三七总皂苷对低氧大鼠肺动脉压和肺组织p38 MAPK表达的影响

目的:探讨三七总皂苷(PNS)对低氧大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)表达的影响,及预防低氧性肺动脉高压(HPH)的作用和机制。方法:将30只SD大鼠随机分为3组:正常对照组、低氧组和低氧+PNS组。观察各组大鼠平均肺动脉压(mPAP)、平均颈动脉压(mCAP)和右心室/(左心室+室间隔重量)比[RV/(LV+S)],免疫组化法和RT-PCR法分别检测肺小血管壁磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白和肺组织中mRNA的含量。结果:与对照组相比,低氧组大鼠mPAP、RV/(LV+S)明显升高,肺小动脉p-p38 MAPK及肺组织p38 MAPK mRNA含量显著升高(P0.05)。低氧+PNS组mPAP、RV/(LV+S)、肺小动脉p-p38 MAPK及肺组织p38 MAPK mRNA含量明显低于低氧组(P0.05)。结论:PNS具有显著预防HPH的作用,其机制可能与其降低p38 MAPK mRNA的表达有关。     

MAPK通路抑制剂对三七皂苷单体R1减轻大鼠低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响

 目的：探讨三七皂苷单体R1对低氧高二氧化碳性肺血管收缩(HHPV)的影响及其与MAPK信号通路的关系。方法：采用大鼠离体肺动脉环灌流模型,随机将其分为：常氧组（N组）;低氧高二氧化碳组（H组）;低氧高二氧化碳+DMSO组（HD组）;低氧高二氧化碳+R1组,又分为低浓度组（RL组）、中浓度组（RM组）和高浓度组（RH组）;低氧高二氧化碳+SB203580组（S组）;低氧高二氧化碳+U0126组（U组）;低氧高二氧化碳+R1+SB203580组（RS组）;低氧高二氧化碳+R1+U0126组（RU组）。观察二级肺动脉环在常氧及急性低氧高二氧化碳条件下的张力变化。在急性低氧高二氧化碳条件下,观察不同浓度R1孵育及最佳浓度R1分别与SB203580、U0126联合孵育对HHPV三期变化的影响,按照低氧高二氧化碳反应性测定方法测定血管张力变化值。结果：在急性低氧高二氧化碳条件下：（1）二级肺动脉呈现双相性收缩变化,与N组相比显著差异（P＜005或P＜001）;(2)HD组和RL组能明显缓解HHPV的I期快速收缩,逆转II期持续收缩,RM组作用不明显,RH组增强HHPV的I期快速收缩和II期持续收缩。与HD组比较,RL和RH组有显著差异（P＜005或P＜001）;(3)RS组和RU组收缩峰值较HD组均明显下降,II期持续收缩逆转为舒张状态。与RL组相比,RS组和RU组HHPV显著缓解(P＜005或P＜001)。与S组和U组相比,RS组和RU组HHPV显著缓解(P＜005或P＜001)。结论：低浓度（8 mg/L）三七皂苷单体R1可减轻大鼠急性HHPV,其机制可能与MAPK（p38 MAPK和ERK1/2）信号通路的参与有关。     

三七总皂苷通过Notch3/Hes-1/p27Kip1信号通路抑制低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构

目的：探讨Notch3/Hes-1/p27^Kip1信号通路与低氧性肺动脉高压大鼠肺血管重构的关系及三七总皂苷(PNS)的干预作用。方法：将SPF级雄性SD大鼠采用随机编号分为3组：正常组(C组),低氧组(H组)和PNS组(P组),检测肺动脉压,称量右心室重量,HE染色和Masson染色观察肺血管重构情况,RT-qPCR检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1和p27^Kip1的mRNA表达水平,Western blot检测大鼠肺组织中Notch3、Hes-1、p27^Kip1,增殖细胞核抗原(PCNA)和caspase-3的蛋白水平。结果：与C组相比,H组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数明显增加;肺血管重构现象明显;Notch3、Hes-1和PCNA的蛋白水平增加,p27^Kip1和caspase-3的蛋白水平降低;Notch3和Hes-1的mRNA表达增加,p27^Kip1的mRNA表达降低(P<0.05)。经PNS干预后,与H组相比,P组大鼠的肺动脉压和右心室肥厚指数降低;肺血...     

ERK通路和三七总皂苷干预在低氧高二氧化碳性肺动脉高压中的作用

目的: 研究 ERK 信号通路在大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压发生发展中的动态变化;探讨三七总皂苷(PNS)防治低氧高二氧化碳性肺动脉高压的机制。方法: 复制慢性低氧高二氧化碳性肺动脉高压大鼠模型;分为正常(N)组,低氧高二氧化碳性肺动脉高压3 d(H_3d)、1周(H_1w)、2周(H_2w)、4周(H_4w)组及PNS治疗(H_p)组,H_p组腹腔注射三七总皂甙注射液,余组注射等量生理盐水;光镜下比较各组大鼠肺细小动脉结构;Western 印迹法和免疫组织化学技术检测各组肺组织及肺血管 p-ERK、ERK 蛋白的表达。结果: (1) H_1w、H_2w、H_4w和H_p组的肺细小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA) 均高于N组(均P<0.05), 但 H_3d 组较N 组增加不明显(P>0.05),H_p组 WA/TA 明显低于 H_4w 组(P<0.05)。 (2) 肺组织 p-ERK蛋白在 N 组表达不明显,在 H_3d 组表达即开始上升,在 H_1w、H_2w、H_4w 组均高水平表达 ( P<0.05)。 (3) 肺小动脉壁 p-ERK 蛋白在N组表达呈弱阳性或阴性,H_3d 组表达上升,在 H_1w、H_2w、H_4w 组表达水平逐渐升高( P<0.05)。(4) H_p组肺组织 p-ERK 蛋白、肺小动脉壁 p-ERK 蛋白表达较低氧高二氧化碳组降低(P＜0.05)。结论: ERK 信号通路可能介导了大鼠低氧高二氧化碳性肺动脉高压的形成。PNS 可能通过抑制p-ERK表达减轻这一过程。     

MAPK 通路抑制剂对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响

目的： 观察肺主动脉环、二级肺动脉环在急性低氧高二氧化碳介质中张力的变化；探讨 MAPK 信号通路抑制剂 U0126、SB203580 对低氧高二氧化碳性肺血管收缩的影响。方法: 制备离体 SD 大鼠肺主动脉环、二级肺动脉环。分别观察肺主动脉环、二级肺动脉环在常氧及急性低氧高二氧化碳介质中的张力变化；在急性低氧高二氧化碳条件下分别用 U0126、SB203580 孵育二级肺动脉，观察各自对低氧高二氧化碳性肺动脉收缩的影响。结果: 在常氧条件下,肺主动脉、二级肺动脉张力均无明显变化。急性低氧高二氧化碳条件下二级肺动脉发生双向性收缩反应，肺主动脉只在低氧高二氧化碳早期出现较明显的收缩峰，后期则变化不明显。二级肺动脉分别经ERK1/2上游激酶抑制剂 U0126、p38 MAPK 通路抑制剂 SB203580 孵育后，Ⅱ期持续收缩幅度明显下降（P<0.05)，Ⅰ期快速收缩峰、Ⅰ期舒张均没有明显变化。结论: 在离体条件下，急性低氧高二氧化碳（PO₂ = 30-35 mmHg，PCO₂=55-60 mmHg)可使肺主动脉出现早期快速收缩，并可使二级肺动脉环发生双向性收缩反应；急性低氧高二氧化碳条件下，U0126、SB203580 均能减弱二级肺动脉环的Ⅱ期持续收缩反应。这为临床治疗缺氧和高碳酸血症引起的肺血管收缩及肺动脉高压提供了理论依据。     

辛伐他汀通过抑制p38 MAPK活化降低肝硬化门静脉高压大鼠门静脉压力

 目的:探讨p38 MAPK信号通路在辛伐他汀降低肝硬化门静脉高压症大鼠门静脉压力（PP）中的作用。方法:采用四氯化碳复合因素法构建大鼠肝硬化门静脉高压症模型,成模后将存活大鼠随机分为模型组（n=10）、辛伐他汀治疗组（n=11）和p38 MAPK信号通路抑制剂SB203580处理组（n=10）,后2组分别给予辛伐他汀及SB203580干预处理;另设正常对照组（n=8）。处理结束后检测大鼠PP、肝脏总p38 MAPK蛋白、磷酸化p38 MAPK蛋白、总eNOS蛋白、磷酸化eNOS蛋白表达水平以及肝脏一氧化氮（NO）含量的变化。结果:（1）模型组大鼠PP明显高于正常对照组;辛伐他汀治疗组及SB203580处理组PP均明显低于模型组（P＜0.01）,辛伐他汀治疗组PP明显低于SB203580处理组（P＜0.01）。（2）与正常大鼠相比,模型组大鼠肝脏总p38 MAPK蛋白及总eNOS蛋白表达水平无明显变化（P＞0.05）,而磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别增高与降低（P＜0.01）;辛伐他汀治疗组大鼠肝脏磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别降低与增高（P＜0.01）;SB203580处理组大鼠肝脏磷酸化p38 MAPK蛋白及磷酸化eNOS蛋白表达水平分别降低与增高（P＜0.01）,但磷酸化eNOS蛋白表达水平增高的程度低于辛伐他汀治疗组（P＜0.01）。(3)辛伐他汀治疗组肝脏NO含量［（15.73±1.59） μmol/(g protein)］及SB203580处理组肝脏NO含量［（13.98±1.27) μmol/(g protein)］明显高于模型组［（9.81±1.12） μmol/（g protein）］（P＜0.01）,辛伐他汀治疗组NO含量明显高于SB203580处理组（P＜0.01）。结论: 辛伐他汀降低肝硬化门静脉高压症大鼠门静脉压力可能与其抑制p38 MAPK信号通路的活化有关。     

丙酮酸通过抑制p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化减轻低氧对PC12细胞的损伤北大核心CSCD

目的观察丙酮酸对低氧诱导神经细胞损伤的保护作用及机制。方法采用丙酮酸处理PC12细胞,10 m L/L O2的低氧环境暴露12、24、48 h。MTT法观察细胞增殖情况,检测胱天蛋白酶3(caspase-3)活性观察细胞凋亡情况,ELISA检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,Western blot法检测p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化的p38MAPK(p-p38MAPK)蛋白水平。结果低氧暴露24、48 h,抑制PC12细胞增殖,caspase-3活性增强,IL-1β、IL-6、TNF-α和p-p38MAPK水平增高;丙酮酸处理可显著增加PC12细胞增殖,减少细胞凋亡,降低IL-1β、IL-6、TNF-α水平,抑制p38MAPK的磷酸化水平。结论丙酮酸通过抑制p38MAPK的磷酸化而抑制低氧暴露引起PC12细胞炎症因子的表达,对低氧暴露导致的神经元损伤起保护作用。     

TGF-β1 作用后老龄大鼠心肌成纤维细胞p38 MAPK通路和JNK通路的变化

目的:探讨转化生长因子β₁(TGF-β₁)作用后老龄大鼠心肌成纤维细胞丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)通路和c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路的变化。方法:提取乳鼠及老龄大鼠心肌成纤维细胞,以TGF-β₁(5μg/L)刺激,分为乳鼠PBS对照组(N1组)、乳鼠TGF-β₁干预组(N2组)、老龄鼠PBS对照组(A1组)和老龄鼠TGF-β₁干预组(A2组)。采用MTT比色法测定细胞增殖;Western blotting检测各组成纤维细胞总p38、phospho-p38、JNK及phospho-JNK水平。结果:TGF-β₁刺激后老龄鼠心肌成纤维细胞增殖能力低于乳鼠心肌成纤维细胞。加入TGF-β₁后,N2组和A2组的phospho-p38和phospho-JNK分别较N1组和A1组明显升高;N2组与A2组总p38及JNK水平无显著差异;加入TGF-β₁后,与N2组相比,A2组phospho-p38及phospho-JNK表达水平显著减弱(P<0.05)。结论:老龄导致心肌成纤维细胞的TGF-β₁/p38及TGF-β₁/JNK信号通路相关蛋白磷酸化水平受损。     

薯蓣皂苷抑制ERK/p38MAPK信号通路减轻过敏性哮喘小鼠炎症反应

目的探讨薯蓣皂苷对过敏性哮喘小鼠炎症反应的影响及对ERK/p38MAPK信号通路的调控作用。方法 SPF级BALB/c小鼠40只,随机分为对照组、过敏性哮喘模型组、薯蓣皂苷组与地塞米松组,每组10只。利用卵白蛋白致敏联合雾化激发法建立小鼠过敏性哮喘模型。HE染色观察肺组织炎症细胞浸润情况;ELISA检测小鼠血清中OVA特异性免疫球蛋白和小鼠肺泡灌洗液中炎性因子表达;Western blot检测各组小鼠肺组织MAPK信号通路相关蛋白ERK1/2、p38 MAPK、JNK、p-ERK1/2、p-p38 MAPK及p-JNK蛋白表达。结果薯蓣皂苷降低过敏性小鼠肺组织炎性浸润,降低血清中OVA特异性IgE含量(P0.05),降低BALF中炎性因子IL-4、IL-5及IL-13,促进IFN-的表达水平(P0.05),抑制哮喘小鼠肺组织p-ERK1/2,p-p38 MAPK及p-JNK蛋白的表达水平(P0.05)。结论薯蓣皂苷抑制过敏性哮喘小鼠炎症反应,与MAPK信号通路相关。     

PM2.5通过p38 MAPK信号通路影响血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的:研究细颗粒物(PM2.5)对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响,以及p38 MAPK信号通路在其中的作用。方法:体外培养人血管平滑肌细胞,分为对照组和不同浓度PM2.5染毒组,分别用PBS及6.25、12.5和25 mg/L的PM2.5作用于细胞,用CCK-8法和EdU染色法检测细胞增殖能力的变化,用划痕实验和Transwell法检测细胞的迁移能力,然后根据结果选取PM2.5最强作用浓度染毒细胞,在不同时点用Western blot法检测p38MAPK信号分子的磷酸化改变,并观察用特异性抑制剂阻断p38 MAPK信号后细胞在PM2.5刺激下的增殖和迁移情况。结果:与对照组比较,PM2.5染毒可明显促进血管平滑肌细胞的增殖和迁移能力,在设定的浓度范围内以12.5 mg/L浓度组的作用最为明显(P<0.05)。Western blot结果显示,12.5 mg/L PM2.5染毒可上调血管平滑肌细胞p38 MAPK的磷酸化水平;而加入p38 MAPK抑制剂SB203580预处理后,PM2.5诱导的细胞增殖和迁移明显受到抑制,说明p38 MAPK可能介导PM2.5的毒性作用。结论:PM...     

反义p38 MAPK寡核苷酸对AT1R介导的血管收缩的影响及其机制

目的研究反义p38 MAPK寡核苷酸在血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1R）介导的血管平滑肌收缩反应中的作用及其机制。方法采用反义寡核苷酸（ASODN）基因封闭技术来特异性调控p38 MAPK的表达,观察p38 MAPK在AT1R介导的大鼠主动脉血管平滑肌收缩中的作用及其与血管平滑肌肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的关系。结果 AngⅡ诱导大鼠主动脉产生浓度依赖性的收缩,AT1R拮抗剂losartan和p38 MAPK-ASODN处理均可拮抗AngⅡ诱导的血管收缩反应。同时,AngⅡ处理可明显升高血管MLCK的活性,AT1R拮抗剂和p38 MAPK-ASODN也明显抑制了AngⅡ的这一作用。结论 p38 MAPK参与了AT1R介导的血管收缩反应的调节,其机制与MLCK调节途径有关。     

羟胺对慢性低氧高二氧化碳大鼠肺动脉高压的影响

目的: 探讨羟胺(HA)对慢性低氧(O₂)高二氧化碳(CO₂)大鼠肺动脉压的影响。方法: 24只清洁级雄性SD大鼠随机分为3组(每组8只):正常对照组(NC)、低O₂高CO₂+生理盐水组(NS)和低O₂高CO₂+HA组(HA),NS组和HA组置于常压低O₂高CO₂舱内(舱内O₂浓度维持在9%-11%,CO₂浓度为5%-6%),每天8 h,每周6 d,共4周。入舱前,HA组腹腔注射HA溶液(12.5 mg/kg)1 mL,NS组腹腔注射1 mL生理盐水。4周后,戊巴比妥钠(35 mg/kg)腹腔注射麻醉,以右心导管测定大鼠肺动脉平均压(mPAP),分离右心室(RV) 和左心室加室间隔(LV+ S),计算右心室重量与左心室加室间隔重量的比值 ,以光学显微镜观测肺血管结构变化,用分光光度计测定血浆中硫化氢(H₂S)的水平,用免疫组织化学方法及RT-PCR技术观察肺小动脉及支气管胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)的表达。结果: (1)与NC组相比:NS组和HA组的mPAP、RV/(LV+S)、肺细小动脉管壁面积/管总面积比值(WA/TA) 和肺细小动脉中膜厚度(PAMT)明显升高(P<0.05);NS组的血浆中H₂S水平、肺小动脉及支气管CSE的含量和CSE mRNA的表达显著降低(P<0.05)。(2)与NS组相比:HA组的mPAP、RV/(LV+S)、肺小动脉管壁面积/管总面积比值(WA/TA) 和肺小动脉中膜厚度(PAMT)明显降低(P<0.05);血浆中H₂S水平、肺小动脉及支气管CSE的含量和CSE mRNA的表达显著升高(P<0.05)。结论: 羟胺通过提高血浆中H₂S的水平、肺小动脉及支气管CSE的含量和CSE mRNA的表达和改善肺部血管重构,降低慢性低O₂和高CO₂所致的大鼠肺动脉高压。     

容量激活性氯离子通道在低氧高二氧化碳处理的大鼠PASMCs的表达及其与MAPK通路的关系

 目的：探讨容量激活性氯离子通道（CLC3）在低氧高二氧化碳处理的大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMCs）中的表达变化及其与MAPK信号通路的关系。方法：酶消化法取雄性SD大鼠PASMCs进行原代培养,采用小鼠抗大鼠α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光细胞化学法进行细胞鉴定;复制低氧高二氧化碳模型,采用免疫印迹法检测CLC3蛋白的表达;采用RT-PCR技术测定CLC3 mRNA水平的表达。结果：(1)与对照组比较,低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著上调(均P＜001);(2)与低氧高二氧化碳组比较,ERK抑制剂U0126+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均显著下调(均P＜001);p38抑制剂SB203580+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达量均明显上调(均P＜001);p38激活剂茴香霉素+低氧高二氧化碳组PASMCs CLC3 mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P＜005和P＜001)。结论：低氧高二氧化碳可上调大鼠PASMCs CLC3 mRNA和蛋白的表达;ERK1/2通路介导了低氧高二氧化碳诱导的大鼠PASMCs CLC3表达, 而p38 MAPK通路活化则下调低氧高二氧化碳诱导的CLC3 mRNA和蛋白表达。     

CX3CR1 RNAi inhibits hypoxia‐induced microglia activation via p38MAPK/PKC pathway

There is accumulating evidence which demonstrates that chronic cerebral ischaemia can induce white matter lesions (WMLs), and microglia‐activation‐mediated cytokines and proteases releasing during the ischaemia might play a vital role in pathogenesis. In addition, hypoxia‐induced upregulated expression of fractalkine promotes the activation of microglia and their migration to the lesions through interaction with its receptor CX3CR1. However, the specific mechanisms involved in fractalkine/CX3CR1‐mediated microglial activation have not been fully identified. In the present study, we constructed lentivirus encoding shRNA against CX3CR1 and transduced into microglial cells in under hypoxic conditions. Moreover, we analysed the proliferation, cytokine secretion and signal‐pathway activation of the microglia. We found that CX3CR1 RNAi‐mediated gene downregulation could attenuate hypoxic‐induced microglial proliferation, cytokine secretion [including tumuor necrosis factor‐α (TNF‐α), interleukin‐1β (IL‐1β)] and matrix metalloproteinase‐2 (MMP‐2) synthesis. These effects were shown to be nediated through p38MAPK/PKC activation. Therefore, our results reveal a novel mechanism of fractalkine/CX3CR1 involvement in activation of microglia. Thus CX3CR1 RNAi might provide a therapeutic strategy which could be useful in chronic cerebral ischaemia.     

p38/ATF-2通路参与C反应蛋白诱导的内皮细胞活化

目的:考察p38 MAPK/ATF-2通路在C反应蛋白(CRP)诱导的内皮细胞活化中的作用。方法:采用培养的人冠状动脉内皮细胞(HCAEC)第3~7代用于实验。CRP刺激诱导内皮细胞活化,给予p38抑制剂SB203580和SB202190干预。免疫印迹法检测p-e NOS、p-p38和p-ATF2的水平;ELISA法测定HCAEC分泌的黏附分子ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的变化。结果:CRP呈浓度依赖性地抑制p-e NOS水平,CRP诱导HCAEC分泌ICAM-1、VCAM-1和MCP-1;CRP激活p38/ATF-2通路;SB203580和SB202190部分恢复p-e NOS水平和抑制CRP诱导的ICAM-1、VCAM-1和MCP-1分泌。结论:p38 MAPK/ATF-2通路参与CRP诱导的HCAEC活化。     

利拉鲁肽通过p38 MAPK通路改善高同型半胱氨酸血症诱导的大鼠海马氧化应激及炎症损伤

目的:探讨胰高血糖素样肽1(GLP-1)类似物利拉鲁肽(Lir)对高同型半胱氨酸血症(Hhcy)大鼠海马损伤的保护作用及其机制。方法:40只SD大鼠随机分为对照(Ctrl)组、模型(Hhcy)组、Lir低剂量(12.5μg·kg~(-1)·h~(-1))组、Lir中剂量(25.0μg·kg~(-1)·h~(-1))组和Lir高剂量(37.5μg·kg~(-1)·h~(-1))组,采用Western blot法检测大鼠海马组织内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中p38、JNK和ERK1/2的蛋白表达及活性依赖的磷酸化水平,同时采用Western blot和免疫组织化学法检测内质网应激标志蛋白免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)和C/EBP同源蛋白(CHOP)的表达水平;采用酶标法检测超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性及丙二醛(MDA)含量;酶联免疫吸附法检测炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。结果:Hhcy可明显上调p-p38、BIP和CHOP的蛋白表达量,降低SOD和GSH的活性,升高MDA含量及IL-1β、IL-6和TNF-α水平;腹腔注射Lir可浓度依赖性地改善Hhcy引起的上述内质网应激和炎症反应,并伴有p38 MAPK通路的抑制。结论:Lir可改善Hhcy诱导的大鼠海马组织氧化应激和炎症损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK信号通路的过度激活有关。     

p38MAPK通路调控树突状细胞表达PD-L1的实验研究

目的探讨脂多糖刺激单核细胞源树突状细胞表达程序性死亡因子配体1(PD-L1)与p38MAPK信号通路的关系。方法体外培养树突状细胞,用p38抑制剂SB203580阻断p38MAPK通路后再用LPS刺激树突状细胞。光学显微镜观察各组细胞的形态变化;流式细胞术测定CD86和PD-L1表达的平均荧光强度;Western blot测定PD-L1蛋白表达。结果光镜下观察LPS刺激组细胞先经历梭型贴壁后逐渐恢复圆形,树突较多;SB203580和LPS共同刺激组细胞树突退化,未刺激组细胞成团悬浮,树突较多。SB203580和LPS共同刺激组细胞CD86、PD-L1较LPS刺激组的明显降低(P<0.05或P<0.01),与未刺激组的相比CD86差异无统计学意义,但PD-L1降低(P<0.05)。SB203580和LPS共同刺激组细胞PD-L1的蛋白表达量较其它两组的均明显减少(P<0.01或P<0.01)。结论 LPS通过p38MAPK信号通路调控树突状细胞表达PD-L1。     

TPX2通过p38 MAPK信号通路诱导直肠癌HR-8348细胞凋亡

目的:研究下调非洲爪蟾驱动蛋白样蛋白2靶蛋白(TPX2)对直肠癌细胞凋亡的影响及机制。方法:用TPX2小干扰RNA(si RNA)转染直肠癌HR-8348细胞,记为TPX2 si RNA组;以不做转染的细胞作为正常对照(control)组;以转染si RNA阴性对照(si RNA-NC)的细胞作为si RNA-NC组;用p38 MAPK抑制剂处理敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞记为TPX2 si RNA+SB203580组。RT-qPCR和Western blot测定TPX2的表达水平,MTT法测定细胞存活率,流式细胞术测定细胞凋亡,Western blot测定细胞中p38 MAPK、p-p38 MAPK、cleaved caspase-3和Bcl-2的蛋白水平。结果:TPX2 si RNA转染后HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白表达水平显著下降(P 0. 05),而转染si RNA-NC对HR-8348细胞中TPX2的m RNA和蛋白水平没有影响。敲减TPX2表达后的直肠癌HR-8348细胞存活率降低,凋亡率升高,细胞中的cleaved caspase-3、p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显升高,Bcl-2水平水平降低,与control组比较,差异有统计学意义(P 0. 05)。与TPX2 si RNA组相比,TPX2 si RNA+SB203580组的HR-8348细胞凋亡率、cleaved caspase-3水平和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白水平明显降低,存活率明显升高(P 0. 05)。结论:TPX2表达下调可以通过激活p38 MAPK促进直肠癌HR-8348细胞凋亡。