嗜肺军团菌主要毒力因子与细胞免疫反应

嗜肺军团菌是胞内的寄生菌,主要以细胞免疫为主,是引起社区获得性和医院内感染性肺炎的重要病原体,其致病性与毒力因子密切相关。Dot/IcmⅣ分泌系统是嗜肺军团菌的重要毒力因子,能诱发大量底物效应蛋白,激活免疫调控因子如NF-κB,调控嗜肺军团菌细胞内的生长繁殖。该细菌表面主要毒力因子如Mip蛋白、鞭毛蛋白和LPS脂多糖等,与嗜肺军团菌侵染和繁殖能力有关,在细胞免疫反应中具有重要作用。本文简要概述了嗜肺军团菌几个主要毒力因子、致病性以及与寄主免疫之间的相互关系。     

土壤中军团菌污染状况调查研究

目的 了解土壤中军团菌的污染状况和分离菌株的分子型别、对抗生素的敏感性和细胞内的生长能力。 方法 采集北京市公共场所土壤样本123份,采用军团菌GVPC选择性培养基培养法和荧光定量PCR检测法对土壤中军团菌进行检测分析。用小鼠巨噬细胞J774细胞对分离菌株进行菌株致病性研究;用脉冲场凝胶电泳（PFGE）技术对分离菌株进行分型分析;用E-test试纸药敏实验法对分离菌株进行红霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星5种抗生素敏感性检测。 结果 荧光定量PCR检测法在花鸟市场和夏季水库样本中检出军团菌,检出阳性率分别为50.00%和24.24%,平板培养法仅在夏季水库样本中检出军团菌,阳性率为6.06%。 分离的2株军团菌TR1和TR2均为嗜肺军团菌,血清型分别为5型和8型。 2株嗜肺军团菌均具有较高的细胞内生长能力,PFGE分型显示2株菌为不同带型,药敏实验显示2株菌均对红霉素、阿奇霉素、利福平、左氧氟沙星、莫西沙星5种常用抗生素表现敏感性。 结论 公共场所土壤中可检出嗜肺军团菌,且分离株有较高的细胞内生长能力,提示具有致病性,存在导致军团菌病散发流行或暴发的危险,应加强对公共场所土壤中军团菌的监测。      

含氯消毒剂对嗜肺军团菌等四种细菌杀灭效果观察

目的观察含氯消毒剂对嗜肺军团菌等四种细菌杀灭效果。方法采用悬液定量杀菌试验法进行了实验室检测。结果用含有效氯50 mg/L三氯异氰尿酸泡腾片水溶液作用10 m in,对悬液内嗜肺军团菌杀灭对数值为5.92;作用20 m in达到完全杀灭。含有效氯100 mg/L该泡腾片溶液作用10 m in,对悬液内铜绿假单胞菌杀菌对数值为5.56;作用20 m in,对大肠杆菌杀灭对数值为5.58。含有效氯200 mg/L该泡腾片溶液作用20 m in,对悬液内金黄色葡萄球菌的杀灭对数值为5.88。结论三氯异氰尿酸泡腾片水溶液对四种细菌杀灭效果较好,其中嗜肺军团菌对含氯消毒剂更敏感。     

问答

问：哪些抗菌药物对军团菌有效？答：军团菌为细胞内寄生菌,治疗本病应采用既有良好抗菌能力又能进入细胞内的抗生素。红霉素仍被国内认为是治疗本病的一线药物,在肺炎急性期主张静脉应用红霉素,国内剂量为1.2~2.0 g/d,国外多采用2~4 g/d。过早由静脉改为口服红霉素可导致军团病复发,一般认为红霉素疗程应满3周。     

实时荧光定量PCR及其在军团菌检测中的应用

军团菌是一种兼性胞内寄生菌,可入侵人体巨噬细胞,并在其中繁殖,是引起人类军团菌病的重要病原体。目前已确认军团菌有50多个种,70多个血清型,其中20多种与人类疾病相关[1]。由于军团菌种类繁多,常规的检测鉴定方法已不能满足需要。近年来,随着分子技术特别是PCR技术的发展,已有许多分子生物学方法被用于军团菌的检测,实时荧光定量PCR     

问答

<正>问:哪些抗菌药物对军团菌有效?答:军团菌为细胞内寄生菌,治疗本病应采用既有良好抗菌能力又能进入细胞内的抗生素。红霉素仍被国内认为是治疗本病的一线药物,在肺炎急性期主张静脉应用红霉素,国内剂量为1.2~2.0 g/d,国外多采用2~4 g/d。过早由静脉改为口服红霉素可导致军团病复发,一般认为红霉素疗程应满3周。     

荧光环介导恒温扩增技术检测嗜肺军团菌方法的建立

目的探讨利用环介导恒温扩增技术(LAMP)建立可以准确快速检测嗜肺军团菌的方法。方法选取嗜肺军团菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞杆菌、大肠埃希氏菌、阪崎肠杆菌、单核细胞增生李斯特氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、副溶血性弧菌菌株,根据嗜肺军团菌毒力mip基因的6个特殊区域,使用Primer Explorer Version 4软件设计LAMP引物(mip-1、mip-2、mip-3),提取病原菌基因组DNA进行LAMP,评价其特异性、最低检测限和稳定性。结果筛选出mip-3引物在测定嗜肺军团菌的LAMP反应体系中扩增约10min出峰且峰值较高;非嗜肺军团菌菌株没有扩增反应;LAMP检测限可达100fg/μL;mip-3引物在10次重复检测中几乎同时出峰,稳定性良好。结论建立的LAMP检测方法具有特异性强、稳定性高特点,能快速、准确检测出嗜肺军团菌,具有较大的推广及应用前景。     

3例重症嗜肺军团菌社区获得性肺炎患者的病原学诊断分析

目的介绍嗜肺军团菌引起社区获得性肺炎(CAP)的快速、特异实验室诊断方法。方法回归性分析2018年5月至9月确诊为重症嗜肺军团菌CAP的3例患者的临床资料。分别检测患者急性期及恢复期嗜肺军团菌血清抗体,PCR扩增嗜肺军团菌基因,体外快速免疫层析法检测尿中嗜肺军团菌抗原。取患者急性期痰标本进行细菌培养,应用常规方法分离鉴定细菌。结果 3例患者皆高热(39.4～40.3℃)、CRP升高、LDH升高、血小板下降、低钠血症、腹泻和咳嗽,提示有军团菌感染。嗜肺军团菌尿抗原和(或)PCR检测确认临床拟诊,证实患者为嗜肺军团菌感染。启动喹诺酮类药物治疗后,患者病情好转。结论根据"高热、CRP升高、LDH升高、血小板下降、低钠血症和咳嗽"组成的6项指标对患者进行拟诊,进行嗜肺军团菌尿抗原和PCR检测组合的快速病原学试验进行确认,尽快启动靶向抗生素治疗,是成功诊治嗜肺军团菌引起的重症肺炎的关键。     

二溴海因对嗜肺军团菌杀灭效果及其影响因素的实验研究

目的研究二溴海因对嗜肺军团菌杀灭效果及其影响因素。方法采用悬液定量杀灭试验方法进行实验室观察。结果用含有效溴200 mg/L的二溴海因消毒液作用10 m in和含有效溴400 mg/L的二溴海因消毒液作用2.5 m in,对悬液内嗜肺军团菌均可达到完全杀灭。消毒液的温度为10℃时对二溴海因杀灭嗜肺军团菌的效果有轻度影响;菌悬液内含体积分数50%小牛血清对二溴海因杀灭嗜肺军团杆菌的效果基本无影响;消毒液的pH值在9.0~5.0范围内,基本不影响二溴海因的杀菌效果。结论二溴海因对悬液内嗜肺军团菌有很好杀灭效果,受有机物影响较小,pH值允许范围较宽。     

军团菌选择性分离培养基及其实用性比较研究

目的探讨与改进嗜肺军团菌选择性分离培养基及其临床实用性评价。方法在BCYEα基础培养基中添加3种不同抗生素组合:CCCV、DGVP(含自配特种染料)和GVPC,以不含抗生素的BCYEα平板作对照,采用菌落计数法比较添加3种不同抗生素和染料的选择性分离平板对嗜肺军团菌生长的影响,同时比较3种选择性分离平板对空调冷凝塔水中嗜肺军团菌的分离率。结果在BCYEα DGVP和BCYEα GVPC平板上菌落计数(菌液稀释度在105~107之间)和BCYEα平板结果相类似,差异无统计学意义(P>0.05)。在BCYEα CCCV平板上生长菌落数只有前3种平板的1/2,差异有统计学意义(P<0.05)。从9个中央空调冷凝塔水中分离嗜肺军团菌,用BCYEα DGVP和BCYEα GVPC平板分离出5株嗜肺军团菌,而BCYEα CCCV平板仅分离出2株,不加抗生素的BCYEα平板未分离出军团菌。结论常规用BCYEα CCCV平皿对杂菌有较强的抑制作用,但对嗜肺军团菌亦有一定抑制作用,因而在实际应用中降低了嗜肺军团菌的分离率;BCYEα DGVP和BCYEα GVPC平皿(自制)对嗜肺军团菌的抑制作用微弱,而对杂菌有较强的抑制作用,提高了嗜肺军团菌的分离率。     

嗜肺军团菌和大肠杆菌对过氧乙酸抗性比较的试验研究

摘要 目的通过过氧乙酸对嗜肺军团菌和大肠杆菌的定量杀灭试验,比较其对消毒剂的抗性。方法 采用悬液定量杀灭试验,比较过氧乙酸对两种细菌的杀灭效果。结果 100 mg/L过氧乙酸作用10 min,可有效杀灭悬液内大肠杆菌;20 mg/L过氧乙酸作用2.5 min,可有效杀灭悬液内嗜肺军团菌。结论 嗜肺军团菌对过氧乙酸的抗性远低于大肠杆菌,用大肠杆菌为指示菌评价过氧乙酸的消毒效果可用于对嗜肺军团菌的评价。     

乌梅、金银花、忍冬藤对嗜麦芽窄食单胞菌的抑菌作用

目的探讨乌梅、金银花、忍冬藤体外抑制嗜麦芽窄食假单胞菌的作用。方法选用纸片扩散法筛选对环丙沙星等12种抗菌药物全耐药的嗜麦芽窄食假单胞菌菌株;选用MH琼脂稀释法测定乌梅、金银花、忍冬藤对嗜麦芽窄食假单胞菌的抗菌效果,比较3种中药的最低抑菌浓度(MIC)、抑制50%受试菌所需MIC(MIC_(50))、抑制90%受试菌所需MIC(MIC_(90))。结果本研究共筛选出对环丙沙星等12种抗菌药物全部耐药的嗜麦芽窄食假单胞菌菌株30株;乌梅、金银花、忍冬藤对耐药嗜麦芽窄食假单胞菌均有一定的抑菌作用,其中乌梅抑菌作用较强。结论乌梅、金银花、忍冬藤对嗜麦芽窄食假单胞菌均有不同程度的抑菌作用,其中乌梅的抑菌作用最强,提示中药在耐药菌治疗的研究价值值得进一步研究。     

非发酵菌的临床分布及耐药性分析

目的了解2002-2005年本院非发酵菌的分布及耐药性分析，为临床合理选用抗生素提供依据。方法细菌鉴定、药敏实验检测采用VITEK-32全自动微生物分析仪。结果4年间非发酵菌的检出菌株为422株，其中以铜绿假单胞菌为最多（70．9％），其次为不动杆菌（14．9％）和嗜麦芽假单胞菌（6．4％）。非发酵菌在痰液中分离率最高（65．6％）。亚胺培南和头孢他啶对铜绿假单胞菌敏感率最高；头孢唑林和头孢曲松对铜绿假单胞菌的敏感率最低；复方新诺明对嗜麦芽假单胞菌的敏感率最高，其他抗生素敏感率较低；不动杆菌敏感率以哌拉西林／他唑巴坦和亚胺培南偏高。结论非发酵菌为医院感染的主要致病菌，且对抗菌药物呈多重耐药，含酶抑制剂复方型抗菌药物、亚胺培南和头孢他啶为治疗非发酵菌感染的首选药物。     

三例重症嗜肺军团菌社区获得性肺炎患者病原学诊断报道

目的 介绍嗜肺军团菌引起社区获得性肺炎的快速、特异实验室诊断方法。 方法 回归性分析2018年5月至2018年9月CAP确诊为重症嗜肺军团菌社区获得性肺炎3位患者临床资料。分别检测患者急性期及恢复期嗜肺军团菌血清抗体。应用聚合酶链反应(PCR)分别扩增嗜肺军团菌基因。应用体外快速免疫层析法检测尿中嗜肺军团菌抗原。取患者急性期痰标本进行细菌培养，应用常规方法分离鉴定细菌。 结果 3例患者皆有高热（39.4-40.3℃）、CPR升高、LDH升高、血小板下降、低钠血症、腹泻和咳嗽，提示有军团菌感染。嗜肺军团菌尿抗原和（或）PCR检测确认了临床拟诊，证实患者为嗜肺军团菌感染。启动喹诺酮类药物治疗后，3位患者病情均好转。结论 根据“高热、CPR升高、LDH升高、血小板下降、低钠血症和咳嗽”组成的6项指标对患者进行拟诊，快速病原学实验进行确认，尽快启动靶向抗生素治疗，是成功诊治嗜肺军团菌引起的重症肺炎的关键。     

非发酵菌肺部感染菌株分布及药敏分析

目的:分析非发酵菌肺部感染菌株分布及药敏性。方法:选取2018年1月～2019年1月收治的肺部感染患者108例,取所有患者新鲜痰液进行细菌培养,分析非发酵菌菌株分布及药敏性。结果:108例肺部感染患者62例为非发酵菌感染,占57.41%。62例非发酵菌肺部感染患者共检出80株病原菌,其中铜绿假单胞菌占比最高,为38.75%;洋葱伯克霍尔德菌占16.25%;产碱假单胞菌占7.50%;嗜麦芽窄食单胞菌占15.00%;鲍曼不动杆菌占17.50%;其他占5.00%。铜绿假单胞菌对阿卡米星抗菌药物敏感性最高,为87.10%;洋葱伯克霍尔德菌对哌拉西林/他唑巴坦抗菌药物敏感性最高,为84.62%;鲍曼不动杆菌对亚胺培南抗菌药物敏感性最高,为85.71%;嗜麦芽窄食单胞菌对磺胺甲噁唑/甲氧苄啶抗菌药物敏感性最高,为83.33%。结论:非发酵菌肺部感染菌株主要类型为铜绿假单胞菌、洋葱伯克霍尔德菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌,它们对临床常用抗菌药物的药敏性存在一定差异。     

非发酵菌致危重患者获得性肺部感染118例分析

目的　探讨我院ICU内危重患者非发酵菌致肺部感染的临床特征和对常用抗生素的敏感性。方法　对 118例ICU内危重患者非发酵菌所致的肺部感染的临床资料和细菌学药敏试验做回顾性分析。结果　 118例患者细菌培养提示主要非发酵菌为铜绿假单胞菌 70株 ,鲍曼氏不动杆菌 5 6株 ,脑膜脓毒金黄杆菌 5 2株 ,嗜麦芽假单胞菌 4 6株 ,88%为混合感染 ,细菌耐药性高 ,头孢哌酮 /舒巴坦、哌拉西林 /他唑巴坦为相对敏感抗生素。结论　非发酵菌致肺部感染多发生于有各种基础病、免疫低下、长期使用抗生素的老龄患者 ,细菌耐药性高 ,治疗应选用加酶抑制剂抗菌药物     

消毒因子对嗜肺军团菌杀灭效果的实验研究

目的观察三种常用化学消毒剂对嗜肺军团菌杀灭效果,为控制嗜肺军团菌感染传播提供消毒方法依据。方法采用悬液定量杀菌试验进行了实验室观察。结果在常温条件下,用含有效碘100 mg/L的碘伏消毒液,或含有效氯50 mg/L的含氯泡腾片溶液作用10 min,对悬液内嗜肺军团菌杀灭对数值达到5.0以上。用含36 mg/L二氧化氯消毒液,作用2.5 min,对悬液内嗜肺军团菌的杀灭对数值亦可达到5.0以上。在试验条件下,三种常用消毒剂均随着有效成分浓度的增加、作用时间的延长,杀菌效果逐渐递增。结论常用含碘和含氯消毒剂以及二氧化氯在较低浓度下,均可快速杀灭悬液内嗜肺军团菌,可在实际消毒中参考本研究参数使用。     

五种消毒剂杀灭军团菌效果观察

目的观察5种化学消毒剂对嗜肺军团菌杀灭效果及其对金属的腐蚀性。方法应用悬液定量杀菌试验和腐蚀性试验方法,对次氯酸钠等5种化学消毒剂杀灭嗜肺军团菌的效果及其对金属腐蚀性进行了实验室检测。结果用浓度74 mg/L二癸基二甲基氯化铵的水溶液作用5 min,用浓度为1 000 mg/L的苯扎溴铵水溶液作用15min,对悬液内嗜肺军团菌杀灭对数值均>5.0。用有效氯浓度500 mg/L的次氯酸钠溶液、金星消毒液和漂白粉溶液作用15 min,对悬液内嗜肺军团菌的杀灭对数值均>5.0。上述5种消毒剂在常用浓度下均对不锈钢金属片基本无腐蚀,对其他3种金属不同程度腐蚀。结论 2种季铵盐消毒剂和3种含氯消毒剂均在较低浓度下能有效杀灭悬液内嗜肺军团菌,均对不锈钢基本无腐蚀性。     

临床分离铜绿假单胞菌的耐药性分析

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌的耐药性及变化趋势。方法对2000年~2004年分离出的1405株铜绿假单胞菌选用16种抗生素采用K irby-Bauer纸片扩散法进行药敏试验,按美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)标准判断。结果铜绿假单胞菌最敏感的抗生素为美罗培南(总耐药率为15.3%),抗菌作用最差的抗生素为头孢曲松(总耐药率为64.1%)。铜绿假单胞菌对抗生素的耐药性呈逐年上升的变化趋势。结论加强耐药性监测,合理应用抗菌药物十分重要。     

亚胺培南耐药非发酵菌流行进展及耐药谱分析

[目的]了解亚胺培南耐药非发酵菌在我院的流行进展及对其他常用抗菌药物的耐药性，为临床合理选用抗生素提供参考。[方法]全部细菌用ATB Expression鉴定到种，铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌药敏采用纸片扩散法，统计软件为WHONET5；嗜麦芽窄食单胞菌药敏采用ATB配套的药敏卡。[结果]4年来我院铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药性有逐年增长趋势（χ^2=13．44，P〈0．05）；鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药性变化不明显，耐药率平均为2．4％；对铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌亚胺培南耐药株体外抗菌活性均较强的是头孢哌酬／舒巴坦、环丙沙星，其他抗生素耐药率均大于50％；对嗜麦芽窄食单胞菌耐药率最低的抗生素仍是复方磺胺（9．34％），其次是环丙沙星（25．2％）、复方替卡西林（43．0％）。[结论]近年来铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药有升高趋势，值得密切关注；亚胺培南耐药的非发酵菌多重耐药严重，尤其对β-内酰胺类抗生素和氨基糖苷类；对嗜麦芽窄食单胞菌最为有效的抗生素仍是复方磺胺，亚胺培南耐药非发酵菌经验用药可选头孢哌酮／舒巴坦或环内沙星，但应根据药敏结果随时调整用药。