黄连细胞二步法悬浮培养生产黄连生物碱类成分的探索

为提高用植物细胞培养生产镒生代谢产物的单位产量，作者对黄连细胞采用二步法悬浮培养生产黄连生物碱进行了探索。结果显示：黄连细胞采用一步法悬浮培养６周，细胞干，鲜重产率分别为２０．９６ｇ／Ｌ和１７４．９２ｇ／Ｌ，增重约７００％，细胞中总生物碱含量为１４．７９ｍｇ／ｇ．ｃｅｌｌ ｄｗ，培养基中生物碱量为１２．９６ｍｇ／Ｌ，每升培养液共可收获生物碱３２３ｍｇ。采用先在生长培养基中培养３周，在合成碱量为１２     

长春花细胞大规模培养生产生物碱的研究现状

本文主要从通气状况，剪切力，流变学特征，培养方式，反应器的设计和放大等方面概述了近年来国外长春花细胞大规模培养生产生物碱的研究成果及存在的问题，试图为我国药用植物细胞大规模培养研究提供借鉴。     

黄连生物碱抗糖尿病机制的研究进展

黄连为中国传统中药，药理作用广泛，应用历史悠久。现代药理学研究新发现其具有治疗糖尿病及其并发症的作用，其有效成分为多种生物碱。对黄连及其生物碱抗糖尿病整体实验和分子水平上的研究工作进行了综述。提出阐明黄连生物碱作用的分子靶点及相关机制是未来研究的方向。     

芸香科植物飞龙掌血愈伤组织细胞培养物生物碱成分的研究

目的：为研究芸香料各亚科及属之间的亲缘关系及化学分类。方法：对药用植物飞龙掌血（Ｔｏｄｄａｌｉａａｓｉａｔｉｃａ）愈伤组织进行诱导生长和继代培养，收获培养７周的组织块，甲醇和乙酯提取物通过多次硅胶柱层析和ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶柱层析等方法进行生物碱等化学成分的分离与结构鉴定。结果：为采用药用植物飞龙掌血愈伤组织细胞培养的方法制备喹啉呋喃类药用生物碱提供依据。     

白花曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱活性成分合成

目的 研究白花曼陀罗细胞悬浮培养合成生物碱。方法 在MS液体培养基上悬浮培养细胞生产生物碱，以碳源、pH值、接种量等为影响因子进行研究。结果 蔗糖为最佳碳源，细胞接种量以鲜重1.5～2.0g／L、培养液初始pH值5．5～6．0对曼陀罗悬浮培养细胞生长和生物碱合成最有利，加入苯丙氨酸能促进生物碱的合成。结论 白花曼陀罗细胞悬浮培养能有效地合成生物碱。     

黄连中生物碱类成分抗溃疡性结肠炎的作用机制研究进展

黄连是一味常用中药,具有清热燥湿,泻火解毒等功效,其中的主要活性成分为小檗碱、药根碱、黄连碱、表小檗碱等生物碱。现代药理学研究表明,黄连具有抗菌、抗氧化、免疫调节等药理作用,广泛用于治疗细菌性痢疾、胃炎、溃疡性结肠炎等胃肠道疾病。近年来,含黄连的复方、黄连及其中的生物碱类成分在溃疡性结肠炎的治疗中取得一定进展。基于此,主要从抑制炎症反应、调节免疫失衡、肠道菌群-宿主互作调控以及维持肠黏膜屏障功能角度,系统分析和归纳黄连及其生物碱类成分的抗溃疡性结肠炎机制,从而为黄连及溃疡性结肠炎治疗药物的开发提供参考。     

黄连生长状况及生物碱含量的个体差异

报道了黄连Ｃｏｐｔｉｓ ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ Ｆｒａｎｃｈ．不同单株生长状况（叶片数、花茎数、根茎重、须根重、叶片重、花茎重）,生物碱（药根碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀、小檗碱）含量及叶片性状（裂片质地、花斑、光泽、叶形）的个体差异,为选育黄连良种提供了一些依据。     

黄连生物碱的提取纯化及降脂作用

目的：提取纯化黄连主要生物碱并研究其降脂作用。方法：采用乙醇浸泡、加酸加碱及大孔吸附树脂提取总生物碱,用萃取、柱层析及重结晶分离黄连生物碱。以高脂饲料喂养鹌鹑建立高脂模型,观察各用药组对鹌鹑血清TC、TG、LDL-C及HDL-C影响。结果：小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降低TC、LDL-C水平的作用。结论：小檗碱、黄连碱及巴马汀有明显降脂作用。     

高效毛细管电泳测定黄连配伍阿胶中黄连生物碱的含量

应用高效毛细管电泳测定黄连及黄连配伍阿胶药对中的黄连生物碱含量,保留时间在１５～２５ｍｉｎ之间,内标物是马钱子碱,缓冲液为００５ｍｏｌ／Ｌ的四硼酸钠（ｐＨ＝７０）、甲醇（８５∶１５）,实验结果表明,药对中黄连生物碱含量下降。     

电穿孔法基因转染悬浮细胞条件的优化

目的 以绿色荧光蛋白(GFP)为报告基因优化悬浮培养的白血病细胞的电穿孔转染条件。方法 通过控制电压、电容、细胞状态、温度及缓冲液等转染条件，采用不同条件组合后用电穿孔法将质粒GFP转入悬浮培养的人白血病细胞株K562和NB4，用流式细胞仪和荧光显微镜观察转染率。结果 (1)低电压、高电容能高效转染悬浮培养的人白血病细胞，细胞类型不同条件有所差异，K562细胞在250V、950μF得到最大转染率40．6％，NIM细胞在350V、950μF得到最大转染率32．9％。(2)良好的细胞生长状态能明显提高转染率。(3)温度和缓冲液中的血清成分对电穿孔效率影响不大。结论 电穿孔是一种高效的基因转染法，通过优化其条件，可提高转染率。     

中国红豆杉悬浮细胞高密度培养

采用３０ｇ／Ｌ起始糖浓度，通过在细胞对数生长后期补料的方法成功地在２５０ｍＬ摇瓶和１．５Ｌ搅拌式生物反应器中进行了细胞高密度培养，经２０ｄ培养，细胞干重超过２５ｇ／Ｌ。在反应器培养中，次生代谢产物紫杉烷的产量较低。通过高密度培养，明显增加了细胞量，还可以提高反应器中紫杉烷的产量。     

真菌诱导子对白鲜细胞产生白鲜碱能力的影响

目的：研究提高白鲜悬浮细胞产生白鲜碱能力的方法。方法：将7种真菌诱导子溶液各1mL分别在白鲜悬浮细胞培养的早、中、末期（第4d、第8d、第12d）加入,共培养至第15d,测定产生的白鲜碱的含量。结果：7种真菌诱导子均能提高白鲜悬浮细胞中白鲜碱的含量,在细胞培养的3个不同时期加入真菌诱导子,以末期加入促进白鲜碱产生的效果最显著,中期加入效果次之,早期加入效果最差。结论：加入真菌诱导子能有效地提高白鲜碱的产量,且与加入时间有关。     

表达vWF蛋白的重组BHK细胞的无血清培养

采用HADAMARD统计设计方法建立了适于重组BHK细胞培养和vWF蛋白表达的无血清培养基SFMA。用SFMA进行重组BHK细胞的批培养，细胞生长明显优于有血清培养(DMEM FBS(φPRS=0．05))和无血清培养基SFM-Ⅱ的培养，最大细胞密度可分别提高16．7％和40%。同时，在培养的96h，蛋白的表达水平比有血清培养提高了18．7%，SFMA维持培养48h的vWF蛋白的表达水平比SFM-Ⅱ提高了50％。     

培养细胞中间纤维表达的研究

应用角蛋白PKK_1、PKK_2、PKK_3、波状蛋白、结蛋白、神经纤维蛋白与胶质纤维酸性蛋白5类7种单克隆抗体研究食管上皮细胞、食管癌、肝癌、肺癌、人胚肺转化细胞、胃癌、星形胶质细胞瘤(BT_(420),BT_(325))、肌细胞、肺细胞及神经纤维细胞等11种培养细胞的中间纤维表达。结果表明,不同细胞具有不同的中间纤维表达的特异性。据此特异性可鉴定胶质细胞、神经细胞、间质细胞、肌细胞与上皮细胞的类型及鉴别正常细胞与肿瘤细胞系的性质与来源。PKK_3还可用于腺癌细胞检测。     

甲状腺细胞产生白细胞介素-6及其调节的研究

目的 研究碘化钠（ＮａＩ）、促甲状腺激素（ＴＳＨ）、白细胞介素－１（ＩＬ－１）、肿瘤坏死因了－α（ＴＮＦ－α）、地塞米松（ＤＥＸ）、肾上腺素等因子对Ｇｒａｖｅｓ病（ＧＤ）甲状腺细胞（ＴＥＣ）生成ＩＬ－６的影响。方法 以超敏ＥＬＩＳＡ方法,检测甲状腺培养细胞上清液中ＩＬ－６含量。结果 单层培养的ＴＥＣ能够产生高浓度的ＩＬ－６、ＴＳＨ（１０＾３ｍＵ／Ｌ）、ＩＬ－１（１０Ｕ／ｍｌ）、ＴＮＦ－α（１０＾－     

凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织的制备研究

目的 研究凹叶厚朴适用于细胞悬浮培养的愈伤组织.方法 通过对基本培养基(B5、MS和1/2MS)、外植体(茎段、顶芽和叶片)、激素浓度及组合进行筛选的方法进行厚朴愈伤组织诱导和继代研究.结果 B5为最适合厚朴愈伤组织诱导的基本培养基;顶芽是最佳诱导愈伤组织的材料;最适合厚朴愈伤组织诱导的培养基为B5+2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L 6-BA;最佳继代培养基为B5+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA,愈伤组织生长倍数达到2.87倍.结论 初步筛选出凹叶厚朴用于细胞悬浮培养的愈伤组织,为凹叶厚朴细胞培养奠定基础.     

无血清培养基中成釉细胞瘤细胞的生长特性

【目的】 研究成釉细胞瘤细胞在无血清培养基中的生长特性，建立成釉细胞瘤细胞的无血清培养法。【方法】 用Defined Keratinocyte-SFM（DK-SFM）无血清培养基和DMEM培养成釉细胞瘤细胞，观察细胞的生长特性、细胞形态和传代次数，流式细胞仪（FCM）测定S期细胞比率（SPF）和增殖指数（PI）。【结果】在DK-SFM培养基中，细胞传代6次，平均生长92d；细胞形态清晰，仅见少许散在的成纤维细胞生长：SPF值为12．3％～14．5％，PI值为11．6％～15．3％。在DMEM中，细胞传代3次，平均生长61d；细胞境界不清．并可见较多的成纤维细胞；SPF值为7．9％～9．2％，PI值为8．3％～9．6％。【结论】成釉细胞瘤细胞在DK-SFM无血清培养基中存活时间长，DK-SFM较DMEM更适合体外培养成釉细胞瘤细胞。     

无血清培养基中成釉细胞瘤细胞的生长特性

 【目的】 研究成釉细胞瘤细胞在无血清培养基中的生长特性，建立成釉细胞瘤细胞的无血清培养法。【方法】 用Defined Keratinocyte-SFM（DK-SFM）无血清培养基和DMEM培养成釉细胞瘤细胞，观察细胞的生长特性、细胞形态和传代次数，流式细胞仪（FCM）测定S期细胞比率（SPF）和增殖指数（PI）。【结果】在DK-SFM培养基中，细胞传代6次，平均生长92d；细胞形态清晰，仅见少许散在的成纤维细胞生长：SPF值为12．3％～14．5％，PI值为11．6％～15．3％。在DMEM中，细胞传代3次，平均生长61d；细胞境界不清．并可见较多的成纤维细胞；SPF值为7．9％～9．2％，PI值为8．3％～9．6％。【结论】成釉细胞瘤细胞在DK-SFM无血清培养基中存活时间长，DK-SFM较DMEM更适合体外培养成釉细胞瘤细胞。