三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠T-bet/GATA3信号通路的影响

目的:本文旨在探讨三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对MRL/lpr狼疮鼠T-bet/GATA3信号通路的影响及其作用机制。方法:将20周龄MRL/lpr狼疮鼠和正常C57BL/6J小鼠随机分组,分别接受ATO(0.4mg·kg~(-1)·d~(-1))和同体积生理盐水(NS)治疗2个月,分离脾脏淋巴细胞,然后用实时荧光定量PCR法检测T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的mRNA水平及T-bet/GATA3 mRNA的比值,Western blot法检测T-bet和GATA3的蛋白表达,ELISA法检测血清中IFN-γ和IL-4的浓度。结果:(1)MRL/lpr狼疮鼠NS组T-bet、IFN-γ的mRNA及蛋白表达、Tbet/GATA3 mRNA比值均高于C57BL/6J小鼠NS组(P0.05),而GATA3、IL-4的mRNA及其蛋白表达均低于C57BL/6J小鼠NS组(P0.05);(2)在MRL/lpr狼疮鼠中,与NS组相比,ATO组T-bet、IFN-γ的mRNA及蛋白表达、T-bet/GATA3 mRNA比值均下降(P0.05),而2组中GATA3、IL-4的mRNA及蛋白表达无明显差异;(3)在C57BL/6J小鼠中,NS组和ATO组之间以上指标均无显著性差异。结论:ATO可能通过影响MRL/lpr狼疮鼠Tbet/GATA3信号通路,降低T-bet表达,从而减少Th1型细胞因子IFN-γ的表达和分泌。     

三氧化二砷对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和淋巴细胞亚群的影响

目的研究三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮鼠抗ds-DNA抗体和淋巴细胞亚群的影响。方法将MRL/lpr狼疮鼠随机分为:ATO组、生理盐水(NS)组和环磷酰胺(CTX)组。另设正常C57/BL小鼠,随机分为ATO治疗组(0.4 mg/kg.d)和对照组(0.25 mL)。以上每组各6只,隔日腹腔注射,给药2个月后处死,称体重和脾脏重量算出脾脏指数;ELISA法测各组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平;流式细胞术测脾脏细胞亚群百分比。结果(1)MRL/lpr小鼠ATO治疗组脾脏指数、血清抗ds-DNA抗体水平和CD19 、CD3 、CD3 CD4 细胞百分比均低于NS对照组(P<0.01或P<0.05),NK细胞百分比明显高于NS对照组(P<0.05);(2)ATO治疗组小鼠的脾脏指数和CD3CD4双阳性细胞百分比显著低于CTX组(P<0.01),CTX治疗组小鼠血清抗ds-DNA抗体水平均较对照组明显降低(P<0.01),但ATO治疗组的抗体水平较CTX治疗组高(P<0.05);(3)在C57/BL小鼠中,ATO治疗组和NS治疗组之间以上指标均无差异。结论ATO抑制MRL/lpr狼疮鼠T、B淋巴细胞活化同时上调NK细胞功能,减少体内自身抗体产生;但是对正常小鼠的抗体水平和细胞亚群并无明显影响。     

P-糖蛋白单克隆抗体改善MRL/lpr狼疮鼠肾脏病变的研究

目的 探讨P-糖蛋白(P-glyeoprotein,P-gp)单克隆抗体(UIC2)在改善MRL/lpr狼疮鼠肾脏病变中的作用.方法 24只14周龄雌性MRl/lpr狼疮鼠分为3组:P-gp单克隆抗体1次治疗组(G1)、P-gp单克隆抗体3次治疗组(G2)、对照组(G0).观察体重;采用考马斯亮蓝法检测24 h尿蛋白定量;采用酶联免疫吸附法试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体水平;采用酶法检测血清肌酐水平;采用苏木素-伊红染色、免疫荧光和电镜观察肾脏病理改变.结果 ①22周时G1组和G2组体重高于G0组(P<0.05).② 24 h尿蛋白定量22周时Gl组[(1.9±1.1)mg]和G2组[(1.4±0.9)mg]低于G0组[(3.1±1.9)mg](P<0.05);26周时G1组[(2.4±1.4)mg]和G2组[(1.8±1.1)mg]低于G0组[(5.3±2.2)mg](P<0.05).③26周时血清肌酐G1组[(7.0±2.9)μmol/L]和G2组[(6.1±2.5)μmol/L]低于G0组[(12.7±1.3)umol/L](P<0.05).④19周时,抗dsDNA抗体滴度G1组[(43±19)×102 U/mL]和G2组[(45±32)×102 U/mL]低于G0组[(87±39)×102 U/mL](P<0.05);26周时G2组[(35±11)×102 U/mL]低于G0组[(59±35)×102 U/mL].⑤肾小球新月体形成率G1组(0.11±0.05)和G2组(0.09土0.01)低于G0组(0.23±0.07),G2组较Gl组减低(P均<0.05).结论 P-gp单克隆抗体可改善MRl/lpr狼疮鼠肾脏病变的进展,减少尿蛋白、降低血清肌酐,对狼疮肾炎有显著疗效.     

BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响北大核心CSCD

目的:探讨BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠外周B细胞分化的影响及其治疗作用。方法:12周龄MRL/lpr小鼠分别腹腔注射JQ150 mg/(kg·d)或10%DMSO;每2周检测24 h尿蛋白定量;6周后检测血清中尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、补体C3、补体C4、抗ds-DNA抗体、ANA及IgG、IgG1、IgG2a、IgM等免疫球蛋白水平;PAS染色观察肾脏组织病理学改变,免疫荧光染色观察IgG和C3免疫复合物沉积情况。利用流式细胞术检测小鼠B细胞各亚群细胞的比例;RT-qPCR检测脾脏prdm1 mRNA表达水平。结果:与DMSO组相比,JQ1治疗组小鼠24 h尿蛋白定量显著减少,血清BUN、Cr水平明显降低,补体C3、C4水平明显升高,抗ds-DNA抗体、ANA以及IgG、IgG1、IgG2a和IgM等免疫球蛋白水平明显降低;此外,JQ1治疗组小鼠肾小球、肾血管的病理损害程度均明显减轻,肾脏IgG和C3免疫复合物沉积显著减少。同时,JQ1治疗组小鼠脾脏、淋巴结、外周血B细胞中浆细胞和记忆B细胞亚群的比例显著下降;JQ1治疗亦显著抑制狼疮小鼠B细胞内调节浆细胞分化的关键转录因子prdm1 mRNA表达。结论:BET蛋白抑制剂JQ1对MRL/lpr狼疮小鼠具有显著的治疗作用,通过抑制Blimp1表达进而调节浆细胞分化可能是其发挥治疗作用的机制之一。BET蛋白可能是SLE治疗的新靶标。     

姜黄素对MRL/lpr狼疮鼠肾组织富含脯氨酸的酪氨酸激酶2信号转导途径表达的影响

目的 探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)信号转导途径在MRL/lpr模型鼠狼疮肾炎中所起的作用以及姜黄素对PYK2信号转导途径活化的影响.方法 选用MRL/lpr转基因狼疮鼠为研究对象,给予姜黄素干预治疗后,采用免疫组化方法研究狼疮鼠肾脏磷酸化PYK2的组织分布情况,采用Western blot方法研究磷酸化PYK2蛋白的定量表达.结果 MRL/lpr狼疮鼠肾脏的磷酸化PYK2蛋白明显活化,给予姜黄素干预治疗后肾脏的磷酸化PYK2蛋白表达降低.结论 狼疮鼠肾脏PYK2信号转导途径的活化与狼疮肾炎的发病密切相关,姜黄素可以降低PYK2信号转导途径的表达.     

LTβR在MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎病理发生中的作用及其机制初探

目的研究淋巴毒素β受体(lymphotoxinβreceptor,LTβR)在狼疮性肾炎病理发生中的作用及其机制。方法选取12周龄、雌性的MRL/lpr小鼠作为狼疮性肾炎小鼠模型,将其随机分为3组:生理盐水处理组、Human-Ig处理组和LTβR-Ig处理组,分别腹腔注射生理盐水(100μl),Human-Ig(100μg/只,100μl)和LTβR-Ig(100μg/只,100μl),每周1次,连续8周。同周龄和性别的C57BL/6小鼠为狼疮性肾炎模型小鼠的正常对照,每周腹腔注射生理盐水1次(100μl),连续8周。Human-Ig和LTβR-Ig处理组小鼠在首次处理后第2、4、6、8周称体质量。最后一次处理1周后,处死以上4组小鼠,收集肾组织。qRTPCR,IHC和Western blot比较C57BL/6小鼠和MRL/lpr小鼠肾组织中LTβR的表达情况。然后通过HE染色肾组织,qRT-PCR检测肾组织中LTβR、IL-6、MCP-1、TNF-α的表达水平;Western blot检测肾组织核转录因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)的活化情况,以C...     

MRL/lpr小鼠中CD4~+CD25~+调节性T细胞对B细胞影响的研究

目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)对B淋巴细胞的影响。方法磁珠分选法选出MRL/lpr小鼠及Balb/c小鼠脾脏中的Treg与效应性T细胞(Teff细胞),以尼龙毛柱法分离B细胞;用2种小鼠的Treg细胞分别与MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞(加或不加Teff细胞)组成共培养体系,5 d后用酶联免疫吸附法检测上清液中IgA及IgG的水平,计算抑制率;将两种小鼠的Treg细胞注入MRL/lpr小鼠,对照组注入生理盐水,3周后流式细胞法检测小鼠脾脏中CD19+CD27++浆细胞含量。结果两种小鼠Treg细胞对B细胞分泌IgA及IgG均有直接抑制作用,与Teff细胞共培养也能对B细胞IgA及IgG的分泌起抑制作用(总抑制作用),两种小鼠Treg细胞的直接抑制率无显著性差异,总抑制率均大于直接抑制率,且MRL/lpr小鼠的Treg细胞总抑制率显著降低;输注同系Treg细胞的MRL/lpr小鼠,3周后浆细胞的含量显著低于对照组及输入Balb/c小鼠Treg细胞组。结论 Treg细胞可直接或间接抑制MRL/lpr小鼠的B细胞分泌IgA和IgG,MRL/lpr小鼠体内Treg细胞对B细胞的抑制力低于正常对照。输注同系Treg细胞可减少MRL/lpr小鼠浆细胞的生成。     

MRL/lpr小鼠肾组织JAK/STAT信号转导途径的表达和雷帕霉素对其表达的影响

目的 探讨JAK／STAT1信号转导途径在MRL／lpr小鼠狼疮肾炎中所起的作用以及雷帕霉素对JAK／STAT1信号转导途径活化的影响。方法采用MRL／lpr转基因鼠，给予雷帕霉素干预治疗后，采用免疫组化方法研究肾脏磷酸化STAT1的组织分布情况，采用Westernblot方法研究磷酸化STAT1蛋白的表达，采用SYBRgreen嵌合荧光法real-time定量PCR研究SOCS-1mRNA的表达，从而研究STAT1的活化水平。结果MRL/lpr狼疮鼠肾脏的磷酸化STAT1蛋白明显活化，SOCS-1基因的表达升高，给予雷帕霉素治疗后肾脏的磷酸化STAT1蛋白表达降低，SOCS-1基因的表达降低。结论JAI（／STAT1信号转导途径的活化与狼疮肾炎的发病相关，雷帕霉素可以降低JAK／STAT1信号转导途径的表达．这可能是雷帕霉素治疗系统性红斑狼疮的机理之一。     

IFN-γ上调人胃癌细胞株PD-L1表达

 目的：研究不同人胃癌细胞株表面程序性死亡配体1（PD-L1）表达及干扰素γ（IFN-γ）对其表达的诱导情况。方法：分别培养不同人胃癌细胞株AGS、BGC823、MGC803和SGC7901,经不同浓度IFN-γ、作用不同时间后,利用流式细胞术及real-time PCR检测胃癌细胞株PD-L1在蛋白和mRNA水平的表达情况。结果：流式细胞术显示AGS、BGC823、MGC803和SGC7901细胞PD-L1蛋白表达率分别为（1.567±0.109）%、（2.640±0.577）%、（1.760±0.236）%和（16.030±1.289）%;不同胃癌细胞株对IFN-γ反应不同,经不同浓度IFN-γ刺激后均可不同程度上调PD-L1的表达（P<0.05）;real-time PCR显示10 μg/L IFN-γ刺激各胃癌细胞株12 h后PD-L1 mRNA水平上调（P<0.05）。结论：胃癌细胞株组成性表达PD-L1;IFN-γ可上调胃癌细胞株PD-L1的表达,呈现浓度、时间依赖性;其中以SGC7901细胞（来源于转移淋巴结）表达最高,推测胃癌细胞中PD-L1的表达与肿瘤分化程度无关,与组织来源和淋巴结转移有关;IFN-γ上调胃癌细胞PD-L1,表明IFN-γ并非都是抑制肿瘤增殖、生长,可能参与介导肿瘤免疫逃逸,故临床运用IFN-γ辅助治疗胃癌时应慎用。     

蛋白激酶C抑制剂对T细胞表达IL-2及IFN-γ的影响

目的:研究蛋白激酶C(PKC)抑制剂H7和棉酚对体外活化T细胞表达白细胞介素-2(IL-2)和γ-干扰素(INF-γ)的影响。方法:在莫能菌素(monensin)存在时,以佛波醇酯(PDB)+离子霉素(I)体外活化人外周血单个核细胞(PBMC),以流式细胞术胞内细胞因子检测法分析H7和棉酚对CD3⁺T细胞表达IL-2和IFN-γ水平的影响。结果:PDB+I处理PBMC4h后,表达IL-2和IFN-γ的CD3⁺T细胞百分率分别为16.64±2.04和25.81±3.53(x±s),而对照组二者的比率为1.06±0.22及3.12±0.77(P＜0.05)。棉酚(50μmol/L)可明显抑制IL-2及IFN-γ的表达,抑制后表达率分别为2.08±0.12及9.01±1.90。H7作用比棉酚强,50μmol/L的H7抑制后的IL-2及IFN-γ阳性T细胞比率分别为0.43±0.06和2.40±0.27。结论:PKC在CD3⁺T细胞表达IL-2及IFN-γ中发挥重要作用;PKC抑制剂H7及棉酚明显抑制IL-2及IFN-γ的表达,提示H7和棉酚可通过抑制PKC活性,对依赖于T细胞功能的特异性免疫应答有调节作用。     

组蛋白乙酰化对细胞分化的调控及其机制

近来大量实验提示体内组蛋白乙酰化状态的改变会影响到细胞的分化.目前研究主要集中在组蛋白乙酰化状态对肿瘤细胞分化、干细胞分化和胚胎发育等的影响.但其相关作用机制仍不十分清楚.本文就组蛋白乙酰化过程对细胞分化的调控以及其调控的机制进行讨论.     

LPS对MRL/MpJ小鼠脾T细胞表达TLR4和TNFα的影响

研究Toll样受体 4 (TLR4 )在MRL/MpJ小鼠脾细胞的表达状况和革兰阴性菌脂多糖 (LPS )刺激后TLR4的表达变化以及对TNF α产生的影响。MRL/MpJ小鼠经腹腔注射LPS后在不同时间取脾细胞 ,用三色荧光标记流式细胞仪技术检测小鼠脾T细胞TLR4的表达情况 ,并与BALB/c小鼠作对照 ;通过RT PCR观察LPS刺激前后脾T细胞TNF αmRNA的表达变化。结果表明TLR4在MRL/MpJ小鼠CD3+ CD4 + T细胞和CD3+ CD8+ T细胞中均有表达 ;但TLR4 + /CD4 + 细胞表达仅BALB/c小鼠的 33% ,在受LPS刺激后 ,MRL/MpJ鼠CD4 + T细胞TLR4升高时间较BALB/c小鼠延迟 ;CD8+ T细胞TLR4在LPS刺激前后无明显变化 ;脾细胞TNF αmRNA水平升高亦延迟。通过对干燥综合征样自身免疫病鼠模型MRL/MpJ小鼠脾T细胞TLR4的表达及功能研究 ,将有助于认识天然免疫和获得性免疫间的联系和感染在自身免疫病发病中的作用。     

组蛋白乙酰化/去乙酰化与染色质结构及基因转录调控的关系

在真核生物中,组蛋白是染色质基本结构——核小体中的重要组成部分,其N末端氨基酸残基可发生乙酰化等共价修饰。组蛋白的乙酰化是一可逆的动态过程,而其稳定状态的维持则是多种组蛋白乙酰基转移酶(HATs)和去乙酰基酶(HDACs)共同作用的结果。这种可逆的乙酰化修饰作用可使染色质结构发生动态的改变,并对基因的转录产生相应的影响。     

激活FXR抑制MRL/lpr狼疮小鼠肝损害的研究

 目的:观察法尼酯衍生物X受体（FXR）激活是否减轻MRL/lpr狼疮小鼠肝损害。方法:检测FXR在MRL/lpr狼疮小鼠及正常BALB/c小鼠肝脏的表达;观察BALB/c小鼠和鹅去氧胆酸（CDCA）激活FXR的MRL/lpr小鼠再以伴刀豆球蛋白A(ConA)诱导肝脏炎症反应后的肝脏酶学、炎症因子及病理学的变化。结果:FXR在MRL/lpr狼疮小鼠肝脏中低表达;ConA能在MRL/lpr小鼠诱导出较对照BALB/c小鼠更严重的肝损害;激活FXR减轻MRL/lpr狼疮小鼠ConA诱导的肝脏炎症损伤,并减少一系列炎症因子的释放。结论: CDCA激活FXR 后,能减轻狼疮小鼠肝脏损害。FXR可能是系统性红斑狼疮肝损害的一个保护性因素,激活FXR可能成为狼疮肝损害的一个治疗途径。     

Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用北大核心CSCD

目的探讨Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠的保护作用机制。方法 MRL/lpr狼疮小鼠20只随机分为MRL/lpr对照组、5 mg/kg Y-27632处理组,每组10只;野生型对照组C57BL/6小鼠10只。采用ELISA检测各组小鼠血清、脾脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,ELISA检测血清核因子κB(NF-κB)相关炎症因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;采用Western blot法检测各组小鼠脾脏组织中硫氧还蛋白结合蛋白(Txnip)/硫氧还蛋白(Trx)、丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)相关蛋白胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)和p38MAPK以及NF-κB的水平;Western blot法检测各组小鼠脾脏T淋巴细胞Txnip、p38MAPK、NF-κB蛋白水平;ELISA检测T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平。结果 Y-27632提高MRL/lpr狼疮小鼠血清及脾脏组织SOD水平;降低血清及脾脏组织MDA水平;降低血清、脾脏组织和脾脏T淋巴细胞上清液IL-6、IL-1β、TNF-α水平;抑制脾脏和脾脏T淋巴细胞Txnip、MAPK相关蛋白ERK、JNK和p38MAPK以及NF-κB表达,增加Trx含量。结论 Rho激酶抑制剂Y-27632对MRL/lpr狼疮小鼠有保护作用。     

干扰素γ抑制IL-13对成纤维细胞的纤维化作用

 目的：研究干扰素γ（IFN-γ）抑制白细胞介素13（IL-13）对成纤维细胞纤维化作用的影响。方法：将成纤维细胞分为实验组和空白对照组,实验组加入IFN-γ（4×105 U/L）和IL-13（100 μg/L）,共同作用24、48和72 h后,分别用羟脯氨酸法、RT-PCR和Western blotting检测成纤维细胞分泌胶原蛋白、I型胶原α1(Col 1A1)mRNA表达和I型胶原蛋白的表达水平。另外对比空白对照组、IFN-γ组、IL-13组和IFN-γ+IL-13组72 h后Col1A1 mRNA表达和I型胶原蛋白的表达水平。结果：MTT结果表明IFN-γ浓度增加到4×105 U/L后可显著抑制成纤维细胞的增殖（P<0.01）。羟脯氨酸法检测显示48 h和72 h实验组成纤维细胞分泌的胶原蛋白含量显著低于空白对照组（P<0.05）;RT-PCR分析结果揭示48 h和72 h实验组的Col1A1 mRNA表达水平显著低于空白对照组（P<0.05）;Western blotting检测也进一步证实了48 h和72 h实验组成纤维细胞分泌I型胶原蛋白的水平显著低于空白对照组。另外各因素组对比结果显示, 72 h后IFN-γ组Col1A1 mRNA和蛋白的表达水平显著低于空白对照组（P<0.05）,IL-13组显著高于空白对照组（P<0.05）,而IFN-γ+IL-13组显著低于显著低于其它组（P<0.01）。结论：IFN-γ可抑制IL-13对成纤维细胞的纤维化作用。     

姜黄素对小鼠心脏发育相关基因表达的影响及其表观遗传调控机制

目的 阐明姜黄素对心脏发育相关基因GATA4,MEF2C和Nkx2.5表达的影响,探讨其表观调控机制.方法 姜黄素处理新生鼠心肌细胞后,分别用ELISA,Western blot,real time RT-PCR和染色质免疫沉淀(ChIP)检测组蛋白乙酰化酶活性,组蛋白H3乙酰化修饰状态,GATA4,MEF2C和Nkx...     

健康者与狼疮患者骨髓间充质干细胞移植治疗MRL/lpr鼠的疗效比较

为了比较健康者及狼疮患者骨髓来源间充质干细胞(MSC)移植治疗MRL/lpr狼疮鼠的疗效,24只17周龄MRL/lpr狼疮鼠随机分为三组,健康者骨髓MSC治疗组(H-MSC)、SLE患者骨髓MSC治疗组(L-MSC)及PBS对照组(PBS)。分别给予不同MSC或PBS治疗后观察8周,处死所有小鼠,评价移植疗效及检测相关免疫学指标。结果显示H-MSC组小鼠生存率显著高于PBS组。H-MSC组小鼠蛋白尿水平显著低于L-MSC组及PBS组。H-MSC组及L-MSC组小鼠肾脏总体病理学评分均显著低于PBS组,但两治疗组之间无显著差异。H-MSC组和L-MSC组小鼠肾小球补体IgG沉积水平均显著低于PBS组,且H-MSC组肾脏C3沉积水平显著低于L-MSC组和PBS组。H-MSC组及L-MSC组小鼠脾脏CD3+CD4+T淋巴细胞绝对数均显著低于PBS组。结果表明H-MSC及L-MSC移植治疗MRL/lpr狼疮鼠均有疗效,但H-MSC疗效优于L-MSC,MSC移植可能通过抑制CD3+CD4+T淋巴细胞发挥对MRL/lpr的治疗作用。