胃癌组织中NF-κB和COX-2的表达及临床意义

目的：探讨核因子-κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的表达与胃癌发生发展的关系,为开展以NF-κB和COX-2为靶标的胃癌防治提供理论依据。方法：采用免疫组织化学染色法（SP法）检测对照组10例正常胃黏膜及实验组50例胃癌组织中NF-κB和COX-2的表达情况,分析它们在不同组织中的表达、相互关系及与胃癌的关系。结果：实验组NF-κB和COX-2的表达阳性率明显高于对照组（P<0.001）;NF-κB表达与胃癌淋巴结转移、分化程度有关（P<0.05）,COX-2 表达与淋巴结转移有关（P<0.05）;胃癌组织中NF-κB与COX-2的表达呈正相关关系,相关系数r=0.5238 （P<0.01）。结论：NF-κB和COX-2参与胃癌的形成,且与胃癌的侵袭、转移及预后有一定的关系。NF-κB与COX-2表达呈正相关,提示它们在胃癌的发生发展中起协同作用。     

胰腺癌组织中NFκ-B/p65、IKKβ的表达及临床意义

目的探讨NF-κB/p65、IKKβ在胰腺导管腺癌组织中的表达、临床意义和诊断价值。方法应用组织芯片和免疫组织化学的方法检测88例人胰腺导管腺癌组织和11例正常胰腺组织中NF-κB/p65及IKKβ的表达,并分析其与临床病理特征及患者预后的关系。结果在88例胰腺癌组织中,NF-κB/p65、IKKβ的阳性表达率分别为54.55%和46.59%,正常胰腺组织分别为18.18%和9.09%,且两者的表达与胰腺癌的临床分期、淋巴结转移相关(P0.05),与患者年龄、性别、肿瘤部位、大小、病理学分级无关(P0.05)。经Spearman秩相关检验分析NF-κB/p65与IKKβ之间表达呈正相关(r=0.378,P=0.000,P0.01)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,胰腺癌组织中NF-κB/p65与IKKβ表达阳性的患者生存时间缩短。Cox多因素相关分析表明NF-κB/p65和IKKβ是影响患者生存期的独立预后因素(分别P1=0.004,P2=0.041)。结论胰腺癌中NF-κB/p65、IKKβ的异常表达与临床分期、淋巴结转移相关,提示NF-κB信号转导通路可能在胰腺癌的发生、发展中发挥重要作用,两者可以为胰腺癌的早期诊断及预后的判断提供参考依据。     

螺杆菌感染与NF-κB p65蛋白表达相关性在人食管癌发生中的意义

目的研究人食管癌是否存在螺杆菌感染及其与NF-κB p65蛋白的关系,从而探讨在人食管癌发生中的意义。方法随机收集食管癌标本40例和正常食管标本10例,采用聚合酶链反应(PCR)扩增螺杆菌16S rRNA,随机选4例测序及同源比较。阳性者再扩增幽门螺杆菌(H.pylori, Hp)的特异基因相对分子质量(M_r)26×10~3的种特异性抗原和相关功能基因(CagA,VacA)。并采用免疫组化法检测食管癌组织中NF-κB p65蛋白的表达情况。结果32.5%(13/40)的食管癌组织中发现有螺杆菌16S rRNA基因存在,正常人食管组织无一例阳性。4例测序及同源比较,食管癌组织中螺杆菌序列与H.pylori的16S rRNA序列有99%～100%同源性。阳性标本均扩增出Hp特异基因M_r 26×10~3种特异性抗原,但仅2例扩增出CagA基因,3例扩增出VacA基因。免疫组化法染色显示,16S rRNA阳性的食管癌组织中NF-κB p65蛋白表达率为100%(13/13),而16S rRNA阴性食管癌组织表达率仅占18.5%(5/27),二者差异有统计学意义(P<0.01)。结论食管癌患者食管组织存在螺杆菌感染,该螺杆菌可能为Hp。螺杆菌感染导致食管黏膜NF-κB p65蛋白表达的增加,可能在食管癌生成中作为信号传导机制之一。     

RNAi沉默NF-κB p65对小鼠巨噬细胞细胞因子表达的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术在抑制NF-κB p65表达、调控LPS活化后巨噬细胞细胞因子表达中的应用.方法:利用阳离子脂质体将NF-κB p65小干扰RNA(siRNA)瞬时转染入Ana-1细胞,RT-PCR及Western blotting法检测其沉默效率,ELISA法检测LPS(1 mg/L)刺激下0 h、4 h、12 h和24 h Ana-1细胞培养上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10浓度.结果:NF-κB p65 siRNA转染24 h后,NF-κB p65在基因水平及蛋白水平表达均被明显抑制(P<0.05).RNA干扰组Ana-1细胞培养上清中细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6表达在相应时点内均较对照组明显降低(P<0.05),IL-10表达显著升高,在12 h和24 h差异显著(P<0.05).结论:体外实验初步证实RNAi技术能有效沉默小鼠巨噬细胞NF-κB p65基因的表达,下调其下游调控的促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6及上调抑炎症细胞因子IL-10的表达,从而抑制过度的炎症反应.     

pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体的构建及蛋白表达

目的克隆NF-κB(p65)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1/NF-κB(p65),并进行体外表达研究。方法提取B16总RNA,RT-PCR扩增出NF-κB(p65)基因片段,并将其克隆到pcDNA3.1载体中进行序列分析,转染到B16细胞中,Real-time PCR和Western-blot检测NF-κB(p65)的抗原性和表达量。结果获得高质量的B16总RNA,RT-PCR扩增出1.65kb的cDNA片段,成功构建了pcDNA3.1/NF-κB(p65)载体,Blast序列分析与GenBank中NM_009045.4完全一致。NF-κB(p65)重组蛋白具有抗原性,其基因和蛋白表达高于B16细胞组和空质粒pcDNA3.1组。结论成功构建pcDNA3.1/NF-κB(p65)表达载体和表达出具有NF-κB(p65)抗原性的重组蛋白。     

MALT淋巴瘤中bcl-10与NF-κB的表达及其意义探讨

目的研究在黏膜相关淋巴组织结外边缘区淋巴瘤（extranodal marginal zone Bcell lymphoma of mucosa associated lymphoid tissue,MALT淋巴瘤）中bcl-10核表达和NF-KB／p65活化的关系,探讨bcl-10核表达对MALT淋巴瘤发生的价值。方法收集不同部位MALT淋巴瘤74例（包括29例胃、16例肠、15例眼眶、8例肺、2例唾液腺、1例甲状腺、1例唇、1例胸腺和1例附睾）,用免疫组化EnVision法检测bcl-10和NF—κB／p65的表达。结果在74例MALT淋巴瘤中,bcl-10的阳性率为94．6％（70／74）,其中胞质阳性率为52．7％（39／74）,胞核阳性率为41．9％（31／74）;NF—κB／p65的阳性率为100％（74／74）,其中细胞质阳性率47．3％（35／74）,细胞核和细胞质共同阳性率占52．7％（39／74）。统计结果显示bcl-10核阳性与NF—κB核表达间有显著相关性（P〈0．001）。结论在MALT淋巴瘤中,bcl-10核表达对NF—κB活化有显著影响,可能是促进细胞增生、导致肿瘤形成的重要因素。     

辛伐他汀通过NF-κB p65通路影响食管癌细胞增殖

目的:探究辛伐他汀(SIM)通过NF-κB p65通路对食管癌Eca109细胞增殖的影响。方法:采用不同浓度(2、4、8、16和32μmol/L)SIM处理食管癌Eca109细胞,MTT法检测食管癌Eca109细胞活力的变化,平板集落形成实验检测食管癌Eca109细胞平板集落形成率,Western blot法检测食管癌Eca109细胞增殖相关蛋白细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、c-Myc及NF-κB p65通路中p65和IκB-α蛋白的表达水平,ELISA法检测食管癌Eca109细胞培养上清液中NF-κB p65通路下游调控因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)的水平。结果:与对照组比较,2、4、8和16μmol/L SIM对食管癌Eca109细胞活力的抑制呈浓度及时间依赖性(P<0.05),同一时点,16和32μmol/L SIM对食管癌Eca109细胞活力的抑制率无显著性差异(P>0.05)。16μmol/L SIM作用48 h时对食管癌细胞活力的抑制率为50.61%,接近半数抑制量IC50,因此采用该浓度及时间用于下游实验。与对照组比较,8...     

巨细胞病毒感染后雄鼠生殖细胞凋亡与睾丸NF-κB p65的表达研究

目的研究鼠巨细胞病毒（MCMV）感染对雄鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响,探讨睾丸组织核因子-κB亚基p65亲和肽（NF-κBp65）表达与生殖细胞凋亡的相关性。方法建立小鼠睾丸MCMV感染模型,设立实验组与对照组,分别于感染不同时段（小鼠一个生精周期内）,采用Hoechst33258染色法对小鼠睾丸组织生精小管及间质细胞进行凋亡检测,采用免疫组织化学sP法检测小鼠睾丸组织内NF-κB065的表达。结果睾丸间质细胞的凋亡率在MCMV感染的第1天开始增多（P〈0．05）,第4-6天达到高峰。第21天、第38天恢复正常。生精小管管周肌样上皮细胞的凋亡数在感染的第1天开始增多（P〈0．05）．第6—9天达到高峰（P〈0．001）,第21天、第38天也恢复正常。生精细胞的凋亡数在感染的第2天显著增加（P〈0．05）,第6天达到高峰（P〈0．001）;第14天起逐渐恢复正常。睾丸组织中NF-κBp65表达在MCMV感染第2天起开始增加（P〈0．05）,感染的第6—9天增至高峰（P〈0．001）,随感染时间延长逐渐下降,第21～28天恢复正常。结论MCMV急性感染可诱导睾丸生殖细胞凋亡,其凋亡程度与睾丸组织NF-κBp65表达呈正相关。提示NF-κBp65参与并调控了MCMV感染所致的生殖细胞凋亡,这可能是MC-MV感染的致病机制及机体抵御MCMV感染机制之一。     

胃癌组织中Cyr61和核因子-κB的表达与转移及预后的关系

目的 检测胃癌组织中富含半胱氨酸肝素结合蛋白61(Cyr61)和核因子-κB(NF-κB)的表达及其与临床病理特征及预后的关系.方法 应用逆转录聚合酶链反应技术验证和检测53例胃癌组织与11例非肿瘤胃黏膜中Cyr61基因的表达,并用免疫组织化学方法 (SP法)检测99例胃癌组织与25例非肿瘤胃黏膜中cyr61与NF-κB蛋白的表达情况.结果 胃癌原发灶和转移灶中Cyr61mRNA的阳性表达率分别为84.6%(22/26)、88.9%(24/27),明显高于非肿瘤胃黏膜组5/11(P值均＜0.05).非肿瘤胃黏膜、原发癌与转移癌组的基因表达量(2-△Ct)分别为(2.76±5.50)×10-5、(14.61±20.64)×10-5、(18.46±26.38)×10-5.胃癌原发灶、转移灶Cyr61 mRNA均高于非肿瘤胃黏膜(P值均＜0.05),转移灶与原发灶比较,差异无统计学意义(P＞0.05).99例胃癌中Cyr61及NF-κB蛋白的高表达率分别为56.6%(56/99)和55.6%(55/99),其表达水平与肿瘤浸润深度、脉管侵犯、淋巴结转移、远处转移及TNM分期呈正相关(P值均＜0.05),NF-κB还与肿瘤大小呈正相关(P＜0.05);Cyr61蛋白的表达水平与NF-κB呈正相关(P＜0.05);Cyr61与NF-κB蛋白高表达的病例平均生存时间和5年生存率明显低于低表达的病例(P值均＜0.05).结论 Cyr61和NF-κB阳性表达与胃癌的侵袭、转移密切相关,检测Cyr61和NF-κB的表达可作为判断胃癌生物学行为的重要参考指标.     

B细胞非霍奇金淋巴瘤中CD40和NF-κB表达及意义

目的 探讨B细胞非霍奇金淋巴瘤(non-hodgkinlymphoma,NHL)中CD40、NF-κB的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测69例B细胞NHL及22例淋巴结反应性增生组织中CD40、NF-κB的表达.B细胞NHL患者应用CHOP(环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、地塞米松)方案治疗6～8个周期.结果 CD40和NF-κB在B细胞NHL组织中阳性率分别为72.46%(50/69)(P<0.05)和59.42%(41/69)(P<0.001).CD40在Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ+Ⅳ期B细胞NHL中的阳性率分别为87.88%(30/33)和58.33%(20/36)(P<0.05);NF-κB在Ⅰ+Ⅱ和Ⅲ+Ⅳ期B细胞NHL中的阳性率分别为36.36%(12/33)和80.56%(29/36)(P<0.05).B细胞NHL组织中CD40与NF-κB的表达呈负相关(r=-0.443,P<0.01).结论 CD40阳性提示B细胞NHL侵袭性低,NF-κB阳性则提示B细胞NHL侵袭性高;CD40是一种提示预后良好的因子,而CD40-NF-κB信号途径对B细胞NHL预后提示的作用尚需进一步研究.     

槲皮素对脓毒症急性肺损伤大鼠肺组织NF-κB表达的影响

目的观察槲皮素对脓毒症相关急性肺损伤(ALI)大鼠的炎症信号转导通路NF-κB p65的影响。方法选用健康雄性Wistar大鼠36只,随机均分为4组:对照组、脂多糖(LPS)组、槲皮素低剂量组(30mg/kg),槲皮索高剂量组(50mg/kg),用LPS 10mg/kg溶于生理盐水2ml腹腔内注射,建立脓毒症ALI大鼠模型,对照组予等量生理盐水2ml腹腔注射,治疗组于造模前30min腹复腔注射槲皮素,所有实验动物于造模后24h应用10%水合氯醛4ml/kg腹腔注射进行麻醉,并处死。所有大鼠取肺组织进行苏木素-伊红(HE)染色,观察病理学改变并进行病理评分且对比,应用免疫组化及Western blot检测NF-κB p65在肺组织的表达。结果与对照组相比,LPS组的肺损伤明显,病理评分明显增加(P0.05);较LPS组,槲皮素治疗组肺组织HE病理染色明显改善,病理评分显著下降(P0.05),但两个治疗组之间病理评分无统计学差异。与对照组比较,LPS组的免疫组化及Western blot检测的NF-κB p65含量明显增高(P0.05),而槲皮素治疗组比LPS组NF-κB p65含量明显下降(P0.05),但两治疗组比较无明显差异。结论槲皮素对脓毒症ALI大鼠的肺脏保护作用可能与其抑制NF-κB p65的表达相关。     

小鼠肝癌淋巴道转移细胞系中NF-κB基因的表达及意义

目的 探讨NF-κB基因表达在小鼠肝癌淋巴道转移细胞系中的表达及意义.方法 采用RQ-PCR方法检测NF-κB基因在肝癌淋巴道低转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-P和高转移潜能的小鼠肝癌细胞系Hca-F中的表达水平.结果 NF-κB基因在Hca-P和Hca-F细胞系基因表达分别为(1.41±0.48)×10~(-3)、(2.95±0.22)×10~(-3),Hca-P和 Hca-F之间,NF-κB基因表达差异有统计学意义 (P<0.01),其随转移潜能的增高,表达水平增加.结论 NF-κB基因表达水平增高与肝癌淋巴道侵袭转移相关.     

TNF-α抗体对Sp1和NF-κ B p65在兔粘连腹膜表达的影响

目的探讨TNF-α抗体对实验兔腹膜损伤粘连修复演变过程中核转录因子Sp1和NF-κB p65活化的影响。方法实验兔随机分3组:正常对照组(不做任何处理)、模型组(腹膜腔内注入生理盐水)、TNF-α抗体组(造模后后腹膜腔内注入TNF-α抗体),每组30只,共90只。建立实验兔腹膜回盲部手术动物模型,ELISA检测腹水Sp1、NF-κB p65的表达,Masson染色检测Sp1在腹膜的表达、免疫组化SP法检测NF-κB p65在腹膜的表达,监测腹膜粘连分级变化。结果 TNF-α抗体导致Sp1和NF-κB p65在损伤腹膜和腹水中的表达水平显著减低(0.01),并有效减轻腹膜粘连形成。结论 TNF-α抗体有效减轻腹膜粘连形成可能与其下调Sp1和NF-κB p65表达相关。     

妊娠滋养细胞疾病中NF-κBp65和IκBα的表达及临床意义

目的:分析核转录因子κB p65(NF-κBp65)和核转录因子κB抑制蛋白α(IκBα)在正常早孕绒毛及妊娠滋养细胞疾病中表达的差异性,以及与妊娠滋养细胞肿瘤(GTN)(包括侵蚀性葡萄胎和绒毛膜癌)患者年龄及临床分期的关系。并探讨两者在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的相关性。方法:采用免疫组化方法(SP法)检测20例正常早孕绒毛组织、30例葡萄胎组织、13例侵蚀性葡萄胎和15例绒毛膜癌中NF-κBp65和IκBα的表达情况。结果:NF-κBp65在正常早孕绒毛组与侵蚀性葡萄胎组、正常早孕绒毛组与绒毛膜癌组、葡萄胎组与侵蚀性葡萄胎组、葡萄胎组与绒毛膜癌组之间阳性表达率比较差异均具有统计学意义(P=0.013,0.018,P=0.026,0.035,P<0.05);IκBα在正常早孕绒毛组与侵蚀性葡萄胎组、正常早孕绒毛组与绒毛膜癌组、葡萄胎组与侵蚀性葡萄胎组、葡萄胎组与绒毛膜癌组之间阳性表达率比较差异均具有统计学意义(P<0.01)。NF-κBp65和IκBα在GTN中的表达与临床分期有关(P=0.043,0.042,P<0.05),与患者年龄无关。NF-κBp65与IκBα在GTN中呈负相关(r=-0.403,P=0.034,P<0.05)。结论:NF-κBp65上调、IκBα的下降或缺失可能与滋养细胞肿瘤的发生发展以及侵袭、转移有关,NF-κBp65、IκBα两者在妊娠滋养细胞肿瘤组织中的表达呈负相关。     

NF-κB/IκB信号通路在乙型肝炎病毒相关性肾炎肾组织中的表达

目的探讨核转录因子-κB(NF-κB)/IκB在乙型肝炎病毒相关性肾炎(HBVGN)肾组织中的表达及其在HBVGN发病机制中的可能作用。方法采用免疫组化染色法,检测42例HBVGN、20例原发性膜性肾病及5例正常肾组织中NF-κBp65、IκB-α蛋白的表达。结果NF-κBp65蛋白在HB-VGN组织中的表达,明显高于在原发性膜性肾病(P<0.01)及正常肾组织(P<0.05)中的表达,且细胞核和细胞质中都可检测到NF-κBp65的表达;相反IκB-α在HBVGN组织中的表达低于原发性膜性肾病肾组织(P<0.05)。结论HBVGN肾组织可能有IκB-α蛋白降解及NF-κB核转移。NF-κB/IκB可能参与了肾组织的病理损害过程。     

Toll样受体4、NF-κB在溃疡性结肠炎中的表达

目的:研究Toll样受体4、NF-κB在溃疡性结肠炎(UC)中的表达变化,探讨两者在UC发病机制中的作用。方法:收集UC病例及非UC对照结肠镜活检标本或手术标本。采用免疫组化和RT-PCR技术,检测非UC对照及UC患者肠黏膜TLR4、NF-κBp65的表达水平,并做统计学分析。结果:RT-PCR结果显示,TLR4、NF-κBp65在UC组织中的表达情况显著高于在非UC对照组织的表达(TLR4:143.658±33.870,30.531±8.442,t=24.253,P0.01;NF-κBp65:185.773±37.625,23.810±7.038,t=31.664,P0.01)。免疫组化染色显示TLR4、NF-κB在UC组结肠黏膜表达增强。结论:TLR4、NF-κBp65在UC中表达高度上调,推测它们可能参与了UC的发病过程。     

芝麻素通过调节p38和NF-κB激活抑制肥大细胞炎症细胞因子释放

目的观察芝麻素对肥大细胞炎症细胞因子释放的影响并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HMC-1细胞,PMA和A23187体外诱导HMC-1细胞激活,ELISA和Western blot方法观察芝麻素对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)释放及p38、NF-κB p65活化的影响。结果 PMA和A23187能激活HMC-1细胞,促进p38磷酸化和NF-κB p65核转位,提高TNF-α和IL-6合成和释放(P0.05)。芝麻素高(100μg/L)、中(50μg/L)质量浓度明显抑制HMC-1细胞TNF-α、IL-6合成和释放,降低p38磷酸化,减少NF-κB p65核转位(P0.05)。p38和NF-κB抑制剂都能明显抑制TNF-α、IL-6的合成和释放(P0.05)。结论芝麻素通过调节p38和NF-κB激活抑制肥大细胞炎症细胞因子释放。     

丙泊酚抑制NF-κB p65的磷酸化缓解葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应

为探讨丙泊酚对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate, DSS)诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应的影响,构建DSS诱导的结肠炎小鼠模型,将小鼠随机分为5组:对照组、模型组、丙泊酚低剂量组、丙泊酚中剂量组和丙泊酚高剂量组。采用疾病活动指数评分检测小鼠体质量变化和结肠长度,H-E染色检测病理损伤程度并进行组织病理学评分,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(terminal dexynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)染色检测细胞凋亡情况,qRT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10 mRNA水平,ELISA检测IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-10水平,Western blotting检测p65、p-p65蛋白表达。结果显示,与对照组比较,模型组小鼠体质量显著降低(P0.05),结肠长度显著缩短(P0.05),病理学评分显著升高(P0.05),结肠细胞凋亡率显著增加(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平显著升高(P0.05),IL-10 mRNA水平显著降低(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P0.05),p-p65/p65比值显著升高(P0.05);与模型组比较,丙泊酚中、高剂量组小鼠体质量显著升高(P0.05),结肠长度显著增加(P0.05),病理学评分显著降低(P0.05),结肠细胞凋亡率显著降低(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA水平显著降低(P0.05),IL-10 mRNA水平显著升高(P0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著降低(P0.05),IL-10水平显著升高(P0.05),p-p65/p65比值显著降低(P0.05)。该研究提示,丙泊酚通过抑制NF-κB p65的磷酸化缓解DSS诱导的结肠炎小鼠病理损伤和免疫反应。