人脐血前红系祖细胞(BFU-E)体外培养的动态观察

<正> 脐血含各系造血干/祖细胞和多种造血集落刺激因子,是继骨髓、外周血、胎肝之后第4个新开发的、可移植的造血干细胞来源;还可静脉输注,用于一切放化疗后血细胞减少的病人、刺激造血功能,从而扩大了血源供应。笔者通过对37份人脐血和11份正常骨髓的BFU-E体外培养观察,再次证明脐血含有丰富的造血干细胞,并对脐血红系定向祖细胞的2个亚群(CFU-E、BFU-E)进行了动态观察,结果报告如下。     

PNH患者外周血及骨髓正常和异常造血干/祖细胞组成分析

目的　研究阵发性睡眠性血红蛋白尿症 (PNH)患者外周血及骨髓造血干 祖细胞的组成及含量。方法　用流式细胞仪测定 2 1例PNH患者外周血及骨髓造血干 祖细胞 (以CD3 4+为标志 )锚连蛋白CD59的表达 ,并将患者造血干 祖细胞总数与正常人进行比较。结果　PNH患者骨髓及外周血CD3 4+细胞总量均明显低于正常人 (P <0 .0 0 1) ,但在疾病缓解时总量与正常对照差异无显著性 (P >0 0 5 )。PNH患者外周血CD3 4+细胞主要以CD59+表型为主 [CD3 4+CD59+细胞占总CD3 4+细胞的 (81.4±16 1) % ],临床未缓解或骨髓中CD3 4+细胞以CD59- 表达为主的患者 ,其外周血CD3 4+细胞仍以CD59+表型为主。结论　PNH患者造血干 祖细胞含量明显减少 ,但在外周血中以正常表型为主     

成骨生长肽对红系造血祖细胞的体外促增殖作用

目的：通过研究人工合成成骨生长肽(sOGP)对红系造血祖细胞的体外促增殖作用，初步探索sOGP促造血活性的作用环节。方法：将正常小鼠和人骨髓有核细胞在标准红系祖细胞基础培养基中进行培养，设定sOGP的不同浓度梯度，于培养48h后计数小鼠CFU—E集落数，培养第4天与第14天计数人CFU—E、BFU—E集落数，将数据与空白对照组及EPO阳性对照组进行比较。结果：sOGP能够有效促进小鼠CFU—E及人CFU—E、BFU—E的体外增殖，量效关系明显，其有效作用浓度范围为10^-16～10^-10mol／L，高峰浓度约为10^-14～1011^-12 mol／L，呈低浓度、广范围及双相作用的特点。但是，sOGP对红系造血祖细胞的体外促增殖效果要弱于阳性对照药EPO。结论：sOGP能够在体外有效地促进红系造血祖细胞的增殖，可能是通过对骨髓基质细胞的作用而促进造血和造骨。     

烧伤大鼠血清对骨髓红系粒系造血的影响

目的：观察烧伤血清对骨髓红系粒系造血的影响，探讨促进造血细胞增殖的物质。方法：用5kg溴钨灯致大鼠背部30％体表面积Ⅲ度烧伤，伤后无菌抽取大鼠血清。按10mg／L蛋白加入到骨髓红系或粒系体系中培养。结果：烧伤后3，12，24，48，72和96h，骨髓红系(CFU-E，RFU-E)和粒分(CFU-GM)集落数均显著高于正常对照组：伤后24h达3377，179．7，2405个／1&;#215;10^5骨髓有核细胞(bone marrow cell,BMC)；对照组仅98．5，68．7，1052个／1&;#215;10^5BMC；差异非常显著(t=8．3l，9．65，7．84，P&;lt;0．01)结论：烧伤血清对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用。     

PNH患者红细胞膜缺乏自身限制因子的研究

采用抗Ｃ＿９－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析柱，从正常人红细胞膜分离出同种限制因子（ＨＲＦ）。试验表明它有限制未端补体溶血的功能。用细胞亲和层析法从混合的阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）红细胞中分离出纯而完整的ＰＮＨＩＩＩ型细胞。试验说明纯ＰＮＨＩＩＩ型细胞上缺乏ＨＲＦ。     

低分子量肝素和地塞米松对PNH患者红细胞体外抑制溶血作用的研究

目的 研究低分子量肝素和地塞米松对阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者红细胞体外溶血的作用。方法 采集6例典型溶血发作的PNH患者外周血，采用Ham试验、微量补体溶血敏感试验（mCLST)检测单独或联合加入不同剂量的低分子量肝素和地塞米松后对溶血的影响；同时检测各种不同剂量的药物对活化部分凝血活酶时间（APTT）的影响。结果 （1）低分子量肝素、地塞米松体外对PNH患者的红细胞均有抑制溶血的作用，此种作用随剂量的增大而增大。当同时加入上述两种治疗量的药物时，对溶血的抑制作用明显加强。同时，在此种剂量下APTT的延长未超过2倍。（2）Ham试验检测时地塞米松有抑制溶血的作用，mCLST检测时地塞米松随加入方法的不同对溶血的作用不同。低分子量肝素在Ham和mCLST试验中均可发挥抑制溶血的作用。结论 低分子量肝素、地塞米松均有抑制PNH患者红细胞溶血的作用，其作用机制存在差异；二者具有协同作用，治疗剂量对出凝血的影响较小，在PNH患者红细胞溶血发作的治疗中有应用前景。     

PNH异常红细胞的计数及其意义

采用乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ）单抗结合荧光免疫标记红细胞，通过流式细胞仪直接对单个红细胞膜上ＡｃｈＥ进行定量检测，发现阵发性睡眠性血红蛋白尿症（ＰＮＨ）患者体内红细胞可分为两个类群，一群ＡｃｈＥ含量正常（ＡｃｈＥ（＋）］，一群ＡｃｈＥ缺失［ＡｃｈＥ（一）］；ＡｃｈＥ（－）红细胞百分率与蛇毒因子（ＣｏＦ）诱发的补体溶血率呈正相关；经ＣｏＦ诱发补体溶血后，仍可发现有对补体不敏感但无ＡｃｈＥ的异常红细胞，说明对补体不敏感的红细胞仍有其它异常。本法有可能成为一种比补体溶血试验更灵敏、更特异并易定量的ＰＮＨ诊断方法。     

DEFECTIVE LYMPHOCYTES SUPPORTING HEMATOPOIESIS IN PATIENTS WITH PAROXYSMAL NOCTURNAL HEMOGLOBINURIA

Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (PNH) is an acquired hemo-lytic disease in which there is a stem cell disorder of clonal nature. Previous studies have demonstrated that the numbers of burst-forming units-erythroid (BFU-E) and colony-forming units-granulocyte / macrophage (CFU-GM) from bone marrow of PNH patients growing in the medium containing PHA-LCM from the normai donors were more reduced than those of normai bone marrow. The purpose of present study was to investigate if PNH lymphocytes are defective in supporting hematopoiesis in vitro. PHA-LCM from PNH blood was added to the culture medium for the growth of PNH and normai BFU-E and CFU-GM. The numbers of PNH bone marrow BFU-E and CFU-GM in the medium containing PHA-LCM from PNH blood were less than those from normai blood; the numbers of normai bone marrow BFU-E and CFU-GM grown in the medium containing PHA-LCM from PNH blood were more decreased than those from normai blood. The results suggest that diminished numbers of PNH bone marrovv BFU-     

骨髓基质细胞对粒系祖细胞增殖的影响

本文研究了培养不同时间的骨髓基质细胞对粒系祖细胞体外培养生长的影响,并分析其细胞成分及培养上清液的作用。结果表明:在含上清的基质细胞贴壁层上种植骨髓细胞,除第14天外,均可见对CFU-GM的形成有刺激作用。而单纯无上清贴壁细胞层,或单纯基质贴壁细胞培养上清液,均无此刺激作用。说明基质细胞对粒系造血祖细胞生长的调控必须在一个结构功能完整的体系中才能发挥作用。在无外源性CSF作用的情况下,基质细胞仍能使少量CFU-GM生长,也说明基质细胞有刺激粒细胞生长的作用。14天以前,无琼脂间隔层的粒系祖细胞数较高,而21天后,有琼脂间隔层的粒系祖细胞数较高。说明造血基质细胞对粒系细胞生长的调控受着多方面因素的影响,体外培养时间不同有不同表现。基质细胞一方面通过与粒系造血祖细胞相互作用,近距离调节,另方面通过分泌粒系刺激因子和抑制因子,从正、负两方面调节粒系造血,以维持粒系造血的动态平衡。     

Amifostine对环磷酰胺衍生物所致正常造血祖/干细胞毒性的保护作用

为了估价Amifostine(WR-2721)对正常造血干细胞的保护作用,我们用不同剂量的环磷酰胺衍生物(4-HC,ASTA-Z)对13例正常造血干细胞进行了体外处理,并测定其PCM-CFU-GM,5R-CFU-GM和LTO-IC的LD_(95),发现在处理前经过WR-2721孵育的13例中10例LD_(95)明显增加(P<0.05),显示了明确的保护效果,而在9例白血病祖细胞组中,这种保护效果却没有被发现。相反,经过WR-2721孵育9例白血病祖细胞对化疗的敏感性都有不同程度的增加。     

人脐血造血干,祖细胞体外培养的实验研究

采用体外细胞培养的方法，检测了脐血、骨髓、外周血ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ。结果表明脐血中ＣＦＵ－ＧＭ，ＢＦＵ－Ｅ数量高于成人外周血，同骨髓相比，ＣＦＵ－ＧＭ数量无显著差异，ＢＦＵ－Ｅ低于骨髓。同时观察到脐血中ＣＦＵ－ＧＭ大集落比例明显高于骨髓；ＣＦＵ－ＧＭ集落产率时间曲线较骨髓延迟３～４天；Ｓ期ＧＭ－ＣＦＣ所占比例明显低于骨髓，可能提示脐血造血细胞中早期造血细胞比例高于骨髓。实验中还发现脐血红系集落生长同骨髓十分相似，二者均含ＣＦＵ－Ｅ和ＢＦＵＥ集落，而外周血中只含ＢＦＵ－Ｅ集落。我们统计了２７份脐血血量及所含有核细胞数。根据骨髓移植的有核细胞数标准（２×１０￣８／ｋｇ），一份脐血的有核细胞数很难达到此要求，但已达到目前国外小儿异体脐血移植成功病例的有核细胞数值。     

长期骨髓细胞培养净化白血病细胞与临床疗效关系的研究

应用Dexter长期培养体系进行了17急性非淋巴细胞白血病例(ANLL)骨髓的长期培养,按照培养4周后基质细胞CFU-ANLL和CFU-GM的生长情况,将其分为3型:Ⅰ型(11/17例)为培养净化有效型;Ⅱ型(3/17例)为部分净化有效或需4周以上培养观察其净化效果的类型;Ⅲ型基质细胞缺陷。体外培养中各种类型细胞均同步死亡。Ⅰ型病人化疗有效率较Ⅱ、Ⅲ型高。该结果提示临床应用Dexter体系净化进行自体骨髓移植(ABMT)时,应按其体外生长类型选择病人。比分类与所处临床状态无关,其净化作用可能与临床化疗之间无选择性交叉抗肿瘤关系。     

再生障碍性贫血患者血浆对正常骨髓巨核系祖细胞体外增殖分化作用的研究

应用骨髓长期培养（ＬＴＢＭＣ）法研究了再生障碍性贫血（再障）患者血浆的巨核细胞集落刺激活性（ＭＫ－ＣＳＡ）。分别用再障血浆、正常ＡＢ混合血浆和特发性血小板减少性紫癜（ＩＴＰ）患者血浆作为刺激正常骨髓巨核细胞生长的活性来源。结果显示三组培养贴壁层形成情况类似；再障组悬浮液中累积细胞数（３．１９±０．５４）×１０￣７高于对照组（２．４８±０．６０）×１０￣７，与ＩＴＰ组（２．６４±０．６４）×１０￣７比较，统计学差异不显著；再障组悬浮液中巨核系祖细胞（ＣＦＵ－ＭＫ）维持时间长。直接对正常骨髓细胞作半固体培养，发现再障组形成的巨核细胞集落数（９５．４±３５．２／２×１０￣５个细胞）高于对照组（４３．５±２０．６／２×１０￣５个细胞）。结果表明再障血浆具有较高ＭＫ－ＣＳＡ，推测再障患者可能存在着原发性ＣＦＵ－ＭＫ缺陷，血浆中ＭＫ－ＣＳＡ升高可能是机体的一种反馈性调节。     

抗凋亡基因bcl－2在急性白血病骨髓与细胞株中的转录水平表达

采用原位杂交方法检测了急性白血病骨髓活检标本及细胞株中ｂｃｌ－２基因表达水平。结果２２例白血病患者骨髓中２１例（包括髓系和淋巴系）存在ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ高表达；６种白血病细胞株中５种ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ阳性（Ｍｏｌｔ－４例外），它们分别为ＣＥＭ、Ｒａｊｉ、ＨＬ－６０、Ｕ９３７及Ｋ５６２。表明造血系统肿瘤中广泛存在ｂｃｌ－２基因转录水平激活，其基因产物可能通过抑制细胞凋亡过程而影响急性白血病细胞的生物学特性。     

THE PROLIFERATION OF PLASMA CELLS FROM MOUSE BONE MARROW IN VITRO : I. THE ROLE OF THYMUS

An in vitro proliferative system for immunoglobulin-G-forming plasma cells from the bone marrow of mice was established by the addition of antigenic protein and thymic cells or their homogenate to bone marrow cultures. The promoting activity of the thymus on plasma cells was independent from mouse strain, but it differed in strength with the variations of donor strains. Synthesis of immunoglobulin-G in proliferating plasma cells and its antibody reactivity against the administered antigen were demonstrated by immunocytological analyses.     

延安市114例心脑血管病患者体外血栓形成测定与分析

用 Ｃｈａｎｄｌｅｓ氏法对延安市 １１４例心脑血管病患者和 ６５例正常人的体外血栓形成进行测试与对照比较。结果表明，患者的体外血栓长（ｍｍ）、湿重（ｍｇ）、干重（ｍｇ）测值增大均有显著性改变（Ｐ＜０．０５或＜０．０１或＜０．００１），男女正常人３项指标比较，女性增值大于男性，均有显著性改变（Ｐ＜０．０５或＜０．０１），女性体外血栓形成能力高于男性。因此对心脑血管病人进行体外血栓形成测验是十分有意义的。