肝癌组织CT抗原基因CSAG1表达及体外对肝癌细胞生长的影响

目的:探讨CSAG1(chondrosar-coma associated gene 1)基因在肝癌组织中的表达及其对肝癌细胞生长增殖的影响,为了解肝癌发生的分子机制奠定理论基础.方法:利用半定量RT-PCR技术检测CSAG1基因在12例肝癌和癌旁组织中的表达差异;RNA干扰技术沉默肝癌细胞株(Focus)内CSAG1基因的表达;利用CCK-8、克隆形成实验以及流式细胞仪分别定量分析内源性CSAG1基因被沉默前后的Focus细胞生长曲线、克隆形成能力以及细胞周期的变化.结果:与癌旁组织相比较,CSAG1基因在75%(9/12)肝癌组织中的表达量明显上调;沉默肝癌细胞株Focus中内源性CSAG1基因表达后,Focus细胞的生长明显减慢,克隆形成能力明显降低,S期细胞明显减少.结论:CSAG1可能是一个新的肝癌相关的促进基因,对其进行深入的研究有可能发现肝癌发病的新机制,也有可能发现肝癌治疗的新靶点.     

MAGEA9基因在肝癌中的表达及RNAi沉默后对肝癌细胞生长和克隆形成的影响

目的研究基因MAGEA9在肝癌中的表达,以及被沉默后对肝癌细胞株Focus和PLC/PRF/5生长的影响。方法采用半定量RT-PCR方法检测MAGEA9基因在48例肝癌样本的癌和癌旁组织,14种人正常组织和17株人肝癌细胞株中的表达差异;同时观察沉默MAGEA9表达后肝癌细胞生长曲线和克隆形成能力的变化。结果与癌旁样本相比,MAGEA9基因在肝癌组织mRNA表达水平上调的比例为29%(14/48);在正常人体组织中局限于睾丸、心脏、脾脏、肾脏组织中表达;利用RNA干扰技术下调MAGEA9基因的表达后,Focus和PLC/PRF/5细胞生长受到明显的抑制;同时,PLC/PRF/5细胞克隆形成能力明显减弱。结论MAGEA9基因在维持肝癌细胞的恶性表型中可能起到重要的作用,因此它可能与肝癌发生发展有密切的关系,深入研究MAGEA9在肝癌中的功能,有可能为肝癌诊断发现新的指标或为肝癌治疗提供潜在的药物靶点。     

PEG10基因在肝癌组织中高表达的分子机制及其功能的研究

目的:探讨印迹基因父系表达基因10(paternally expressed gene10,PEG10)在肝癌组织中高表达的分子机制,及其对肝癌细胞生长的影响。方法:采用半定量RT-PCR法检测30例肝癌患者术后肝癌和癌旁组织中以及15株肝癌细胞株中PEG10基因的表达水平;甲基化特异PCR(methylation specific PCR,MSP)技术检测17例PEG10基因高表达的肝癌和癌旁组织中PEG10基因启动子区域CpG岛甲基化状态的差异,及其与PEG10基因表达水平的关系。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术沉默肝癌QGY-7703细胞中PEG10基因的表达,并观察对细胞克隆形成能力的影响。结果:与癌旁组织相比,PEG10基因在67%(20/30)的肝癌组织中表达水平明显提高,在15株肝癌细胞株中均有表达。PEG10基因CpG岛2在29.4%(5/17)肝癌组织中显示有肝癌特异性低甲基化,同时采用亚硫酸氢盐测序验证了PEG10基因CpG岛2在肝癌病例中总体低甲基化的状态。与对照组相比,短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰PEG10表达后,肝癌细胞株QGY-7703的克隆数目明显减少(P<0.05)。结论:印迹相关基因PEG10在肝癌中高表达,可能与其启动子区域CpG岛2的低甲基化密切相关,沉默PEG10表达可以抑制肝癌细胞的生长,提示PEG10基因可能是一个新的肝癌治疗的药物靶点。     

T细胞因子4基因表达与肝癌侵袭转移的关系

目的 研究人T细胞因子4基因（hTcf-4)在原发性肝癌及肝癌细胞株中表达情况，以探讨hTcf-4基因与肝癌发生发展的关系。方法 用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR），检测了32例原发性肝癌组织、癌旁组织及5株肝癌细胞株中hTcf-4基因表达。结果 hTcf-4 mRNA在癌旁组织中的表达率为71．9％，而在癌组织中的表达率达90．6％。且癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织（P＜0．001）。同时在肿瘤包膜不完整及有转移的癌组织中该基因表达明显增高。不同细胞株中均有hTcf-4基因表达。肝癌细胞株中表达水平高于正常肝细胞株（P＜0．001），而高转移肝癌细胞株MHCC97中表达水平又高于低转移肝癌细胞株（P＜0．05）。结论 hTcf-4基因表达增高与肝癌发生发展及侵袭转移有关，提示hTcf-4可能成为协助肝癌诊断、判断预后及疗效评价的指标。     

T细胞因子4基因表达与肝癌侵袭转移的关系

目的　研究人T细胞因子 4基因 (hTcf- 4)在原发性肝癌及肝癌细胞株中表达情况 ,以探讨hTcf- 4基因与肝癌发生发展的关系。方法　用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR) ,检测了 32例原发性肝癌组织、癌旁组织及 5株肝癌细胞株中hTcf- 4基因表达。结果　hTcf- 4mRNA在癌旁组织中的表达率为 71 9% ,而在癌组织中的表达率达 90 6 %。且癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织 (P <0 0 0 1)。同时在肿瘤包膜不完整及有转移的癌组织中该基因表达明显增高。不同细胞株中均有hTcf- 4基因表达。肝癌细胞株中表达水平高于正常肝细胞株 (P <0 0 0 1) ,而高转移肝癌细胞株MHCC97中表达水平又高于低转移肝癌细胞株 (P <0 0 5 )。结论　hTcf- 4基因表达增高与肝癌发生发展及侵袭转移有关 ,提示hTcf- 4可能成为协助肝癌诊断、判断预后及疗效评价的指标。     

CD90和CD44分子在人肝癌组织中的表达

目的 探讨肝癌干细胞标志物CD90和CD44分子在人肝癌组织中的表达.方法 采用实时荧光定量PCR和免疫组化法检测40例人肝癌组织及其40例相应远端癌旁组织中CD90和CD44基因mRNA和蛋白的表达.结果 CD90和CD44基因mRNA在肝癌组织中的表达高于远端癌旁组织,差异有统计学意义(P＜0.05);CD90和CD44阳性分子定位于癌细胞膜与细胞浆,CD90和CD44细胞在肝癌组织中的阳性表达率分别为82.5％(33/40)和77.5％(31/40),在远端癌旁组织中分别为17.5％(7/40)和12.5％(5/40),两者差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 CD90和CD44分子在人肝癌组织中高表达,但低表达于相应远端癌旁组织,CD90和CD44分子可能与肝癌的发生有关.     

新基因pp3774的亚细胞定位以及在肝癌细胞系和组织中的表达谱研究

目的探讨新基因pp3774在肝癌细胞系、人肝癌及癌旁肝、肝硬化以及正常肝组织中的表达差异及其生物学功能.方法脂质体转染-荧光观察pp3774-GFP融合蛋白的亚细胞定位;合成新基因pp3774特异性多肽,制备兔源性多克隆抗体;用RT-PCR、蛋白印迹、免疫细胞化学及免疫组化方法检测pp3774基因在7个肝癌细胞系及214例肝细胞癌、18例肝硬化及10例正常肝组织中的表达差异.流式细胞术检测转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡率.结果 pp3774蛋白主要定位于细胞质(内质网为主);RT-PCR检测结果表明pp3774 mRNA在肝癌细胞系BEL-7402、Huh-7、MHCC-97L及HepG2中高表达,SMMC-7721、MHCC-LM3及人永生化肝细胞系L-02中度表达,而在Hep3B中低表达;肝癌及癌旁组织中pp3774 mRNA的表达表现为癌旁高于癌(P<0.05);免疫组化结果显示pp3774蛋白表达程度依次为正常肝≥肝硬化≥癌旁肝组织>肝癌.转染pp3774基因的SMMC-7721细胞的凋亡发生率高于对照组约10%.结论 pp3774基因是一个具有抑制肝癌细胞生长功能的新基因.     

肝细胞肝癌相关新基因FP248的功能研究

目的FP248基因是本实验室通过高通量基因功能筛选得到的一个与细胞生长相关的新基因,本研究旨在研究其在肝癌发生发展中的作用.方法用Northern blot,Southern blot方法检测FP248在肝癌及其癌旁组织中mRNA表达差异和DNA的变化.通过体外细胞转染和体内裸小鼠成瘤实验观察FP248对肝癌细胞SMMC-7721生长的作用,并用Atlas Hu-man cDNA Expression Array探讨FP248影响肝癌细胞SMMC-7721的作用机理.结果FP248的mRNA在57%(4/7)的肝癌中表达高于其相应的癌旁组织,而且肝癌组织中DNA有扩增.FP248的过表达在体内外均可明显促进SMMG-7721细胞的生长.Atlas结果显示FP248过量表达后可上调许多与细胞生长密切相关的基因,同时还参与调节细胞粘附分子.结论基因FP248与肝癌的发生发展有密切关系,是一个与人肝癌发生发展相关的新基因.     

肝细胞肝癌组织中survivin和caspase 3、Ki67的表达及意义

目的研究survivin和caspase 3、Ki67在肝细胞肝癌(HCC)及癌旁肝组织中的表达及其意义.方法利用RNA提取试剂获取新鲜肝癌组织RNA,用RT-PCR方法测定survivin基因mRNA;用免疫组化方法检测肝细胞肝癌及其癌旁组织中caspase 3和Ki67蛋白的表达.结果17例新鲜HCC组织,survivin基因表达阳性13例,阳性率为76.5%,癌旁肝组织和正常肝组织survivin表达全为阴性.13例survivin表达阳性的肝癌组织其caspase 3蛋白表达平均染色强度为0.98±0.35,显著低于4例survivin表达阴性的HCC组织1.36±0.47(P＜0.01),而survivin表达阳性的HCC组织其Ki67表达强度平均评分为2.787±0.71,又显著高于survivin表达阴性的HCC组织1.662±0.38(P＜0.01).88例肝癌组织caspase 3蛋白的阳性表达率明显低于癌旁肝组织(18.5%vs38.6%,P＜0.01),caspase 3蛋白的表达强度与HCC的分化程度相关,分化愈差,caspase 3蛋白表达愈弱(F=8.651,P＜0.01);Ki67在肝癌组织中其平均表达强度评分为2.44±1.12,在癌旁肝组织中为散在灶性表达,Ki67表达强度评分与HCC分化程度有关,分化愈差,Ki67表达强度评分愈高(F=9.121,P＜0.01).结论本文结果提示在HCC发生过程中survivin的表达或许可通过抑制caspase3而抑制细胞凋亡,促使细胞增殖,使HCC呈现无限制的生长及恶性程度不断增高.     

hAph2β和c-abl在肝细胞癌中的表达及其相互作用

目的:探讨hAph2β蛋白与c-abl蛋白在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的相互作用.方法:RT-PCR和Western 印迹法分析c-abl基因和hAph2基因在肝癌细胞株及永生化人肝细胞株中的表达.脂质体转染、免疫共沉淀和Western印迹法检测hAph2β与c-abl在SMMC-7721细胞中的相互作用.激光共聚焦-荧光显微镜观察hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中的定位.用组织芯片结合免疫组织化学法检测hAph2β和c-abl蛋白在肝癌和相应癌旁组织中的表达差异,统计学分析其表达差异的临床意义.结果:RT-PCR检测结果表明,c-abl mRNA在HepG2、L-02及MHCC-LM3细胞中高表达,在SMMC-7721、BEL-7402、Hep3B和Chang's liver细胞中中度表达,而在Huh-7、MHCC-97L细胞中低表达.Western印迹法检测结果发现,hAph2总蛋白在HepG2、Huh-7、MHCC-LM3和MHCC-97L细胞中高表达,在BEL-7402、L-02细胞中低表达;c-abl蛋白在Huh-7细胞中低表达.免疫共沉淀观察发现SMMC-7721细胞中过表达的hAph2β-GFP和内源性c-abl相互作用.荧光免疫细胞化学检测发现hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中部分共定位.免疫组织化学检测结果表明,hAph2β/c-abl蛋白在人正常肝组织、硬化肝组织、癌旁肝及原发性HCC癌组织中的强阳性率分别为:100%/50%、91.7%/100%、100%/89.5%和50.9%/19.3%,其中hAph2β和c-abl在癌旁肝组织中的表达均明显高于肝癌组织(均P<0.001),2者在56.1%(32/57)的肝癌组织中同时高或低表达.结论:hAph2β和c-abl在SMMC-7721细胞中相互作用,在原发性HCC及相关组织中共表达.     

肝癌及相关组织中NET-1基因与蛋白的表达

背景与目的:NET-1是最近发现的肿瘤相关基因,它在肝癌中的表达目前尚未见报道。本研究在胚胎肝、成人肝、肝癌及相应的癌旁组织中筛检和比较NET-1基因和蛋白表达,以探讨NET-1基因在肝癌表达的特征。方法:用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测3例胚胎肝、4例成人肝、4例验证肝癌组织和28例肝癌与相应癌旁组织中NET-1mRNA的表达,由四星图像分析系统软件检测NET-1基因mRNA的光密度。用基因生物工程方法制备NET-1多克隆抗体,并用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学检测培养的人肝癌细胞系SMMC-7721中NET-1抗体的表达,免疫组化法检测28例肝癌与癌旁组织中NET-1蛋白的表达。结果:(1)正常成人和胎儿肝组织中NET-1基因mRNA不表达,4例验证肝癌组织中NET-1基因mRNA均呈阳性表达;肝癌与癌旁组织中NET-1基因mRNA高表达,阳性率均为85.71%(24/28)。肝癌组织中NET-1mRNA的平均光密度显著高于癌旁组织(0.64与0.47,P<0.05)。(2)经激光共聚焦显微镜观察SMMC-7721细胞中NET-1抗体的表达定位于胞浆。(3)免疫组化检测NET-1多克隆抗体在同组肝癌和癌旁组织中NET-1蛋白检出率分别为96.43%(27/28)和71.43%(20/28),两者差异具有显著性意义(P<0.05)。(4)RT-PCR方法和免疫组化方法检测肝癌和癌旁组织中NET-1基因mRNA表达与蛋白表达两者之间阳性率无显著性差异,并呈显著性正相关(癌中r=0.48,癌旁r=0.40,均P<0.05)。结论:NET-1基因表达可能是肝癌发生的早期分子事件,该基因在肝癌诊断中可能有一定的参考价值。     

肝细胞肝癌中hTERT基因表达及其与肿瘤临床病理特征的关系

目的:研究hTERT基因在肝细胞肝癌中的表达,探讨其在肝细胞肝癌发生发展中的作用及意义。方法:应用免疫组化(SP法)和半定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)同步检测62例肝细胞肝癌及对应癌旁组织、8例正常肝组织中hTERT蛋白及hTERTmRNA的表达情况,分析hTERT基因的表达与肝细胞肝癌临床病理参数的关系。结果:hTERT蛋白主要定位于肝癌细胞胞质内,偶见核内染色。hTERT蛋白和hTERTmRNA在肝细胞肝癌中的阳性率分别为88.71%(55/62)、82.26%(51/62),分别明显高于癌旁肝组织的阳性率9.68%(6/62)、6.45%(4/62),差异具有非常显著性(P<0.01)。hTERT蛋白及其mRNA在8例正常肝组织均未见表达,阳性率为0.00%(0/8)。统计学分析显示,在肝细胞肝癌中hTERT基因的表达与肿瘤分期分级、门静脉有无癌栓、血清中甲胎蛋白表达水平、是否合并HBV感染等有关(P<0.05),与患者年龄、性别、肿瘤大小等因素无关。结论:hTERT基因可能在肝细胞肝癌的发生发展中起着重要作用,其表达有望成为肝细胞肝癌的重要分子生物学指标。     

Frequent hypermethylation of CpG islands and loss of expression of the 14-3-3 sigma gene in human hepatocellular carcinoma

The 14-3-3 sigma gene has been implicated in G2/M cell cycle arrest by p53. Frequent inactivation of the 14-3-3 sigma gene by hypermethylation of CpG islands has recently been reported in human breast carcinoma. The aim of this study was to examine the methylation status of CpG islands of the 14-3-3 sigma gene in hepatocellular carcinoma (HCC). The methylation status of the 14-3-3 sigma gene was evaluated in four normal liver tissues and 19 paired specimens of carcinoma and adjacent non-tumorous liver tissues using bisulfite-single strand conformation polymorphism (bisulfite-SSCP), a combination of sodium bisulfite modification and fluorescence-based polymerase chain reaction (PCR)-SSCP. The 14-3-3 sigma protein expression was examined by immunohistochemical staining. Hypermethylation of CpG islands of the 14-3-3 sigma gene was detected in 89% (17/19) of the HCC tissues but not in any of the four normal liver tissues. All of the 14 methylation-positive HCC samples analysed by immunohistochemistry showed loss of 14-3-3 sigma expression, while both of the methylation-negative HCC samples retained the expression, and a significant correlation was found between methylation and loss of expression. Lower levels of methylation were detected in adjacent non-tumorous liver tissues (6/16 in cirrhotic tissues and 1/3 in chronic hepatitis tissues), but the 14-3-3 sigma expression was retained in all of these tissues. In a methylation-positive HCC cell line, HLE, 5-aza-2'-deoxycytidine (5-aza-dC)-induced demethylation of CpG islands led to reactivation of gene expression, indicating that hypermethylation plays a causal role in inactivation of the 14-3-3 sigma gene in HCC. Hypermethylation and the resulting loss of expression of the 14-3-3 sigma gene corresponds to one of the most common abnormalities reported to date in HCC, suggesting their crucial role in the development and/or progression of HCC.     

肝细胞癌组织中lncRNA H19、miR-200a表达变化与临床预后的相关性分析

目的:观察肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中lncRNA H19、miR-200a表达情况,并探讨其与HCC患者临床病理特征及预后的关系。方法:选取57例HCC患者经手术切取的HCC组织和相应癌旁组织（≥癌灶边缘5 cm）,以及60例因肝血管瘤行手术切除的周围正常肝组织。采用qRT-PCR法检测组织中lncRNA H19和miR-200a表达水平;分析其与HCC患者临床病理特征及5年总生存率（overall survival,OS）的关系。结果:HCC组织中lncRNA H19表达水平明显高于癌旁组织和正常肝组织（P＜0.05）;HCC组织中miR-200a表达水平显著低于癌旁组织和正常肝组织（P＜0.05）。HCC组织中lncRNA H19、miR-200a表达与HCC患者分化程度、TNM分期、AFP值及是否侵袭转移有关（P＜0.05）。HCC组织中lncRNA H19表达与miR-200a表达呈负相关（P＜0.05）。HCC患者lncRNA H19低表达5年OS明显高于高表达（P＜0.05）;HCC患者miR-200a高表达5年OS显著高于低表达（P＜0.05）。分化程度、TNM分期、lncRNA H19及miR-200a表达均是影响HCC患者预后的独立危险因素（P均＜0.05）。结论:HCC组织中lncRNA H19表达上调、miR-200a表达下调,二者异常表达与病情程度及5年OS关系密切,可能相互作用参与HCC发展。     

PTEN基因在肝细胞肝癌中的表达及其意义

目的:研究PTEN基因在肝细胞 肝癌(humanhepatocellularcarcinoma, HCC)中的表达,探讨其在HCC发生发展 中的作用及意义。方法:应用免疫组化(SP 法)和半定量逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测58例HCC及对应癌旁组 织中PTEN蛋白及PTENmRNA的表达 情况,分析PTEN基因的表达与HCC临床 病理参数的关系。结果:PTEN蛋白明确 定位于肝细胞胞质内。PTENmRNA和 PTEN蛋白在HCC中的阳性率分别为 41.38%(24/58)、44.83%(26/58),明显低 于癌旁肝组织的阳性率100%(58/58),差 异具有统计学意义,P<0.01。统计学分析 显示,在HCC中PTEN基因的低表达与肿 瘤分期分级、门静脉有无癌栓、血清中甲胎 蛋白表达水平、是否合并HBV感染等有 关,P<0.05,与患者年龄、性别、肿瘤大小 等因素无关。结论:PTEN基因可能在 HCC的发生发展中起着重要作用,其表达 有望成为HCC的重要分子生物学指标。     

自噬相关基因5在肝癌组织中的表达及临床意义

背景与目的：肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）是死亡率极高的原发性肝癌,其恶变的机制目前尚未明确。近些年随着对自噬研究的深入,发现自噬可以提供肿瘤生长高能量的需求,增加肿瘤细胞对极端低氧、化疗药物等环境的适应性,因而与肿瘤的恶性进程关系密切。该研究旨在探讨自噬小体形成中泛素样连接系统Atgl2-Atg5-Atgl6参与自噬的关键因子,自噬相关基因5（autophagy-related gene 5,Atg5）在HCC组织中的表达及与临床病理参数的关系。方法：回顾性分析中国医科大学肿瘤医院于2015年3月—2017年6月进行肝癌手术切除的110例已确诊无误的HCC标本,免疫组织化学染色检测110例癌旁及HCC组织中Atg5蛋白的表达,同时分析HCC组织中Atg5蛋白表达与患者临床病理学特征之间的关系。蛋白质印迹法（Western blot）与实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）分别检测46例癌旁和HCC组织中Atg5蛋白及mRNA的表达。结果：免疫组织化学结果显示,HCC组织Atg5蛋白的阳性率71.82%（79/110）,明显高于癌旁组织的阳性率20.09%（23/110）,差异有统计学意义（P<0.05）。HCC组织Atg5蛋白水平与肿瘤直径、甲胎蛋白（alpha fetoprotein,AFP）及血管侵犯相关（P<0.05）,肿瘤直径大于等于5 cm、AFP水平大于等于200 ng/mL且合并血管侵犯HCC患者的Atg5蛋白水平较高。Western blot结果显示,HCC组织Atg5蛋白水平为1.25±0.25,癌旁组织为0.47±0.12（P<0.05）。RTFQ-PCR结果显示,Atg5 mRNA在HCC组织中的表达相当于癌旁组织的4.37倍（P<0.05）。结论：HCC组织中Atg5的基因表达和蛋白水平均显著增加,HCC组织的发生、发展可能与Atg5自噬活性的激活有关。     

mdm2基因表达与肝细胞癌侵袭性的关系

目的以ｍｄｍ２基因为指标,研究与肝细胞癌侵袭性有关的分子机理。方法应用ＲＴ－ＰＣＲ方法,研究ｍｄｍ２基因在３４例癌组织和１９例癌周肝组织中的表达及其与肝细胞癌侵袭性的关系。结果ｍｄｍ２基因表达值（ｘ±ｓ）癌组织高于癌周肝组织（５０．１８％±５．２４％对２７．７０％±７．４３％,Ｐ＜０．０５）,侵袭性肝癌高于非侵袭性肝癌（５９．０９％±７．２８％对３７．８７％±６．３７％,Ｐ＜０．０５）,但不同大小肝癌及不同包膜状况肝癌,其ｍｄｍ２基因表达值差异无显著意义。结论ｍｄｍ２基因表达与肝细胞癌的侵袭性有关。     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的：研究血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）与基质金属蛋白酶－９（ＭＭＰ－９）在原发性肝癌中的表达与肝癌复发、转移的关系。方法：采用逆转录－聚合酶链式反应技术,对３９例原发性肝癌的手术切除标本（包括癌组织及癌旁肝组织）中的ＶＥＧＦ及ＭＭＰ－９基因表达进行了检测。结果：ＶＥＧＦ分别在９２％（３６／３９）的肝癌组织７９％（２６／３３）的肝硬变组织和５７．１％（４／７）的下沉肝组织中表达,ＭＭＰ－９分别基因表     

MARK2在肝癌中的表达及其对肝癌细胞迁移的影响

背景与目的：肝细胞癌是我国常见恶性肿瘤之一,其发生机制目前尚未明确。该研究旨在探讨微管亲和性调节激酶2（microtubule affinity-regulating kinase 2,MARK2）在肝癌中的表达及其对肝癌细胞迁移能力的影响。方法：通过组织芯片和免疫组织化学法对肝癌组织中MARK2的表达进行分析;将MARK2基因真核表达载体及其空载体转染至肝癌HepG2细胞中,采用蛋白质印迹法（Western blot）检测转染后MARK2蛋白表达水平;采用Transwell实验及细胞划痕实验检测MARK2对HepG2细胞迁移能力的影响;通过癌症基因组图谱（the Cancer Genome Atlas,TCGA）分析MARK2在肝癌组织和正常组织中的表达差异,及其与肝癌患者临床病理特征的关系;运用网络在线生存期分析软件Kaplan-Meier plotter分析MARK2表达与肝癌患者生存预后的关系。结果：MARK2在肝癌组织中表达明显高于癌旁组织,肝癌组织中MARK2高表达与TNM分期及病理分级显著相关（P<0.001）;生存分析结果表明,MARK2高表达患者5年生存率明显低于MARK2低表达组（P<0.01）;将MARK2基因真核表达载体转染肝癌HepG2细胞后,MARK2蛋白表达上调,肝癌细胞的迁移能力增强。结论：MARK2在肝癌组织中高表达,并促进肝癌细胞的迁移。