UV致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL/6小鼠免疫保护作用的研究

目的 研究紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴诱导C57BL／6小鼠的免疫保护作用。方法分别观察不同UV强度（300、400和500μW／cm。照射的日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫剂量（8、24和300条uV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫）、不同免疫位点（300条UV致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫）和不同免疫次数（100条UV致弱尾蚴经腹部皮肤免疫3次）诱导C57BL／6小鼠抗血吸虫攻击感染（40条正常尾蚴经腹部皮肤感染）的保护力。同时观察免疫后小鼠的体液免疫应答变化。结果 300、400和500μW／cm。UV照射的日本血吸虫尾蚴免疫C57BI。／6小鼠诱导产生的减虫率分别为2．72％、11．37％和10．38％；8、24和300条致弱尾蚴免疫小鼠诱导产生的减虫率分别为38．67％、7．54％和16．36oA；300条致弱尾蚴经腹部和耳廓皮肤免疫诱导小鼠产生的减虫率分别为16．36％和16．14％；100条致弱尾蚴免疫3次，诱导小鼠产生减虫率为4．88％。对300条uV照射尾蚴免疫后小鼠的体液免疫应答动态观察显示，与感染对照组相比，免疫组血清中可溶性成虫抗原（SWA）和可溶性虫卵抗原（SEA）特异的IgG于免疫后2周开始升高，正常尾蚴抗原（SCA）特异的IgG于免疫1周后开始升高，SWA和SCA特异的IgG随免疫次数的增加而升高。结论 UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫C57BL／6小鼠能诱导其产生高水平的体液免疫应答，但保护力水平较低，提示C57BL／6小鼠为对UV致弱日本血吸虫尾蚴的低应答品系。     

紫外线致弱日本血吸虫尾蚴诱导BALB／c小鼠免疫保护作用研究

目的观察紫外线（UV）致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠免疫保护作用。方法辐照致弱日本血吸虫尾蚴,经腹部皮肤用UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫诱导BALB／c小鼠,3周后进行攻击感染,同时设正常感染对照组。攻击感染6周后解剖小鼠,计算减虫率、减卵率,并观察虫体发育情况和肝组织细胞免疫应答情况。结果免疫组的减虫率和减卵率分别为37．90％和51．16％;免疫组小鼠体内虫体发育明显滞后于正常感染对照组内虫体;免疫组小鼠肝脏虫卵肉芽肿较正常组明显减少。结论UV致弱日本血吸虫尾蚴免疫BALB／c小鼠能诱导较好的免疫保护力。     

重组日本血吸虫超氧化物歧化酶融合蛋白对小鼠免疫保护作用的研究

目的 探讨重组日本血吸虫胞浆内超氧化物歧化酶（SOD）融合蛋白在抗血吸虫感染中的免疫保护作用。方法采用亲和层析方法制备纯化表达的重组SOD融合蛋白。用重组SOD融合蛋白加福氏佐剂,免疫C57BL／6J小鼠,4周后用（45±2）条日本血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀小鼠,计算减虫率和减卵率,组织切片观察小鼠肝脏的病理变化。结果实验组减虫率为35．63％,减卵率为31．17％。实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿数比对照组少,单个肉芽肿的平均直径比对照组小22．32％,血清抗SOD融合蛋白特异性抗体亚类IgG1、IgG2a、IgG2b水平明显高于对照组（P均〈0．05）。结论重组SOD分子能诱导一定水平的抗日本血吸虫感染免疫保护作用。     

重组日本血吸虫中国大陆株rTPI分子对小鼠免疫保护性作用的研究

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（SjC－TPI）分子抗血吸虫感染的保护性作用。方法用IPTG诱导表达,制备纯化的重组TPI蛋白,将重组TPI抗原免疫C57BL／6及昆明鼠,8周后用血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀,计数减虫率及减卵率。结果C57BL／6获得27．78％的减虫率;昆明鼠获得21．39％的减虫率,54．00％的减卵率。结论重组SjC－TPI对血吸虫感染具有一定的保护作用,可能为日本血吸虫病疫苗候选分子之一。     

日本血吸虫重组抗原rSj14-3-3免疫保护作用的初步研究

目的初步探讨重组信号蛋白14-3-3及14-3-3与GST融合蛋白抗日本血吸虫尾蚴感染和抗血吸虫病的免疫保护作用。方法用rSj14-3-3和rSj14-3-3／SjGST免疫BALB／c小鼠，日本血吸虫尾蚴经腹部皮肤攻击感染，收集实验组与对照组成虫和虫卵，计算减虫率和减卵率；间接ELISA法测定实验组与对照组小鼠免疫前、后血清中特异性IgG抗体水平的变化；显微镜下测量并比较实验组与对照组肝脏切片上单个虫卵肉芽肿大小，观察两种重组抗原对小鼠肝脏肉芽肿形成的影响。结果上述两种重组抗原在尾蚴攻击感染后的减虫率分别为31．93％和34．39％；每克肝组织减卵率分别为53．24％和60．06％，每对成虫减卵率分别为33．39％和40．48％；免疫前各组血清IgG抗体A值差异无显著性，免疫后实验组血清IgG抗体A值明显高于对照组；实验组小鼠肝脏虫卵肉芽肿平均直径比对照组分别下降35．23％和46．13％。结论信号蛋白14-3-3在抗感染和抗病免疫中具有保护作用，复合多价疫苗的免疫保护作用可能优于单价疫苗。     

吖啶诱变剂ICR—170致弱日本血吸虫尾蚴诱导的保护性？…

为了观察吖啶诱变无产卵能力的血喟虫是否能诱生抗感染的保护性免疫力，用１０μｇ／ｍｌ吖啶诱变往日上７０致弱日本血吸虫尾蚴作免疫原，免疫Ｃ５７ＢＬ／６Ｎ小鼠两次，分别于初次免疫后６、８、１０ｗｋ用正常尾蚴作攻击感染。结果免疫鼠成虫减少率为６８．９％，肝组织虫卵减少率为７４．９％。动态观察显示，初次免疫后６ｗｋ攻击感染的减虫率最高，减卵率高峰在６～８ｗｋ．表明诱变剂ＩＣＲ－１７０致弱日本血吸虫尾蚴发育的     

日本血吸虫P14基因纳米微球-DNA疫苗的免疫保护作用

目的 探讨日本血吸虫碱性调宁蛋白样蛋白P14基因的重组真核表达载体(pcDNA3.1(+)-SjP14)对小鼠血吸虫感染的免疫保护作用.方法 制备无内毒素pcDNA3.1 (+)-SjP14及纳米微球DNA疫苗,将雌性BALB/c小鼠随机分为3组,每组10只,分别为生理盐水对照组、pcDNA3.1(+)-Sj P14组及纳米微球-DNA疫苗组.各组小鼠分别肌肉注射生理盐水和pcDNA3.1(+)-Sj P14、纳米微球DNA疫苗100μg/鼠·次,每2周免疫一次,共3次.末次免疫后2周,尾蚴攻击,6w后处死小鼠,收集成虫,计算减虫率;同时留取肝脏,部分消化后在显微镜下行虫卵计数,计算减卵率.结果 pcDNA3.1(+)-Sj P14p核酸疫苗能明显提高小鼠的抗血吸虫感染能力,减虫率和减卵率分别达到44.6％和61.6％;纳米微球-DNA疫苗免疫能进一步提高小鼠抗血吸虫感染作用,减虫率和减卵率分别提高至56.2％和73.5％.结论 pcDNA3.1(+)-Sj P14核酸疫苗有一定程度的抗血吸虫感染作用,pcDNA3.1(+)-SjP14-纳米微球复合物疫苗免疫能增强小鼠对血吸虫感染的免疫保护作用.     

紫外线减毒日本血吸虫尾蚴和童虫免疫小鼠的抵抗力研究

本文报告用２５条、５０条、１５０条和３００条紫外线减毒日本血吸虫尾蚴钻皮免疫或减毒童虫皮下注射免疫均能诱导小鼠产生有效的抗攻击感染抵抗力。以２５条免疫量为例，尾蚴钻皮及童虫皮下注射后的减成虫率分别为７２．１％和７０．４％，肝脏减卵率分别为６９．４％和５７．４％，小肠组织减卵率分别为７６．６％和８０．５％，免疫后的有效保护期为７．５个月。     

日本血吸虫pcDNA3.1(+)/MLP核酸疫苗对家兔的保护性免疫作用

目的 观察日本血吸虫pcDNA3.1( )／MLP(SJP)核酸疫苗对家兔的保护性免疫作用。方法 将24只新西兰家兔随机分为2组，每组12只；实验组每只家兔SJP的免疫剂量为500μg／次，后腿肌肉注射，对照组注射空质粒pcDNA3.1( )；隔周免疫1次，共4次，最后1次免疫后2周进行日本血吸虫尾蚴攻击感染。尾蚴攻击感染60d后处死，观察肝脏病变，计算减虫率及减卵率，并做血清抗体及细胞因子分析。结果 SJP免疫家免可明显抑制肝脏虫卵肉芽肿的大小，肉芽肿数量减少，肝组织减卵率为28．10％，并可诱导IgA、IgG1变化，诱生INF-γ应答。结论 SJP免疫家兔对日本血吸虫尾蚴攻击感染可产生一定的保护作用。     

日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫小鼠保护力的观察

目的探讨日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗免疫鼠后对尾蚴攻击感染的保护作用。方法采用10^6和10^8CFU疫苗皮下接种免疫BALB／C鼠，免疫后8周用日本血吸虫尾蚴进行攻击感染，感染后6周剖杀小鼠，计算减虫率和减卵率，观察肝脏病理变化，测量虫卵肉芽肿周长和面积，测定血清中CAg、IgG及其亚类水平，同时设有PBS和BCG对照。结果疫苗接种组的减虫率为16．64％-46．20％，减卵率为55．75％-60．50％，肝组织病变明显减轻，虫卵肉芽肿的平均周长和平均面积显著减少，血清IgG和IgG2a水平明显升高，10^8CFU组CAg升高。结论日本血吸虫重组BCG-Sj26GST疫苗是一种新型比较理想的疫苗，值得进一步深入研究。     

日本血吸虫紫外线致弱尾蚴免疫鼠诱导的抗病免疫效应

目的观察日本血吸虫紫外线致弱尾蚴（UVC）疫苗免疫小鼠诱导的抗肝虫卵肉芽肿及纤维化效应。方法将60只C57BL／6小鼠随机分为UVC疫苗免疫组和感染对照组。疫苗免疫组小鼠经皮肤接种UVC后5周,每鼠攻击感染（30±2）条正常日本血吸虫尾蚴;感染对照组经皮肤感染同量尾蚴。于攻击感染后7周解剖小鼠;取肝左叶制备连续石蜡切片,测定肝脏单卯肉芽肿大小;用ELISA法检测血清透明质酸（HA）及层黏连蛋白（LN）含量,PCR—ELISA法检测肝组织TGF—β1mRNA的表达水平。结果UVC疫苗免疫组小鼠肝组织单卵肉芽肿直径为（176．25±38．67）μm,显著小于感染对照组的（304．38±53．23）μm（P〈0．01）,与感染对照组相比,UVC疫苗免疫组小鼠肝虫卵肉芽肿直径减小了42．10％。UVC疫苗组小鼠血清中HA、LN含量均显著低于感染对照组,肝纤维化程度明显减轻。结论UVC疫苗免疫小鼠诱导的抗肝虫卵肉芽肿及其纤维化效应同疫苗免疫诱导的细胞免疫应答的增强及高水平的IFN-γ以及肝TGF—β1mRNA表达水平的降低密切相关。     

日本血吸虫97kDa DNA疫苗与致弱尾蚴疫苗诱导免疫应答特征的比较研究

目的　对比观察日本血吸虫大陆株副肌球蛋白基因疫苗(Sjc97DNA)与紫外线致弱尾蚴(UVC)疫苗免疫C57BL6小鼠诱导的抗感染保护力及免疫应答特征。　方法　以Sjc97DNA核酸疫苗经后腿胫前肌免疫C57BL6小鼠共2次,每次间隔3wk,末次免疫后3wk攻击感染日本血吸虫尾蚴;UVC疫苗接种同种小鼠后5wk攻击感染上述等量尾蚴。均于攻击感染后7wk计数虫负荷及肝卵负荷。并设空质粒对照及感染对照组。用ELISA分析免疫鼠攻击感染前后血清特异性IgG、IgA及亚型抗体水平,以及脾淋巴细胞体外诱生的细胞因子水平。　结果　Sjc97DNA疫苗及UVC疫苗免疫小鼠均诱生出以Th1型免疫应答为主的IL2、IFNγ及特异性抗AWA、SEAIgG2a、IgG2b亚型及IgA抗体,UVC疫苗组小鼠各细胞因子及抗体水平均显著高于Sjc97DNA疫苗组,但两疫苗组均未测及IL4。攻击感染后,Sjc97DNA疫苗组的减虫率36.3%、减卵率42.4%,明显低于UVC疫苗组的66.9%和75.6%。攻击感染后7wk,两疫苗组小鼠Th2型免疫应答虽有所增强,但仍以Th1型免疫应答占优势;而空质粒对照组和感染对照组小鼠则以Th2型免疫应答为主。　结论　核酸疫苗与紫外线致弱尾蚴疫苗均能诱导产生抗感染免疫保护力,致弱尾蚴疫苗的免疫保护力高于Sjc97DNA。两疫苗诱导的抗感染     

Protective immunity to Schistosoma japonicum infection depends on the balance of T helper cytokine responses in mice vaccinated with gamma-irradiated cercariae

Although the strain difference in protection of mice to Schistosoma mansoni infection has been described, limited information is available in the case of Schistosoma japonicum. In the present study, we compared the protective immunity to S. japonicum infection and cytokine production in various strains of mice vaccinated with gamma-irradiated cercariae. A significant reduction in worm recovery was observed in male and female mice of DBA/2 at a 6-week interval between vaccination and a challenge infection, whereas vaccinated mice of C57BL/6, C57BL/10, (C57BL/6 x DBA/2) F1 (B6D2F1) and (C57BL/10 x DBA/2) F1 (B10D2F1) showed no detectable level of protection. No sex-linked difference in development of resistance was observed in any of the strains so far examined. Vaccination with gamma-irradiated cercariae twice with a 3-week interval also induced significant protection against a challenge infection in DBA/2 but not in BALB/c or C57BL/6 strains. Further studies demonstrated that spleen cells of vaccinated C57BL/6 mice produced lower levels of IFN-gamma compared to the cells of vaccinated BALB/c and DBA/2. On the other hand, production of IL-10 by spleen cells was relatively higher in BALB/c mice than in the other two strains. Macrophages that had been stimulated with spleen cell culture supernatants derived from vaccinated DBA/2 damaged schistosomula more effectively than cells stimulated with supernatants derived from the other strains. These results suggest that different levels of protection observed among strains of mice depend on the balance of cytokine responses which consequently activate or suppress macrophage-mediated damage to schistosomula.     

Vaccination of mice with gamma-irradiated Schistosoma japonicum cercariae

gamma-irradiated cercarial vaccines induce high levels of protection in mice against Schistosoma mansoni infection, however, the same has not been well established for S. japonicum. Here we describe vaccination studies in mice with gamma-irradiated S. japonicum cercariae testing the effectiveness of different irradiation doses, number of vaccinations, and mouse strains. In CBA/Ca mice, a single percutaneous exposure to 500 S. japonicum cercariae previously attenuated by 10, 20, 30, 40 or 50 krad gamma-irradiation induced significant, but comparable levels of protection (34-46%) against challenge infection. In a repeat experiment in C57Bl/6 mice, only groups vaccinated with 10 or 20 krad gamma-irradiated cercariae showed statistically significant, but lower levels of resistance (20-24%). Multiple vaccination of CBA/Ca mice with 500 20 krad gamma-irradiated cercariae did not improve the resistance level (40%). Analysis of IgG responses showed no clear correlation between antibody levels and levels of protection. Western blot analysis suggested that recognition of a 200-kDa antigen might be correlated with protection, that antigens of 42 and 50 kDa may be involved in the protection induced by single vaccination, but that different antigens might be protective in single vs multiple vaccinations. Sera from mice vaccinated with gamma-irradiated cercariae recognized many fewer antigens than more protective sera from mice vaccinated with UV-attenuated cercariae. These results suggest that the mouse may not be a suitable host for studies involving gamma-irradiated S. japonicum vaccines.     

重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团对小鼠免疫保护作用的研究

目的探讨重组日本血吸虫四跨膜蛋白第二亲水基团融合蛋白（GST-TSP2HD）抗血吸虫感染免疫保护效果。方法采用Glutathione sepharose 4B胶亲和层析法大量制备GST-TSP2HD蛋白。实验组以GST-TSP2HD融合蛋白的福氏佐剂抗原免疫C57BL/6J小鼠,同时设置佐剂对照组及GST蛋白免疫对照组,每2周加强免疫1次。加强免疫2次后每只小鼠经腹部皮肤感染（45±2）条血吸虫尾蚴。感染42 d后剖杀小鼠,经生理盐水静脉灌注收集成虫,计数减虫率,用KOH溶液消化肝组织收集虫卵,计算减卵率。组织切片观察小鼠肝组织病理变化,通过酶联免疫吸附试验检测小鼠血清中的抗体水平。结果与佐剂对照组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组的减虫率为27.10%,减卵率为32.30%;与GST蛋白免疫组相比,GST-TSP2HD融合蛋白免疫组可获得39.57%的减虫率,43.53%的减卵率。GST-TSP2HD融合蛋白免疫组肝组织中的虫卵肉芽肿数量明显减少,单个虫卵肉芽肿平均直径比佐剂对照组、GST蛋白免疫组分别下降了27.08%（P〈0.05）和40.53%（P〈0.01）,差异均有统计学意义。GST-TSP2HD能诱导高水平抗TSP2HD蛋白的特异性抗体IgG,其中IgG1、IgG2b和IgG2c亚类可能在小鼠抗血吸虫感染保护性免疫中发挥重要作用。结论日本血吸虫四跨膜蛋白是一个有效的日本血吸虫病疫苗候选分子。     

日本血吸虫副肌球蛋白全基因核酸疫苗在小鼠诱生的保护性免疫力

目的： 研究日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗免疫Ｃ５７ ＢＬ／６ 及ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠诱生的保护性免疫力。方法： 将构建的日本血吸虫大陆株副肌球蛋白全基因核酸疫苗 （ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７） 经后腿胫前肌免疫Ｃ５７ＢＬ／６及ＢＡＬＢ／ｃ小鼠, 共免疫３ 次, 每次间隔３ ｗ ｋ。末次免疫后３ ｗ ｋ 以血吸虫尾蚴攻击感染, ６ ｗｋ 后计数成虫负荷及肝、脾、肠组织虫卵数。设不含ＳｊＣ９７ 编码基因的空载体质粒免疫组为对照组。结果： ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 免疫Ｃ５７ ＢＬ／６ 小鼠主要诱生ＩｇＧ２ａ 和ＩｇＧ２ｂ 亚类, 而免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠除诱生ＩｇＧ２ａ 和ＩｇＧ２ｂ 亚类外, 还诱生ＩｇＧ１。ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 免疫Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠诱生较明显的减虫率 （３５．５％ ～４１．１％ ） 和减卵率 （肝、脾及肠组织减卵率分别为４４．５％ ～５９．６％ 、５６．７％ ～８２．４％ 及５７．９％ ）, 而对ＢＡＬＢ／ｃ小鼠未诱生保护性。结论： ｐＣＭＶ－ＳｊＣ９７ 核酸疫苗能对Ｃ５７ＢＬ／６ 小鼠诱生较明显保护性免疫力, 而对ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠未诱生免疫保护力     

旋毛虫机蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用4种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴30条或100条攻击感染，攻击后45d剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：4种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（TsSA）效果较好，减虫率为21．3％，加用福氏佐剂时，其减虫率为29．3％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达48％和58．5％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵EPG减少率分别为41．7％和48．9％；当抗原剂量为10000条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达39．6％。结论：旋毛虫抗原免疫小鼠能诱导抗日本血吸虫攻击感染的免疫效应。     

小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型的建立

本文报告应用腹腔注射SEA致敏C57BL/6小鼠,继之经脾脏攻击注射虫卵的方法,建立了小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型,并与自然感染模型作比较.结果证明,SEA致敏组小鼠肝虫卵肉芽肿发生率为100%.其肉芽肿的形态、细胞组成、转化发展过程及单虫卵肉芽肿的直径和面积均与自然感染模型相似.本实验表明经脾脏注射虫卵及SEA致敏建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型是一种良好的肉芽肿实验动物模型.