肺癌组织中Akt2、p-Akt蛋白的表达

目的:观察肺癌组织中Akt2、p-Akt的表达.方法:对原发性非小细胞肺癌组织80例和肺良性病变组织35例行HE染色及Akt2、p-Akt免疫组织化学染色.结果:肺癌组织中Akt2蛋白阳性率为91.3%(73/80),p-Akt蛋白阳性率为78.8%(63/80);肺良性病变组织中Akt2蛋白阳性率为5.7%(2/35),p-Akt未表达.肺癌组织中Akt2、p-Akt蛋白阳性率高于肺良性病变组织(P＜0.05).Akt2、p-Akt蛋白阳性率与患者年龄、性别、组织学类型、TNM分期无关(P＞0.05).Akt2蛋白的表达与肺癌组织淋巴结转移有关(P＜0.05);p-Akt蛋白与肺腺癌组织分化程度有关(P＜0.05).结论:Akt2及p-Akt蛋白的表达可能与肺癌的发生有关.     

P13K抑制剂对转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞Smad泛素化调节因子2表达的影响

目的 探讨体外条件下转化生长因子β1（TGF-β1）对人近端肾小管上皮细胞系（HK-2）表达Smad泛素化调节因子2（Smurf2）的诱导情况，以及P13K抑制剂LY294002对其的影响。方法 应用RT-PCR法检测Smurf2mlKNA的表达，应用Western印迹法检测Smurf2蛋白的表达。结果 HK-2细胞有基础量的Smurf2mlKNA和蛋白的表达，TGF-β1呈时间和剂量依赖性增加HK-2细胞Smurf2mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。P13K抑制剂LY294002呈剂量依赖性抑制TGF-β1（100pM）所诱导的HI〈-2细胞Smurf2mRNA和蛋白的表达（P〈0．01）。结论 在体外，TGF-β1可能通过P13K／AKT通路诱导HK-2细胞Smurf2mRNA和蛋白的表达。P13K抑制剂LY294002可抑制Smurf2mRdNA和蛋白的表达。     

镉诱导肾细胞凋亡及其对P13K／Akt和ERK1／2信号通路的影响

目的镉（cd）诱导猪肾近曲小管上皮细胞（LLC-PK）凋亡及其对胞内蛋白激酶B（P13K／Akt）和胞外信号调节激酶（ERKI／2）表达的影响。方法应用不同浓度Cd（0、10、20、40、50μmol／L）作用LLC-PK：12h和40μmol／Lcd作用LLC-PK。不同时间（0、3、6、12、24h）,采用蛋白免疫印迹法检测细胞内蛋白激酶B（P13K／Akt）和胞外信号调节激酶（ERKl／2）及其磷酸化蛋白表达水平。结果镉可上调P13K／Akt和ERKl／2的表达：当加入N-乙酰半胱氨酸（NAC）预处理后对镉引起的ERKl／2上调具有抑制作用,但对镉引起的P13K／Akt上调的抑制作用不明显。结论镉诱导肾细胞凋亡可能与活化P13K／Akt和ERKI／2通路有关。NAC拮抗镉性肾细胞凋亡的机制可能与抑制镉引起的ERKl／2表达上调有关。     

P13K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的作用

目的 研究P13K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病理痛中的作用.方法 Wistar大鼠,体质量180～220g,腹腔单次注射链脲菌素65mg/kg制作糖尿病神经病理痛模型.4周后用Von frey纤雏测双后足机械痛阈,痛阈明显下降者为糖尿病神经病理性疼痛造模成功.将64只成模大鼠随机分为两组:糖尿病神经病理痛组(D组)和P13K抑制剂组(Ⅰ组),另取同窝大鼠32只作为对照组(C组).Ⅰ组大鼠静脉注射0.5mg/kg的P13K抑制剂Wortmannin,1次/天.于实验开始后第4、6、8、10周末,各组分别随机取8只大鼠,采用Von frey纤维丝测机械缩足反应阈值(MWT),用肌电图仪测定神经传导速度(NCV),用免疫组化和Western blot法检测脊髓和背根神经节(DRG)磷酸化Akt(p-Akt)水平.结果 与C组比较,D组和Ⅰ组均在第4周开始出现MWT降低,NCV减慢(P＜0.05)并持续至第10周;与D组比较,在用药后各时点Ⅰ组MWT和NCV升高(P＜0.05).与C组比较,在脊髓和背根神经节中,D组和Ⅰ组均在第4周开始出现p-Akt升高(P＜0.05),而D组上述改变持续至第10周;Ⅰ组第6周时出现p-Akt下降并持续至第10周(P＜0.05).结论 P13K/Akt信号通路参与了糖尿病大鼠神经病理痛的形成和维持.     

姜黄素对肺腺癌A549细胞P13K/Akt/Bcl-2信号通路的作用

目的：研究姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖率、凋亡和P13K/Akt/Bcl-2信号通路的影响。方法：采用细胞计数法绘制肺腺癌A549细胞生长曲线,MTF法测定姜黄素对肺腺癌A549细胞抑制率。将不同浓度姜黄素作用于肺腺癌A549细胞24h后,显微镜下观察细胞形态;TUNEL法检测细胞凋亡率;免疫组化法检测P13K/Akt/Bcl-2蛋白表达。结果：姜黄素能够抑制肺腺癌A549细胞增殖,且呈一定剂量和时间依赖性;随着药物浓度上升细胞凋亡率明显增高（P〈0．05）;P13K、Akt和Bcl-2蛋白表达明显下降（P〈0．05）。结论：姜黄素对肺腺癌A549细胞增殖具有抑制作用,其作用可能是诱导细胞凋亡及抑制P13K/Akt/Bcl-2信号通路来实现的。     

原花青素B2通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路减轻氯氰菊酯所致神经元损伤

目的 探讨原花青素B2（PCB2）是否通过调控P13K/Akt/Nrf2信号通路保护氯氰菊酯（CYP）导致的神经元氧化损伤。方 法 原代培养C57BL/6小鼠大脑皮层神经元,将细胞随机分成5组：正常对照组;PCB2处理组（将5 μg/mL的PCB2与细胞共培养24 h）;CYP暴露组（将50 μmol/L的CYP与细胞共培养24 h）;PCB2预处理组（将5 μg/mL的PCB2 与细胞预处理30 min后加入CYP 50 μmol/L共培养24 h）;LY294002处理组（先将20 μmol/L的 LY294002与细胞预处理30 min,然后加入PCB2预处理30 min,后与CYP共培养24 h）。采用CCK-8分析各组细胞活性,采用荧光探针DCFH-DA及流式细胞术检测细胞内ROS水平,通过Hoechst 33342观察细胞核形态变化,采用JC-1检测线粒体膜电位异常,利用Western blot检测Nrf2、HO-1、p-Akt、Akt蛋白表达。结果 CYP暴露降低细胞活性（P<0.001）,引起线粒体膜电位下降、促使细胞核出现固缩、浓染等凋亡特征,导致ROS产生异常。PCB2预处理提高细胞存活率（P=0.006）,改善细胞核形态异常,逆转CYP导致的线粒体膜电位下降,减弱细胞内ROS产生。CYP暴露引起Nrf2核易位,Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白表达上调（P<0.001）。PCB2预处理调节Nrf2、HO-1、p-Akt蛋白过度表达。抑制P13K/Akt信号通路消除了PCB2对CYP诱导损伤的保护作用（P<0.05）。结论 PCB2通过激活P13K/Akt信号通路,调控Nrf2/ARE通路,减轻CYP所致小鼠大脑皮层神经元氧化损伤。     

三阴型化疗耐药乳腺癌中P13K／Akt信号通路生物学功能的研究

目的探讨三阴型化疗耐药乳腺癌中磷脂酰肌醇-3-激酶／丝苏氨酸蛋白激酶（P13K／Akt）信号通路生物学功能。方法选取2009年1月-2011年12月该院收治的49例三阴型化疗耐药性乳腺癌患者作为观察对象。患者采用P13K／Akt抑制剂雷帕霉素口服液治疗。检测用药期间血药浓度。探讨治疗后患者发生肿瘤转移及疗效。结果治疗后,总有效率为79．59％,较治疗前疗效,差异有统计学意义（P〈O．05）;治疗期间常见不良反应主要为血小板减少、高血脂、皮肤毒性、转氨酶增高;乳腺癌组织及转移灶癌组织P13K／Akt表达率治疗前后均差异有统计学意义（P〈O．05）。结论P13K／Akt信号通路抑制剂能够有效阻断该信号通路在乳腺癌增殖、转移、耐药作用。     

乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质的影响

目的 探讨乌灵胶囊对卒中后抑郁大鼠海马P13K/Akt/mTOR通路和神经递质影响。方法 选取健康SD大鼠48只,随机分为对照组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组12只。采用改良Zea-Longa法复制大脑中动脉缺血大鼠模型（MCAO模型）,MCAO模型复制成功后皮下注射利血平复制卒中后抑郁模型。对照组和模型组给予等剂量双蒸水灌胃;低剂量组于模型复制成功后第2天给予40 mg乌灵胶囊;高剂量组于模型复制成功后第2天给予80 mg乌灵胶囊,1次/d。各组大鼠灌胃21 d。采用Western blotting检测大鼠海马组织海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量;高效液相色谱法测定海马组织NE、DA和5-HT含量。结果 模型组、低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分高于对照组（P <0.05）,海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量低于对照组（P <0.05）,海马组织NE、DA和5-HT含量低于对照组（P <0.05）;而低剂量组和高剂量组大鼠Zea Longa评分低于模型组（P <0.05）,海马组织PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量高于模型组（P <0.05）,海马组织NE、DA和5-HT含量高于模型组（P <0.05）。结论 乌灵胶囊可改善卒中后抑郁大鼠行为,且可调节海马P13K/Akt/mTOR通路,调节神经递质水平。     

芪玉三龙汤对肺癌移植瘤小鼠PI3K/Akt/mTOR通路PI3K、Akt、mTOR表达的影响

目的 研究芪玉三龙汤对小鼠皮下移植瘤生长及对PI3K/Akt/mTOR信号通路调节的影响。方法 采用Lewis肺癌细胞培养移植法复制肺癌荷瘤小鼠模型,荷瘤成功后随机分为模型组,化学治疗组,芪玉三龙汤高、中、低剂量组,联合组;观察小鼠的生存状态,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率;Western blot法检测荷瘤小鼠肿瘤组织PI3K、Akt、mTOR蛋白表达。 结果 芪玉三龙汤高剂量组、联合组生存状态优于化学治疗组;芪玉三龙汤对肺肿瘤具有温和的抑制作用,其高剂量抑制肿瘤生长作用较优,但量效关系不明显,其与顺铂联用无明显增效作用;芪玉三龙汤可以下调PI3K、Akt和mTOR表达水平,和顺铂联用对下调关键分子Akt的表达具有明显的协同作用。 结论 芪玉三龙汤对肺癌移植瘤的抑制作用可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路关键分子有关,与化学治疗药联用可协同下调关键蛋白Akt的表达。     

Herceptin下调HER2表达后对PI3K/Akt通路蛋白表达的影响

目的:研究Herceptin下调乳腺癌细胞HER2表达对PI3K/Akt通路相关蛋白表达的影响,探讨该通路在Herceptin抗肿瘤效应中的作用。方法:Herceptin处理HER2过表达的乳腺癌细胞株SKBR-3,免疫细胞化学检测HER2、p21Cip1和p27Kip1的表达,Westernblot检测p-Akt和Bad的表达。结果:Herceptin处理组细胞HER2阳性表达率(37.4%)显著低于对照组(78.3%)(P<0.01)。Herceptin处理组与对照组比较,p-Akt蛋白含量降低53.5%(P<0.01),Bad蛋白含量升高0.83倍(P<0.01)。Herceptin处理组细胞p21Cip1和p27Kip1阳性表达率(分别为67%和56.1%)显著高于对照组(分别为19%和21.4%)(P<0.01)。结论:Herceptin下调HER2表达后,通过下调p-Akt表达而上调其下游Bad、p21Cip1和p27Kip1的表达,从而抑制肿瘤细胞增殖,促进肿瘤细胞凋亡。     

地塞米松对PI3K／Akt途径及哮喘大鼠气道炎症的调控

目的研究大鼠支气管哮喘（简称哮喘）模型PI3K／Akt信号转导途径与Th1／Th2的关系,探讨地塞米松对PI3K／Akt信号转导途径及大鼠气道炎症的调控。方法取SPF级雄性SD大鼠32只,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组、渥曼宁青霉素组,每组8只。以卵白蛋白（OVA）致敏和激发建立大鼠哮喘模型。酶联免疫吸附试验（ELISA）测定BALF中IL-4、IL-12含量;免疫组化MaxvisionTM法测定肺组织中P—Akt蛋白的表达量并观察其表达位置;Western blot测定肺组织匀浆中P—Akt蛋白的含量;并对各检测指标进行组间比较分析。结果（1）与对照组比较,其他3组大鼠IL-4含量显著增高、IL-12含量显著降低（均P〈0.01）;而且地塞米松组及渥曼宁青霉素组IL-4含量显著低于哮喘组、IL-12含量明显高于哮喘组（P〈0.05或0．01）。（2）与对照组比较,其他3组大鼠P—Akt蛋白相对表达量及光密度值均显著增高（均P〈0.01）;而且地塞米松组及渥曼宁青霉素组P—Akt蛋白相对表达量及光密度值均显著低于哮喘组（均P〈0.01）.（3）肺组织中P—Akt蛋白含量与IL-4含量呈显著正相关（r=0．918,P〈001）,与IL-12含量呈显著负相关（r=-0．868,P〈0.01）.结论哮喘大鼠模型中出现了PI3K—Akt通路的激活,其Th1/Th2失衡可能与P13K／Akt通路的激活有关。糖皮质激素可能通过抑制PI3K／Akt通路,改善Th1/Th2失衡,从而减轻哮喘气道炎症。     

P13K/Akt通路在药物放射增敏中作用的机制

目的 进一步探讨PI3K/Akt信号转导途径在药物放射增敏中作用的分子机制.方法 体外培养HeLa细胞,多西紫杉醇(docetaxel)和顺铂(cisplatin)单独及分别联合P13K抑制剂LY294002作用24 h,X线6 Gy剂量照射;Western blot检测Akt、磷酸化Akt(pAkt)、Bad、磷酸化Bad(pBad)蛋白的表达变化;RT-PCR检测Bad、Ku70、Ku80 mR-NA的表达变化;中性彗星电泳检测不同处理组细胞DNA的损伤.结果 ①docetaxel+LY294002联合照射组、cispla-tin+LY294002联合照射组Bad mRNA表达增高,Ku70 mRNA表达减低,Ku80 mRNA表达无明显变化;②docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组Bad蛋白表达增高,pAkt、pBad蛋白表达减低,Akt蛋白表达无明显变化;③docetaxel+LY294002联合照射组、cisplatin+LY294002联合照射组细胞彗星电泳尾距明显长于单纯药物增敏照射组.结论 ①docetaxel和cisplatin药物增敏照射能够明显活化PI3K/Akt信号转导途径;②抑制PI3K/Akt信号转导途径能够抑制Ku70表达,减少细胞DNA损伤后的再修复,提高促凋亡因子Bad的表达,促进细胞的凋亡.     

PI3K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病理性疼痛中的作用

目的 研究P13K/Akt信号通路在大鼠糖尿病神经病理痛中的作用.方法 Wistar大鼠,体质量180～220g,腹腔单次注射链脲菌素65mg/kg制作糖尿病神经病理痛模型.4周后用Von frey纤雏测双后足机械痛阈,痛阈明显下降者为糖尿病神经病理性疼痛造模成功.将64只成模大鼠随机分为两组:糖尿病神经病理痛组(D组)和P13K抑制剂组(Ⅰ组),另取同窝大鼠32只作为对照组(C组).Ⅰ组大鼠静脉注射0.5mg/kg的P13K抑制剂Wortmannin,1次/天.于实验开始后第4、6、8、10周末,各组分别随机取8只大鼠,采用Von frey纤维丝测机械缩足反应阈值(MWT),用肌电图仪测定神经传导速度(NCV),用免疫组化和Western blot法检测脊髓和背根神经节(DRG)磷酸化Akt(p-Akt)水平.结果 与C组比较,D组和Ⅰ组均在第4周开始出现MWT降低,NCV减慢(P＜0.05)并持续至第10周;与D组比较,在用药后各时点Ⅰ组MWT和NCV升高(P＜0.05).与C组比较,在脊髓和背根神经节中,D组和Ⅰ组均在第4周开始出现p-Akt升高(P＜0.05),而D组上述改变持续至第10周;Ⅰ组第6周时出现p-Akt下降并持续至第10周(P＜0.05).结论 P13K/Akt信号通路参与了糖尿病大鼠神经病理痛的形成和维持.     

PI3K/Akt抑制剂联合西妥昔单抗对人肺癌细胞的体外抑制作用

目的探讨PI3K/Akt抑制剂LY294002单独或联合西妥昔单抗对人肺癌细胞株A549的作用,以期为肺癌临床治疗方案的选择、用药顺序提供新的理论依据。方法选用西妥昔单抗和LY294002,分析单药及不同浓度和联合作用方式对A549细胞增殖的影响;计算IC50值和CI值,分析药物联合作用的效应是协同、相加抑或拮抗。结果单独作用时,西妥昔单抗与LY294002最大抑制率分别为(57.3±6.2)%、(56.2±6.0)%;联合作用时,LY294002→西妥昔单抗序贯给药(CI=0.41)比同步应用(CI=0.73)可增强疗效,其最大抑制率分别为(84.9±7.5)%和(79.0±7.3)%。结论两药对A549细胞增殖均具有抑制作用,LY294002→西妥昔单抗序贯联合应用对A549细胞的增殖抑制率最高。     

PHLPP2与Akt表达对NSCLC紫杉醇耐药的临床意义

目的研究PHLPP2在紫杉醇耐药非小细胞肺癌组织中的表达及其与Akt表达的关系。方法采用免疫组化方法分别检测160例非小细胞肺癌组织中的PHLPP2、Akt表达,分析PHLPP2在紫杉醇耐药组和非耐药组非小细胞肺癌组织细胞中的表达高低及其与Akt表达的关系。结果 (1)PHLPP2在低中分化肺癌组织内的阳性表达为39.8%,高分化肺癌组织内的阳性表达为70.2%,两者表达存在显著性差异(χ~2=13.539,P0.001)。(2)Akt在Ⅳ期的阳性表达为77.0%,在Ⅲb期的阳性表达为56.7%,两者表达存在显著性差异(χ~2=7.297,P0.05)。在淋巴结转移的阳性表达为83.3%,在无淋巴结转移的阳性表达为44.8%,两者表达存在显著性差异(χ~2=25.804,P0.001)。在不同的分化程度、性别、年龄、肿瘤最大直径、组织学类型的表达差异均无显著性(P0.05)。(3)PHLPP2表达在TP方案耐药组中低表达率高于非耐药组,差异有统计学意义(P=0.043)。(4)Akt表达在TP方案耐药组中高表达率高于非耐药组,差异有统计学意义(P=0.022)。结论 PHLPP2可能通过调节Akt水平减少NSCLC对紫杉醇治疗的耐药性。     

PI3K/Akt信号途径抑制烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡

目的 探讨PDK/Akt信号途径在烧伤后大鼠缺血缺氧心肌细胞凋亡中的作用及机制.方法 首先建立模拟烧伤的动物模型,通过Western blot观察P13K/Akt信号途径的活化规律,TUNEL实验观察烧伤大鼠心肌凋亡.然后建立离体培养的缺血缺氧心肌细胞模型,并分为对照组、单纯缺血缺氧组、LY294002处理组或IGF-1处理组,应用ELISA观察缺血缺氧心肌细胞凋亡.并通过DEVD荧光检测caspase-3酶活性,RT-PCR检测p53、Bax的转录活性.结果 烧伤后大鼠心肌组织内P13K和pAkt表达逐渐增加,伤后3 h达高峰;烧伤3 h后,大鼠心肌细胞凋亡率显著增加;应用LY294002特异性抑制P13K/Akt通路后,大鼠心肌细胞凋亡率较对照组增加更为显著(P<0.05).缺血缺氧导致体外培养心肌细胞凋亡增加,caspase-3活性逐渐增强,p53、Bax mRNA表达量逐渐升高;与单纯缺血缺氧组相比,应用LY294002阻断P13K/Akt途径活化后,心肌细胞凋亡数量增加更显著(P<0.05),caspase-3活性增高更为明显(P<0.05),053、Bax mRNA表达量均显著升高(P<0.05);用IGF-1预先激活P13K/Akt途径后,与单纯缺血缺氧组比较,心肌细胞caspase-3活性明显降低(P<0.05).结论 P13K/Akt信号途径在缺血缺氧心肌细胞中具有抗凋亡作用,该作用与P13K/Akt调控促凋亡基因p53、Bax的表达,抑制caspase-3凋亡反应有关,并为心肌缺血缺氧损害的临床防治提供新思路及实验依据.     

人细胞色素P450 2A13基因在舌癌中的表达

目的:比较分析细胞色素P4502A13(cytochrome P450 2A13,CYP2A13)分别在舌癌组织及其对应癌旁组织中的表达水平,探讨CYP2A13与舌癌的相关性。方法:采用实时定量PCR和Western blot技术分别检测26例舌癌组织及其对应癌旁组织中CYP2A13mRNA及蛋白表达。结果:CYP2A13 mRNA及蛋白在舌癌组织中表达量均低于对应的癌旁组织(P<0.05)。结论:CYP2A13在舌癌组织中表达降低,结合CYP2A13的功能,提示CYP2A13在癌组织中的表达降低可能是舌癌发生发展过程中的自我保护效应。