芍药苷治疗重症急性胰腺炎的实验研究

目的观察芍药苷对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠的治疗效果及对核因子kappaB(NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达的影响。方法 SD大鼠40只随机分为5组:正常对照组(A组)、急性胰腺炎(AP)模型组24h点(B组)、AP模型组72h点(C组)、芍药苷治疗组24h(D组)和芍药苷治疗组72h(E组),每组8只。采用L-精氨酸腹腔内注射的方法诱发SAP模型,造模后立即灌胃生理盐水(B、C组)、芍药苷溶液(D、E组),分别于造模后24、72h时间点处死各组大鼠。采血检测血清淀粉酶、TNF-α、IL-6;取胰腺组织分2份,HE染色行光镜检查、WesternBlot法检测NF-κBp65蛋白表达。结果造模24h后与A组比较,B、D组大鼠血清淀粉酶均升高(P均<0.05),但D组淀粉酶水平明显低于B组(P<0.05);造模后72h,C、E组血清淀粉酶水平均下降至接近A组水平(P均>0.05)。D、E组较同时间点B、C组的病理改变和病理学评分均明显减轻(P均<0.05)。血清TNF-α和IL-6的水平分别为D组:(10.45±1.90)pg/ml和(610.38±106.19)pg/ml,E组:(9.93±1.63)pg/ml和(598.13±83.77)pg/ml;均明显低于同时间点的B组[(20.53±4.16)pg/ml,(1255.75±118.82)pg/ml,P均<0.05]与C组[(23.85±5.59)pg/ml,(1366.33±163.16)pg/ml,P均<0.05]。D、E组较同时间点B、C组NF-κBp65/β-actin的比值明显减少[D组与B组相比,(0.23±0.044)vs(0.71±0.029),P<0.05;E组与C组相比,(0.04±0.006)vs(0.65±0.026),P<0.05]。结论芍药苷对SAP大鼠治疗作用的机制可能与其抑制NF-κB活化,在整体水平上抑制细胞因子基因表达,使机体免受过量细胞因子的损伤等因素有关。     

重型再生障碍性贫血患者树突细胞亚群及其与淋巴细胞转录因子T-bet表达的相关性

目的 探讨树突细胞(DC)亚群和淋巴细胞转录因子T-bet、GATA-3表达在获得性重型再生障碍性贫血(SAA)患者免疫失衡中的意义.方法 采用流式细胞术检测29例SAA患者及16名健康人外周血DCI(HLA-DR+Lin-CD11c+)、DC2(HLA-DR+Lin-CD123+)数值及比例,半定量RT-PCR检测外周血T-bet mRNA和GATA-3 mRNA表达,ELISA法检测血浆IFNγ、IL-4水平.结果 SAA初治组、恢复组DC1占外周血单个核细胞比例分别为(0.44±0.24)%、(0.73±0.30)%,明显高于正常对照组[(0.29±0.10)%,P<0.05].三组DC2分别为(0.18±0.14)%、(0.28±0.20)%、(0.29±0.13)%,初治组低于对照组(P<0.05).SAA初治组、恢复组DC1/DC2比值分别为3.45±2.71、2.90±0.95,明显高于对照组(1.15±0.56),初治组与恢复组DC1/DC2比值差异无统计学意义(P>0.05).SAA初治组、恢复组及对照组T-bet的相对表达量分别为0.37±0.07、0.20±0.07、0.17±0.05,初治组明显高于恢复组和对照组(P<0.05).三组中GATA-3的相对表达量差异无统计学意义(P>0.05).初治组T-bet/GATA-3比值为0.72±0.13,明显高于恢复组(0.33±0.08)和对照组(0.35±0.11).初治组血浆IFNγ/为(50.9±1.1)ng/L,明显高于恢复组[(49.7±0.9)ng/L]和正常对照组[(49.7±0.7)ng/L].T-bet表达与DC1/DC2比值、IFNγ水平呈显著正相关(r=0.445和r=0.402,P<0.01).结论 DC1/DC2和T-bet/GATA-3比值失衡可作为判断SAA患者免疫状态的指标.T-bet的相对表达量与SAA患者的病情有关,病情好转后T-bet/GATA-3恢复平衡.SAA患者DC亚群恢复迟于血常规恢复,因此不可过早停用免疫抑制剂.     

心肌缺血再灌注损伤小鼠E1A激活基因阻遏子基因表达及其对心肌的保护作用

目的探讨心肌缺血再灌注损伤(myocardial ischemia/reperfusion injury,MIR)小鼠E1A激活基因阻遏子基因(cellular repressor of E1A-stimulated gene,CREG)表达变化,及其对损伤心肌的保护作用。方法 CREG基因半敲除C57BL/6模型小鼠18只(A组),36只未敲除CREG基因C57BL/6小鼠随机分为B、C组各18只,3组采用线栓法制备MIR模型。建模前B组皮下微渗透泵给予外源性重组CREG蛋白1.5mg/(kg·d),连续14d,A、C组给予等量生理盐水。MIR后2h各组均处死6只小鼠,采用Western blot法检测心肌CREG蛋白表达,反转录PCR法检测心肌CREG mRNA表达;MIR后12h各组均取6只小鼠检测左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左心室舒张末期容积(left ventricular end-diastolic volume,LVEDV)、左心室收缩末期容积(left ventricular end-systolic volume,LVESV),血清肌酸激酶(creatine kinase,CK)、肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzyme,CK-MB)、谷草转氨酶(glutamic-oxaloacetic transaminase,GOP)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH);MIR 24h检测各组剩余6只小鼠心肌细胞凋亡指数。结果 A组心肌组织CREG蛋白、CREG mRNA表达(0.33±0.07、0.51±0.09)低于B组(0.85±0.19、0.97±0.10)、C组(0.67±0.15、0.99±0.05)(P0.05);C组CREG蛋白表达低于B组(P0.05),CREG mRNA表达与B组比较差异无统计学意义(P0.05);A组LVEF[(34.2±3.1)%]低于B、C组[(58.7±5.1)%、(41.4±4.5)%](P0.05),LVEDV[(121.8±14.0)μL]、LVESV[(77.2±9.0)μL]高于B组[(93.1±7.7)、(43.8±6.1)μL]、C组[(95.0±8.5)、(45.2±5.4)μL](P0.05),C组LVEF低于B组(P0.05);A组血清CK[(1 481.6±339.2)]u/L、CK-MB[(539.5±54.0)u/L]、GOP[(519.8±43.2)u/L]、LDH[(923.8±211.3)u/L]高于B组[(682.3±155.9)、(458.7±44.4)、(431.2±29.7)、(401.4±98.6)u/L]、C组[(874.0±193.5)、(489.1±47.1)、(460.0±32.5)、(600.5±115.8)u/L](P0.05),且C组各指标均高于B组(P0.05);A组心肌细胞凋亡指数[(57.21±2.26)%]明显高于B、C组[(16.94±1.75)%、(26.16±1.90)%](P0.05),C组高于B组(P0.05)。结论 CREG蛋白高表达对MIR心肌具有保护作用,其机制可能与减轻心肌细胞凋亡、降低心肌酶水平有关。     

臭氧联合玻璃酸钠对膝关节骨性关节炎患者膝关节功能及疼痛症状的改善效果观察

目的探讨臭氧联合玻璃酸钠对膝关节骨性关节炎患者膝关节功能及疼痛症状的改善效果。方法前瞻性选取自2013年1月到2017年1月期间收治的126例膝关节股性关节炎患者,随机分为A组、B组和C组各42例。A组采用玻璃酸钠膝关节腔内注射治疗,B组采用医用臭氧膝关节腔内注射治疗,C组采用臭氧联合玻璃酸钠膝关节腔内注射治疗。比较三组患者的临床疗效,同时比较三组患者治疗前后的视觉模拟评分法(VAS)、Lequesne评分的评估结果以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的检测结果。结果 C组的显效率为66.67%,总有效率为95.24%,均显著高于A组(28.57%、71.43%)和B组(26.19%、64.29%)(P0.05);三组患者治疗1个月后和治疗2个月后的VAS评分显著低于治疗前,而Lequesne评分显著高于治疗前(P0.05);C组治疗1个月后的VAS评分为(1.95±0.79)分,显著低于A组[(5.89±1.12)分],而Lequesne评分为(67.42±5.07)分,显著高于A组[(50.31±3.95)分](P0.05);C组治疗2个月后的VAS评分为(2.17±0.78)分,显著低于A组和B组[(5.89±1.12)分、(2.03±0.91)分],而Lequesne评分为(82.41±5.47)分,显著高于A组和B组[(63.19±5.08)分、(62.21±4.92)分](P0.05);三组患者治疗后的TNF-α和IL-6检测结果均显著低于治疗前(P0.05);C组治疗后的TNF-α为(24.09±7.29)pg/ml,IL-6为(48.15±11.51)pg/ml,均显著低于A组[(39.58±10.61)pg/ml、(77.85±19.64)pg/ml]和B组[(37.17±8.09)pg/ml、(73.19±16.19)pg/ml](P0.05)。结论臭氧联合玻璃酸钠可显著减轻膝关节骨性关节炎患者的疼痛症状,减轻炎症反应,改善膝关节的功能,具有良好的临床疗效。     

去白细胞输血对急性淋巴细胞白血病患者外周血Th1/Th2细胞平衡影响

目的:探讨去白细胞输血对急性淋巴白血病(ALL)患者外周血Th1/Th2细胞平衡的影响。方法:选取2016年3月至2017年8月在我院治疗的57例ALL患者,其中31例ALL患者接受常规输血治疗,纳入A组,26例患者接受去白细胞输血治疗,纳入B组,并选择同期在本院体检正常者36例为对照组;记录患者的基本临床特征,采用流式细胞术分析患者外周血Th1/Th2细胞比例;采用ELISA分析患者血清IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10水平;采用RT-PCR分析淋巴细胞T-bet和GATA-3的mRNA表达水平;采用Western blot分析淋巴细胞T-bet和GATA-3蛋白水平。结果:ALL患者外周血Th1/Th2比例与患者的年龄、风险等级明显相关(P0.05);A组患者在接受治疗后Th1/Th2比例变化与治疗前相比无统计学差异(P0.05);B组患者在接受治疗后Th1/Th2比例升高(P0.05)。A组ALL患者Th1和Th2细胞分泌的IL-2、IFN-γ、IL-4和IL-10水平变化无统计学差异(P0.05);B组ALL患者Th1细胞分泌的IL-2和IFN-γ水平均上升,Th2细胞分泌的IL-4和IL-10水平均下降,差异有统计学意义(P0.05)。通过RT-PCR和Western blot检测发现,A组ALL患者T-bet mRNA和T-bet蛋白水平低于对照组,B组ALL患者T-bet mRNA和T-bet蛋白水平高于A组,差异有统计学意义(P0.05)。A组ALL患者GATA-3 mRNA和GATA-3蛋白水平高于对照组,B组ALL患者GATA-3 mRNA和GATA-3蛋白水平低于A组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:去白细胞输血有助于改善外周血Th1/Th2细胞平衡,提高患者的免疫功能,这可能与T-bet和GATA-3表达密切相关。     

全反式维A酸对慢性阻塞性肺疾病患者外周血中Th17/Treg平衡的影响和意义

目的检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者外周血Th17细胞、Treg细胞分别占CD4+T细胞比例及全反式维A酸(ATRA)对其影响,探讨ATRA对COPD患者外周血Th17细胞、Treg细胞、Th17/Treg的影响及其对COPD的意义。方法收集COPD急性加重期患者23例(A组),COPD缓解期患者23例(B组),肺功能正常健康吸烟者23例(C组),肺功能正常健康非吸烟者23例(D组);分别抽取试验对象外周静脉血制备单个核细胞悬液(PBMC),分为空白对照组和ATRA干预组,应用流式细胞术检测所有对象ATRA干预前后Th17细胞、Treg细胞分别占CD4+T细胞的比例。结果 CD4+Th17细胞占外周血CD4+细胞比例:空白对照组均高于ATRA干预组(P<0.05),空白对照组中,A组[(6.95±2.33)%]高于B组[(5.21±1.37)%]、C组[(4.15±1.23)%]、D组[(2.84±1.21)%](P<0.05),B组高于C、D组(P<0.05),C组高于D组(P<0.05);ATRA干预组中,A组[(4.66±1.86)%]高于B组[(2.77±1.10)%]、C组[(3.10±1.28)%]、D组[(1.68±0.80)%](P<0.05),B组和C组相比差异无统计学意义(P>0.05),二者均高于D组(P<0.05);CD4+Treg细胞占外周血CD4+细胞比例:各ARTA干预组均高于空白对照组(P<0.05),空白对照组中,C组[(4.64±1.36)%]高于A组[(2.50±1.21)%]、B组[(3.46±1.29)%]、D组[(3.55±1.59)%](P<0.05),B组和D组相比差异无统计学意义(P>0.05),二者均高于A组(P<0.05),ATRA干预组中,C组[(6.28±1.44)%]高于A组[(3.26±1.44)%]、B组[(4.53±1.54)%]、D组[(4.45±1.94)%](P<0.05),B组和D组相比差异无统计学意义(P>0.05),二者均高于A组(P<0.05)。结论 Th17和Treg的失衡可能和COPD的发病机制相关,且Th17和Treg比例失衡程度和患者病情严重程度相关,ATRA在一定程度上能纠正Th17和Treg失衡。     

转录因子T-bet、GATA-3及炎性因子在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉中的表达及意义

[目的]探讨转录因子T-bet和GATA-3及炎性因子在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉(CRSwNP)筛窦黏膜组织中的表达及意义.[方法]选取2015年1月至2016年6月在本院治疗的CRSwNP患者52例(观察组),同时选取上颌窦或蝶窦囊肿患者50例作为对照组,采用免疫组织化学和RT-PCR检测黏膜组织中T-bet和GATA-3表达,采用ABC-ELISA法检测黏膜组织中白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-5和干扰素γ(IFN-γ)的水平.[结果]观察组筛窦黏膜组织IL-2、IL-4、IL-5和IFN-γ分别为(7.01±1.52)pg/mg、(3.60±0.87)pg/mg、(7.51±1.34)pg/mg和(8.70±1.67)pg/mg,明显高于对照组(P<0.05);观察组筛窦黏膜组织T-bet和GATA-3表达的阳性细胞数分别为(25.40±5.11)个和(17.52±4.08)个,明显高于对照组(P<0.05);观察组筛窦黏膜组织T-bet和GATA-3 mRNA相对表达量分别为(3.012±0.816)和(2.841±0.973),明显高于对照组(P<0.05).[结论]CRSwNP患者T-bet、GATA-3表达明显升高,同时Th1和Th2细胞因子表达明显升高,提示可能存在Th1和Th2型免疫反应.     

丹参酮ⅡA对腹主动脉缩窄大鼠肥厚心肌血管紧张肽受体及细胞内游离钙离子浓度的影响

目的 通过研究丹参酮ⅡA对腹主动脉缩窄的高血压大鼠肥厚心肌血管紧张肽Ⅱ受体(ATR)基因表达及细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]I)的影响,探讨丹参酮ⅡA逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制.方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为假手术组(A组)、手术组(B组)、丹参酮低剂量组(C组,10 mg·kg-1·d-1腹腔注射)、丹参酮高剂量组(D组,20 mg·kg-1·d-1腹腔注射)及缬沙坦组(E组,10 mg·kg-1·d-1灌胃).用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LVMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(MFD);采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分别检测AT1受体mRNA和蛋白的表达水平.利用激光共聚焦显微镜测定心肌细胞内游离Ca2 浓度的变化.结果 ①C、D组血压[(188±11、187±14)mm Hg]显著高于A组、E组[vs(117±8、136±15)mm Hg,P<0.01],C、D组与B组[(186±13)mm Hg]之间差异无统计学意义(P>0.05).②C、D组和E组LVMI、MFD均高于A组(P<0.05),显著低于B组(P<0.01).③B组的AT1R mRNA和蛋白的表达显著高于其他各组(P<0.01);C、D组间无差异(P>0.05),但均高于E组(P<0.05);C、D、E组的AT1R基因表达均未降至A组水平(P<0.05).④B组细胞内[Ca2 ]I明显高于其他各组(P<0.01);D组与A组之间差异无统计学意义(P>0.05);E组和C组仍高于A、D组(P<0.05).结论 丹参酮ⅡA可通过下调心肌细胞AT1基因表达、阻止心肌细胞的钙离子内流发挥逆转心肌肥厚的作用,该作用是非血压依从性的.     

丹参酮ⅡA对高血压肥厚心肌细胞游离钙离子及一氧化氮合酶基因表达的影响

目的 通过研究丹参酮ⅡA对腹主动脉缩窄的高血压大鼠肥厚心肌血管紧张肽Ⅱ受体(ATR)基因表达及细胞内游离钙离子浓度([Ca2 ]i)的影响,探讨丹参酮ⅡA逆转高血压左心室肥厚的分子生物学机制.方法 SD大鼠行腹主动脉缩窄术建立高血压左室心肌肥厚模型,术后4周将手术大鼠随机分为假手术组(A组)、手术组(B组)、丹参酮低剂量组(C组,10 mg·kg-1·d-1腹腔注射)、丹参酮高剂量组(D组,20 mg·kg-1·d-1腹腔注射)及缬沙坦组(E组,10mg·kg-1·d-1灌胃).用药8周后检测各组尾动脉压,取左心室组织检测左心室质量指数(LCMI)、病理切片HE染色测量心肌纤维直径(MFD);采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分别检测AT1受体mRNA和蛋白的表达水平.利用激光共聚焦显微镜测定心肌细胞内游离Ca2 浓度的变化.结果 ①c、D组的血压[(188±11、187±14)mm Hg]显著高于A、E组[Vs(117±8、136±15)EtlIn Hg,P＜0.01],C、D组与B组[(186±13)mm Hg]之间差异无统计学意义(P＞0.05).②C、D组和E组的LVMI、MFD均高于A组(P＜0.05),显著低于B组(P＜0.01).③B组的ATlR mRNA和蛋白的表达显著高于其他各组(P＜0.01);C、D组间差异无统计学意义(P＞0.05),但均高于E组(P＜0.05);C、D、E组的AT1R基因表达均未降至A组水平(P＜0.05).④B组细胞内[ca2 ]i明显高于其他各组(P＜0.01);D组与A组之间差异无统计学意义(P＞0.05);E组和C组仍高于A、D组(P＜0.05).结论 丹参酮ⅡA可通过下调心肌细胞AT1基因表达、阻止心肌细胞的钙离子内流发挥逆转心肌肥厚的作用,该作用是非血压依从性的.     

系统性红斑狼疮患者血清中白细胞介素-33的表达及其临床意义

目的分析系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中白细胞介素-33(IL-33)的表达水平及其与SLE疾病活动和临床特征的关系。方法选取2014年3月至2015年4月在广西医科大学第一附属医院风湿免疫科住院和门诊就诊的SLE患者70例(其中活动期患者50例,缓解期20例),均符合2009 SLICC修改的SLE分类标准。健康对照组30例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者与健康对照组血清中IL-33水平,同时收集一些与SLE相关的临床指标[包括血常规、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白、补体C3、补体C4、Ig G、Ig M、Ig A、一些自身抗体]并进行分析。结果 SLE患者血清IL-33水平[(987.0±336.2)pg/ml]显著高于对照组[(777.5±238.8)pg/ml](P<0.05);SLE活动期患者血清IL-33水平[(1 055.9±356.7)pg/ml]高于缓解期患者[(814.6±196.9)pg/ml](P<0.05),缓解期患者血清IL-33水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);皮疹组患者与非皮疹组患者、口腔溃疡组患者与非口腔溃疡组患者、脱发组患者与非脱发组患者、关节炎患者与非关节炎患者、狼疮性肾炎(LN)患者与非LN患者、溶血性贫血患者与非溶血性贫血患者、白细胞减少患者与非白细胞减少患者、血小板减少患者与非血小板减少患者、低补体C3患者与非低补体C3患者、低补体C4患者与非低补体C4患者血清IL-33水平差异均无统计学意义(P>0.05);SLE活动期患者中,抗SSB抗体阳性组血清IL-33水平[(1 315.4±306.7)pg/ml]高于抗SSB抗体阴性组[(998.9±344.3)pg/ml](P<0.05),抗核糖体P抗体阳性组血清IL-33水平[(897.5±291.5)pg/ml]低于抗核糖体P抗体阴性组[(1 152.9±362.2)pg/ml](P<0.05),抗双链DNA(ds DNA)抗体阳性组与阴性组、抗n RNP/Sm抗体阳性组与阴性组、抗Sm抗体阳性组与阴性组、抗SS-A抗体阳性组与阴性组、抗Ro-52抗体阳性组与阴性组、抗核小体抗体阳性组与阴性组组间差异无统计学意义(P>0.05);SLE患者血清IL-33水平与SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分呈正相关(r=0.375,P<0.05),与补体C4(r=-0.294,P<0.05)、白蛋白(r=-0.331,P<0.05)呈负相关,与24 h尿蛋白、抗ds DNA抗体定量、补体C3、ESR、CRP、Ig G、Ig M、Ig A无相关性(P>0.05)。结论血清IL-33水平在SLE患者中升高,并且与病情活动度相关,提示IL-33可能在SLE发病中起着重要作用。