瘤内注射型卡铂缓释微球制备初步研究

目的：制备适宜于超声引导局部注射治疗肿瘤的载药缓释剂--卡铂/乳酸羟基乙酸共聚物微球。方法：采用W/O/W复乳法、恒温磁力搅拌制备卡铂/乳酸羟基乙酸共聚物缓释微球，并观察其物理特征和体外缓释效果。结果：制备的缓释微球粒径范围为5-200μm，10-100μm的微球数目为90.1％，包封率为68.3％，载药率为15.3％，缓释时间持续96h以上。结论：卡铂/乳酸羟基乙酸共聚物缓释微球符合肿瘤局部注射的要求。     

卡铂缓释微球瘤内注射治疗兔肝VX2肿瘤最适剂量研究

目的 探索卡铂缓释微球瘤内注射治疗兔VX2肝肿瘤的最适剂量。方法 通过开腹瘤块包埋法建立兔肝VX2肿瘤模型,将荷瘤兔随机分为A、B、C、D、E五个治疗组和注射用大豆油阴性对照组。观察治疗后第14d肿瘤体积变化情况和血常规变化情况。结果 卡铂缓释微球治疗兔VX2肝肿瘤的效果随剂量增加而增加,而各剂量组之间毒性反应未见明显差异（P〉0.05）。结论 最高剂量组（E组）抑瘤作用最明显,无明显的毒副作用,可作为治疗兔VX2肝肿瘤的最适剂量。     

超声辐照LHRHa靶向微泡增强顺铂对卵巢癌移植瘤的抑制作用

目的 探讨超声辐照携带促黄体生成素释放激素类似物(LHRHa)的靶向微泡能否增强顺铂(DDP )对人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤的抑制作用.方法 利用LHRH受体阳性的人卵巢癌耐药细胞A2780/DDP建立裸鼠腹腔移植瘤模型.将30只荷瘤鼠随机分成6组,即DDP+靶向微泡+超声组(Ⅰ),DDP+普通微泡+超声组(Ⅱ),DDP组(Ⅲ ),靶向微泡+超声组(Ⅳ),靶向微泡组(Ⅴ)和生理盐水对照组,Ⅰ～V组为实验组.处理结束后记录肿瘤个数,剖取瘤块称湿质量,计算抑瘤率;对肿瘤及主要脏器进行病理组织学检查;免疫组化SP法检测肿瘤组织中基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)的表达.结果 各组的肿瘤个数、质量和MMP-9表达均有差异(P<0.01),其中,工组的抑瘤率最大,其肿瘤个数、质量和MMP-9表达均显著低于其他4个实验组(P<0.05)和对照组(P<0.01).结论 超声辐照LHRHa靶向微泡能显著增强DDP对卵巢癌移植瘤的抑制作用.     

实时三维诊断超声激励瘤内注射微泡增强兔VX2移植瘤化疗效果

目的 探讨实时三维诊断超声激励瘤内注射微泡增强VX2移植瘤化疗效果的价值。方法 将24个兔VX2移植瘤模型随机分为4组,每组6只,分别为空白对照组(A组)、单纯多柔比星(Dox)组(B组)、实时三维诊断超声+微泡组(C组)、实时三维诊断超声+微泡+Dox组(D组)。对实验兔静脉注射Dox 1.2 ml/kg,瘤内注射微泡、约为肿瘤体积的1/2,辐照时间为20 min,机械指数(MI)1.3。于第1、3、5、8天对每组肿瘤进行治疗,共治疗4次。治疗后第10天剥离肿瘤,计算各组肿瘤体积总体生长率。结果 治疗后第10天,D组肿瘤体积明显小于其余3组(P<0.05);4组肿瘤体积总体生长率分别为A组100%,B组15.11%,C组118.22%,D组-30.81%。D组肿瘤体积在治疗后1~3天内略有增大,之后明显下降。结论 实时三维诊断超声激励瘤内注射微泡联合静脉注射Dox能够明显抑制兔VX2移植瘤的生长。     

超声引导瘤内注射凝血酶对兔VX2皮下移植瘤的影响

目的探讨超声引导下瘤内注射凝血酶对实体肿瘤生长的影响。方法48只新西兰大白兔建立VX2皮下移植瘤模型,随机平均分为6组：对照组（0．9％生理盐水）;超声引导下瘤内注射凝血酶50U／ml、100U／ml、150U／ml、200U／ml和250U／ml组。在实验前1d,实验第3、14天监测凝血功能变化情况,同时三维超声观测肿瘤生长情况及肿瘤血管生成变化;处死瘤兔后,肿瘤组织行用TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果随着浓度增高,抑瘤率及凋亡指数均增加（P〈0．05）,200U／ml与250U／ml组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,凝血功能中纤维蛋白原（FIB）先升高后降低,凝血酶原时间（PT）、活化的部分凝血活酶时间（APTT）无明显变化。结论超声引导下瘤内注射凝血酶可抑制肿瘤生长,且具有一定的浓度依赖性,凝血功能不发生显著改变。     

诊断超声联合微泡对兔VX2肿瘤的血流增强效应

目的探讨不同机械指数(MI)的诊断超声联合微泡对兔VX_2肿瘤的血流增强效应。方法选取健康雄性新西兰白兔40只,采用单侧大腿内侧瘤组织块接种法接种VX_2肿瘤,造模成功后将其随机分为实验1组(MI=0.3)、实验2组(MI=0.7)、实验3组(MI=1.4)及对照组,每组各10只。抽取0.2 ml"脂氟显"用5.0 ml生理盐水稀释后经耳缘静脉通道匀速推入,同时分别经不同机械指数辐照肿瘤,对照组予以超声假照,时间均为5 min。储存治疗前后动态造影图像,并用造影分析软件分析,记录峰值强度(PI)和曲线下面积(AUC)。结果实验1组、实验3组治疗前后PI比较差异均有统计学意义(P=0.028、0.018),实验2组、对照组治疗前后PI比较差异无统计学意义(P=0.994、0.978);实验3组治疗前后AUC值比较差异有统计学意义(P=0.009),实验1、2组及对照组治疗前后AUC值比较差异均无统计学意义(P=0.099、0.497、0.898)。结论低能量诊断超声(MI=0.3)联合微泡可丰富兔VX_2肿瘤血供,高能量诊断超声(MI=1.4)可减少血流灌注。     

超声辐照联合微泡转染短发卡状重组质粒诱导裸鼠宫颈癌移植瘤凋亡的研究

目的探讨超声辐照联合微泡对靶向存活素的短发卡状重组质粒（survivin—shRNA）的转染增效作用及其安全性,分析其凋亡诱导效应和增殖抑制作用。方法将荷人宫颈癌（Hela）裸鼠18只随机分为3组,每组6只。1组：质粒＋超声辐照组,注入质粒溶液后予以超声辐照;2组：质粒＋微泡＋超声辐照组,注入质粒及微泡复合物后辐照;对照组：不予任何处理。对组织样本行冰冻切片、组织学检查、转染率检测。采用免疫组化SABC法检测移植瘤增殖细胞核抗原（PCNA）及survivin蛋白在各组肿瘤标本中的表达,测定凋亡指数（AI）和增殖指数（PI）。结果2组的移植瘤内荧光表达率显著高于对照组、1组（P〈0．01）;裸鼠其他器官组织中未观察到基因表达,且未观察到明显的组织损伤;PCNA及survivin蛋白表达下降,AI明显升高,PI明显减少,与对照组及1组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论超声辐照联合微泡能显著增强基因转染效率,无明显副作用,联合Survivin—shRNA能明显诱导裸鼠体内肿瘤凋亡,抑制细胞增殖。     

低频超声辐照联合微泡抑制裸鼠人前列腺癌移植瘤的实验研究

目的 观察低频超声(20 kHz)辐照联合静脉注射微泡造影剂SonoVue对裸鼠人前列腺癌Du145移植瘤的抑瘤效应,并探讨其可能的抑瘤机制.方法 通过细胞移植和瘤块移植方法建立24只裸鼠人前列腺癌Du145移植瘤模型,随机分为超声微泡组、单纯超声组、单纯微泡组和对照组,每组6只.超声微泡组:尾静脉注射0.2 mL SonoVue的同时对瘤体行20 kHz超声辐照,辐照强度2 W/cm2,辐照2 min;单纯超声组:尾静脉持续缓慢推注生理盐水0.2 mL,同时超声辐照2 min;单纯微泡组:尾静脉持续缓慢推注SonoVue 0.2 mL同时行假照;对照组不做任何处理.各组均隔天治疗1次,共3次.治疗后测量瘤体大小,绘制瘤体生长曲线,计算抑瘤率.首次治疗后14 d剥离瘤体,通过光镜、电镜观察肿瘤组织病理改变.免疫组织化学法观察CD34阳性染色血管,计算肿瘤微血管密度(MVD),比较各组间MVD的差异.结果 24只裸鼠均成功植瘤.治疗后超声微泡组瘤体体积明显小于其他各组(P＜0.05),抑瘤率为62.70%.HE染色观察超声微泡组瘤体组织大部分损伤坏死,电镜下超声微泡组肿瘤内微血管的内皮细胞损伤,线粒体肿大,基底膜断裂.超声微泡组瘤体内CD34阳性染色微血管数减少,其MVD值显著低于其他各组(P＜0.05).结论 20 kHz低频超声辐照联合微泡造影剂SonoVue可有效抑制裸鼠人前列腺癌移植瘤的生长,其抑瘤机制是超声空化效应破坏肿瘤的微血管.     

超声引导瘤内注射型卡铂-PLGA缓释微球制备工艺优化研究

目的探讨制备条件对微球粒径、表面形态和载药量的影响因素，确定制备超声引导瘤内注射型卡铂-PIGA缓释微球的最佳工艺条件。方法以O／O型乳化溶剂挥发法制备微球，采用单因素试验和拟水平均匀设计法优化制备工艺。结果制备微球的最佳条件是卡铂晶体粒径1～4μm，CBP／PIGA投料比为1：7，PLGA浓度为10％，内，外相体积比为1：8，span-80浓度为8％，搅拌速度为1400r/min，乳化和挥发时间分别是15min和4h；此条件所制备微球呈规则球形、表面光滑，粒径100—200μm的微球产出率达到65．4％，载药量为11．6％。结论优化卡铂-PLGA缓释微球的制备条件，可制备出符合瘤内注射要求的缓释微球。     

脉冲高强度聚焦超声联合微泡非热损伤兔肝VX2移植瘤的病理观察

目的探讨脉冲高强度聚焦超声(HIFU)联合微泡非热损伤兔肝VX2移植瘤的病理变化。方法将36只荷瘤兔随机分为假照组、P-HIFU组和P-HIFU UCA组进行HIFU辐照,观察辐照后组织的病理学变化。结果假照组、P-HIFU组和P-HIFU UCA组TTC染色后,肉眼下各组肿瘤组织被均匀红染,而组织学检查显示P-HIFU组和P-HIFU UCA组肿瘤细胞有损伤征象,胞浆内有大小不等空泡。结论脉冲高强度聚焦超声(HIFU)以及联合微泡均可对兔肝VX2移植瘤通过非热损伤达到治疗目的。     

诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性影响的实验研究

目的 研究诊断超声联合微泡对大鼠移植瘤血管通透性的影响.方法 将48只已建立Walker-256皮下移植瘤模型的SD大鼠随机分为4组:空白对照(A)组、单纯微泡剂(B)组、单纯超声(C)组和超声联合微泡(D)组.以伊文思蓝(Evens blue,EB)为指示剂,选择频率为1.75 MHz、机械指数为1.4的诊断超声持续照射肿瘤区5 min,经大鼠尾静脉注射/不注射微泡造影剂.使用分光光度计和标准曲线法测量大鼠肿瘤组织内EB含量变化,激光共聚焦显微镜观察EB外溢情况.结果 超声联合微泡可增加肿瘤组织微血管通透性.D组瘤内EB含量较A、B、C组明显增加(P＜0.05),血管周围EB外溢明显.A、B、C组EB含量比较差异无统计学意义(P＞0.05),血管周围均未见明显EB渗出.结论 在一定条件下,诊断超声联合微泡可明显提高辐照肿瘤组织血管通透性,这对临床肿瘤化疗患者具有潜在的应用意义.     

超声联合微泡对兔VX2肿瘤化疗效果的影响

目的 探讨诊断超声联合微泡在增强兔VX2肿瘤化疗的同时,对肿瘤生长、肿瘤多器官转移及动物生存期的影响.方法 将陆军军医大学附属新桥医院动物实验中心符合实验条件的41只皮下VX2荷瘤兔随机分为A(n=14)、B(n=14)、C(n=13)3组.各组均经耳缘静脉注射阿霉素1.0 mg/kg进行治疗,同时,A组行高机械指数(...     

超声定位辐照载药微泡治疗卵巢癌移植瘤的实验研究

目的观察超声定位辐照载紫杉醇脂质微泡（paclitaxel—carrying liposome microbubbles，PLM）介导药物释放的方法对裸鼠人卵巢癌移植瘤的抑制效应。 方法对荷瘤鼠进行分组处理，包括超声定位辐照PLM组、单纯静脉给药组、超声定位辐照脂质微泡组、单纯静脉输注PLM组和生理盐水对照组。处理结束后剖取瘤块测其体积、质量，计算抑瘤率；并用免疫组化法检测肿瘤组织血管内皮生长因子（VEGF）表达。 结果各组的肿瘤体积、抑瘤率及VEGF表达均有差异（P＜0．01）。超声定位辐照PLM组的肿瘤体积、质量最小，抑瘤率最大，VEGF表达量最低。 结论超声定位辐照PLM的方法能有效介导药物释放，具有较强的体内抑瘤效果，有望成为新的肿瘤化疗给药方式。     

超声介导载紫杉醇微泡对小鼠H22皮下移植瘤抑制作用的实验研究

目的探讨超声介导自制载紫杉醇微泡对小鼠H22皮下移植瘤的抑制效果。方法 (1)自制载紫杉醇微泡,并检测其一般特性。(2)建立小鼠H22皮下移植瘤模型,给予紫杉醇微泡+超声处理。绘制肿瘤生长曲线,计算各组抑瘤率,肿瘤行病理组织学检查,免疫组织化学法检测微血管密度(MVD),Western Blotting检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果 (1)微泡呈圆形,表面光滑,平均粒径2.07μm,载药量10.13%,包封率89.58%。(2)紫杉醇微泡+超声组肿瘤生长明显减慢,肿瘤体积和质量明显下降(P0.05),肿瘤组织HE染色呈现不同程度变性坏死,MVD表达减少,Bax的表达上调,Bcl-2的表达下调(P0.05)。结论超声介导载紫杉醇微泡可明显抑制小鼠H22皮下移植瘤的生长,并可降低肿瘤组织MVD的表达,促进肿瘤细胞的凋亡。     

高强度聚焦超声二次辐照兔肝VX2移植瘤的实验研究

目的探讨高强度聚焦超声(HIFU)二次辐照对兔肝VX2移植瘤的疗效。方法 40只荷瘤兔随机分为3组:一次辐照组,进行一次性辐照消融;二次辐照组,先进行一次低剂量辐照(不消融),次日再次辐照消融;假照组,辐照剂量为零。结果两辐照组总治疗时间相当,但二次辐照组的每次辐照时间、能效因子小于一次辐照组(P0.05);辐照后,一次辐照组出现皮肤红斑,二次辐照组未发生皮肤改变;两辐照组均完全消融肿瘤,并减少肺部转移及延长生存时间(P0.05)。结论二次辐照能达到一次性消融相同的疗效,虽然总治疗时间相当,但每次辐照的时间与剂量大大减少,提高HIFU损伤效率,减少并发症的发生。二次辐照法可能成为一种HIFU治疗的新方法。     

阿霉素海藻酸钠微球栓塞对兔肝VX2移植瘤血管生成的影响

目的 观察阿霉素海藻酸钠微球对兔VX2肝移植瘤的化疗栓塞术后肿瘤血管生成的影响.方法 30只新西兰大白兔,于肝左叶植入VX2 肿瘤组织块,建立肝移植瘤模型,随机分为5组,每组6只.开腹游离肝动脉,经肝动脉楔入法分别给予空白海藻酸钠微球(A组)、阿霉素海藻酸钠微球(B组)、超液化碘油(C组)、超液化碘油+阿霉素(D组),对照组(E组)给予生理盐水.治疗后第3周将所有实验动物处死,取肿瘤标本进行大体观察及免疫组化染色,分析血管内皮生长因子(VEGF)免疫组化结果及微血管密度(MVD)计数情况.结果 A、B、C、D、E五组间VEGF的表达阳性率分别为66.67%、50.00%、100%、83.33%、66.67%,组间比较差异无统计学意义(P>0.05).MVD计数分别为55.36±7.02、41.27±8.45、82.42±6.23、67.81±11.42、62.46±7.54,C组MVD值高于A组和B组(P<0.05);B组MVD值低于D组(P<0.05). Spearman等级相关分析显示VEGF与MVD相关系数为0.726(P<0.01).结论 阿霉素海藻酸钠微球化疗栓塞可使兔VX2肝移植瘤VEGF表达和MVD数目下降,但不排除其快速闭塞肿瘤血管,导致肿瘤明显坏死.     

连续和脉冲高强度聚焦超声辐照兔肝VX2移植瘤的比较

目的 比较连续和脉冲高强度聚焦超声辐照兔肝VX2移植瘤时的治疗效果.方法 将48只荷瘤兔随机分为A、B、C3组,每组各16只.A组(连续波组)用连续高强度聚焦超声辐照,B、C组(脉冲波组)分别用占空比为75％和50％的脉冲高强度聚焦超声(pulsed high intensity focused ultrasound,PHIFU)辐照.结果 3组消融后的肿瘤组织均发生确切的凝固性坏死,且有效地控制肿瘤复发与转移;与连续波组相比,脉冲波组能效因子(energy efficiency factor,EEF)减小,皮肤红斑发生减少(P＜0.05).结论 PHIFU辐照能达到与连续波辐照相同的治疗效果,实际辐照剂量相当,但损伤效率提高,并发症减少.PHIFU有望成为一种安全、有效的肿瘤治疗方式.     

超声微泡介导miR-34a联合DOX治疗小鼠U14皮下移植瘤的实验研究

目的研究超声介导载miR-34a、DOX微泡对小鼠U14宫颈癌皮下移植瘤联合治疗效果。方法制备载miR-34a、DOX高分子微泡,检测一般性质;建立小鼠皮下移植瘤模型,随机分为:模型组、空微泡组、DOX微泡组、miR-34a微泡组、miR-34a联合DOX微泡组;超声微泡治疗小鼠皮下移植瘤,绘制肿瘤生长曲线图,计算抑瘤率;RT-PCR检测各组小鼠肿瘤组织miR-34a基因表达情况;免疫组织化学染色法检测肿瘤微血管密度(MVD)和凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果自制高分子微泡呈球形,分布均一,平均粒径1.87μm,包封率为46.24%,载药量为10.58%;与模型组相比,各治疗组肿瘤生长减慢,肿瘤质量体积显著下降,联合治疗效果更佳并与单一作用比较具有显著差异(P0.05);聚合酶链式反应(RT-PCR)结果显示,miR-34a组和联合组肿瘤组织中miR-34a高表达;DOX组、miR-34a组和联合组免疫组织化学染色检测肿瘤微血管密度(MVD)降低,凋亡蛋白Bcl-2表达下调,Bax高表达,联合组更加明显(P0.05)。结论超声微泡介导的miR-34a和DOX的共同递送可以实现肿瘤抑制的协同效应。     

超声造影剂联合高强度聚焦超声损伤兔肝VX2移植瘤的可行性研究

目的研究超声造影剂作为一种增效剂,增强高强度聚焦超声的生物学效应,损伤兔肝VX2移植瘤的可行性.方法 30只荷瘤兔随机分为二组,单纯高强度聚焦超声辐照组和联合辐照组,超声造影剂剂量为0.05 ml/kg.结果联合辐照组的辐照时间明显缩短（P＜0.05）,损伤肿瘤体积大大增加（P＜0.01）,损伤效率高于单纯高强度聚焦超声辐照组（P＜0.01）.结论超声造影剂可以提高高强度聚焦超声损伤效率,靶区组织的声学特性、组织结构或者功能状态可以影响高强度聚焦超声治疗剂量.