肿瘤学

重组型Cospase3对U251胶质瘤细胞促凋亡作用，选择性CDX-2抑制剂Nimesulide对肝肿瘤细胞HepG2增殖与凋亡的影响，肿瘤坏死因子凋亡诱导配体诱导膀胱癌EJ细胞凋亡的研究，^125I标记Ki67多肽核酸影响肾癌细胞增殖及凋亡的实验研究,氧化砷诱导胃癌细胞凋亡的信号传导途径研究.     

S100A7表达下调阻断NF-κB途径诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡

S100A7与肿瘤的发生、发展密切相关。我们的前期研究显示,胃癌组织和细胞中均呈现S100A7的过表达[1-2],并且其表达下调能明显抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖和迁移[2]。本研究中我们通过流式细胞术分析S100A7表达下调对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响,并探讨其与NF-κB途径之间的关系,为以S100A7为靶点的胃癌基因治疗提供理论依据。     

中期因子在肿瘤中表达的临床意义

中期因子(MK)是一种新的肝素结合生长因子,能够促进细胞的生长分化。近年的研究显示,MK在人类正常组织中不表达或低表达,却特异性表达在多种肿瘤组织中,它表达的上调提示肿瘤患者的生存期缩短和预后不良,因此MK可能成为新的肿瘤标记物。应用新的分子生物学技术MK可能成为基因治疗的新靶点。     

胃癌及癌前病变细胞凋亡研究进展

胃癌是一种常见的恶性肿瘤，严重危害人类的健康和生命。目前对胃癌的发病机理仍然认识不清。过去认为，肿瘤的发生是细胞异常增殖与分化的结果，现今研究表明，肿瘤的发生与发展不仅与细胞的异常增殖和分化有关，而且与细胞凋亡的异常密切相关。细胞凋亡是由基因调控的细胞主动死亡的过程，在肿瘤的发生中起着重要作用。自从1972年     

NHE-1反义基因对胃癌细胞的酸化作用及其意义

目的 探讨Na -H 交换泵-1(Na -H exchanger1,NHE-1)反义基因转染对人胃癌细胞内pH值(intracellular pH,pHi)的调节作用及其在肿瘤基因治疗中的价值.方法 构建人NHE-1基因反义真核表达载体,采用脂质体法将其转染至SGC-7901胃癌细胞中, 采用荧光探针检测转染前后细胞内pH值的变化以及对细胞增殖和凋亡的影响.结果 转染反义基因的细胞pHi明显降低,增殖能力降低,细胞凋亡率增加.结论 NHE-1基因的表达在肿瘤细胞pHi及增殖和凋亡调节中起重要作用.     

谷氨酰胺酶反义基因诱导胃癌细胞凋亡的作用研究

目的 利用反义核酸技术封闭胃癌细胞的谷氨酰胺酶基因,观察反义GAcDNA能否对胃癌细胞的恶性表型有所逆转,为肿瘤的基因治疗探索一条新途径,也为后续研究及临床应用奠定基础.方法 将含有GAcDNA片段的反义真核表达载体pcDNA3.0/GA,通过脂质体介导转入胃癌细胞SGC-7901,经筛选、鉴定,命名为SGC-7901GA,采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,观察反义核酸转染后胃癌细胞凋亡的改变.结果 pcDNA3.0/GA通过脂质体介导转染胃癌细胞SGC-7901,PCR证实GAcDNA目的 片段已经整合到了SGC-7901细胞基因组,获得的G418抗性细胞命名为SGC-7901GA.检测胃癌细胞的凋亡情况表明重组质粒转染后SGC-7901GA的TUNEL阳性细胞数量显著上升,与对照组比较差异有统计学意义.结论 本实验通过含有GAcDNA片段的反义真核表达载体pcDNA3.0/GA转染胃癌细胞株,发现胃癌细胞的凋亡指数增加,提示肿瘤细胞恶性程度有所降低,反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶基因可能成为肿瘤基因治疗的一条新途径.     

胃癌及癌前病变细胞的凋亡与增殖

目的 了解胃癌及癌前病变中细胞凋亡和增殖状态的变化,探讨其在胃癌发生中的作用。方法 采用脱氧核糖核酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）技术和增殖细胞核抗原（PCNA）免疫组织化学染色法观察58例胃癌、27例癌前病变和15例正常胃粘膜组织中细胞凋亡和增殖状态。结果 胃癌组织中细胞凋亡指数显著低于胃正常粘膜和胃癌前病变组织（2．8％,6．3％,12％,P＜0．05）;胃癌前病变细胞凋亡指数明显上升,显著高于正常胃粘膜（P＜0．05）;在正常胃粘膜、癌前病变及胃癌组织中凋亡／增殖比率呈递减趋势而细胞增殖指数则呈递增趋势（P＜0．05）;细胞凋亡指数与肿瘤组织类型、分化程度、浸润深度和转移状况无关（P＞0．05）,细胞增殖指数与肿瘤浸润深度和转移状况无关（P＜0．05）。结论 细胞凋亡和增殖的失衡可能是胃粘膜组织恶性转化的重要因素之一。     

LTD4及MK571对人结肠癌细胞SW480、Caco-2凋亡和增殖作用的体外研究

目的 观察半胱氨酰白三烯D4（LTD4）及半胱氨酰白三烯受体1拮抗剂MK571对人结肠癌细胞株SW480、Caco-2增殖和凋亡的影响.方法 MTT法检测细胞生长活性;FITC Annexin V/碘化丙啶（PI）双染流式细胞术检测细胞的凋亡率;PI染色细胞,用流式细胞仪检测细胞周期.结果 12.5 ～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌SW480细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6～12.5μg/L的LTD4处理24、48 h,对SW480细胞的增殖抑制作用无明显影响,作用时间延长至72 h,可促进SW480细胞的增殖.50～ 400 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞有促增殖作用,且存在时效和量效依赖性;而1.6-50 μg/L的LTD4对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.6.25～200 μmol/L的MK571对结肠癌SW480细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8 ～ 6.25 μmol/L的MK571对SW480细胞的影响与对照组相比无明显差异.25～ 200 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞有抑制作用,且存在时效和量效依赖性;而0.8～ 25 μmol/L的MK571对结肠癌Caco-2细胞的影响与对照组相比差异无统计学意义.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4对2种结肠癌SW480细胞和Caco-2细胞有促凋亡作用,且存在时效和量效依赖性;而100、200 μmol/L的MK571对2种结肠癌的凋亡无明显作用.与阴性对照组相比,25 ～ 100 μg/L的LTD4可以降低2种结肠癌细胞株G0/G1期比例,增加G2/M及S期比例;而100、200 μmol/L的MK571增加2种结肠癌细胞G0/G1期的比例,降低G2/M及S期比例.结论 LTD4具有促进人结肠癌SW480、Caco-2细胞株增殖的作用,该作用可能的作用机制是抑制凋亡、增加G2/M及S期细胞比例.MK571可抑制2种结肠癌细胞株的增殖,但对凋亡无明显影响,其抑制增殖作用的可能机制是阻滞细胞于G0/G1期.     

细胞凋亡与胃癌

过去通常认为 ,肿瘤是细胞原癌基因的激活和抑癌基因的失活 ,扰乱了细胞正常的增殖和分化 ,导致增殖过度分化异常所致。晚近 ,越来越多的研究证实 ,肿瘤的发生同时也是细胞凋亡的异常。胃癌同其他肿瘤一样 ,不仅有细胞过度增殖 ,同时也存在细胞的凋亡异常。细胞增殖过度和 (或 )细胞凋亡异常是胃癌发生的生物学基础。本文将就细胞凋亡在胃癌中的作用综述如下。1　细胞凋亡的概念细胞凋亡 (Apoptosis)是指在一定生理或病理条件下 ,由基因编程控制的细胞主动性死亡过程。这是人体清除损伤、衰老或不需要细胞的重要方式 ,对微环境没有或仅有极…     

胰腺癌组织中Midkine的表达与细胞增殖及凋亡的关系

目的研究Midkine(MK)蛋白在人胰腺癌组织中的表达与肿瘤细胞增殖和凋亡之间的关系及意义。方法收集人胰腺癌组织标本49例,免疫组化SP法检测MK蛋白和增殖细胞核抗原Ki67的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡指数,另取同期15例正常胰腺组织作对照。结果15例正常胰腺组织中均未发现MK和Ki67阳性表达,细胞凋亡较少(0.63±0.21);77.1%(35/49)的胰腺癌组织中有MK阳性表达,其表达与肿瘤组织学分级、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05);49例胰腺癌组织中Ki67平均标记指数(LI)为(31.67±15.41),平均凋亡指数(AI)为(5.93±4.18);MK表达阳性组Ki67平均标记指数为(35.27±16.03),显著高于阴性组的(22.67±13.66)(P<0.05);MK表达阳性组凋亡指数为(5.13±2.69),显著低于阴性组的(7.93±6.65)(P<0.05)。结论MK蛋白可作为反映胰腺癌生物学行为的指标之一,其在胰腺癌中的表达可能起到促进肿瘤细胞增殖和抑制凋亡的作用,MK基因可能成为胰腺癌治疗的新靶点。     

中期因子和骨桥蛋白在胃癌组织中表达及意义

目的 研究中期因子(midkine,MK)和骨桥蛋白(osteopontin, OPN)在胃癌组织中的表达情况,并探讨其临床意义.方法 采用免疫组织化学方法检测64例胃癌组织、20例癌旁正常胃黏膜组织中MK和OPN蛋白表达情况.结果 胃癌组织中MK和OPN的阳性表达率分别为76.6%和73.4%,显著高于癌旁正常组织.二者的表达水平与胃癌的浸润深度、淋巴结转移及临床分期成正相关关系.MK和OPN在胃癌中的阳性表达率之间存在一定相关性.结论 MK、OPN在胃癌的生长、侵袭与转移中起重要作用,它们之间存在相互诱导或是协同效应,其共同表达可作为判断胃癌预后的指标.     

RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响.方法:培养人胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803及SGC-7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者.采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden方法检测癌细胞侵袭力.结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降.结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力.     

The midkine family in cancer, inflammation and neural development

The midkine (MK) family consists of only two members, namely MK and pleiotrophin (PTN). MK and PTN share receptors and biophysical characteristics, such as a heparin-binding property. MK and PTN exert several biological activities, which include fibrinolytic, anti-apoptotic, mitogenic, transforming, angiogenic, and chemotactic ones. These activities suggest that these growth factors are involved in carcinogenesis. Indeed, strong expression of MK and PTN in human carcinomas, and the anti-tumor activity of antisense oligonucleotides for MK and ribozymes for PTN further support their importance in cancer. In addition, MK plays critical roles in the pathogeneses of various disorders involving inflammation such as reperfusion- and cisplatin-induced renal dysfunction and vascular restenosis after angioplasty. MK antisense oligonucleotide ameliorates these disorders. Zebrafish and Xenopus MK can induce neural tissues. MK and PTN are localized in the radial glial processes of the embryonic brain, and are induced in reactive astrocytes by ischemic insults. I summarize here the biological significance of the MK family in cancer, inflammation and neural development.     

细胞因子midkine基因的克隆及其转化甲醇酵母Pichia pastoris

目的 克隆细胞因子midldne（MK）基因，并转化甲醇酵母Pichia pastoris。方法 利用RT—PCR方法从人胃癌MGC803细胞总RNA中扩增MK cDNA，构建分泌表达载体pPic9k—MK，然后转入宿主菌GS115中，提取GS115的基因组DNA，用PCR法扩增鉴定阳性克隆。结果 成功构建了分泌表达载体pPic9k—MK，并转入GS115中，筛选到抗4．0mg／ml G418的重组菌株，鉴定出5个阳性克隆。结论 MK基因可以转入甲醇酵母Pichia pastoris中，为今后在Pichia pastoris中表达有活性的MK蛋白，并进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了实验基础。     

新辅助化疗对宫颈癌组织中MK和MVD表达的影响

目的 观察新辅助化疗(NACT)的临床疗效以及NACT前后宫颈癌组织中中期因子(MK)、微血管密度(MVD)的表达变化.方法 对35例宫颈鳞癌患者用顺铂 平阳霉素行NACT,并采用免疫组化SP法检测癌组织NACT前后MK、CD34的表达.结果 35例宫颈癌患者接受NACT后.临床完全缓解(CR)4例(11.43%),部分缓解(PR)25例(71.43%),总有效率(CRTPR82.86%); NACT后MK表达(31.4%)较NACT前(74.3%)下降(P<0.05);MVD水平在NACT后(16.57 7.60)较NACT前(24.65 9.17)亦有明显下降(P<0.05);临床有效组MK表达在NACT后(31.0%)较NACT前(75.9%)显著下降(P<0.05),而临床无效组MK表达在NACT后(33.3%)较NACT前(66.7%)表达差异无统计学意义(P>0.05);临床有效组MVD计数在NACT后(16.27 7.49)较NACT前(24.17士8.55)显著下降(P<0.05),临床无效组MVD计数在NACT后(21.02士8.70)较NACT前(26.98 12.42)亦有明显下降(P<0.05).结论 NACT对宫颈癌有效;NACT后MK、MVD表达下降.NACT发挥效应的机制之一可能为抑制肿瘤血管生成.检测MK在NACT前后的表达变化可协助预测NACT的疗效.     

中期因子在宫颈病变中的表达及与血清中期因子变化的关系

目的探讨中期因子（midkine,MK）与宫颈癌患者临床病理特征之间的关系,并为血清中期因子（sMK）作为宫颈癌早期诊断及病情监测的指标提供理论依据。方法对慢性宫颈炎组织、宫颈上皮内瘤变（CIN）组织、宫颈癌组织标本各20例进行免疫组化染色,分析各组织中MK的表达情况及与宫颈癌患者临床病理特征的关系。用酶联免疫吸附试验检测患者外周血sMK浓度,分析sMK浓度与宫颈癌患者临床病理特征的关系。结果MK在慢性宫颈炎组织中不表达,在CIN III级、宫颈癌组织中阳性表达率较高,且宫颈癌组织中MK表达水平与患者年龄、淋巴结转移无关,与临床分期、组织学分级、肿瘤直径、腺体浸润有关（P〈0．05或P〈0．01）。宫颈癌患者外周血sMK浓度明显高于慢性宫颈炎及CIN患者。宫颈癌患者sMK浓度与患者年龄、淋巴结转移无关（P〉0．05）,与临床分期、组织学分级、肿瘤直径、腺体浸润有关（P〈0．05或P〈0．01）。宫颈癌患者sMK浓度与组织中MK表达水平呈正相关。结论MK可能在宫颈癌的发生过程中起到重要作用;sMK能够可靠地反映组织中MK蛋白表达情况,可作为一种用于宫颈癌诊断、病情监测的新的肿瘤标志物。     

胰岛素样生长因子家族在胃癌中的研究进展

胰岛素样生长因子(IGF)通过其受体和结合蛋白的调节,促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。越来越多的研究发现,IGF家族参与包括胃癌在内的许多相关肿瘤发生、发展及预后。近年来对胃癌患者血液中IGF家族进行了大量基础和临床研究的结果显示,IGF家族可能在胃癌的发生、发展及预后中起重要作用。如抑制其受体信号通路可为胃癌的综合治疗提供新靶点;IGF受体的单克隆抗体可作为胃癌的辅助治疗等。现就IGF家族在胃癌领域的最新研究进展进行综述。     

Inhibition of the proliferation of human gastric cancer cells SGC-7901 in vitro and in vivo using Bcl-2 siRNA

Background Bcl-2, the anti-apoptotic protein is overexpressed in the majority of gastric cancers and associated with its pathogenesis. To better understanding of the role of Bcl-2, RNA interference （RNAi） was used to inhibit Bcl-2 expression in the human gastric cancer cells in vitro and in vivo. Methods Bcl-2 small interfering RNA （siRNA） was transfected into human gastric cancer cells $GC-7901, and Bcl-2 expression was monitored by real-time polymerase chain reaction （PCR） and Western blot. Cell proliferation, apoptosis, and telomerase activity were examined by MTT, flow cytometry, and TRAP assay, respectively. Gastric cancer cells treated with 100 nmol/L Bcl-2 siRNA were subcutaneously transplanted into nude mice and tumor growth was assessed. Results Bcl-2 siRNA significantly inhibited the expression of Bcl-2 in human gastric cancer cells at both mRNA and protein levels in a time- and dose-dependent manner. Bcl-2 siRNA also decreased telomerase activity （by 78.76%） and increased the rate of apoptosis （by 37.47%）. SGC-7901 cell growth was also significantly suppressed in vivo and in vitro. Conclusions Bcl-2 expression knockdown suppressed the growth of gastric cancer cells. Thus, Bcl-2 may play a very important role in carcinogenesis of gastric cancer and its knockdown may offer a new potential gene therapy approach for human gastric cancer in future.     

绒毛膜促性腺激素对人胃腺癌细胞增殖的影响

目的 探讨人绒毛膜促性腺激素(hCG)对人胃腺癌SGC-7901细胞增殖生长的影响。方法用MTT法检测细胞生长率及存活率。结果 hCG在10^11～10^-8mol／L范围内，对胃腺癌细胞的生长具有促进作用，但无明显的时间依较关系。结论 hCG对胃腺癌细胞的生长具有一定的促进作用，提示hCG在胃腺癌的发生与发展中起了一定的作用。