骨髓移植供受者HLA－DRB的单链构型多态性配型

用ＰＣＲ和单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）法检查供受者的ＨＬＡ－ＤＲＢ－１基因座的多态性的一致性，以此做ＤＲＢ的基因配型。１６例同胞供受者对的ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型，有６对相合（６／１６），１０对不合（１０／１６）。此基因配型结果与其它配型结果比较，说明ＤＲＢ－１的ＰＣＲ－ＳＳＣＰ配型在区分同胞供受者对的Ⅱ类抗原多态性上有较高的灵敏度，同时表明此类配型在应用于骨髓移植前检查同胞供者的意义。     

应用PCR—SSP对异基因骨髓移植供受者HLA—DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ１位点的纯合体和杂合体     

应用PCR－SSP对异基因骨髓移植供受者HLA－DQA1位点的基因分型

为探索一种可靠性和灵敏性高的ＨＬＡⅡ类基因的配型方法，根据Ｏｌｅｒｕｐ提出的１６个特异性引物序列，用多聚酶链反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，对ＤＱＡ＿１基因位点的多态性进行检测和分型，并与多聚酶链反应－序列特异性寡核苷酸探针杂交（ＰＣＲ－ＳＳＯＰＨ）及多聚酶链反应－单链构型多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测结果进行比较，获得了一致的分型结果。ＰＣＲ－ＳＳＰ可分辨出ＤＱＡ＿１位点的纯合体和杂合体等位基因，并能检测出单一碱基的点突变；它将ＰＣＲ扩增和检测两个步骤合并为一次完成，操作更简便、快速。并已将ＰＣＲ－ＳＳＰ方法成功地用于１５对异基因骨髓移植的供、受者的分型。ＰＣＲ－ＳＳＰ作为基因分型的有效技术，可为骨髓来源提供直接的科学依据。     

多聚酶链反应／单链构型多态性用于骨髓移植供者选择的研究

在１１个家系内进行了骨髓移植的配型工作。用多聚酶链反应（ＰＣＲ）分别扩增了供受者最具多态性的ＤＲＢ１和ＤＱＢ１基因的第二外显子，这些ＰＣＲ产物变性后在内烯酰胺凝胶电泳上显示具有序理特异性带型格局，即单链构型多态性，ＰＣＲ／ＳＳＣＰ具有简单，经济，灵敏，准确，快速等优点，对骨髓移植供者的选择，尤其是对非血缘关系骨髓移植供者的选择上更显突出的优越性。     

PCR－SSCP用于HLA－DR4等位基因多态性研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术，分析了８例已知ＤＲ４等位基因型的个体，其中７例不同基因型的样本ＳＳＣＰ图谱有明显区别，２例均为ＤＲＢ１＊０４１０的样本，ＳＳＣＰ图谱则完全一致。笔者着重探讨了影响ＳＳＣＰ分析的主要因素：聚丙烯酰胺凝胶浓度和交联度，凝胶中是否含甘油，电泳温度、电流或电压大小等。提示ＰＣＲ－ＳＳＣＰ可用于研究ＨＬＡ的微观多态性、器官移植的配型及法医学上个体识别等方面，具有简便，快速、经济以及高度的分辨力和良好的重复性。     

混合淋巴细胞培养在骨髓移植供体选择中的作用

混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）是传统的配型骨髓移植（ＢＭＴ）供受体主要组织相容性复合（ＭＨＣ）的重要方法。但近年来，随着分子生物学和ＰＣＲ技术发展，出现了许多新的配型ＨＬＡ的基因学方法。利用这些方法，学者们对ＭＬＣ配型ＨＬＡ及选择ＢＭＴ供体的作用进行了研究。认为ＭＬＣ在有血缘关系的同胞间ＢＭＴ供体选择中尚有一定的作用，耐 在无关供体的选择时，ＭＬＣ可被省略而为ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＰＣＲ－Ｆ等方法代替。     

聚合酶链反应—单链构象多态性分析与反向杂交法进行骨髓移植…

用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增骨髓移植（ＢＭＴ）受者及７８例无关供者ＨＬＡ－ＤＰＢ１基因，作单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析，初步选出与受者ＨＬＡ－ＤＰＢ１ＳＳＣＰ带型相同者；最后进行反向杂交检测，确定ＨＬＡ－ＤＰＢ１更为相容的供者。应用上述技术，从７８例无关供者中选择出１例与ＢＭＴ受者基因相同的供者。整个过程快速、经济、准确性高。     

PCR－SSCP用于HLA－DR4等位基因多态性研究

采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）技术，分析了８例已知ＤＲ４等位基因型的个体，其中７例不同基因型的样本ＳＳＣＰ图谱有明显区别，２例均为ＤＲＢ１＊０４１０的样本，ＳＳＣＰ图谱则完全一致。笔者着重探讨了影响ＳＳＣＰ分析的主要因素：聚丙烯酰胺凝胶浓度和交联度，凝胶中是否含甘油，电泳温度、电流或电压大小等。提示ＰＣＲ－ＳＳＣＰ可用于研究ＨＬＡ的微观多态性、器官移植的配型及法医学上个体识别等方面，具有简便，快速、经济以及高度的分辨力和良好的重复性。     

非同位素方法检测卵巢癌组织p53基因的改变

为解决常规ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）使用放射性同位素及操作繁杂等问题，应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的非同位素检测方法对１６例卵巢癌及５例正常胎盘组织中ｐ５３基因的第５、６外显子（Ｅｘｏｎ５、６）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物进行了分析，并结合ＤＮＡ测序技术进行验证。正常组织未发现异常，１６例卵巢癌ＳＳＣＰ分析显示３例异常，ＤＮＡ测序证实其中２例为核苷酸突变，１例为核苷酸插入。采用ＥＢ染色的非同位素ＰＣＲ－ＳＳＣＰ，方法简便、省时、准确，具有良好的实用性和广泛的使用价值。     

HLA-DRB1基因分型在移植配型及亲子鉴定中的应用

应用聚合酶链反应－序列持异性引物（ＰＣＲ＿ＳＳＰ）方法对南京地区汉族人群ＨＬＡ－ＤＲＢ１位点基因特异性及骨髓移植配型、亲子鉴定等进行了分析。ＤＲＢ１基因频率范围在０．００３３～０．１８３３之间，以ＤＲ９１ＤＲ４占多数；骨髓移植通过配型移植成功３例，２例存活情况良好；ＤＲＢ１位点排除亲子关系５例，其中２例为ＨＬＡ－ＤＲＢ１单独排除亲缘关系。本法具有操作简单、快速、结果可靠的特点，不仅适用于移植配型、     

小儿急性T淋巴细胞白血病tal－1基因缺失分析

根据ｔａｌ－１基因缺失上下游序列设计一对引物，应用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术对１０株人白血病细胞株和７０例小儿急性白血病骨髓标本进行ｔａｌ－１基因缺失分析。结果ＣＥＭ、ＨＢＳ－２和ＲＰＭＩ－８４０２三株Ｔ细胞白血病（Ｔ－ＡＬＬ）细胞株以及３／１６例Ｔ－ＡＬＬ发现ｔａｌ－１基因缺失，５４例其它类型急性白血病均未见基因缺失，而且具ｔａｌ－１基因缺失的Ｔ－ＡＬＬ细胞均为胸腺发育Ｉ期，免疫表型特征为ＣＤ＿２＋、ＣＤ＿７＋、ＣＤ＿１￣－、ＣＤ＿４￣－和ＣＤ＿８￣－。ＰＣＲ方法敏感性达１０￣（－４）。说明ｔａｌ－１缺失发生于部分Ｔ－ＡＬＬ中，可用于微小残留病的检测。     

PCR-SSCP法检测冠心病患者载脂蛋白E基因多态性

目的：建立聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测冠心病患者载脂蛋白Ｅ（ａｐｏＥ）-基因多态性,研究我国汉族冠心病（ＣＨＤ）患者载脂蛋白Ｅ基因多态性 及其对血脂水平的影响。方法：建立ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术,测定９０例ＣＨＤ患者及１００例相应年龄的健康者ａｐｏＥ基因多态性,同时测定研究对象６项血脂指标。结果：ＣＨＤ患者ａｐｏＥ４等位基因频率显著高于对照组（０．１１１比０．０６,Ｐ〈０．０５）     

可变串联重复区多聚酶链反应法评估异基因骨髓移植后的嵌合状态

为更好地评价异基因骨髓移植（ａｌｏ－ＢＭＴ）后的嵌合状态，采用可变串联重复区（ＶＮＴＲ）Ｄ１Ｓ８０位点多聚酶链反应（ＰＣＲ）法对１０例白血病患者ａｌｏ－ＢＭＴ后的嵌合状态进行检测。结果９例为完全嵌合（ＣＣ），１例为混合嵌合（ＭＣ），其中２例经核型分析结果证明为ＣＣ，６例经小卫星ＤＮＡ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交分析也证明为ＣＣ。说明ＶＮＴＲ位点ＰＣＲ法检测ａｌｏ－ＢＭＴ后的嵌合状态具有方法简便、快速、灵敏度高的优点，且不需放射性同位素操作，不受血型、性别、ＨＬＡ配型及骨髓增生低下等影响。     

PCR—SSP分析视网膜色素膜炎易感基因

采用聚合酶链式反应和顺序特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）基因分析方法，对视网膜色素膜炎患者２９例及３０例无血缘关系的健康人的人类主要组织相容性复合体（ＭＨＣ）ＤＱ各等位基因及亚基因进行了检测分析。实验结果显示：ＭＨＣ－ＤＱＢ１＊０３０１基因可能是视网膜色素膜炎的相关基因之一；ＰＣＲ－ＳＳＰ具有快速、简便、敏感、准确和可靠等优点，值得推广应用。     

ABO血型系统的基因分型

本文介绍了ＡＢＯ血型系统的分子基础及在此基础上对ＡＢＯ血型系统的基因分型的几种主要方法：ＰＣＲ－ＤＮＡ测序法、ＰＣＲ－限制性内切酶酶切法、ＰＣＲ－限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、ＰＣＲ－序列特异性引物（ＳＳＰ）、ＰＣＲ－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）等。另外还介绍了基因分型技术在ＡＢＯ亚型研究中的应用。     

用序列特异性引物的PCR方法分析慢性淋巴细胞性甲状腺炎患者…

慢性淋巴细胞性甲状腺炎（ＣＬＴ）是一种器官特异性自身免疫性疾病，其遗传易感性与ＨＬＡ－Ⅱ类基因具有相关性，本研究用序列特异性引物的ＰＣＲ（ＰＣＲ－ＳＳＰ）方法，分析２６名由病理证实的ＣＬＴ及正常对照２０例外周血白细胞基因组ＤＮＡ的ＭＨＣ－ＤＱＡ１位点的基因多态性分布，发现两组间有明显不同，其中ＤＱＡ１＊０３０１的等位基因频率显著高于对照组（Ｐｃ小于０．０５）ＤＱＡ１＊０３０１／０３０１的纯合子频率     

微量聚合酶链反应对人类白细胞抗原的基因分型

目的 探讨应用于移植的人类白细胞抗原（ＨＬＡ）二类基因（ＤＲＢ／ＤＱＢ）快速分型新技术。方法 采用快速ＤＮＡ抽提技术,建立了ＨＬＡ＿ＤＲＢ／ＤＱＢ微量序列特异性引物聚合酶链反应基因分型方法,对１４２份供受者ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲＢ／ＤＱＢ基因分型,并与单克隆抗体一叔法ＨＬＡ血清学分型技术进行对比研究。结果 应用微量ＰＣＲ－ＳＳＰ方法共检出１３种ＤＲＢ１等位基因和 ＤＱＢ１等位基因,与血清学分型结果     

自体外周血干细胞动员中测定CD34^＋Thy—1＋细胞的意义

目的：确切评估动员后外周血干细胞（ＰＢＳＣ）水平的变化，及时指导临床选择最佳采血时机。方法：用流式细胞术测定化疗和粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）联合动员时外周血ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞含量的变化，同时用体外集落培养方法评价外周血祖细胞（ＰＢＰＣｓ）的克隆形成能力。结果：动员后循环血中ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞、ＣＤ３４＋细胞和克隆形成细胞（ＣＦＣ）含量分别增高４８．６倍、５０．０倍和５３．１倍，高峰时间在化疗后第１２～１４天（注射Ｇ－ＣＳＦ的第６～８天）；外周血单个核细胞中ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞、ＣＤ３４＋细胞的比例分别增高１３．８倍和１０．５倍；动员的早期阶段，ＣＤ３４＋细胞中Ｔｈｙ－１＋细胞比例最高。结论：联合应用化疗和Ｇ－ＣＳＦ对ＰＢＰＣｓ，尤其对早期干／祖细胞具有显著动员作用；用流式细胞术检测ＣＤ３４＋Ｔｈｙ－１＋细胞可及时指导临床准时采集ＰＢＳＣ。     

应用PCR－SSCP法探讨外周血B细胞参与多发性骨髓瘤的发病

为探讨多发性骨髓瘤（ＭＭ）的克隆起源，经形态学及ＡＢＣ法筛选１８例外周血无浆细胞污染的ＭＭ患者，采用多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术扩增免疫球蛋白重链ＣＤＲ３区编码基因，并经单链构象多态性（ＳＳＣＰ）法分析其单链构象多态性。经平行检测患者外周血（ＰＢ）和骨髓（ＢＭ）标本，发现１５例ＢＭ及１１例ＰＢ获得预期的克隆特异性ＰＣＲ产物为８０～１１０ｂｐ，其中９例ＰＢ和ＢＭ获得相同的ＰＣＲ产物，８例为１条扩增条带，其ＳＳＣＰ分析可见２条单链，另１例ＰＣＲ产物为２条扩增条带，其ＳＳＣＰ分析可见３条单链，同一患者ＰＢ与ＢＭ标本的单链泳动速度一致。提示至少６０％ＭＭ患者ＰＢ和ＢＭ不仅ＰＣＲ产物一致，其单链构象也一致，研究结果证实了外周血Ｂ细胞参与ＭＭ的发病。     

非同位素方法检测卵巢癌组织p53基因的改变

为解决常规ＤＮＡ单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）使用放射性同位素及操作繁杂等问题，应用溴化乙锭（ＥＢ）染色的非同位素检测方法对１６例卵巢癌及５例正常胎盘组织中ｐ５３基因的第５、６外显子（Ｅｘｏｎ５、６）的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物进行了分析，并结合ＤＮＡ测序技术进行验证。正常组织未发现异常，１６例卵巢癌ＳＳＣＰ分析显示３例异常，ＤＮＡ测序证实其中２例为核苷酸突变，１例为核苷酸插入。采用ＥＢ染色的