Tsp10多肽免疫血清在体外对旋毛虫侵入肠上皮细胞及幼虫发育的影响

目的 观察Tsp10多肽免疫血清在体外对旋毛虫侵入肠上皮细胞及幼虫发育的影响.方法 将不同免疫血清与含有旋毛虫肠道感染性幼虫的半固体培养基混合后,接种至正常小鼠肠上皮细胞(intestinal epithelial cells,IEC)单层上,37℃5％CO2培养2h、36 h时分别观察幼虫侵入率、细胞单层受损面积及发育至Ⅱ～Ⅳ期幼虫的百分比;免疫荧光试验检测受损肠上皮细胞中的旋毛虫抗原.结果 幼虫在半固体培养基培养2h时,Tsp10多肽免疫血清组的幼虫侵入率与细胞单层受损面积(46.3％,24.3 mm2)均明显低于T7噬菌体免疫血清组(94.1％,65.3 mm2)及正常小鼠血清组(92.5％,65.7 mm2)(P＜0.01);培养36 h时,Tsp10多肽免疫血清组Ⅱ～Ⅳ期幼虫的百分比(16％)亦明显低于T7噬菌体免疫血清组(37％)及正常小鼠血清组(38％)(P＜0.01).Tsp10多肽及ES抗原免疫血清的免疫荧光试验结果显示,受损的IEC呈亮绿色荧光,而应用T7噬菌体免疫血清及正常小鼠血清时则为阴性.结论 Tsp10多肽免疫血清可阻止部分旋毛虫幼虫对肠上皮细胞的侵入与发育,Tsp10可能是旋毛虫的主要侵入蛋白之一.     

免疫血清对旋毛虫感染性幼虫侵入肠上皮细胞及其发育的影响

目的观察旋毛虫感染性幼虫排泄分泌(ES)抗原与旋毛虫感染性幼虫表面抗原免疫鼠血清对幼虫侵入HCT-8肠上皮细胞及其发育的影响。方法将旋毛虫感染性幼虫接种至半固体培养基(RPMI1640培养基+1.75%琼脂糖)+HCT-8细胞中,37℃5%CO2培养12、24、36、72和96h后镜下观察幼虫发育情况;将幼虫接种至含免疫血清的半固体培养基+HCT-8细胞中,培养15min后镜下观察幼虫形态及其对肠上皮细胞的侵入情况,36h后应用间接荧光抗体试验(IFAT)观察幼虫蜕皮,并计数Ⅰ期和Ⅱ～Ⅳ期幼虫。结果幼虫在半固体培养基培养12h可侵入HCT-8细胞单层,36～72h幼虫可蜕皮1～2次,培养96h可见早期成虫。在含ES抗原免疫血清与感染鼠血清条件下培养15min,幼虫头端可见免疫复合物形成的帽样结构,但在含表面抗原免疫血清、正常鼠血清或不含免疫血清条件下培养的幼虫头端则无帽样结构,头端带有帽样结构的幼虫不能侵入HCT-8细胞单层。在含ES抗原与表面抗原免疫血清条件下发育至Ⅱ～Ⅳ期幼虫的百分比(2.25%、2.2%)均明显低于含正常鼠血清条件下培养的幼虫(24.7%)(P0.05)。结论旋毛虫ES抗原免疫血清可阻止幼虫对肠上皮细胞的侵入,ES抗原及表面抗原免疫血清均可阻止部分幼虫的发育(蜕皮)。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原诊断早期旋毛虫病的研究

目的评价旋毛虫肌幼虫排泄分泌(excretory-secretory,ES)抗原诊断早期旋毛虫病的价值。方法应用旋毛虫肌幼虫ES抗原Western blot对旋毛虫感染后6~11d的小鼠血清及19d的早期旋毛虫病人血清进行检测,并与感染后35d的晚期旋毛虫病人和其他寄生虫病人血清的检测结果进行比较。结果 Western blot分析显示,肌幼虫ES蛋白中的2条蛋白带(41.5、55kDa)可被旋毛虫感染后7~11d的小鼠血清识别,6条蛋白带(41.5、44.1、45、55、61和65.2kDa)能被早期和晚期旋毛虫病人血清识别,阳性反应率均为100%(15/15);这6条蛋白带与裂头蚴病人和健康人血清无交叉反应,但与其他寄生虫病(血吸虫病、并殖吸虫病、华支睾吸虫病、棘球蚴病及囊尾蚴病)患者血清具有明显的交叉反应(19.12%~38.23%)。结论旋毛虫肌幼虫ES抗原中的41.5kDa~65.2kDa蛋白带可与旋毛虫感染早期血清反应,但与其他蠕虫病患者有明显的交叉反应。     

旋毛虫肌幼虫ESPs作用于小细胞肺癌H446细胞蛋白组分变化分析

目的 分析旋毛虫(Trichinella spiralis)肌幼虫排泄分泌蛋白(excretory-secretory proteins,ESPs)作用于小细胞肺癌H446细胞后蛋白组分的变化。方法 制备旋毛虫肌幼虫ESPs,把H446细胞分成实验组和对照组。实验组加入0.85 mg/mL ESPs,对照组加入不含血清的RPMI1640培养基,24 h后收集细胞并提取总蛋白,采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离蛋白后酶解,采用液质联用质谱法(LC-MS/MS)对酶解产物进行鉴定,通过Gene Ontology(GO)分析,对鉴定出的实验组与对照组有差异的蛋白质的细胞组分、分子功能和生物过程进行富集分析。结果 实验组共鉴定出240种蛋白质,其中有204种为已明确鉴定的蛋白质,22 种为未明确鉴定的蛋白质,14 种为假定蛋白质。从已知的204种蛋白质中检索出1种与存在于旋毛形肌幼虫排泄分泌蛋白中且与抗肿瘤相关的蛋白质H2A(histone 2A)。对照组鉴定出233种蛋白质。实验组和对照组重合蛋白质191种,非重合蛋白分别有49种和42种。结论 旋毛虫肌幼虫ESPs作用于H446细胞后,细胞内蛋白组分发生了复杂变化,提示其抗肿瘤作用机制和过程复杂。     

旋毛虫幼虫体外对肠上皮细胞侵入及发育的观察

目的观察旋毛虫幼虫在体外对肠上皮细胞的侵入及发育情况。方法将旋毛虫肌幼虫在大鼠肠内容物或小鼠胆汁中孵育2 h后,分别接种至半固体培养基(DMEM/F12完全培养基+1.75%琼脂糖)、半固体培养基+T84细胞、DMEM/F12完全培养基+T84细胞及半固体培养基(高糖DMEM完全培养基+1.75%琼脂糖)+Caco-2细胞中,37℃5%CO2培养24 h,观察并计数细胞层中的1期及2~4期幼虫。结果经肠内容物与胆汁孵育后的幼虫在半固体培养基+Caco-2细胞中发育为2~4期幼虫的百分比分别为50.00%和34.78%(χ2=0.836,P0.05),两者均高于经RPMI-1640孵育的幼虫百分比8.70%(χ21=5.978,χ22=4.600,P0.05)。经肠内容物孵育后的幼虫在半固体培养基+T84细胞中2~4期幼虫的百分比(40.00%)显著高于半固体培养基中的幼虫百分比4.76%(χ2=10.947,P0.05);在T84和Caco-2细胞中发育为2~4期幼虫的百分比分别为40.00%和50.00%,差异无统计学意义(χ2=0.546,P0.05);在完全培养基+T84细胞中未观察到2~4期幼虫;在半固体培养基中,幼虫可侵入T84/Caco-2细胞并在细胞单层中移行,留下明显的移行轨迹,培养37 h与42 h后分别发现1条雌虫与3条雄虫。结论旋毛虫幼虫经肠内容物或胆汁孵育后再接种至半固体培养基,可在体外侵入肠上皮细胞并能生长发育。     

旋毛虫幼虫抗原接种小鼠诱发保护性免疫的研究

本文就旋毛虫幼虫可溶性抗原接种小鼠诱发保护性免疫进行了研究,结果:两组免疫小鼠的成虫减虫率分别为41.3％和34.7％,肌肉幼虫的减虫率61.5％和44.8％,抗旋毛虫抗体水平明显升高,GMRT比对照组高119倍。免疫组的白细胞移动率为57％和63％,血液嗜酸性粒细胞显著增多,肌肉幼虫囊包周围炎症反应面积增大。实验表明旋毛虫幼虫可溶性抗原可诱发特异性细胞免疫和体液免疫,对攻击感染具有明显的保护作用。     

旋毛虫热激蛋白的研究进展

旋毛虫热激蛋白(heat shock protein,HSP)是一个高度保守的蛋白质家族,具有特殊的生物学作用,开展HSP的研究对旋毛虫病的免疫诊断和免疫预防具有重要意义.该文对旋毛虫与宿主HSP水平的变化、旋毛虫HSP的分离纯化、克隆表达及其检测方法等方面的研究进展进行了综述.     

小鼠实验感染不同种旋毛虫后血清IgG抗体水平的变化

目的观察小鼠感染不同种旋毛虫后血清IgG抗体水平的变化。方法将50只小鼠随机分成5组（每组10只），分别感染旋毛虫（T1）、乡土旋毛虫（T2）、布氏旋毛虫（T3）、伪旋毛虫（T4）及纳氏旋毛虫（T7），每只感染300条幼虫，感染后1～6周每周尾部静脉采血，6周后每2周尾部静脉采血，至感染后20周，用旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA检测血清中抗旋毛虫IgG抗体水平。结果小鼠感染旋毛虫、乡土旋毛虫、布氏旋毛虫及纳氏旋毛虫后3～5周，血清IgG抗体水平快速升高，至感染后第8周达高峰，此后旋毛虫和乡土旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平缓慢下降，布氏旋毛虫及纳氏旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平迅速下降；小鼠感染伪旋毛虫后3～5周血清IgG抗体水平快速升高，至第16周达高峰，之后缓慢下降。5种旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平差异具有显著性（P〈0．05）。结论5种旋毛虫感染小鼠的血清IgG抗体水平和动态变化不同；旋毛虫肌幼虫ES抗原可用于其他4种旋毛虫（乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫、纳氏旋毛虫）感染的血清学诊断及流行病学调查。     

旋毛虫肌幼虫排泄分泌物中特异性诊断抗原的研究

目的　寻找旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)物中的特异性诊断抗原。　方法　应用SDSPAGE和Western印迹对旋毛虫肌幼虫体外培养18、30h后的ES抗原中的蛋白组分进行研究。　结果　旋毛虫肌幼虫培养18、30h后得到的ES抗原组分大致相同,两种ES抗原中主要蛋白带的分子量为112、110、108、97、53、49、45、42、35、23和16kDa。18hES抗原中的102、97、95和53kDa以及30hES抗原中的53、49、45和43kDa均与并殖吸虫病、华支睾吸虫病、日本血吸虫病及囊尾蚴病患者血清发生明显的交叉反应。ES抗原中的23kDa蛋白组分只与旋毛虫感染的大鼠、小鼠及患者血清反应,而不与上述其它寄生虫感染者、正常大鼠和小鼠及正常人血清发生交叉反应。　结论　旋毛虫肌幼虫ES抗原中的23kDa蛋白组分为旋毛虫肌幼虫的特异性抗原,可用于旋毛虫病的血清学诊断及血清流行病学调查。     

Characterization of surface antigens of Trichinella spiralis infective larvae

Infective larvae of Trichinella spiralis were surface-labelled with radioactive iodine, and the products were characterized biochemically and immunochemically. The labelled material was restricted to two basic subunits: a lentil lectin-adherent glycoprotein (GP), mol. wt 47K, and a lentil lectin-non-adherent protein fraction (P), mol. wt 55K. Both of these form homologous dimers through as yet unspecified covalent bonds to yield GP90 and P105. The GP is further polymerized into higher molecular weight forms by disulphide bond-dependent associations, suggesting a highly cross-linked arrangement in the cuticle. To what extent this structure contributes to the overall organization of the cuticle remains to be established. The two labelled surface molecules are immunogenic in the infected host, and do not react with a panel of sera taken from animals chronically infected with other nematode species. The approach therefore offers immediate possibilities for immunodiagnosis in nematode infections, and for a comparative immunochemical study of the surface cuticle of different stages of the same and different nematode species and for studies of the function of the nematode cuticle.     

Altered intestinal fluid movement in response to Trichinella spiralis in immunized rats

Net intestinal fluid movement was measured in immunized and non-immunized rats infected with the enteric stages of the nematode, Trichinella spiralis. Animals were studied 30 min, 5 days and 30 days after receiving infective larvae. Net water movement across the mucosal surface of the gut was measured in vivo by perfusing a cannulated segment (approximately 30 cm) of proximal small intestine with an isotonic solution containing a nonabsorbable marker, 14C polyethylene glycol, at a rate of 0.5 ml/min. Uninfected rats showed net absorption of water, 25 microliter/h per cm of intestine. This response was unaltered when rats were infected (7 x 10(3) larvae/rat) and examined 30 minutes later. Five days after primary infection net tissue-to-lumen fluid movement, ie. net secretion, occurred at a rate of 45 microliter/h per cm. When rats were studied 30 days after primary infection, net absorption equivalent to the preinfection level was observed once again. Previously infected (immunized) rats, when challenged (secondary infection, 7 x 10(3) larvae/rat) and examined within 30 min showed a significant decrease in net absorption rate as compared with non-immunized rats. Absorption returned to the preinfection level at both 5 and 30 days post challenge. Results support the conclusion that T. spiralis caused a decrease in net lumen-to-tissue fluid movement during primary and secondary infections. The response was initiated faster in previously infected hosts. The rapid induction of net fluid movement in the direction of secretion upon secondary contact with the parasite is associated temporarily with prevention of worm establishment.     

Effects of immune serum and cells on newborn larvae of Trichinella spiralis

Serum and cells, collected from mice immunized by infection either with newborn larvae (NBL) or per os with infective larvae of Trichinella spiralis, were passively transferred to mice which were challenged with NBL. Serum always gave very strong protection if given before challenge but not if given within 2 h after challenge. Cells from mice immunized with NBL also gave good protection, whereas those from mice immunized per os did not. If NBL were incubated in serum from immunized mice their infectivity was reduced, but if the serum was pre-absorbed with NBL this effect was lost. Such absorbed serum did not confer immunity on recipient mice.     

旋毛虫成囊前期幼虫的收集

目的 探索旋毛虫成囊前期幼虫的收集时间与方法.方法 20只成年大鼠,每只大鼠经口感染3000条旋毛虫脱囊幼虫,分别于第14、15、16、17、18、19、20天将大鼠处死,用人工胃蛋白酶消化肌肉收集旋毛虫.结果 感染后第14、15、16大膈肌均未见旋毛虫,第17、18、19、20天膈肌有旋毛虫的侵入并逐渐增多;第14、15、16天均未收集到旋毛虫,第17、18、19、20天平均每只大鼠分别收集5000、8000、10000、30000条旋毛虫.结论 旋毛虫在感染后第20天是旋毛虫成囊前期幼虫收集的最佳时期.人工胃蛋白酶消化肌肉可以收集成囊前期幼虫.     

树突细胞在旋毛虫感染免疫中作用的研究进展

旋毛虫病是一种常见的人兽共患寄生虫病,也是一种重要的食源性寄生虫病,严重危害着人体的健康.树突状细胞是固有性免疫细胞的一种,也是宿主肠道黏膜免疫系统最重要的一种抗原呈递细胞,与宿主肠道免疫系统关系密切.近年来有关树突状细胞在寄生虫感染与宿主免疫应答中的作用,尤其在旋毛虫感染与免疫的作用,备受人们的关注.该文就目前国内有关旋毛虫感染后,宿主树突状细胞参与肠黏膜的一系列免疫应答反应和发挥作用的研究进展做一综述.     

白酒对鼠体旋毛虫幼虫的杀伤作用

目的观察白酒对鼠体旋毛虫幼虫的杀伤作用。方法80只昆明小鼠,各喂食含500条旋毛虫幼虫的肌肉后随机分成8组(10只/组),实验组分别灌饲0.2ml或0.4ml乙醇体积分数为0.62、0.54和0.46的白酒,对照组灌饲相同体积的生理盐水。7d与40d后各剖杀5只,检查肠道旋毛虫成虫和肌幼虫数。结果灌饲0.2ml乙醇体积分数为0.62、0.54和0.46的白酒的小鼠肠道成虫数分别为(80.00±11.25)条、(208.00±22.89)条及(256.00±69.37)条,肌幼虫数分别为(37993.60±296.50)条、(54166.60±2951.98)条和(63808.40±2442.81)条,灌饲0.4ml乙醇体积分数为0.62、0.54和0.46的白酒的小鼠肠道成虫数分别为(21.00±11.83)条、(87.00±27.66)条及(112.00±25.38)条,肌幼虫数分别为(24691.20±4628.14)条、(47266.60±1955.49)条及(50833.40±2211.50)条,生理盐水对照组分别为(312.00±76.93)条和(81050.00±13157.74)条,差异有统计学意义(P均0.05)。灌饲白酒的感染鼠肠道成虫与肌幼虫数均随乙醇灌胃量的增大而减少(P均0.05)。结论白酒对鼠体内旋毛虫的杀伤作用与乙醇含量有关,小鼠灌饲白酒可降低旋毛虫感染程度。     

旋毛虫肌幼虫在感染小鼠体内的分布

目的观察旋毛虫肌幼虫在感染小鼠体内不同部位横纹肌内的分布和密度。方法分别取感染旋毛虫小鼠的舌肌、咬肌、胸肌、腹肌、前肢肌、后肢肌、膈肌和背肌各50mg,肌肉压片镜检。结果膈肌幼虫密度最高,其次为舌肌、胸肌;前肢肌、后肢肌、咬肌、背肌幼虫密度无明显差异,均低于胸肌,腹肌幼虫密度最低。结论感染旋毛虫的小鼠从膈肌取材,检出肌幼虫的阳性率较其他部位高。