黄芪多糖通过活化AMPK和促进骨骼肌FAT/CD36转位改善成肌细胞FFAs代谢

 目的：探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides, APS)对骨骼肌游离脂肪酸（free fatty acids, FFAs）代谢的影响及其机制。方法：培养小鼠C2C12成肌细胞;MTT法检测不同浓度FFAs作用不同时间对细胞活性的影响。根据MTT结果选取FFAs最适浓度和时间处理细胞并用APS干预,采用乙酰辅酶A合成酶-乙酰辅酶A氧化酶法检测APS干预前后培养液FFAs浓度;Western blotting测APS干预前后细胞膜脂肪酸转位酶(FAT/CD36)、总FAT/CD36、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（phosphorylated AMP-activated protein kinase, p-AMPK）和总AMPK蛋白表达。结果：FFAs对细胞的毒性呈浓度和时间依赖性。与FFAs组比较,FFAs+APS组细胞膜FAT/CD36及p-AMPK蛋白表达增加(P<0.05),而总FAT/CD36及总AMPK蛋白表达无明显差异(P＞0.05),同时培养液FFAs浓度降低,细胞活性增加(P<0.05)。结论：APS可以增加骨骼肌细胞对FFAs的摄取利用,其机制可能与活化AMPK和促进FAT/CD36转位有关。     

黄芪多糖通过活化AMPK-eNOS信号通路减轻游离脂肪酸对人血管内皮细胞的损伤

目的:研究黄芪多糖对游离脂肪酸所诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),实验分为正常对照组、黄芪多糖组[黄芪多糖(200 mg/L)处理24 h]、游离脂肪酸组[游离脂肪酸(0.25 mmol/L)共同处理24 h]、游离脂肪酸加黄芪多糖组[游离脂肪酸(0.25 mmol/L)和黄芪多糖(200 mg/L)共同处理24 h]和compound C组[游离脂肪酸(0.25 mmol/L)、黄芪多糖(200 mg/L)及AMPK阻断剂compound C(10μmol/L)处理24 h]。采用MTT法检测细胞活性,硝酸还原酶法测定培养液中一氧化氮(NO)含量,Western blot法测细胞总腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(p-AMPK)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)及磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-e NOS)的蛋白水平。结果:黄芪多糖组各项指标较正常对照组无显著差异。MTT结果显示游离脂肪酸组的细胞活性较正常对照组明显下降,游离脂肪酸加黄芪多糖组的细胞活性较游离脂肪酸组明显好转,compound C组的细胞活性与游离脂肪酸组无显著差异。游离脂肪酸组的NO含量及p-AMPK、p-e NOS水平较对照组明显减少,黄芪多糖能显著抑制游离脂肪酸所致的NO含量及p-AMPK、p-e NOS水平的减少,compound C则可阻断黄芪多糖的作用。各组AMPK及e NOS表达均无明显差异。结论:黄芪多糖可以减轻游离脂肪酸诱导的血管内皮细胞损伤,其机制与AMPK-e NOS信号通路有关。     

黄芪多糖对慢性心衰大鼠心肌AMPK活性和FFA代谢的影响

目的:探讨黄芪多糖(APS)对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)活性和游离脂肪酸(FFA)代谢的影响。方法:32只雄性SD大鼠随机分为4组:正常对照组、假手术组、模型组和APS组,每组8只。采用大鼠左侧冠状动脉结扎术建立心肌梗死后心衰模型。造模成功后,APS组大鼠给予APS(3 g·kg-1·d-1)连续灌胃6周。采用心脏超声检测左心室舒张期内径(LVD)、左心室收缩期内径(LVS)、左心室射血分数(LVEF)和短轴缩短率(FS);HE染色观察心肌病理形态学改变;乙酰辅酶A合成酶-乙酰辅酶A氧化酶法(ACS-ACOD)检测血清及心肌FFA浓度;Western blotting法测大鼠心肌总AMPK、磷酸化AMPK(p-AMPK)、脂肪酸转位酶(FAT/CD36)和肉毒碱软脂酰转移酶-1(CPT-1)的蛋白表达情况。结果:假手术组与对照组比较各项指标无显著差异。模型组较对照组LVEF和FS显著降低(P0.05)而LVD和LVS显著增加(P0.05)。APS组LVEF和FS较模型组明显改善(P0.05)并且LVD和LVS较模型组明显减小(P0.05)。HE染色显示模型组较对照组心肌坏死灶增加,残余心肌细胞减少;而APS组较模型组心肌坏死灶减少,残余心肌细胞增多。模型组血清及心肌FFA浓度较对照组明显增加(P0.05);APS组血清及心肌FFA浓度较模型组明显减少(P0.05)。模型组p-AMPK、CPT-1和细胞膜FAT/CD36表达较对照组显著减少(P0.05);而与模型组相比APS组p-AMPK、CPT-1和细胞膜FAT/CD36表达明显增加(P0.05)。结论:APS可能通过激活慢性心衰大鼠AMPK相关通路促进心肌摄取利用FFA,从而改善慢性心衰。     

黄芪多糖通过激活AMPK减轻同型半胱氨酸对人血管内皮细胞的损伤

目的:探讨黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)能否减轻同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人血管内皮细胞的损伤及其可能的机制。方法:培养人脐静脉内皮细胞,分为正常对照组、APS组[APS(200mg/L)处理24 h]、Hcy组[Hcy(1 mmol/L)处理24 h]和Hcy+APS组[Hcy(1 mmol/L)和APS(200 mg/L)共同处理24 h]。采用MTT法检测细胞活力,采用试剂盒法检测内皮细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,采用RT-q PCR检测SOD1、过氧化氢酶(catalase,CAT)和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,NOX2)的mRNA表达,并采用Western blot检测腺苷酸活化蛋白激酶α(AMP-activated protein kinaseα,AMPKα)和磷酸化AMPKα(phosphorylated AMPKα,pAMPKα)的蛋白水平。结果:与对照组相比,Hcy组内皮细胞活力明显下降,LDH活性升高,细胞内MDA含量,SOD活性下降,SOD1和CAT的mRNA表达水平显著下降,而NOX2的mRNA表达水平明显升高(P0.05)。APS能够抑制Hcy引起的细胞活力下降、LDH活性升高及MDA含量增加;增加SOD活性,提高SOD1和CAT的mRNA表达水平,减少NOX2的mRNA表达水平(P0.05)。AMPK抑制剂Compound C则可以显著降低APS对Hcy引起的内皮细胞损伤的修复作用。结论:APS可通过活化AMPK调控细胞内氧化应激从而抑制Hcy对血管内皮细胞的损伤。     

黄芪多糖对2型糖尿病大鼠肝脏AMPK苏氨酸磷酸化的影响

目的:观察2型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏组织中腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)磷酸化表达的变化,并探讨黄芪多糖(APS)对T2DM的治疗作用及可能机制。方法:雄性SPF级SD大鼠,随机分为4组:正常对照组(C组,n=8)和APS对照组(APS组,n=8),以普通饲料喂养;T2DM组和T2DM+APS治疗组(T2DM+APS组),以高脂饲料喂养。第8周末,行尾静脉一次性注射小剂量链脲佐菌素(STZ,25mg/kg),实验期间定期检测动物随机血糖(BG)、空腹血糖(FBG)、口服糖耐量(OGTT)、血胰岛素(FINS),计算胰岛素敏感指数(ISI)。于APS治疗第8周末,取各组动物的肝脏组织,以Western blotting检测AMPK磷酸化水平。结果:T2DM组出现高血糖、糖耐量降低,经APS治疗8周后,T2DM+APS组各项实验指标均有显著性改变,肝脏组织中磷酸化AMPK水平较T2DM组显著上升(P<0.01)。结论:APS可以显著改善T2DM大鼠胰岛素抵抗,其作用机制可能与APS增加磷酸化AMPK表达水平,进而改善其能量代谢途径有关。     

黄芪多糖减轻慢性镉暴露诱导的大鼠肝脏损伤

目的研究黄芪多糖对慢性镉暴露诱导大鼠肝脏损伤的影响。方法将大鼠随机均分为对照组、模型组和黄芪多糖干预组(用腹腔注射氯化镉复制大鼠肝脏损伤模型),5周后处死大鼠取出肝脏。称重法计算大鼠肝指数;比色分析法检测大鼠血清和肝脏谷丙转氨酶(ALT)活性、谷草转氨酶(AST)活性、乳酸脱氢酶(LDH)活性;用电感耦合等离子质谱仪检测肝脏镉(Cd)含量;酶联免疫吸附试验(ELISA)测定大鼠肝脏白细胞介素-2(IL-2)和转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;免疫组化法观察大鼠肝脏Bcl-2和Bax的蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肝指数、ALT活性、AST活性、LDH活性、Cd含量、TGF-β1含量和Bax蛋白表达均升高(P<0.05或P<0.01);但模型组大鼠IL-2含量和Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。与模型组比较,黄芪多糖能显著降低模型组大鼠肝指数、ALT活性、AST活性、LDH活性、Cd含量、TGF-β1含量和Bax蛋白表达(P<0.05或P<0.01);但黄芪多糖能显著提高模型组大鼠IL-2含量和Bcl-2蛋白表达(P<0.01)。结论黄芪多糖可能是通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达来减轻镉致大鼠肝细胞氧化应激损伤。     

黄芪多糖诱导的树突状细胞增强CIK细胞的杀伤作用

目的:观察黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对树突状细胞(Dendritic cell,DC)抗原提呈功能的影响,并和同源CIK(Cytokine induced killer)细胞共培养,观察DC-CIK和黄芪多糖诱导DC-CIK细胞杀伤A549肺腺癌细胞的活性.方法:提取健康供血者的外周血单个核细胞(PBMC),常规诱导出DC与CIK细胞后,将其共培养,观察黄芪多糖对DC表型变化的影响,定量检测DC-CIK和黄芪多糖诱导DC-CIK细胞培养上清中的IFN-γ和IL-12;并用MTT法测定其体外细胞毒活性.结果:黄芪多糖能提高DC表面分子CD40、CD80、HLA-DR的表达,经黄芪多糖诱导的DC活化的CIK,对A549肺腺癌细胞的杀伤活性高于单纯DC-CIK细胞,差异显著(P＜0.05).结论:黄芪多糖能增强DC的抗原提呈功能,证实黄芪多糖诱导的DC能明显提高CIK对肿瘤细胞的杀伤活性,具有更广阔的应用前景.     

黄芪多糖对小鼠胸腺细胞凋亡的调节作用

以地塞米松磷酸钠 (Ｄｅｘ ｐ)诱导的胸腺细胞凋亡和胸腺细胞的自发凋亡为研究模型 ,通过流式细胞仪、电镜检测胸腺细胞亚二倍体百分率和形态结构的变化 ,探讨黄芪多糖 (ＡＰＳ)对小鼠胸腺细胞凋亡的调节作用。ＡＰＳ由北京中医药大学提供。 2～ 4周龄昆明小白鼠 ,同济医科大学实验动物中心提供。用直观图展示细胞凋亡特征性Ａｐ峰。细胞凋亡用流式细胞仪检测。ＡＰＳ对胸腺细胞凋亡的影响用流式细胞仪和电镜检测。由Ｄｅｘ ｐ处理的胸腺细胞出现染色质固缩成块位于核周边 ,呈明显的凋亡。Ｄｅｘ ｐ (10 7ｍｏｌ Ｌ) ＡＰＳ 40 0 μｇ ｍ…     

黄芪多糖对树突状细胞表型及功能成熟的影响

目的 通过体外试验研究黄芪多糖（Astragalus mongholicus, ASP） 对树突状细胞（dendritic cells，DC）功能调节的机制，为进一步阐明黄芪多糖的免疫学活性提供依据。方法 应用流式细胞仪检测技术、扫描电镜技术、酶联免疫吸附试验检测DC表型和功能的各种指标。结果 本实验应用小鼠骨髓来源的DC，通过体外试验证明了黄芪多糖能够提高DC表面分子CD11c和MHCⅡ的表达，并且呈黄芪多糖浓度依赖性；空白组DC的吞噬功能很强，LPS组DC和黄芪多糖处理组DC吞噬功能都明显下降；黄芪多糖能够促进DC白细胞介素-12（IL-12）的表达；电镜观察DC的超微结构，可见黄芪多糖处理组DC突起增多，形态上更加成熟。结论 本实验结果证实了黄芪多糖能促进小鼠骨髓来源的DC表型及功能的成熟。     

二甲双胍激活AMPK通路减轻饱和脂肪酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应

目的 观察二甲双胍对饱和脂肪酸(SFA)诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性反应中炎性因子的影响及探讨其可能机制.方法 SFA干预RAW264.7巨噬细胞建立体外炎性反应模型;实验分为对照组、SFA干预组、二甲双胍+ SFA干预组、AMPK抑制剂Compound C+二甲双胍+SFA干预组;实时定量PCR检测TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA法检测TNF-α和IL-6蛋白的分泌,Western blot分析腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的磷酸化水平.结果 与对照组比较,SFA干预组RAW264.7巨噬细胞TNF-α、IL-6 mRNA表达及蛋白分泌水平均显著升高(P＜0.05);与SFA组比较,二甲双胍+SFA干预组TNF-α、IL-6 mRNA表达水平及蛋白分泌水平均降低(P＜0.05),而细胞AMPK的磷酸化水平增强(P＜0.05);与二甲双胍+SFA干预组比,Compound C+二甲双胍+SFA干预组TNF-α、IL-6 mRNA表达及蛋白分泌水平均升高,AMPK磷酸化水平降低(P＜0.05).结论 二甲双胍激活AMPK降低饱和脂肪酸诱导的RAW264.7巨噬细胞炎性因子TNF-α、IL-6的分泌.     

淫羊藿苷通过AMPK减轻脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤

目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤的作用及其可能机制.方法:利用ICA干预棕榈酸(palmitic acid,PA)培养的大鼠肾小管上皮NRK52E细胞,实验分组为对照组、PA组、PA+ICA组及AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase...     

AMPK通过增强心肌脂肪酸氧化抑制大鼠心肌肥厚

目的： 探讨单磷酸腺苷（AMP）激活的蛋白激酶（AMPK）对心肌肥厚的影响及可能涉及的作用机制。方法： 通过对大鼠行腹主动脉缩窄术（TAC）引起压力负荷增加，造成心肌肥厚的模型。术后24 h起经皮下注射AMPK的特异性激活剂AICAR(0.5 mg·kg-1·d-1)直至术后7周。处死动物前，对大鼠进行超声心动学指标的检测和血清游离脂肪酸浓度测定；处死动物，取心脏称重后计算心脏重/体重比值，测量心肌细胞的平均直径、心肌中的游离脂肪酸含量、过氧化体增殖物激活型受体α（PPARα）和肉碱棕榈酰转移酶（CPT-I）的mRNA表达。结果： （1）心肌肥厚+AICAR组大鼠的心脏重/体重比值、心肌细胞平均直径、血清及心肌中游离脂肪酸的浓度明显低于心肌肥厚对照组；（2）心肌肥厚+AICAR组大鼠心肌PPARα及CPT-I的mRNA表达明显高于心肌肥厚对照组；(3) 心肌肥厚+AICAR组大鼠心脏超声心动学指标：左室后壁舒张末期厚度、左室舒张、收缩末期内径 (PWT, LVDD, LVSD) 低于心肌肥厚对照组，左室短轴缩短率 (FS%) 则高于心肌肥厚对照组。结论： 活化的AMPK可能通过增强心肌脂肪酸氧化从而抑制压力负荷增加引起的心肌肥厚。     

腺苷酸激活蛋白激酶在大鼠酒精性肝病中的表达减少

 【摘要】：目的：观察酒精对大鼠肝脏腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）表达水平的影响。方法：雄性Wistar大鼠50只,随机分出10只为正常对照组,其余动物采用酒精灌胃的方法,随机分为模型4、8、12、16周组,留取血清及肝组织标本;检测血清ALT、AST、CHE、TG、TC、LDL、VLD、HDL等生化指标,应用HE、天狼红及苏丹Ⅳ染色观察肝组织病理变化;应用免疫组织化学染色、RT-PCR法检测AMPK、ACC、SREBP蛋白及mRNA的表达。结果：随着酒精造模时间延长,血清ALT和AST水平逐渐升高,CHE水平逐渐降低;血清TG、TC、LDL水平逐渐升高,HDL水平逐渐降低;肝组织中AMPK表达逐渐减少,ACC及SREBP表达逐渐增多;肝组织AMPK与ACC及SREBP的表达呈负相关(r=-0.911, P<0.01; r=-0.907, P<0.01)。结论：ALD发病过程中AMPK表达减少,对ACC、SREBP活化的抑制作用减弱,脂质合成增多,造成脂肪堆积于肝脏中,是造成肝脏损伤的重要因素。AMPK作为一个新的药物靶点,为ALD的防治提供了新的思路。     

Curcumin attenuates ethanol-induced toxicity in HT22 hippocampal cells by activating mitogen-activated protein kinase phosphatase-1

Ethanol causes neurotoxicity through formation of reactive oxygen species and activation of mitogen-activated protein kinase (MAPK) pathways. MAPK phosphatase-1 (MKP-1) is one of the phosphatases responsible for dephosphorylation/deactivation of MAPKs. In this report, we examined the potential involvement of MKP-1 in cytoprotective effects of the well-known antioxidant curcumin. In HT22 hippocampal cells, ethanol caused cell death and activation of p38 MAPK and other two kinases. Blockage of p38 MAPK by its inhibitor protected HT22 cells against ethanol-induced toxicity. Curcumin attenuated ethanol-induced cell death, inhibited activation of p38 MAPK, and activated MKP-1. In HT22 cells transiently transfected with small interfering RNA against MKP-1, curcumin failed to inhibit ethanol-induced activation of p38 MAPK and to protect HT22 cells from ethanol-induced toxicity. Our results suggest that curcumin can attenuate ethanol-induced neurotoxicity by activating MKP-1 which acts as the negative regulator of p38 MAPK. This novel pathway may contribute to and explain at least one of the cytoprotective actions of curcumin.     

Vascular endothelial growth factor B inhibits lipid accumulation in C2C12 myotubes incubated with fatty acids

To investigate (1) the effect of vascular endothelial growth factor B (VEGFB) on lipid accumulation and the alteration of fatty acids and fatty acid-related enzymes in C2C12 myotubes incubated with fatty acids and (2) the regulatory effect of VEGFB on skeletal muscle lipid metabolism. Mouse C2C12 myotubes were incubated with oleic acid (OA) and palmitic acid (PA), and differentiated mature C2C12 myotubes were treated with VEGFB. Oil-red O staining, BODIPY staining and cell triglycerides (TG) content were examined. Total RNA was isolated, and real-time PCR analysis was performed. Treatment with 100?μM OA and 50?μM PA induced lipid droplet accumulation and increased TG content (p?<?.01), and 100?ng/mL VEGFB reduced lipid droplet accumulation and decreased TG content (p?<?.01). Treatment with 100?ng/mL VEGFB significantly induced the mRNA expression of fatty acid transport protein 1 (FATP1) (p?<?.01) and FATP4 (p?<?.01). Treatment with 100?ng/mL VEGFB significantly induced the mRNA expression of adipose TG lipase and hormone-sensitive lipase (p?<?.01) as well as carnitine palmitoyltransferase I (p?<?.01), peroxisome proliferator-activated receptor-γ coactivator-1α (p?<?.01), acyl-coa dehydrogenase very long chain (p?<?.05), acyl-coa synthetase long-chain family member 1 (p?<?.01), peroxisomal acyl-coenzyme A oxidase 1 (p?<?.05), and mitochondrial uncoupling protein 3 (p?<?.01). VEGFB enhanced FATP1and FATP4 expression, promoted C2C12 myotube fatty acid oxidation and TG decomposition, and inhibited C2C12 myotube fatty acid re-esterification, thus inhibiting lipid accumulation in C2C12 myotubes incubated with fatty acids.