ⅡCD34抗原表达与对化疗药物的敏感性

体外细胞毒法（四唑盐法）检测３６例急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞对阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）、高三尖杉酯碱（ＨＨｒ）、柔红霉素（ＤＮＲ）、阿克拉霉素（Ａｃｌａ）、长春新碱（ＶＣＲ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）的敏感性，同时用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（ＡＰＡＡＰ）法检测其ＣＤ＿（３４）抗原，并与临床化疗疗效比较。发现Ａｒａ－Ｃ、ＨＨｒ、ＶＰ－１６中敏组ＣＤ＿（３４）抗原的表达较高敏组高（Ｐ＜０．０５），ＤＮＲ、Ａｃｌａ、ＶＣＲ耐药组较中敏组高，差异亦显著（Ｐ＜０．０５），六种化疗药物耐药组ＣＤ＿（３４）抗原的表达均较高敏组高（Ｐ＜０．０５）。诱导化疗第一疗程后骨髓原始细胞减少指数（ＭＢＤＩ）值＜４０组，４０～６０组及＞６０组组间ＣＤ＿（３４）抗原的表达差异显著（Ｐ＜０．０５）。ＡＭＬ化疗完全缓解，部分缓解与未缓解组组间ＣＤ＿（３４）抗原表达差异亦显著（Ｐ＜０．０５）。复发患者ＣＤ＿（３４）抗原的表达较初诊者高（Ｐ＜０．０５）。ＣＤ＿（３４）阳性白血病细胞对化疗药物具有抗药性，除因其处于静止期（Ｇ＿０期）外，可能与多药耐药基因（ＭＤＲ１）的高水平表达有关。     

重组人造血干细胞因子基因在人造血干／祖细胞的转移和表达

目的：拓展造血干细胞因子（ＳＣＦ）的研究和基因治疗途径。方法：利用基因重组技术，构建了编码可溶性人ＳＣＦ基因的逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ－ＳＣＦ，应用脂质体ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ基因转移法将重组质粒导入Ψ２和ＰＡ３１７病毒包装细胞，经Ｇ４１８选择性培养基筛选，获得产重组病毒的包装细胞ＰＡ３１７／ＳＣＦ，其病毒效价为（２．４～８．５）×１０５ＣＦＵ／ｍｌ，继而感染人造血干／祖细胞。应用多聚酶链反应、ＡＰＡＡＰ免疫组化染色和化学发光－直接酶标法检测人ＳＣＦ基因在细胞中转移和表达。结果：逆转录病毒载体介导的ｒｈＳＣＦ基因在人造血干／祖细胞中获得有效转移和表达。结论：为进一步研究ＳＣＦ的生物学特性及开展干细胞移植等提供了一定的途径。     

重组人单链白细胞介素12融合基因的构建、真核表达及生物学活性测定

目的 探讨用生物学技术获取具有生物学活性的重组人白细胞介素１２（ｒｈＩＬ－１２）的方法。方法 从经佛波醇酯（ＰＤＢｕ）刺激的ＥＢ病毒转化的人Ｂ淋巴母细胞株ＮＣ－３７中提取ｍＲＮＡ,经逆转录－聚合酶链反应分别获得ｈＩＬ－１２ｐ４０和ｐ３５亚单位编码序列的ｃＤＮＡ,运用重组聚合酶链反应技术。将两段基因通过多肽接头（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ＤＮＡ序列连接后进行基因重组,构建了重组人单链ＩＬ－１２融合基因（ｒｈ－ｓｃＩＬ－１２）。进一步将ｒｈｓｃＩＬ－１２融合基因插入ｐｃＤＮＡ３．１（＋）真核表达载体中,构建ｒｈｓｃＩＬ－１２真核表达载体「ｐｃＤＮＡ３．１（＋）－ｒｈｓｃＩＬ－１２」,转染ＣＯＳ－７细胞,结果 经Ｇ４１８筛选获ＣＯＳ－ｒｈｓｃＩＬ－１２融合蛋白稳定表达株,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ显示该融合蛋白相对分子质量为７     

登革病毒E蛋白抗原基因免疫诱导在小鼠免疫应答的初？…

目的：研究登革病毒Ｅ基因免疫的可行性,方法：用脂质体转染法将构建的Ｅ基因重组真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３－Ｅ导入小鼠成纤维细胞ＮＩＨ３Ｔ３细胞,ＳＤＳ＿ＰＡＧＥ和蛋白质印迹实验检测Ｅ基因的体外表达,然后将重组真核表达质粒经肌肉注射免疫ＢＡＢＬ／ｃ小鼠,检测其诱发特异性体液和细胞应答水平。结果：重组真核表达质粒,ｐｃＤＮＡ３－Ｅ在小鼠体内诱发一一定水平的体液和细胞免疫应答,且持续时间较长,结论：登革病毒     

HLA—DR基因反义RNA导入脐血干／祖细胞对HLA—DR抗原表达的影响

目的：探讨组织相容性抗原Ⅱ类（ＭＨＣ－Ⅱ）基因反义ＲＮＡ是否可调控脐血细胞ＭＨＣ－Ⅱ类基因的表达及降低脐血细胞的免疫原性和脐血细胞移植时发生移植物抗宿主反应（ＧＶＨＲ）的程度。方法：应用分子克隆技术构建了含人ＨＬＡ－ＤＲβ基因的逆转录病毒表达载体，经过狭缝杂交、电泳、酶切分析鉴定，获得了ＨＬＡ－ＤＲβ基因反义ＲＮＡ重组体，用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ（脂质体）将重组体导入包装细胞ＰＡ３１７。结果：产重组病毒的细胞ＰＡ３１７的病毒滴度可达１×１０５ｃｆｕ／ｍｌ。用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）可从转染的脐血干细胞中扩增出ＤＲ－β基因ｃＤＮＡ，说明反义ＲＮＡ重组体目的基因已有效表达。用流式细胞仪测定转染的脐血细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原阳性细胞率为２８％（对照组为４５％），其抑制率为３８．２％。结论：导入脐血干细胞的ＨＬＡ－ＤＲ基因反义ＲＮＡ重组体成功地降低了其ＨＬＡ－ＤＲ抗原的表达程度，为临床上降低脐血移植的ＧＶＨＲ提供了理论依据和实验基础。     

HCV结构区重组质粒构建,蛋白表达及小鼠对重组质粒抗体 …

为进行ＨＣＶ－ＤＮＡ疫苗实验研究，通过分子克隆技术构建了ＨＣＶ－ＤＮＡ重组质粒（含有ＨＣＶ结构区基因片段１６９３ｂｐ，ＯｋａｍｏｔｏＩＩ型）将其转染到Ｈｅｌａ细胞中，蛋白抽提物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ表明，重组质粒能表达约１１０ＫＤ的融合蛋白，经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实该融合蛋白为特异性的ＨＣＶ结构区蛋白。用核酸免疫方法，将构建的重组质粒注射ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，经ＥＬＩＳＡ检测到免疫鼠能产生特异性抗体。     

急性髓系白血病细胞CD34抗原表达的研究：Ⅰ表达特点和临床意义

对５６例初发急性髓系白血病（ＡＭＬ）细胞ＣＤ＿（３４）抗原的表达作了检测，分析了ＣＤ＿（３４）抗原表达与临床表现及化疗疗效的关系。结果显示，ＡＭＬ细胞的ＣＤ＿（３４）表达率存在很大差别，从１％～８５％；５６例ＡＭＬ中ＣＤ＿（３４）阳性表达病例为２３例，占４１．１％。ＣＤ＿（３４）抗原表达与ＦＡＢ形态学分型无关，但Ｍ＿３型的表达阳性率明显低于Ｍ＿１、Ｍ＿２型。ＣＤ＿（３４）￣＋病例组与ＣＤ＿（３４）￣－病例组在年龄、性别及初发时白细胞总数、血红蛋白浓度、血小板计数等均无明显差异；在诱导化疗疗效上，ＣＤ＿（３４）￣＋组完全缓解率为４３．５％，明显低于ＣＤ＿（３４）￣－组的７２．７％。研究结果提示，ＡＭＬ细胞在ＣＤ＿（３４）抗原的表达上存在异质性；并具有一定的预后判断价值，建议对ＣＤ＿（３４）￣＋病例施行更为有效的、可能需与ＣＤ＿（３４＿￣－病例不同的化疗。     

家兔脑缺血再灌注损伤机制的研究

用家兔四动脉闭塞法建立急性完全性脑缺血后给予再灌注，观察缺血前后及再灌注后脑组织部分电解质和含水量、脑组织和血液丙二醛（ＭＤＡ）、环核昔酸（ｃＡＭＰ、ｃＧＭＰ）、血栓烷Ｂ＿２（ＴｘＢ＿２）、６－酮－前列腺素Ｆ＿（１α）（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）含量、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和谷胱苷肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性改变。结果：再灌注后实验组脑组织Ｃａ￣（２＋）、ＭＤＡ、ＴｘＢ＿２和ｃＡＭＰ较对照组升高（Ｐ＜０．０５），ＧＳＨ－Ｐｘ活性、６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ＿（１α）含量降低（Ｐ＜０．０５）；实验组血液中ｃＡＭＰ含量高于对照组（Ｐ＜０．０５）。提示脑组织Ｃａ￣（２＋）过载、氧自由基增多、ｃＡＭＰ／ｃＯＭＰ和ＰＧＩ＿２／ＴＸＡ＿２比值异常在脑缺血再灌注损伤中起着重要的作用。     

急性髓细胞白血病细胞抗原分化途径的研究

用造血因子体外培养５例正常人和１５例急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）患者的骨髓单个核细胞，同时用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法（ＡＰＡＡＰ）检测培养０，５，１０天时两组造血干、祖细胞和髓系分化阶段标志抗原（ＣＤ３４、ＣＤ３８、ＣＤ１３、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１５）表达的变化，研究ＡＭＬ细胞抗原分化途径和阻滞点。结果显示ＡＭＬ细胞虽然在培养０～５天能沿正常髓系分化途径分化成熟，但培养６～１０天间ＡＭＬ细胞则不能象正常骨髓细胞一样继续分化成熟，表现在ＣＤ３４＋、ＣＤ３８＋、ＣＤ１３＋细胞持续升高。证明ＡＭＬ细胞自身存在独特的调控失常机制     

先天性甲状腺功能减退症壮族患儿 ＴＳＨＲ 基因突变遗 传分析

摘要：目的 分析南宁市先天性甲状腺功能减退症壮族患儿促甲状腺激素受体（ＴＳＨＲ）基因突变及其特点。方法 以 ２１ 例患 有先天性甲状腺功能减退症的壮族患儿及其父母为研究对象。提取患儿及其父母的外周血 ＤＮＡ，采用荧光定量 ＰＣＲ 扩增 ＴＳＨＲ 基因所有 １２ 个外显子、外显子－内含子交界区以及 ３′端和 ５′端非翻译区，利用第一代测序法对基因扩增产物进行测序 并进行分析。结果 ２１ 例患儿中的 １２ 例存在 ＴＳＨＲ 基因突变，分别为 ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）纯合突变 ６ 例，ｃ．Ｃ１５４Ａ（ｐ．Ｐ５２Ｔ）和 ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）复合杂合突变 １ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）杂合子复合 ｃ．Ｇ２１８１Ｃ（ｐ．Ｅ７２７Ｄ）纯合突变 １ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ） 杂合子突变 ４ 例。４０ 例父母中存在的 ＴＳＨＲ 位点基因突变分别为 ｃ．Ｃ１５４Ａ（ｐ．Ｐ５２Ｔ）１ 例，ｃ．Ｇ２１８１Ｃ（ｐ．Ｅ７２７Ｄ）９ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ （ｐ．Ｒ２６９Ｓ）２４ 例。结论 先天性甲状腺功能减退症患儿的发病与父母 ＴＳＨＲ 基因具有遗传相关性，新发现的 ｃ． Ｃ８０５Ａ （ｐ．Ｒ２６９Ｓ）基因突变位点可能是壮族人群遗传性先天性甲状腺功能减退症的主要突变位点