线粒体融合蛋白2在胚胎停止发育者绒毛组织中的表达

目的:测定线粒体融合蛋白2(Mitofusin 2,Mfn2)在正常早孕妇女和不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达差异,探讨Mfn2在胚胎发育过程中的可能作用。方法:采用HE染色观察正常早孕妇女(正常早孕组,30例)和不明原因胚胎停止发育患者(胚胎停育组,35例)绒毛组织形态;采用免疫组织化学技术(SABC法)检测Mfn2在两组妇女绒毛组织中的定位表达和表达强度;同时采用实时荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)技术检测两组妇女绒毛组织中Mfn2的相对表达。结果:Mfn2在正常早孕组和胚胎停育组绒毛合体滋养细胞和细胞滋养细胞中均有阳性表达,在细胞滋养细胞中表达尤为明显,而在间质细胞中无明显表达,且Mfn2阳性表达主要分布在细胞浆中。胚胎停育组的绒毛组织中Mfn2的相对表达量(0.006 8±0.003 2)显著低于正常早孕组(0.023 9±0.005 5),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:Mfn2在不明原因胚胎停止发育患者绒毛组织中的表达水平下降,提示Mfn2可能与胚胎发育相关,绒毛滋养层细胞中Mfn2的正常表达可能对维持早期妊娠起到一定作用。     

纳米材料诱导细胞自噬的研究进展

细胞自噬是一种"清道夫"式的细胞保护程序,保护自身细胞不受来自内部或外界的伤害。随着细胞自噬研究的深入进展,科学家们开始关注与细胞自噬相关的其他方面问题的研究,其中纳米材料诱导的细胞自噬得到了高度关注,且越来越多的研究表明,纳米材料能引起细胞自噬。本文从当前关于纳米材料与细胞自噬关系的现有研究结果出发,针对水溶性富勒烯及其衍生物、稀土金属氧化物、量子点、石墨烯等纳米材料对细胞自噬的诱导和抑制作用,做简单综述。     

滋养层细胞自噬与子痫前期发病机制的研究进展

子痫前期是引起围产期孕妇和胎婴儿病死率的重要原因,目前发病机制尚不明确。细胞自噬作为真核生物中最基本的生命现象,广泛参与机体的多种生理和病理过程,有关研究表明,适度的细胞自噬有助于滋养层细胞存活,防止子痫前期的发生。然而,自噬过程受损或过度自噬,均会导致子痫前期甚至不良妊娠结局的发生。     

胎盘绒毛滋养层细胞MMP-9表达与妊高征的关系

目的 :研究MMP 9在胎盘绒毛滋养层细胞的表达 ,探讨MMP 9在妊高征发病中的作用。方法 :用免疫组化两步法检测 42例妊高征患者及 2 5例正常妊娠者胎盘组织中滋养层细胞MMP 9的表达。结果 :正常妊娠组滋养细胞MMP 9表达阳性率为 72 0 % ,明显高于妊高征组 (4 0 5 % ) ,P <0 0 5。随妊高征病情的加重 ,MMP 9的表达有减少趋势。结论 :妊高征患者胎盘滋养细胞MMP 9的表达明显减少 ,且随其病情加重 ,MMP 9表达有减少趋势。表明MMP 9与妊高征的发生有密切关系。     

自噬基因Beclin1过表达诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡的研究

目的:探讨自噬基因Beclin 1在人卵巢癌SKOV3细胞中过表达对其体外生长活性的影响。方法:构建自噬基因Beclin 1的真核表达载体pcDNA3.1/Beclin1,将其稳定转染SKOV3细胞,实现Beclin 1在SKOV3中的过表达;用MTT法分析Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,用流式细胞仪检测凋亡和自噬情况,电镜和荧光显微镜下观察自噬现象。结果:pcD-NA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后Beclin 1在mRNA和蛋白水平均高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组。Beclin 1在SKOV3中的稳定过表达后G1期细胞明显增多,S期细胞比例明显减少,细胞增殖受到抑制,凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后MDC标记的自噬囊泡平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后在电镜下可见大量自噬囊泡形成。在荧光显微镜下见pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞中MDC标记的自噬囊泡明显增加。结论:自噬基因Beclin1过表达可诱导人卵巢癌细胞SKOV3自噬和凋亡,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。     

激活自噬改善炎性因子诱导的血管细胞粘附分子1的表达

目的血管细胞粘附分子(VCAM)1表达是心血管疾病发生的风险因素。本研究旨在揭示自噬对炎性因子诱导的VCAM-1表达的影响及潜在分子机制。方法以人原代脐静脉血管内皮细胞为研究对象,分别采用炎性因子(肿瘤坏死因子-α,TNF-α或白细胞介素-1β,IL-1β)、自噬激动剂雷帕霉素、自噬抑制剂氯喹等对细胞进行干预,检测VCAM-1的mRNA、蛋白表达及磷酸化ERK1/2 MAPK的变化。结果炎性因子显著激活VCAM-1的转录及蛋白表达(P0.05)。激活自噬可显著降低TNF-α诱导的VCAM-1表达,而抑制自噬显著加重TNF-α诱导的VCAM-1增加。ERK1/2 MAPK抑制剂U0126显著抑制TNF-α诱导的VCAM-1表达(P0.05)。自噬调控显著影响TNF-α诱导的磷酸化ERK1/2表达增加(P0.05)。结论自噬激活可能通过ERK1/2 MAPK参与的信号通路改善炎性因子诱导的VCAM-1表达增加,自噬调控可作为改善血管内皮细胞功能及其相关心血管疾病的潜在治疗手段。     

活性氧在1,4-苯醌诱导的线粒体自噬中的作用

目的探讨苯的代谢产物1,4-苯醌(1,4-BQ)能否活化PINK1/Parkin介导的线粒体自噬,以及活性氧(ROS)在线粒体自噬发生中的作用。方法以人早幼粒白血病细胞HL60为受试细胞,将其分为对照组、1,4-BQ组、N-乙酰半胱氨酸(NAC)组和1,4-BQ+NAC组。采用透射电镜观察细胞超微结构,采用蛋白免疫印迹法检测自噬蛋白LC3、PINK1和Parkin表达,采用DCFH-DA染色法测定胞内ROS含量。结果对照组细胞线粒体呈正常杆状结构,嵴线分明;1,4-BQ组可见呈椭圆肿胀变形的线粒体和包含双层膜性结构的线粒体自噬体。与对照组比较,1,4-BQ组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、PINK1、Parkin蛋白表达和ROS含量均增加(P0.05);1,4-BQ+NAC组的LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、PINK1、Parkin蛋白表达和ROS含量均低于1,4-BQ组(P0.05)。结论 1,4-BQ可诱导PINK1/Parkin途径的线粒体自噬,且ROS在诱导的线粒体自噬中起重要作用。     

绒毛外滋养层细胞的功能及其内分泌调节机制

妊娠是一个复杂而精细的过程。在妊娠早期囊胚着床之后,胎盘绒毛外滋养层细胞（extravillous trophoblast,EVT）向子宫蜕膜层和肌层血管进一步侵袭、迁移、分化,启动并完成血管重塑,是建立母．胎循环的关键环节。因此EVT细胞的迁移和侵袭功能是保证血管重塑和妊娠顺利完成的基本要素。而EVT细胞的增值、迁移和侵袭功能受到体内微环境因素,如胎盘细胞分泌的人绒毛膜促性腺激素、孕酮、雌二醇和瘦素等的精细调节。EVT细胞侵袭性迁移不足,可导致子宫螺旋动脉重塑不足,与流产、先兆子痫等妊娠相关疾病密切相关。因此,明确EVT细胞侵袭性迁移的调节机制将为预防与治疗上述疾病提供莺要依据。本文就EVT细胞的功能及其内分泌调节机制加以综林。     

输卵管妊娠绒毛滋养层细胞的体外培养与鉴定

目的建立输卵管妊娠绒毛滋养层细胞有效的培养与鉴定方法。方法通过胰酶消化法培养滋养细胞,差异贴壁法分离滋养细胞,通过光镜、电镜和免疫荧光细胞化学染色法对所培养的细胞进行形态和细胞骨架评价。结果倒置显微镜下可见细胞呈上皮样细胞形态;透射电镜、扫描电镜观察,细胞的超微结构具有典型滋养层细胞结构;直接免疫荧光双标记染色检测到角蛋白染色为阳性,波形蛋白为阴性。结论该法切实可行,可获得合乎实验要求的输卵管妊娠滋养细胞,可供后续实验研究。     

子痫前期患者胎盘滋养细胞线粒体融合蛋白-2的表达及与氧化应激的关系

目的探讨子痫前期患者胎盘滋养细胞线粒体融合蛋白-2(Mfn-2)的表达及与氧化应激的关系,为临床诊治提供参考依据。方法收集36例子痫前期患者(观察组)、28例正常对照(对照组)胎盘组织、血清;免疫组织化学检测Mfn-2在胎盘滋养细胞的表达,ELISA测定血清8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG),邻苯三酚氧化法测定血清超氧化歧化酶(SOD)。结果 Mfn-2在观察组患者胎盘滋养细胞多数为中低表达,而在对照组为中高表达,两组间表达强度差异有统计学意义(P0.05);观察组患者8-OHdG显著高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),SOD两组间差异无统计学意义(P0.05);血清8-OHdG水平随着Mfn-2的表达强度增强而降低,差异有统计学意义(P0.05),而SOD与Mfn-2的表达强度关系不明显,差异无统计学意义(P0.05)。结论 Mfn-2在子痫前期胎盘滋养细胞表达降低而且与氧化应激相关,Mfn-2表达下降可能与子痫前期发生、发展有关。     

密花香薷挥发油经活性氧-线粒体途径诱导SMMC-7721细胞自噬性死亡

目的 探讨密花香薷挥发油诱导肝癌SMMC-7721细胞死亡的作用及机理。方法 设置三个处理组,使密花香薷挥发油处理终浓度为20、40μg/ml和60μg/ml,以1%DMSO为对照。采用AO-EB染色和Annexin-V/PI双染流式细胞术分析细胞死亡率;化学荧光法检测细胞内ROS相对含量和线粒体膜电位;通过透射电子显微镜观察细胞超微结构;Western blot检测自噬相关蛋白Beclin 1和LC3的表达量;采用SPSS 17.0进行ANOVA方差分析,Duncan法进行多重比较。结果 AO/EB双染和Annexin-V/PI双染流式细胞术结果表明,随着密花香薷挥发油浓度增加,SMMC-7721细胞的死亡率增高(F=132.100,Ρ<0.001);SMMC-7721细胞内相对ROS水平升高,差异有统计学意义(F=61.580,P<0.001),而线粒体膜电位下降(F=64.300,Ρ<0.001);透射电子显微镜观察SMMC-7721细胞内出现自噬体;Western blot检测结果显示,随着密花香薷挥发油处理浓度的增加,自噬相关蛋白LC3-Ⅰ(F=504.10...     

两种人早孕绒毛滋养层细胞的原代培养方法

目的:比较两种不同方法进行人早孕绒毛滋养层细胞原代培养的异同。方法:分别用组织块培养法和3种酶联合消化法(Ⅳ型胶原酶、低浓度胰酶及DNaseⅠ)、Ficoll 400梯度密度离心法对人早孕绒毛滋养层细胞培养。结果:两种方法进行早孕滋养层细胞的培养均获得成功,其生长率比较差异无显著性意义(P>0.05)。结论:组织块培养法简单易行,但细胞数量少,生长缓慢,难以完成后续实验;3酶联合消化、Ficoll 400梯度密度离心法相比较而言,可获得数量更多的活力好、纯度较高的具有不同分化功能的滋养层细胞,为进一步研究其侵袭、增殖能力等生理、病理作用提供了坚实的基础。     

葛根素对高糖诱导的RSC96细胞凋亡和自噬相关蛋白的影响

目的探讨葛根素对高糖诱导的RSC96细胞损伤的保护作用是否与自噬调节有关。方法建立体外RSC96细胞高糖损伤模型,根据Westernblot检测CleavedCaspase-3蛋白判断造模成功与否。通过CCK-8法确定葛根素干预浓度。免疫细胞化学法检测Beclin-1蛋白的表达;Western blot检测Cleaved Caspase-3、LC3-Ⅱ、p62、Beclin-1蛋白的表达。结果与高糖组相比,葛根素预处理可显著提高高糖诱导后RSC96细胞的存活率(P<0.05),抑制Cleaved Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白的表达(P<0.05),增强p62蛋白的表达(P<0.05)。结论葛根素可改善由高糖诱导的RSC96细胞损伤,其机制可能与其抑制LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达、提高p62蛋白表达有关。[营养学报,2020,42(3):281-286]     

糖尿病足感染患者病原菌分布及创面组织中细胞自噬相关蛋白表达

目的 探究糖尿病足感染(DFI)患者病原菌分布特征及创面组织中细胞自噬相关蛋白表达。方法 选取2015年11月-2019年11月医院收治的196例DFI患者(感染期126例,感染控制期70例),分析患者病原菌分布,检测微管结合轻链蛋白-3(LC3)、自噬特异性基因(Beclin-1)和泛素结合蛋白(P62)的表达量和白细胞计数(WBC)、C-反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平,分析检测结果。结果 126例感染期DFI患者共培养分离病原菌147株,包括革兰阴性菌84株、革兰阳性菌52株、真菌11株,主要病原菌为铜绿假单胞菌、奇异变形菌、金黄色葡萄球菌;感染期患者LC3、Beclin-1表达水平均低于感染控制期患者,P62表达水平和WBC、CRP、PCT水平均高于感染控制期患者,差异有统计学意义(P<0.05);重度感染患者LC3、Beclin-1表达低于中度、轻度感染患者,P62表达高于中度、轻度感染患者,中度感染患者LC3、Beclin-1表达低于轻度感染患者,P62表达高于轻度感染患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 DFI患者感染病原菌主要为革兰阴性菌,常见菌为铜绿假单胞菌、奇异变形菌、金黄色葡萄球菌,感染后DFI患者LC3、Beclin-1表达降低而感染指标水平和P62表达提高,且三者表达水平与感染程度有关。     

自噬相关蛋白14对氟致人神经母细胞瘤细胞自噬和凋亡的影响

目的 探讨自噬相关蛋白14(ATG14)在氟致神经毒性中的作用.方法 不同浓度氟化钠(NaF)(0、20、40、60 mg/L)染毒人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)24 h,采用CCK-8试剂盒测定细胞存活率,流式细胞术测定凋亡率,免疫印迹法测定UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK...     

线粒体融合蛋白2在环孢素肾病中的作用

目的:探讨线粒体融合蛋白2(Mfn2)在环孢素A(CSA)引起的慢性肾损伤中的作用及可能的机制。方法:制作慢性CSA肾病大鼠模型,将大鼠分为溶剂对照组、CSA模型组和正常对照组。分别检测各组大鼠血肌酐及尿蛋白水平。光镜检查观察肾小管间质损伤情况。电镜观察肾小管上皮内线粒体结构改变,Western blot检测肾组织Mf...     

靶向抑制人滋养层细胞表面抗原-2基因表达诱导宫颈癌细胞凋亡的机制研究

目的探讨抑制人滋养层细胞表面抗原-2(TROP2)基因表达对宫颈癌细胞凋亡的影响。方法空白对照组(Control组)、阴性对照无意义小干扰RNA siRNA序列组(Control siRNA组)和转染TROP2的靶向siRNA序列组(TROP2 siRNA组)转染人宫颈癌Hela细胞,48 h后蛋白印迹检测TROP2、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved caspase3)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;流式细胞仪检测细胞凋亡。结果转染TROP2-siRNA后能显著降低TROP2的蛋白表达;TROP2-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于Control组,β-catenin、Cyclin D1蛋白表达显著低于Control组(P0.01),Control-siRNA组细胞凋亡率及Cleaved caspase3、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达与Control组差异无统计学意义(P0.05)。结论抑制宫颈癌细胞中TROP2基因表达可促进癌细胞的凋亡,其机制与上调Cleaved caspase3蛋白表达及下调Wnt/β-catenin信号通路有关。     

丁酸钠通过Ca~(2+)-CaMKK β信号通路诱导结直肠细胞自噬

目的研究丁酸钠(sodium butyrate,Na B)诱导结直肠癌细胞HCT-116自噬的分子机制。方法免疫印迹法和实时荧光定量PCR检测Na B诱导结直肠癌细胞自噬标志蛋白微管相关蛋白1A和1B(microtubule-associated protein1A/1B-light chain 3,LC3)的蛋白与m RNA表达水平,以及免疫印迹法检测钙调素依赖蛋白激酶的激酶β(Ca~(2+)/calmodulin-dependent protein kinase kinaseβ,Ca MKKβ)的磷酸化蛋白表达水平;免疫印迹法检测RNAi下调Ca MKKβ表达对Na B诱导结直肠癌细胞自噬的影响;免疫印迹法和荧光定量PCR检测细胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)对Na B诱导结直肠癌细胞自噬的影响,以及免疫印迹检测其对p-Ca MKKβ蛋白表达水平的影响。结果Na B可上调LC3-II蛋白与m RNA表达水平,即诱导结直肠癌细胞自噬;Na B可诱导Ca MKKβ蛋白磷酸化;RNAi下调Ca MKKβ表达可显著抑制Na B诱导的LC3-II蛋白的表达,即抑制Na B诱导的结直肠癌细胞自噬;BAPTA-AM预处理可抑制Na B诱导的Ca MKKβ蛋白磷酸化以及下调LC3-II蛋白与m RNA表达水平。结论 Na B可通过Ca~(2+)-Ca MKKβ信号通路诱导结直肠细胞自噬。     

维生素E琥珀酸酯诱导胃癌细胞自噬对细胞抗氧化功能的影响

目的 探讨维生素E琥珀酸酯(VES)处理人胃癌SGC-7901细胞过程中自噬对细胞抗氧化功能的影响。方法 不同剂量(0、5、10、15、20μg/ml) VES处理人胃癌SGC-7901细胞24h,Western blot检测自噬标志蛋白LC3和Beclin-1的表达情况,Real-time PCR检测细胞内抗氧化酶SOD、CAT和GPX mRNA的表达情况,ELISA检测GSH水平;RNA瞬时干扰阻断自噬关键基因BECN-1基因的表达后,以20μg/ml VES处理人胃癌SGC-7901细胞24h,Real-time PCR检测抗氧化酶SOD、CAT和GPX mRNA的表达情况,ELISA检测GSH水平。结果 与对照组相比,随着VES作用剂量的增加,Beclin-1蛋白表达逐渐增高,可观察到LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ转化增加;Real-time PCR检测显示SOD、CAT和GPX等抗氧化酶的mRNA表达减少,ELISA显示细胞内GSH水平降低。阻断自噬关键基因BECN-1基因后,SOD、CAT和GPX等抗氧化酶的mRNA表达进一步减少(P<0.05),ELISA显示GSH水平进一...     

UVB诱导A375细胞自噬与凋亡调控机制探讨

目的探究中波紫外线(UVB)对人表皮黑色素瘤细胞株A375细胞自噬与凋亡的诱导效应。方法 (1)取对数生长期A375细胞,分别予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射,于照射后3、6、9、12 h收集细胞,用单丹磺酰戊二胺染色法观察细胞自噬,用吖啶橙/溴乙锭染色法观察细胞凋亡。(2)予相应剂量的UVB照射10.0、15.0 m J/cm~2组A375细胞,于照射后18、24、36、48 h收集细胞,以CCK-8法检测细胞存活率。(3)予剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后3、6、9、12 h收集细胞;予剂量为2.5、5.0、7.5、10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射A375细胞,于照射后9 h收集细胞;用免疫印迹法检测B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相互作用蛋白(Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达。上述3个实验均另设不予UVB照射(予假照射)的对照组。结果 (1)剂量为10.0、15.0 m J/cm~2的UVB照射诱导的A375细胞自噬和细胞凋亡均表现为随着照射后时间的延长而增强,但在15.0 m J/cm~2UVB照射后12 h,细胞自噬已观察到降低。(2)10.0、15.0 m J/cm~2组细胞活力均随照射后时间的推移而增加(P0.05);在照射后18~48 h,10.0和15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于对照组(P0.05);在照射后24~48 h,15.0 m J/cm~2组细胞活力均低于10.0 m J/cm~2组(P0.05)。(3)10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平在照射后0~12 h内均随照射时间的增加而增加(P0.05),而15.0 m J/cm~2组细胞仅在照射后0~9 h内观察到上述改变,在12 h时间点上述2个自噬相关蛋白明显下降(P0.05);10.0和15.0 m J/cm~2组细胞Bcl-2蛋白相对表达水平在照射后3~12 h内均随照射时间的增加而下降(P0.05),Bax蛋白相对表达水平均在照射后0~12 h内随照射时间的增加而增加(P0.05)。0.0~10.0 m J/cm~2组细胞Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白相对表达水平,0.0~15.0 m J/cm~2组细胞Bax蛋白相对表达水平,均随照射剂量的增加而增加(P0.05);5.0~15.0 m J/cm~2组Bcl-2蛋白相对表达水平随照射剂量的增加而下降(P0.05)。结论剂量为10.0和15.0 m J/cm~2UVB照射均可诱导A375细胞发生自噬和凋亡;10.0 m J/cm~2UVB照射诱导的细胞自噬可部分抵抗UVB对凋亡的诱导而使细胞活力增强,15.0 m J/cm~2UVB诱导的自噬不足以发挥上述作用,且以诱导凋亡为主导效应。