黄连碱对软骨细胞增殖及转化生长因子β1 mRNA基因的表达的影响

目的：观察黄连碱对Sprague Dawley大鼠关节软骨细胞体外增殖及转化生长因子β1mRNA基因表达的影响,探讨其治疗骨关节炎的作用及可能机制。方法取SD大鼠关节软骨,剪碎后,采用酶消化法原代分离培养软骨细胞,取处于对数生长期第3代细胞随机分组,实验组加入含10μm黄连碱的培养基,对照组仅加入普通培养基。培养48小时后在倒置显微镜下观察软骨细胞形态,MTT法检测黄连碱在1,3,5,7天对软骨细胞增殖影响,实时荧光定量PCR分别检测培养7天后实验组和对照组细胞转化生长因子β1mRNA表达。结果培养48小时后实验组软骨细胞生长密集程度明显优于对照组;MTT检测也显示实验组细胞增殖情况优于对照组;培养7天后实验组转化生长因子β1mRNA表达显著高于对照组。结论黄连碱能促大鼠软骨细胞增殖,并提高转化生长因子β1mRNA的表达,提示这可能是其治疗骨关节炎的可能机制之一。     

槲皮素对骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响

目的:通过观察槲皮素对骨髓间充质干细胞增殖和骨向分化的影响,探讨其调控骨髓间充质干细胞及其防治骨质疏松症的作用机制。方法:运用全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,并通过形态学、流式细胞仪检测表面标志物及分化能力鉴定所取得的细胞;运用MTT法检测不同浓度槲皮素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖的影响,以确定其最佳促增殖剂量。实验分为空白组、槲皮素组、经典诱导组(地塞米松+β-甘油磷酸钠+维生素C),检测诱导分化过程中ALP活性和钙化结节数目,RT-PCR的方法检测BMP-2 mRNA的变化。结果:经MTT法检测,浓度为5μmol/L和10μmol/L的槲皮素组OD值较空白组明显升高;与空白组相比,槲皮素组与经典诱导组ALP活性及矿化结节均显著增加,并均可上调MSCs骨向分化过程中BMP-2 mRNA的表达。结论:槲皮素能促进骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化,可能是其促进骨折愈合、防治骨质疏松症的细胞学机制之一。     

复叶耳蕨总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化的影响

目的研究复叶耳蕨总黄酮对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨分化的影响。方法采用全骨髓差速贴壁法体外分离、纯化和培养大鼠骨髓间充质干细胞;取P3代细胞,分实验组和对照组,用流式细胞仪测定细胞表面标志物鉴定细胞,采用MTT法检测细胞生长曲线。显微镜下观察两组的细胞形态和组织化学染色的钙化结节;速率法测定碱性磷酸酶(ALP)活性和RT-PCR检测骨髓间充质干细胞诱导分化过程中骨桥蛋白和I型胶原的mRNA表达来鉴定成骨作用。结果体外培养的细胞表达表面标志;复叶耳蕨总黄酮对骨髓间充质干细胞内ALP活性增高并形成明显钙结节;PCR结果显示复叶耳蕨总黄酮上调骨桥蛋白和I型胶原的mRNA表达。结论 20μg/mL复叶耳蕨总黄酮可促进大鼠骨髓间充质干细胞定向分化为成骨样细胞。     

牛膝提取物对大鼠骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化的影响

目的研究牛膝提取物对大鼠骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化的影响。方法分离培养原代大鼠骨髓间充质干细胞后,流式细胞仪检测细胞表面标记物,分成对照组和牛膝提取物组(10、30、50μg/mL)。培养14 d后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,阿利新蓝法检测葡糖胺聚糖含有量,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)、免疫印迹(Western blot)检测细胞中Sox-9、Ⅱ型胶原(ColⅡ)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)水平。SIRT1抑制剂(尼克酰胺)处理细胞,MTT法检测细胞增殖,RT-PCR和免疫蛋白印迹检测SIRT1、Sox-9水平。结果骨髓间充质干细胞表面CD90和CD44呈阳性表达,而CD45和CD34呈阴性表达。与对照组比较,牛膝提取物可显著促进骨髓间充质干细胞细胞增殖,抑制细胞凋亡,上调细胞葡糖胺聚糖含有量及Sox-9、ColⅡ、Aggrecan水平,以上差异均有统计学意义(P 0. 05),并呈剂量依赖效应。另外,尼克酰胺可抑制牛膝提取物诱导的骨髓间充质干细胞细胞增殖和Sox-9表达升高。结论牛膝提取物可通过上调SIRT1水平来促进骨髓间充质干细胞向髓核样细胞增殖与分化。     

干扰环状核糖核酸zeste基因增强子同源物2促进骨髓间充质干细胞成骨分化的机制研究

目的:探究环状核糖核酸(RNA) zeste基因增强子同源物2(circEZH2)调控骨形态发生蛋白2(BMP2)对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响。方法:使用生长培养基培养骨髓间充质干细胞,将骨髓间充质干细胞随机分为对照组、si-NC组、si-circEZH2组、si-circEZH2+si-NC组和si-circEZH2+si-BMP2组;qRT-PCR法检测各组骨髓间充质干细胞中circEZH2及BMP2 mRNA表达水平,CCK-8法检测各组骨髓间充质干细胞增殖能力,流式细胞仪检测各组骨髓间充质干细胞凋亡情况,碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测ALP活性,蛋白免疫印迹法(Western Blotting)检测各组骨髓间充质干细胞中BMP2、成骨相关蛋白骨钙素(OC)、RUNT相关转录因子2(Runx2)和骨桥蛋白(OPN)表达水平。结果:相较于对照组和si-NC组,si-circEZH2组骨髓间充质干细胞中circEZH2的表达水平、细胞增殖抑制率、凋亡率显著降低(P<0.05),BMP2 mRNA表达水平、ALP活性、BMP2、OC、Runx2及OPN表...     

丹参多酚酸盐及三七总苷对EA-HY926细胞体外血管新生作用的比较研究（英文）

目的：研究丹参多酚酸盐及三七总苷对EA-hy926细胞在细胞增殖、血管新生及促进血管内皮生长因子（VEGF）表达方面的不同作用。方法：通过体外培养EA-hy926细胞,并给予不同浓度的丹参多酚酸盐和三七总苷（0.4,0.8和1.2mg·L–1）干预,运用CCK-8测定细胞增殖能力,培养12h后观察血管新生情况。培养24h后,通过real-timePCR方法观察VEGF的表达情况。结果：在浓度为0.4,0.8mg·L–1时,与空白对照比较,丹参多酚酸盐和三七总苷均能有效促进血管新生及VEGF的表达（（P〈0.05））,而两者比较无明显差异。在浓度为1.2mg·L–1时,与三七总苷相比,丹参多酚酸盐组VEGF的表达明显增强（P〈0.05）。结论：丹参多酚酸盐和三七总苷均能有效促进EA-hy926细胞增殖、血管新生及VEGF的表达,而实验结果提示丹参多酚酸盐具有更强的促血管新生能力。     

丹参多酚酸盐对人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号转导通路的影响

目的:探讨丹参多酚酸盐对血管紧张素Ⅱ诱导的人肾小球系膜细胞TGF-β/Smad信号传导通路的影响。方法:培养人肾小球系膜细胞,分为正常组;模型组;丹参多酚酸盐高剂量(200μmol/L);中剂量(20μmol/L);低剂量(2μmol/L)组。经预实验筛选结果,采用10-8mol/L血管紧张素Ⅱ诱导模型组及丹参多酚酸盐各组人肾小球系膜细胞增殖,采用MTT法检测各组及各时间点的细胞活性。收集培养48 h时间点各组细胞,采用Western blot法及Real-timePCR法分别检测Smad2、Smad3蛋白及TGF-β及Smad7 mRNA的表达情况。结果:模型组与正常组比较,在培养24 h,48 h,72 h内系膜细胞的增值活性增强、丹参多酚酸盐各组能够抑制其增殖,于48 h达到稳定;模型组与正常组比较,系膜细胞中Smad2、Smad3蛋白及TGF-βmRNA的表达显著上升(P0.05),而Smad7mRNA的表达则明显降低(P0.05);丹参多酚酸盐各组与模型组比较,均能逆转上述变化(P0.05)。结论:血管紧张素Ⅱ能够有效刺激肾小球系膜细胞增殖,丹参多酚酸盐可能通过多靶点抑制TGF-β/Smad信号通路的传导,从而抑制延缓肾小球硬化及纤维化。     

补骨脂甲素介导cAMP/PKA/CREB信号通路调控促进骨髓MSC成骨分化作用研究

目的:观察补骨脂甲素不同剂量单体对大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达的影响,探讨补肾中药防治骨质疏松症的分子生物学机制。方法:以成骨转化诱导液组作为阳性对照组,小牛血清组为空白对照组,用高、中、低3种剂量补骨脂甲素对大鼠骨髓间充质干细胞分别干预6、9、12 d。ELISA法检测第6、9、12天,大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白含量;ELISA法及qRT-PCR法检测第9天大鼠骨髓间充质干细胞PKA、CREB mRNA及蛋白表达。结果:各用药组均能提高大鼠骨髓间充质干细胞ALP蛋白表达,第9天达到峰值。补骨脂甲素能够上调PKA、CREB mRNA及蛋白表达,补骨脂甲素高剂量组效果最显著。结论:补骨脂甲素能够促进大鼠骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,其作用机制可能与cAMP/PKA/CREB信号通路的活化有关。     

不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的观察不同浓度川芎嗪对体外培养骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法取SD大鼠,无菌条件下收集股骨、胫骨骨髓内的细胞进行体外培养,选第3代细胞用于实验。川芎嗪培养液选用9个不同的浓度进行干预实验。骨髓间充质干细胞分别在不同浓度的川芎嗪培养液中培养24h后,倒置显微镜下观察细胞形态,采用MTT比色法检测骨髓间充质干细胞增殖的情况。结果在低浓度范围内,川芎嗪对细胞的增殖作用具有浓度依赖性,浓度越高越明显,但到达一定浓度后,随着川芎嗪浓度进一步增加,对细胞的增殖反而有抑制作用。0.08mmol/L的川芎嗪对骨髓间充质干细胞的增殖作用最强。结论川芎嗪对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖作用与剂量有关。     

骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足过程中血管内皮生长因子的表达

目的探讨骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病足过程中血管内皮生长因子的表达情况。方法选取健康SD大鼠60只作为研究对象,随机分为三组,每组20只,将其设为骨髓间质干细胞移植治疗组、糖尿病对照组、普通对照组,并分别造模,两个对照组大鼠在造模成功后注射普通培养基,移植治疗组大鼠则注射含同种异体骨髓间充质干细胞的等体积培养基,治疗后的不同时间,观察大鼠的溃疡愈合情况,并比较其外周血血管内皮生长因子表选水平。结果治疗1d后,三组大鼠的溃疡面积和外周血血管内皮生长因子表达水平比较并无统计学差异(P0.05),治疗4d和8d后,干细胞移植治疗组大鼠的溃疡面积显著小于糖尿病对照组,但大于普通对照组,VEGF表达水平表达情况表现为:普通对照组高于干细胞移植治疗组,并均高于糖尿病对照组的情况,每两组各项指标的比较均有统计学差异(P0.05),但干细胞移植治疗组第4d和第8d的血管内皮生长因子表达水平未见明显提高。结论骨髓间充质干细胞移植可以促进血管内皮生长因子的表达水平,有利于糖尿病足溃疡的愈合。     

益气活血方含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的：探讨益气与活血中药含药血清对骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs ）增殖能力的影响。方法全细胞贴壁培养法获取、纯化BMSCs,体外培养,建立大鼠骨髓间充质干细胞的培养体系,采集空白对照大鼠、益气药、活血药、益气活血中药灌胃大鼠含药血清,用10%浓度以上不同含药血清培养第三代BMSCs,置于37℃,5% CO2培养箱中孵育。用流式细胞术鉴定BMSCs。噻唑基四唑比色法（ methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）测细胞活性,绘制生长曲线,观察10%益气、活血、益气活血中药含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响。结果采用全骨髓贴壁法获取的BMSCs,经流式细胞术检测,CD44、CD106呈阳性表达,基本不表达CD45、CD34;MTT法检测结果显示,培养第2、4、5天细胞快速增长,均较前一天增长明显（ P 〈0．05）,第6天时活血方血清组与益气活血方血清组细胞增长已呈下降趋势,而其它三组在第6天细胞增长达最大,与前一天比较仍有差异（ P〈0．05）,到第7天呈下降趋势。 BMSCs去除基线增殖率组间比较,培养第2天时,各组间比较虽无差异,但活血方血清组达最大（71．39±177;4．98%）;第4、6天时,益气活血方组达最大（66．40±177;1．47%）,与其它三组比较P〈0．01,活血方血清组次之;培养第6天时,益气方血清组较其它三组大,益气活血方血清组次之,活血方血清组最低。结论全细胞贴壁培养的大鼠骨髓间充质干细胞在细胞形态与表形表达上均具备BMSCs特征;益气活血中药含药血清对培养BMSCs增殖影响最大,活血方含药血清对细胞增殖影响出现最早、益气方含药血清对细胞增殖影响时间最长。     

骨髓间充质干细胞与血管内皮生长因子联合移植对大鼠创伤性脑损伤修复的研究

目的探讨联合移植骨髓间充质干细胞（BMSCs）和血管内皮生长因子（VEGF）对创伤性脑损伤（TBI）大鼠脑组织中脑源性神经营养因子（BDNF）表达的影响。方法 SD大鼠2只,取股骨骨髓体外培养BMSCs。SD大鼠40只,随机分为单独移植BMSCs组、单独应用VEGF组、联合移植BMSCs与VEGF组及对照组,每组10只。采用改良的Feeny自由落体撞击方法建造中度创伤性脑损伤模型。造模后1周,在立体定向仪下分别将等量BMSCs、VEGF、BMSCs加VEGF及PBS液注入相应大鼠的损伤脑组织周边。养育2周后处死取脑。采用HE及尼氏染色法观察脑组织病理学变化;采用免疫组化染色,应用Image pro-Plus6.0软件测量半暗带及健侧对称部位BDNF阳性表达区域的总和累积光密度,应用SPSS 11.3软件进行统计学分析。结果除BMSCs组外,其余各组对称部位BDNF含量均较半暗带高（P〈0.05）;联合移植组半暗带的BDNF含量明显高于对照组（P〈0.05）。结论联合移植BMSCs与VEGF可有效抑制TBI大鼠半暗带中BDNF含量的降低,有利于神经功能的恢复。     

同种异体骨髓间充质干细胞局部多点注射联合特有中药膏剂外敷治疗糖尿病溃疡创面实验研究

目的:探讨同种异体骨髓间充质干细胞局部多点注射联合特有中药膏剂外敷治疗兔糖尿病慢性溃疡创面治疗效果及结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)局部表达。方法:静脉注射四氧嘧啶(ALX)制备糖尿病兔模型,取建模成功的40只糖尿病兔,喂养3周后将各组动物后肢2 cm×3 cm全厚皮切除形成创面,随机数字表法分4组:A组:同种异体骨髓间充质干细胞多点联合特有中药膏剂治疗组(中药+干细胞组),B组:特有中药膏剂治疗组(中药组),C组:单独应用同种异体骨髓间充质干细胞治疗组(干细胞组),D组:糖尿病对照组(对照组)。各组治疗后于第7、14、21天分别观察创面面积;第21天取创面组织制备组织切片行Masson染色观察;应用Real Time PCR法检测创面组织中CTGF目的基因相对表达量。结果与结论:各治疗组创面愈合率明显高于对照组(P<0.01),A组和B组目的基因mRNA表达都上调,说明A组和B组治疗效果好,明显优于C,D组。     

缺血再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子VEGF mRNA的变化及通心络对其的影响

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）mRNA在大鼠缺血/再灌注损伤（MCAO）脑组织的表达情况及通心络对其的影响。方法采用MCAO模型并予通心络灌胃,应用反转录集合酶链式反应（RT-PCR）检测缺血再灌注损伤后5d、7d、14d、21d、30d神经干细胞增殖分化相关细胞因子VEGF mRNA的变化。结果缺血再灌注模型组VEGF mRNA在不同时间段均有表达,VEGF mRNA在造模后第3天开始表达增强,第5天表达最高;给予通心络处理后第3天缺血侧VEGF mRNA开始表达增强,5d、7d、14d、21d、30d时PCR表达灰度值均高于缺血对照组。结论缺血/再灌注损伤大鼠脑组织细胞因子VEGF mRNA表达增强,通心络胶囊可强化此反应,进而可能诱导神经干细胞增殖。     

温阳补肾药对骨髓间充质干细胞促增殖的实验研究

目的：观察、比较巴戟天、鹿角胶、淫羊藿、骨碎补对体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）促增殖的影响,探讨其作用机理。方法：建立SD大鼠BMSCs体外培养体系,倒置显微镜、苏木精-伊红染色进行形态学观察;流式细胞仪（FCM）进行BMSCs细胞周期分析;MTT法检测BMSCs生长曲线;4味温阳补肾药含药血清配制,确定其最佳药物浓度和最佳血清浓度对BMSCs促增殖的影响。结果：体外培养大鼠BMSCs经倒置显微镜、苏木精-伊红染色的形态学观察均符合BMSCs的形态及生长特点。高、中、低剂量的四味中药含药血清对F3BMSCs 24、48、72h的增殖效应显示,以中剂量组20%含药血清对F3BMSCs 48h后促增殖最明显,其组间比较结果为淫羊藿〉骨碎补〉鹿角胶〉巴戟天。结论：巴戟天、鹿角胶、淫羊藿、骨碎补四味温阳补肾药均有促BMSCs增殖作用。淫羊藿促BMSCs增殖效果最佳,其组间比较结果为淫羊藿〉骨碎补〉鹿角胶〉巴戟天。     

人参皂苷Rg1联合骨髓间充质干细胞移植对痴呆大鼠学习记忆能力的影响

目的 探讨人参皂苷Rg1对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell, BMSCs) 移植后阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease, AD)大鼠学习记忆能力的影响及机制。     

丹参联合骨髓间充质干细胞静脉移植对兔心肌梗死区血管再生影响的实验研究

目的：探讨骨髓间充质干细胞静脉移植对兔急性心肌梗死（AMI）梗死区及梗死周围区血管新生的影响及中药丹参注射液对其的干预作用。方法：用开胸结扎冠状动脉左室支的方法建立急性心肌梗死模型,将已建立心肌梗死模型的日本大耳白兔随机分为3组,模型对照组、静脉移植骨髓间充质干细胞组、静脉移植骨髓间充值干细胞联合丹参组。术后5周取材,观察梗死区内CD31（血小板/内皮细胞黏附分子）和VEGF（血管内皮生长因子）蛋白的表达。结果：1免疫组化CD31表达,静脉注射干细胞组和干细胞联合静脉注射丹参组高于模型组（P0.05）。3血清中VEGF蛋白含量,各组间无统计学差异（P〉0.05）。结论：静脉注射骨髓间充质干细胞可诱导梗死区血管新生,其机制并非通过VEGF的表达来调节的,可能是通过其他途径调节的,中药丹参注射液对干细胞促进血管新生无明显促进作用。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养鉴定及复方扶芳藤合剂含药血清对细胞增殖的影响

目的:建立SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的分离培养方法,观察不同浓度的复方扶芳藤合剂大鼠含药血清对大鼠BMSCs增殖的影响。方法:通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化BMSCs,对其进行细胞形态学观察,将BMSCs进行成骨、成脂定向诱导分化,采用流式细胞仪检测其表面标志物,分析其细胞周期,进行BMSCs鉴定;采用不同浓度(20%、10%和5%)的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续7 d对大鼠BM SCs进行干预,以CCK-8法检测其吸光度值,对比各组细胞生长情况。结果:BMSCs具有典型的成纤维样细胞形态,集落生长呈漩涡状。BMSCs成脂、成骨诱导后,油红O染色和茜素红染色均呈阳性。第3代BMSCs表型CD29、CD44、CD34、CD44表达分别为99.645%、99.677%、0.016%、0.133%;不同浓度的复方扶芳藤合剂含药血清和空白血清连续干预7 d后,CCK-8法检测显示:20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清组,其1~7 d的吸光度均值均高于20%浓度的空白血清组(P<0.05);10%的含药血清组的吸光度均值在3~7 d,高于10%的空白血清组(P<0.05);5%的含药血清组与5%的空白血清组比较无明显差异(P>0.05)。结论:全骨髓贴壁法分离、培养BM SCs,操作简单,方法稳定,可大量扩增BMSCs。扩增后的BMSCs具有间充质干细胞的生物学特性,具有多向分化潜能。复方扶芳藤合剂含药血清干预后的BMSCs增殖能力增强,其中20%浓度的复方扶芳藤合剂含药血清在本实验中为最佳干预浓度。     

羌活鱼水提物在大鼠骨髓间充质细胞成骨中的作用

目的：探讨羌活鱼水提物含药血清对大鼠骨髓间充质细胞（BMSCs）成骨的作用。方法：取大鼠第三代BMSCs分为4组,待BMSCs接近80%融合时,分别应用生理盐水＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（生理盐水对照组）、高剂量羌活鱼水提物＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（羌活鱼水提物高剂量组）、中剂量羌活鱼水提物＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（羌活鱼水提物中剂量组）、低剂量羌活鱼水提物＋DMEM/F12培养液＋成骨分化诱导液＋5%FBS（羌活鱼水提物低剂量组）培养基培养。应用碱性磷酸酶（ALP）活性、钙盐沉积量及钙化结节数检测成骨分化程度。采用SPSS 16.0软件包对数据进行单因素方差分析。结果：羌活鱼水提物含药血清组较生理盐水对照组表现出高ALP活性、高钙盐沉积量、高骨钙素分泌量。结论：羌活鱼水提物含药血清可提高成骨性诱导液诱导BMSCs成骨分化的能力,表现出高ALP活性及基质矿化能力,在BMSCs成骨分化中可起到重要作用。