细胞中的表达较正常乳腺细胞明显降低;乳腺癌细胞PNRC基因启动子区存在CpG岛甲基化;乳腺癌细胞经5-Aza-dc处理后,PNRC基因mRNA及蛋白表达水平显著增加,其PNRC基因启动子的活性也明显增强.结论 PNRC基因启动子区的高甲基化导致PNRC在乳腺癌细胞中表达降低.     

Maspin在大肠癌中的表达及其启动子5''CpG岛甲基化状态的研究

目的 探讨Maspin基因启动子5'CpG岛异常甲基化及蛋白表迭与大肠癌及其临床病理特征的关系.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)和免疫组织化学方法分别检测91例大肠癌组织及91例癌旁组织中Maspin基因的5'CpG岛甲基化和蛋白表达.结果 大肠癌和癌旁组织中,Maspin蛋白表达率分別为72.5%,92.3%,CpG岛甲基化率分别为20.9%,9.9%,两者差异均有显著性(P＜0.01,P＜0.05).肿瘤组织中的Maspin蛋白表达与大肠癌分化程度、Duke's分期及浸润深度相关,Maspin甲基化与大肠癌的Duke's分期及浸润深度相关.大肠癌Maspin蛋白阳性与阴性表迭的组织之间,CpG岛甲基化率的差异有显著性(P＜0.01).结论 Maspin基因异常甲基化是其蛋白表达缺失的主要原因之一,并在大肠癌的发生发展中起重要作用.     

乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’CpG岛甲基化状态研究

目的：检测乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域的甲基化状况。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（Methylation-specific PCR,MSP）方法对乳腺癌及癌旁组织中PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化状况进行研究。结果：乳腺肿瘤组织中PTEN基因甲基化率为31.5%（29/92）,显著高于癌旁组织和正常组织（P〈0.05）,而癌旁组织和正常乳腺组织中甲基化率均比较低,分别为8.3%（2/24）、6.2%（1/16）,两者差异无统计学意义（P〉0.05）;PTEN基因甲基化与肿瘤组织学类型、年龄及肿瘤大小均无相关性,但与淋巴结转移相关（P〈0.05）,淋巴结转移组PTEN基因甲基化率显著高于无淋巴结转移组。结论：PTEN基因5’端CpG岛启动子区域甲基化可能是散发性乳腺癌PTEN基因失活的主要机制,参与了乳腺癌的发生发展过程;PTEN基因甲基化可能是乳腺癌发生发展过程中的晚期事件,提示可以考虑将PTEN基因甲基化作为评价乳腺癌肿瘤细胞转移潜能的分子标记。     

HCC患者GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的 检测人原发性肝癌（HCC）中抑癌基因GSTP1的启动子区CpG岛甲基化的状况，并探讨其在肝癌发生中的作用。方法 以已知的GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化阳性的乳腺癌细胞株MCF-7为阳性对照，以11例正常人外周血单核细胞（PBMC）DNA为阴性对照，用甲基化特异性PCR（MSP）的方法对26例肝细胞癌患者的癌、远癌组织中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态进行检测。结果 在26例原发性肝癌中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化在癌组织为88％（23／26），在远癌组织中为69％（18／26）；而在11例正常人外周血单核细胞均为甲基化阴性。结论 抑癌基因GSTP1基因启动子区CpG岛高甲基化可能是肝癌发生早期的分子事件，在人原发性肝癌的发生发展中具有重要的作用。     

白血病细胞雌激素受体α启动子CpG 岛甲基化状态的实验研究

目的 检测3种白血病细胞Jurkat、Molt-4、HL-60的雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)基因启动子ERα-A、ERα-B CpG岛甲基化状态,初步探讨ERα启动子区的甲基化状态以及与白血病发病机制的可能联系.方法 应用甲基化特异性PCR技术(MSP)检测3种白血病细胞株与正常人外周血单个核细胞ERα启动子区ERα-A 和ERα-B启动子区CpG岛甲基化状态.结果 白血病细胞株ERα-A 和ERα-B均出现甲基化条带,为全甲基化状态;正常人外周血单个核细胞ERα-A 和ERα-B CpG岛呈现非甲基化状态.结论 ERα基因启动子ERα-A 和ERα-B CpG岛的甲基化状态有可能成为白血病新的分子诊断标记物.     

上皮性卵巢癌PTEN启动子CpG岛甲基化研究

目的探讨上皮性卵巢癌中抑癌基因PTEN启动子CpG岛的甲基化情况。方法选用甲基化敏感性核酸内切酶HpaⅡ酶切-PCR法,检测64例上皮性卵巢癌组织(浆液性卵巢襄47例,粘液性卵巢癌17例)以及12例正常卵巢组织中PTEN启动子CpG岛甲基化情况。结果正常卵巢组织、浆液性卵巢癌组织和粘液性卵巢癌组织中PTEN启动子甲基化阳性率分别为8.33％(1/12)、57.45％(27/47)和47.06％(8/17),浆液性和粘液性这两种不同组织学类型的上皮性卵巢癌之间的差异无显著性(P<0.05),但均与正常组织间有显著性差异(P分别<0.01,0.05)。结论 PTEN启动子CpG岛甲基化在浆液性卵巢癌和粘液性卵巢癌中均有很高的发生率,提示PTEN基因启动子异常甲基化可能是其在卵巢癌中主要灭活机制之一。     

宫颈癌细胞中DAPK1基因CpG岛甲基化及其表达

目的 :探讨宫颈癌细胞中凋亡相关蛋白激酶 1(DAPK1 )基因CpG岛甲基化及其表达与宫颈癌的相关性 .方法 :应用甲基化特异性PCR和SABC免疫组化方法 ,检测 32(鳞癌 1 8,腺癌 1 4 )例宫颈癌组织DAPK1基因CpG岛甲基化修饰及蛋白表达 .结果 :宫颈癌中DAPK1基因甲基化扩增阳性率明显增高 5 6 .3% ,与正常宫颈比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,鳞癌与腺癌甲基化扩增阳性率无显著差异 (P >0 .0 5 ) ;宫颈癌中DAPK1蛋白表达阳性率降低 1 5 .6 3% ,与正常宫颈比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,鳞癌和 7例与腺癌无显著性差异 (P >0 .0 5 ) .结论 :DAPK1基因CpG岛异常甲基化修饰能抑制DAPK1的转录 ,使DAPK1蛋白不表达 ,丧失抑癌作用 ,是促进正常宫颈上皮细胞癌变的一个重要因素     

胃癌p16基因启动子CpG岛甲基化研究

目的：探讨p16基因启动子CpG岛甲基化在胃癌中的表达及意义．方法：采用特异性甲基化PCR（MSP）法检测p16基因启动子CpG岛甲基化水平．结果：对照组未检测到CpG岛甲基化,胃癌细胞株均检测到CpG岛甲基化,23例（74％）胃癌组织检测到CpG岛甲基化．此外,17例（74％）癌旁组织检测到CpG岛甲基化．胃癌组织p16基因CpG岛甲基化与分化程度及淋巴结转移之间无相关关系（P〉0．05）．结论：胃癌广泛存在p16基因启动子CpG岛甲基化,并且可能是胃癌发生的早期分子事件．     

胰液中p16基因启动子区5'CpG岛甲基化改变及其意义

目的：探讨胰液中p16基因启动子区5’CpG岛甲基化检测在胰腺癌诊断中的价值。方法：2005～2006年30例来自长海医院消化内镜中心的胰腺疾病患者入选，采用内镜逆行胆胰管造影（ERCP）下放置鼻胰管收集胰液，沉渣涂片H-E染色进行细胞学检查，甲基化特异性PCR（MSP）法检测胰液及组织中p16基因甲基化状态。结杲：单纯胰液细胞学检查诊断胰腺癌的敏感性为40％（8／20），特异性为100％（10／10），阳性预测值为100％（3／8），阴性预测值为45．4％（10／22），诊断准确性60．0％（18／30）。所有胰液标本均成功抽提出DNA，30例胰腺疾病患者胰液标本进行p16基因启动子区5＇CpG岛甲基化检测，其中20例胰腺癌患者胰液中p16基因甲基化率为35％（7／20），慢性胰腺炎和胰腺囊腺瘤患者胰液中无p16基因甲基化。胰液中p16基因甲基化与常规细胞学联合诊断胰腺癌的敏感性为55％（11／20），特异性为100％（10／10），阳性预测值为100％（11／11），阴性预测值为52．6％（10／19），诊断准确性70％（21／30）。结论：鼻胰管收集的胰液可用于分子生物学检测，检测胰液中p16基因甲基化改变与细胞学联合更有助于胰腺癌的诊断。     

胃肠道间质瘤中RhoA的表达及其临床意义

目的探讨胃肠道间质瘤中RhoA的表达及其在胃肠道间质瘤（GIST）发生及发展中的作用。方法应用免疫组化方法检测52例G IST标本中RhoA的蛋白水平表达。结果 RhoA蛋白在GIST组织中呈现高表达,RhoA蛋白变化与NIH分级、肿瘤侵袭转移及黏膜受侵密切相关（P〈0.05）。结论 GIST中RhoA蛋白呈现高表达,并且可能在G IST发生发展中起重要作用。     

胃肠道间质瘤中Bax的表达及其意义

目的 探讨胃肠道间质瘤中Bax表达与生物学行为的关系.方法 运用免疫组织化学SP法检测Bax在胃肠道间质瘤中的表达情况,并分析其在良性、潜在恶性、恶性瘤组织中的表达差异.结果 55例胃肠道间质瘤中,33例(60.O%)Bax阳性表达.Bax在良性胃肠道间质瘤中表达较低(28.6%),而潜在恶性和恶性胃肠道间质瘤中Bax表达显著增高,分别达71.4%、70.3%.良性与潜在恶性、良性与恶性胃肠道间质瘤之间Bax的阳性表达率差异有统计学意义(P＜0.05),但潜在恶性和恶性胃肠道间质瘤之间的Bax阳性表达率差异无统计学意义(P＞0.05).Bax的表达与患者的性别、年龄、部位、肿瘤大小、有无坏死及组织学分型无关.结论 Bax检测可作为预测胃肠道间质瘤恶性潜能的重要参考指标.     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

磷酸酶基因CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌中的表达

目的探讨磷酸酶基因（PTEN）CpG岛甲基化状态及其在膀胱移行细胞癌（BTCC）中的表达。方法应用甲基化特异性聚合酶链式反应检测32例BTCC和癌旁正常组织标本中PTEN基因启动子区甲基化状态,逆转录聚合酶链式反应和蛋白印迹法检测其mRNA和蛋白表达水平。结果PTEN基因在BTCC组织中甲基化率为65．6％,随着肿瘤分级、分期的增加,甲基化水平逐渐升高,而在正常膀胱组织中未发现甲基化。PTENmRNA和蛋白表达在正常组织和BTCC组织中分别为93．8％、62．5％和15．6％、6．3％,差异有统计学意义（P〈0．01）。在21例启动子异常甲基化的BTCC组织标本中,19例伴有PTEN基因表达缺失或下调,两者之间存在明显负相关（r=--0．564,P〈0．01）。结论PTEN基因启动子区异常甲基化可能导致该基因转录表达失活,使其mRNA和蛋白表达减少甚至缺失,是膀胱癌发生、发展的原因之一。     

膀胱癌尿沉渣PTEN基因启动子CpG岛异常甲基化研究

目的探讨膀胱癌患者尿沉渣细胞中PTEN基因启动子CpG岛的甲基化状况及其临床意义。方法收集临床病理确诊39例膀胱癌,采用甲基化特异PCR(MSP)的方法,检测膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣PTEN基因启动子CpG岛的甲基化异常频率,同时以45例非肿瘤性泌尿系疾病患者及14例健康志愿者作为对照。结果膀胱癌肿瘤组织和配对的尿沉渣PTEN基因启动子甲基化阳性率分别为53.8%(21/39)和48.7%(19/39),两者密切相关(r=0.381,P=0.017)。膀胱癌组尿沉渣PTEN基因启动子甲基化阳性率(48.7%,19/39)显著高于非肿瘤组(11.1%,5/45)(2χ=15.37,P=0.000),非肿瘤组与志愿组间(阳性率为0)并无明显差异(P>0.05);尿沉渣PTEN基因甲基化对膀胱癌诊断的敏感性为48.7%(19/39),特异性为91.5%(54/59)。性别、年龄、病理分级及临床分期与PTEN基因甲基化均无明显相关性(P均>0.05)。结论 PTEN基因启动子异因异常甲基化可能是膀胱癌的早期事件,尿沉渣PTEN基因启动子异常甲基化可能是膀胱癌早期诊断分子标志物之一。