PCR－DNA指纹图识别异基因骨髓移植后重建造血的细胞起源

用多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增多态性小卫星ＤＮＡ的３３．１，３３．６位点，联合地高辛标记寡核苷酸探针杂交方法，以小卫星ＤＮＡ的ＰＣＲ－ＤＮＡ指纹图为特异性遗传标志，识别２例慢性粒细胞白血病患者接受同胞供髓的骨髓移植后造血重建的细胞起源。结果显示均有供者源性造血细胞植活。该方法灵敏度高，特异性强，无同位素污染，尤其适用于同性别、同血型、ＨＬＡ全相合的异基因骨髓移植植活指标的监测。     

DNA指纹图用于配型不合的骨髓移植活状态分析

用α－珠蛋白－３＇ＨＶＲ ＤＮＡ高多态性多位点探讨和ＤＮＡ指纹图技术，对８例组织配型不合的特殊形式的骨髓移植（ＢＭＴ）病例进行植活状态分析，结果均获确切判断。本法的灵敏度为５％～１０％（最高达２％），具有良好的个体识别能力，可作为ＢＭＴ，尤其是同血型、同性别的异基因ＢＭＴ或某些特殊类型ＢＭＴ植活状态分析的良好指标。     

多聚酶链反应／单链构型多态性用于骨髓移植供者选择的研究

在１１个家系内进行了骨髓移植的配型工作。用多聚酶链反应（ＰＣＲ）分别扩增了供受者最具多态性的ＤＲＢ１和ＤＱＢ１基因的第二外显子，这些ＰＣＲ产物变性后在内烯酰胺凝胶电泳上显示具有序理特异性带型格局，即单链构型多态性，ＰＣＲ／ＳＳＣＰ具有简单，经济，灵敏，准确，快速等优点，对骨髓移植供者的选择，尤其是对非血缘关系骨髓移植供者的选择上更显突出的优越性。     

双带PCR提高检测血清HBV-DNA质量的意义

应用双带ＰＣＲ方法（ＤＢ－ＰＣＲ）检测了２４０份血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，该方法能直接观察和判断假阴性和假阳性结果，提高了检测的准确性。与国内其它ＰＣＲ试剂比较，符合率分别为９４．０５％（ＤＢ－ＰＣＲ／华美产品），和９５．２８％（ＤＢ－ＰＣＲ／长城产品）。ＨＢｅＡｇ阳性的血清，经ＤＢ－ＰＣＲ检测ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者达９３．５５％（２９／３１）。ＰＣＲ产物Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ后能与ＨＢＶ－ＤＮＡ探针杂交，证明了该方法的特异性。     

人巨细胞病毒检测在临床中的应用

本文利用ＰＣＲ法对１３１例骨髓移植供受体进行了人巨细胞病毒的检测。其中，９８例供体阳性率为５７％，３３例移植前受者阳性率为７５．８％，移植后人巨细胞病毒感染呈上升趋势，结果表明在免疫低下或免疫抑制的患者中，人巨细胞病毒的检测对患者的早期诊断早期治疗都十分重要。     

小卫星DNA序列特性及其在临床血液学中的应用

小卫生ＤＮＡ序列具有高度多态性，高度杂合性和体细胞稳定性，小卫星ＤＮＡ序列作为一种标志物应用于检测白血 病微小残留病，对无特异性基因改变的急淋和急非淋有独特意义；应用于骨髓移植入证明，灵敏度高，特异性强，且不受供者性别，血型及ＨＬＡ型别的限制。     

PCR方法在血液病研究中的应用

ＰＣＲ方法在血液病研究中的应用朱平聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种利用酶在体外大量合成ＤＮＡ特异性片段的方法。１９８３年Ｍｕｌｌｉｓ首先利用ＤＮＡ多聚酶，建立了体外大量扩增ＤＮＡ片段的方法，１９８５年Ｓａｉｋｉ用以检验血液系统有名的分子病──镰状细胞贫血...     

一种简便的提高PCR敏感性和特异性的方法

一种简便的提高ＰＣＲ敏感性和特异性的方法杨淑华，高文涛，欧阳喈（白求恩医科大学口腔医学院病理科长春１３００４１）目前ＰＣＲ技术已成为现代分子生物学研究的有力手段之一。虽然ＰＣＲ具有高度敏感性和特异性，但当模板ＤＮＡ含量极低时，ＰＣＲ往往难获成功。本研...     

应用PCR－SSP对异基因骨髓移植供受者HLA－DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ＿１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ＿１位点的纯合体和杂合体等位基因，并能检测出单一碱基的点突变；它将ＰＣＲ扩增和检测两个步骤合并为一次完成，操作更简便、快速。并已将ＰＣＲ－ＳＳＰ方法成功地用于１５对异基因骨髓移植的供、受者的分型。ＰＣＲ－ＳＳＰ作为基因分型的有效技术，可为骨髓来源提供直接的科学依据。     

荧光信号引物PCR定量测定血清HCV—RNA的实验室评价

目的对Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ荧光标记ＨＣＶ定量ＰＣＲ方法进行实验室考核。方法２８例抗ＨＣＶ（＋）、定性ＰＣＲ（＋）的血清标本，用于重复性测定；２０例健康人血清用于正常值测定；５例定性ＰＣＲ（＋）和５例定性ＰＣＲ（－）标本用于Ａｍｐｌｉｓｅｍｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法的比较。结果孔间变异系数（ＣＶ）为 ２０．６％，操作者间ＣＶ为 ４３．８％，批内 ＣＶ为 ６１．９％，批间ＣＶ为８５．１％。２０例健康人血清测定值均小于最小检测浓度，即１０２拷贝／ｍｌ。用Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ两种方法对５ 例定性ＰＣＲ（－）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ和ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ均为阴性；对５ Ｎ定性ＰＣＲ（＋）标本测定，Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ均为阳性，ＨＣＶ－ＲＮＡ的浓度为 ２． ５ × １０５拷贝 ／ｍｌ～ １． ７ ×１０６拷贝 ／ｍｌ， ｂｒａｎｃｈ－ＤＮＡ方法有 ２例未能检出。结论 Ａｍｐｌｉｓｅｎｓｏｒ ＨＣＶ定量 ＰＣＲ方法特异性和灵敏度均好，可用于临床疾病的研究和抗病毒药物疗效的评估。由于批内、批间变异系数较大，试验与操作均应严格规范。     

多聚酶链式反应速检测肺活检组织中的结核杆菌DNA

利用多聚酶链式反应（ＰＣＲ）以３１例病理可疑诊断为结核的肺活检切片进行结核菌ＤＮＡ的检测，并与抗酸染色进行了比较。用蛋白酶Ｋ和冻融融解法快提切片ＤＮＡ。３１例中有２４例ＰＣＲ阳性，１４例抗酸染色阳性；其中１７例抗酸色性经ＰＣＲ检出１２例阳性，１４例抗酸染色阳性ＰＣＲ检出１２例阳性。ＰＣＲ检测阳性率明显高于抗酸染色（Ｐ〈０．０１）。说明ＰＣＲ用于活检组织诊断理一快速、敏感性较高、特异性较强的技术。此     

聚合酶链反应检测幽门螺杆菌

本文应用与幽门螺杆菌染色体ＤＮＡ高保守区序列互补的引物对，建立聚合链反应检测技术，对２８种非ＨＰ菌及１６株ＨＰ进行检测，特异性１００％，敏感性达到能检出１ｐｇ染色体ＤＮＡ（相当于１００个菌细胞）水平，对３６例接受胃镜检查病人的胃活检组织进行检测，ＨＰ阳性率４７．２％（１７／３６），而对照方法中细菌培养ＨＰ阳性率３３．３％（１２／３６），快速尿素酶试验ＨＰ阳性４１．６％（１５／３６）。结果提示ＰＣＲ     

聚合酶链反应检测痰标本中结核菌的临床应用--附284例检测结果

目的：探讨ＰＣＲ检测痰标本中结核菌诊断肺结核的价值。方法：收集１９９３年４月至１９９６年６月我科用ＰＣＲ检测２８４例肺部疾病患者痰标一中结核菌的资料与涂片及结核菌培养比较，结果：肺结核病组ＰＣＲ检测结核菌阳性率明显高于涂片（６３．８％比２４．３％）及培养法（６８．９％比３３．８％）。结论：ＰＣＲ检测痰标本中结核菌培养法灵敏性，特异性高。     

人类血小板抗原基因分型

本文介绍了５个对人类影响最大且已被国际上公认的血小板抗原系统的分子生物学研究结果及其分型方法，包括最早采用的血清学方法，近几年发展起来的分子生物学方法：ＤＮＡ序列分析、等位基因特异性寡核苷酸点杂交（ＰＣＲ－ＡＳＯ）、聚合酶链反应－限制性片断长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）及聚合酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ），其中重点介绍了ＰＣＲ－ＳＳＰ方法的可靠性及实用性。     

定量PCR技术

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是模拟ＤＮＡ体内复制过程,在体外将ＤＮＡ片段加人工扩增的技术,有许多因素都可以影响ＰＣＲ的扩增效率,导致常规ＰＣＲ的特异性不强,准确性不高,为此,大量学者设计了定量ＰＣＲ技术,从克服各种因素对ＰＣＲ扩增的干扰,从而提高ＰＣＲ的特异性及准确性,本文对定量ＰＣＲ技术进行了简要的综述。     

PCR室间质量控制研究状况

ＰＣＲ技术现已得到一定程度的普及，许多单位将其作为一种常规应用于多种病原微生物的临床检测和诊断。国外学者近年来相继报道对全球范围内许多研究室建立的乙肝病毒ＤＮＡ，丙肝病毒ＲＮＡ和结核杆菌ＤＮＡ的ＰＣＲ检测方法进行的室间质量控制研究，结果表明不同研究室所建立的ＰＣＲ的敏感性和特异性，差别较大，本文对此简要综述。     

聚合酶链反应在白血病诊疗中的应用

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种模拟天然ＤＮＡ复制过程的体外基因扩增特异性ＤＮＡ片段的新技术。它能高效扩增目的ＤＮＡ片段，在数小时内完成２０－５０个循环，使目的ＤＮＡ扩增数百万倍。该技术具有快速、敏感、特异性强等优点，目前已广泛用于传染病和遗传病的诊断，并在血液病的研究中取得了重大进展。本文在ＰＣＲ在白血病诊疗中的应用概述如下。     

HLA-DRB1基因分型在移植配型及亲子鉴定中的应用

应用聚合酶链反应－序列持异性引物（ＰＣＲ＿ＳＳＰ）方法对南京地区汉族人群ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点基因特异性及骨髓移植配型、亲子鉴定等进行了分析。ＤＲＢ１基因频率范围在０．００３３～０．１８３３之间，以ＤＲ９１ＤＲ４占多数；骨髓移植通过配型移植成功３例，２例存活情况良好；ＤＲＢ１位点排除亲子关系５例，其中２例为ＨＬＡ－ＤＲＢ１单独排除亲缘关系。本法具有操作简单、快速、结果可靠的特点，不仅适用于移植配型、     

可变串联重复区多聚酶链反应法评估异基因骨髓移植后的嵌合状态

为更好地评价异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）后的嵌合状态，采用可变串联重复区（ＶＮＴＲ）Ｄ１Ｓ８０位点多聚酶链反应（ＰＣＲ）法对１０例白血病患者ａｌｏ－ＢＭＴ后的嵌合状态进行检测。结果９例为完全嵌合（ＣＣ），１例为混合嵌合（ＭＣ），其中２例经核型分析结果证明为ＣＣ，６例经小卫星ＤＮＡ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析也证明为ＣＣ。说明ＶＮＴＲ位点ＰＣＲ法检测ａｌｏ－ＢＭＴ后的嵌合状态具有方法简便、快速、灵敏度高的优点，且不需放射性同位素操作，不受血型、性别、ＨＬＡ配型及骨髓增生低下等影响。     

PCR技术在儿科结核病诊断中存在的问题

观察多聚酶链反应技术在结核病临床诊断上的应用以及存在的问题，方法：２２例结核病符合临床诊断标准，５０例对照组，应用ＰＣＲ技术，经凝胶电泳法检测结果。结果血样本ＴＢ－ＤＮＡ－ＰＣＲ的阳性率为结核组１８．１８％，对照组３６．００％，敏感度１８．１８％，特异性６４．００％，假阳性３６．００％，假阴性８１．８２％。