β3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞粘附和迁移中的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对β₃整合素表达的影响及β₃整合素在PDGF促血管平滑肌细胞(VSMC)粘附、迁移和增殖中的作用。方法:用抗β₃整合素胞外域抗体封闭VSMCβ₃整合素后,通过-TdR掺入、细胞粘附、细胞迁移分析及RT-PCR等方法,检测PDGF对β₃整合素表达及对VSMC粘附、迁移和增殖的影响。结果:阻断β₃整合素与细胞外基质(ECM)蛋白相互作用后,可在一定程度上抑制PDGF刺激的VSMC增殖,使-TdR掺入率降低39%;在β₃整合素抗体浓度为10mg/L时,PDGF引发的细胞粘附和迁移受到显著抑制(P＜0.05);PDGF作用于VSMC6h,β₃整合素基因表达活性达到峰值,比对照细胞高87%。结论:PDGF可显著诱导β₃整合素在VSMC中表达;β₃整合素与ECM蛋白相互作用在PDGF促VSMC粘附、迁移方面发挥重要作用。     

阿胶治疗对不孕症患者子宫内膜容受性的改善

目的探讨应用阿胶治疗不孕症患者后子宫内膜容受性的改善情况。方法选择2009年4月至2011年10月于珠海市妇幼保健院生殖中心就诊不孕症患者70例,其中实验组患者接受阿胶治疗(n=40),不接受阿胶治疗的患者作为对照组(n=30)。两组患者均于排卵期B超测量子宫内膜厚度,排卵后第7日刮取子宫内膜免疫组化法检测整合素β3及雌、孕激素受体的表达。结果实验组患者子宫内膜比对照组患者厚,整合素β3的表达高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者雌、孕激素受体表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论阿胶治疗不孕症患者后能增加子宫内膜厚度并改善子宫内膜容受性,有利于胚胎着床。     

bFGF促进内皮细胞β1整合素表达及其意义探讨

目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对血管内皮细胞β₁整合素表达的影响。方法:采用WesternBlot法结合图像处理分析,检测bFGF作用前后培养血管内皮细胞β₁整合素的表达。结果:bFGF处理组和对照组平均灰度值分别为166.11±9.86和175.32±5.12,两组免疫酶显色有显著差异。结论:bFGF能够诱导内皮细胞膜表面β₁整合素合成增加。推测bFGF通过上调内皮细胞β₁整合素表达,可能在促进血管生成方面有重要作用。     

胚胎因素对体外子宫内膜整合素β3的调节

目的:研究胚胎加入前后体外子宫内膜上皮细胞整合素β3的变化。方法:用已建立的子宫内膜体外培养三维模型,RT-PCR半定量法和免疫印迹法测定胚胎加入前后子宫内膜上皮细胞整合索β3亚基的表达。结果:胚胎加入后整合素β3 mRNA的表达量(1．021±0．022)与对照组(0．434±0．154)相比,表达升高(P<0．05)。整合β3蛋白的表达量 (126．83±8．27)与对照组(69．90±6．16)相比,明显升高(P<0．01)。结论:胚胎可促进子宫内膜整合素β3的表达,在子宫内膜容受性形成中具有促进作用。     

小鼠β2m正反义核酸表达载体转染NIH3T3细胞后的表达

目的:探讨小鼠β₂m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β₂mSN和pcDNA3-β₂mAN对NIH3T3细胞表达β₂m的影响, 为降低MHCⅠ类分子表达的研究提供新方法和实验依据。方法:本研究应用分子生物学技术,构建小鼠β₂m正、反义核酸表达载体pcDNA3-β₂mSN和pcDNA3-β₂mAN,用脂质体转染NIH3T3细胞。经过RT-PCR及Western blot检测,观察正、反义核酸对细胞β₂m mRNA和蛋白表达的影响。 结果: 小鼠β₂m正、反义核酸表达载体成功导入NIH3T3细胞中,且有效表达,转染正义核酸的细胞β₂m mRNA和蛋白表达水平升高,而转染反义核酸则β₂m mRNA和蛋白表达水平降低。 结论:小鼠β₂m反义核酸表达载体pcDNA3-β₂mAN可以降低NIH3T3细胞β₂m基因的表达,本研究结果为降低MHCⅠ类分子的表达、解决同种异体排斥反应提供了新的研究方法和途径。     

人羊膜定向诱导胚胎干细胞分化为表皮样细胞机理的初步探讨

目的:初步探讨人羊膜诱导小鼠胚胎干细胞向表皮样细胞定向分化的机理。方法: 小鼠胚胎干细胞与人羊膜在双层6孔培养板中共培养4-5 d,对照组未加羊膜,观察其形态学分化。分别用β₁整合素、角蛋白19/15和套膜蛋白免疫组化检测胚胎干细胞向表皮样细胞的分化。结果: 共培养4-5 d后,小鼠胚胎干细胞分化为表皮细胞样的单层细胞,细胞排列紧密,呈多边形,免疫组织化学染色显示,大部分细胞呈现β₁整合素阳性,少数细胞呈角蛋白19和角蛋白15阳性,未见套膜蛋白阳性细胞,对照组大部分细胞死亡,存活细胞形态各异,未见β₁整合素、角蛋白19/15和套膜蛋白免疫组化染色阳性细胞。结论: 人羊膜分泌的可溶性物质可能对小鼠胚胎干细胞向表皮样细胞分化起重要作用。     

整合素β3在子宫内膜异位症与子宫内膜癌中的表达及生物学行为相关性研究

目的研究整合素β3（beta3 integrin）在子宫内膜异位症、子宫内膜癌中的表达,探讨其表达与子宫内膜异位症发生及子宫内膜异位症和子宫内膜癌生物学行为的相关性。方法采用免疫组织化学方法检测10例子宫内膜异位症在位内膜、异位内膜,10例子宫内膜癌,10例对照组正常子宫内膜整合素β3的表达。结果整合素β3在子宫内膜异位症在位内膜组的表达显著低于对照组（P〈0.05）,在异位内膜组中的表达显著高于在位内膜组及对照组（P〈0.05、P〈0.05）;整合素β3在子宫内膜癌组中的表达显著高于对照组（P〈0.05）;整合素β3在子宫内膜异位症异位内膜组中的表达与子宫内膜癌组中的表达差异无显著性（P〉0.05）。结论整合素β3的异常表达可能与子宫内膜异位症的发生有关;且可能与子宫内膜异位症具有和子宫内膜癌相似的生物学行为有关。     

细胞外基质促血管平滑肌细胞迁移及β3整合素和粘着斑激酶表达

目的:研究细胞外基质(ECM)蛋白促血管平滑肌细胞(VSMC)迁移与β₃整合素及粘着斑激酶(FAK)表达之间的关系。方法:应用细胞迁移实验观察骨桥蛋白(OPN)和纤连蛋白(FN)对VSMC迁移活性的影响,利用RT-PCR和Western印迹探讨β₃整合素、FAK和转录因子Gax表达与细胞迁移之间的关系。结果:VSMC经10、20mg/LOPN和20mg/LFN处理后,迁移活性分别达对照组的1.36、1.57和1.26倍(P＜0.05)。用相同浓度(20mg/L)OPN和FN刺激细胞,随着作用时间延长,VSMC迁移距离逐渐增加。Western印迹和RT-PCR结果证实,两种基质蛋白促进VSMC迁移与诱导β₃整合素和FAK基因表达及抑制转录因子Gax表达有关。结论:β₃整合素-FAK是介导OPN和FN促VSMC迁移的信号途径之一。     

跨膜蛋白16A表达与冻融胚胎移植妊娠结局的关系

目的探讨跨膜蛋白16A(TMEM 16A)表达与冻融胚胎移植(Freeze-thaw embryo transfer,FET)妊娠结局之间的相关性。方法选取2018年3月～2020年3月于我院首次进行FET治疗的160例患者作为研究对象,根据妊娠结局分为成功妊娠组106例和未妊娠组54例。在移植前一天通过微活检术取所有患者子宫内膜组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测并比较两组患者TMEM 16A以及白血病抑制因子(LIF,Leukemia?inhibitory?factor)mRNA表达水平,采用Western blot法检测两组患者的TMEM 16A以及LIF蛋白表达水平。并采用logistic多因素回归分析FET妊娠结局的独立影响因素。结果妊娠成功组患者的TMEM 16A mRNA、LIF mRNA表达水平高于相比未妊娠组,差异具有统计学意义(P0.001)。妊娠成功组患者的TMEM 16A、LIF蛋白表达量高于未妊娠组,差异具有统计学意义(P0.001)。Spearman相关性分析结果表明TMEM 16A以及LIF mRNA表达水平之间存在明显正相关性(r=0.658,P=0.000)。Logistic回归结果显示年龄(OR=2.787,95%CI=1.209～6.423)、TMEM 16A蛋白表达量(OR=0.506,95%CI=0.289～0.884)、LIF蛋白表达量(OR=0.502,95%CI=0.304～0.829)、移植胚胎评分(OR=0.417,95%CI=0.231～0.753)均是影响FET妊娠结局的独立危险因素。结论子宫内膜跨膜蛋白16A可能参与了子宫内膜容受性建立,其表达水平与冻融胚胎移植妊娠结局存在密切相关性。     

胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞TGF β及其受体的调节作用

目的:从细胞增生、转化生长因子β₁和受体表达等方面,探讨胰岛素对自发型高血压大鼠血管平滑肌细胞(SHR VSMC)和正常血压Wista-Kyoto大鼠血管平滑肌细胞(WKY VSMC)的影响异同。方法:采用组织移植法培养SHR和WKY大鼠胸主动脉VSMC|用细胞计数仪和流式细胞仪分别检测细胞增生情况|TGF β及其受体的mRNA水平利用定量RT-PCR技术进行检测。结果:(1)胰岛素加强SHR VSMC的增生,而不影响WKY VSMC的增生。胰岛素加强SHR VSMC的增生,且呈剂量依赖方式(2)以20%小牛血清培养基培养VSMC, SHR VSMC的S期百分率为31.44%,而WKY VSMC的S期百分率仅为19.86%|以2%小牛血清培养基培养VSMC,SHR VSMC的G₀／G₁和S期百分率分别为73.23%和9.35%,加入胰岛素后,SHR VSMC的G₀／G₁降低为67.58%,S期百分率则增加到15.64%。但是,加入胰岛素前后,WKY VSMC各期百分率无明显变化|(3)RT-PCR分析结果表明,生长静止的SHR VSMC和WKY VSMC均有TGF β₁、Ⅰ型和Ⅱ型TGF β受体的表达,但SHR VSMC的TGFβ₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量高于WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达量,胰岛素加强了WKY VSMC的TGF β₁、Ⅰ型TGF β受体的表达(P＜0.01和P＜0.05),而削弱了SHR VSMC相应分子的表达(P＜0.01和P＜0.05),胰岛素不影响二株系大鼠VSMC Ⅱ型TGF β受体的表达(P＜0.05)。结论:胰岛素对SHR VSMC和WKY VSMC的TGF β和它的受体表达具有不同的调节作用,这种异常调节作用可能和胰岛素加强SHR VSMC的增生密切相关。     

碱性成纤维细胞因子对人肾成纤维细胞的影响

目的:研究碱性成纤维细胞因子(bFGF)对人肾成纤维细胞(KFB)增殖、分泌I型胶原、表达整合素β₁的影响。方法:体外培养KFB, 分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、ELISA法、流式细胞仪检测KFB增殖、I型胶原分泌及整合素β₁表达水平。结果:25-50μg/L的bFGF可明显促进KFB细胞增殖(P<0.05vs对照)及分泌I型胶原(P<0.05vs对照), 同时显著增加KFB整和素β₁的表达(P<0.05vs对照).结论:bFGF可通过对整合素β₁表达的上调来促进KFB增殖及分泌I型胶原, 这可能是bFGF致肾间质纤维化的作用机制。     

长期容量超负荷心力衰竭大鼠心脏交感神经去甲肾上腺素转运蛋白表达的变化

目的：检测长期容量超负荷（VOL）条件下大鼠心肌β₁-肾上腺素能受体（β₁-AR）及其上游调控因素心脏交感神经去甲肾上腺素转运蛋白（NET）mRNA表达的变化。方法：用RT-PCR及Northern杂交检测心脏交感神经NET表达组织特异性、VOL后不同时间大鼠心脏交感神经NET及β₁-AR mRNA表达水平变化。结果：①心脏交感神经节专一性表达心脏交感神经NET基因。②VOL后3 d大鼠左心室收缩压（LVSP）下降最显著（24%）（P<0.05）此后逐渐增高,至手术后60 d高于对照组32.8%（P<0.05）;3-30 d舒张末压（LVEDP）显著增177.96%-234.75%（P<0.05）,术后60 d恢复至对照组水平（P>0.05）。③与对照组比较VOL大鼠术后3-30 d NET、β₁-AR mRNA表达无下降（P>0.05）,60 d NET RT-PCR及Northern杂交检测分别显示下降43.3%（P<0.05）和 63.5%（P<0.05）,Northern杂交显示β₁-AR下降50%（P<0.05）。结论：长期心脏VOL大鼠左心室β₁-AR mRNA可维持较长时间稳定与心脏交感神经NET mRNA表达相对稳定有关。NET表达正常对维持β₁-AR对肾上腺素能刺激的敏感性,维持心脏收缩功能正常可能有重要意义。     

新的β2m基因打靶载体构建方法的建立

目的:采用常规方法(同源片段的插入方向与Neo基因相同)构建载体的同时,将两条同源臂反向插入Neo基因的两侧,构建新型小鼠β₂m基因替换型打靶载体β₂m-pPNT,即增加3'同源臂的长度,探讨同源臂插入位置和长度变化对同源重组率的影响。方法:设计和合成引物,经PCR从小鼠β₂m-pSV2△HXgpt基因组克隆分别扩增出长度为0.8kb和4.2kb的β₂m基因片段,作为5'和3'同源臂,分别反向插入载体pPNT的Neo基因上游和下游,构建小鼠β₂m基因替换型打靶载体β₂m-pPNT。结果:经过PCR、限制性内切酶及DNA序列测定,证实此两条同源臂包含小鼠β₂m的起始区和表达区,表明载体构建成功。结论:PCR技术是构建基因打靶载体的简单而可靠方法。增加3'同源臂的长度对研究提高胚胎干细胞基因敲除的同源重组率提供新的途径。     

生长激素对SD大鼠子宫内膜容受性的影响

目的 观察生长激素对着床期SD大鼠子宫内膜整合素αvβ3(Itgαvβ3)及骨桥蛋白(OPN)表达的影响,以探讨改善子宫内膜容受性的方法.方法 随机将50只雌性SD大鼠平均分成两组,对照组为生理盐水(NS)组,实验组为生长激素(GH)组.取发现阴栓后第4天子宫内膜,用免疫组织化学技术检测子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,同时首次通过SYBR Green嵌合荧光实时定量PCR技术检测子宫内膜上述两种因子mRNA的表达.结果 GH组子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达呈强阳性,对照组表达弱于GH组,两组差异有统计学意义(Itgαvβ3:77.33±4.23比92.56±16.80,0PN:71.75±8.77比80.73± 13.00,均P＜0.05).实时荧光定量PCR结果与免疫组织化学结果相符.结论 生长激素可以增强着床期子宫内膜Itgαvβ3及OPN的表达,可能可改善子宫内膜容受性,提高临床妊娠率.     

多囊卵巢综合征患者着床窗口期子宫内膜容受性的改变

目的探讨正常妇女与PCOS妇女促排卵治疗后着床期子宫内膜容受性相关因子的改变,包括整合素αv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF的表达。方法12例正常妇女自然周期(对照组)和8例PCOS患者经过促排卵治疗后(P-COS组)均在着床期取子宫内膜进行integrinαv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF免疫组化染色,并进行统计学分析。结果PCOS组E2、P水平高于正常组,但E2/P比值变化幅度大,PCOS组着床期子宫内膜中integrinαv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF表达均弱于对照组。结论PCOS患者促排卵治疗后E2、P分泌不协调,导致着床期子宫内膜integrinαv、MMP9、TIMP1、VEGF和LIF表达减弱,进而影响着床过程中的多个环节,这可能是造成PCOS患者促排卵治疗后高排卵率、低妊娠率和高流产率的原因之一。     

Aβ1-42作用的小胶质细胞对体外培养的神经干细胞生存的影响

目的: 探讨β-淀粉样蛋白(Aβ_1-42)作用的小胶质细胞对体外培养的神经干细胞(NSCs)生存的影响。方法: 利用Transwell小室在体外建立NSCs与小胶质细胞共培养体系,检测Aβ_1-42蛋白作用小胶质细胞前后NSCs增殖、分化及凋亡情况。结果: 与单纯共培养组相比,Aβ_1-42干预共培养组的增殖率降低,且微管相关蛋白2(MAP-2)和胆碱乙酰转化酶(CHAT)阳性表达率也均降低。结论: Aβ_1-42介导的炎症反应抑制了神经干细胞的增殖,促进其凋亡,并能显著降低其分化成神经元尤其是胆碱能神经元的能力。     

多种粘附分子基因在原发性肝癌的表达及其临床意义

目的:探讨多种粘附分子基因在原发性肝癌中的表达及其临床意义。方法:取64例用RT-PCR法半定量检测肝癌粘附分子的基因表达情况,分析其临床意义。结果:(1)原发性肝癌各粘附分子的表达率分别为:E-钙粘蛋白 90.62%、细胞间粘附分子-1 93.75%、粘附分子CD44 50.00%、粘附分子CD_44V 96.88%、整合素α₅ 100%、整合素β₁ 100%,CD44与其他粘附分子表达率的差异显著。(2)肝癌组织各粘附分子E-钙粘蛋白 、细胞间粘附分子-1 、粘附分子CD44、粘附分子CD_44V 、整合素α₅、整合素β₁ mRNA的表达量分别为:1.24±0.54、0.96±0.37、0.62±0.73、0.86±0.33、 0.97±0.49、1.41±0.24,其中粘附分子CD44与E-钙粘蛋白、整合素β₁的表达量差异显著。(3)肝癌分期与粘附分子基因mRNA表达量的关系显示:E-钙粘蛋白、粘附分子CD44的表达量随分期增高而下降,其中粘附分子CD44Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著;细胞间粘附分子-1、粘附分子CD_44V,整合素α₅、整合素β₁的表达量随分期增高而增高,其中细胞间粘附分子-1Ⅰ-Ⅱ期和Ⅳ期的表达量差别显著。(4)肝癌粘附分子基因mRNA表达量与临床病理生理特点相关分析显示:肝癌粘附分子基因mRNA表达量与肿瘤大小、有无转移、有无包膜和结节数目有关,与AFP水平、肝硬化情况、肝功能状况无关。结论:肝癌粘附分子基因mRNA的表达存在明显的差异,粘附分子CD44表达缺失率高。肝癌粘附分子基因mRNA的表达与肿瘤大小、有无转移、结节数目、有无包膜相关。     

宫腔镜微创手术对于子宫内膜容受性的影响

目的：探讨宫腔镜微创手术对于子宫内膜容受性的影响。方法：选取本院妇产科2013年1月至2013年12月收治的98例体外受精–胚胎移植失败的患者,进行宫腔镜下活检以及微创手术,观察术后月经第5、10、15天的平均子宫内膜厚、整合素β3以及HOXA10表达情况以及术后ER以及PR的累计阳性率情况。结果：98例患者微创术后月经第5、10、15天的平均子宫内膜厚分别(7.5±1.3)、(12.3±2.3)、(14.5±3.2) mm,差异具有统计学意义(P<0.05);术后月经第5、10、15天整合素β3以及HOXA10表达显著上升,差异具有统计学意义(P<0.05);术后ER以及PR的累计阳性率相比于术前显著上升,并随着时间呈现出上升趋势(P<0.05)。结论：宫腔镜下微创手术治疗能显著改善子宫内膜术后容受性,有利于体外受精–胚胎移植术的成功。     

补肾助孕中药对促排卵后子宫内膜LIFmRNA表达的影响

目的探讨补肾助孕中药对多囊卵巢综合征（PCOS）不孕患者促排卵治疗后黄体中期子宫内膜白血病抑制因子（LIF）mRNA表达的影响及意义。方法随机给予患PCOS的不孕妇女两种不同的促排卵方案：克罗米芬（CC）／hCG或CC／hCG加服中药方案。选择促排卵周期中单卵泡成熟排卵的患者为研究对象,其中CC／hCG促排卵者26例,为A组;CC／hCG同时服用补肾助孕中药促排卵者28例,为B组。同期选择25例月经周期正常妇女为对照组,为C组。采用逆转录-聚合酶链反应技术（RT—PCR）对3组妇女黄体中期的子宫内膜LIFmRNA进行半定量分析。结果LIFmRNA在3组妇女着床期子宫内膜均有表达,组间比较有差异（P〈0．05）。B、C组均高于A组（P分别〈0．05、0．01）,差异有显著性;B组和C组间差异无显著性（P〉0．05）。结论单纯CC／hCG促排卵治疗降低了子宫内膜容受性,加服补肾助孕中药后改善了子宫内膜容受性,有利于胚胎着床和临床妊娠率的提高。     

低氧时肺癌细胞侵润和迁移特性的变化及分子基础

目的:探讨低氧对肺癌细胞侵润、迁移特性的影响及其机制。方法:将肺癌细胞株置常氧(空气、5%CO₂)、低氧(5%O₂、5%CO₂、90%N₂)、无氧(95%N₂、5%CO₂)的不同氧环境中培养48 h后,用划痕法测定各组细胞的迁移能力,用羊膜内皮细胞模型测定各组细胞的侵润能力。同时将处理的细胞接种于裸鼠背部皮下,观察其生长情况及转移特点。同时分析上皮钙粘附素、β1-整合素的表达量。结果:低氧组细胞迁移能力、侵润能力显著高于常氧组。无氧组成瘤率和肺转移率显著低于常氧组和低氧组。低氧组上皮钙粘附素表达显著低于常氧组而β1-整合素表达量显著高于常氧组,无氧组两者均显著低于常氧组。结论:适度低氧可以下调肺癌细胞上皮钙粘附素表达,增加β1-整合素表达,增强癌细胞迁移力和侵润力。但是严重低氧使癌细胞粘附分子表达下降,生长增殖能力、迁移力和侵润力下降。