超声波对实验性兔膝骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的:探讨超声波治疗对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的影响。方法:30只新西兰大白兔随机分为正常对照组、模型组和超声波治疗组,每组10只。将模型组和超声波治疗组的兔左膝于伸直位石膏固定6周制作KOA模型。造模后超声波治疗组实施超声波治疗2周。8周后取各组软骨观察膝软骨病理学形态改变、MMP-1表达的变化。结果:采用Mankin评分比较病理学形态改变,正常对照组与模型组、模型组与超声波治疗组间比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。软骨免疫组化MMP-1测定,正常对照组与模型组、模型组与超声波治疗组间比较,差异均有显著性意义(P<0.01)。结论:超声波能有效治疗膝骨性关节炎,其作用机制可能与减少软骨细胞MMP-1的含量而利于软骨细胞的修复有关。     

温阳益髓中药干预兔膝骨关节炎软骨基质金属蛋白酶的表达

背景：目前临床上关于温阳益髓中药治疗膝骨关节炎对软骨基质金属蛋白酶表达影响的研究还较少有报道。 目的：制作兔膝骨关节炎模型观察温阳益髓中药对软骨基质金属蛋白酶表达的影响。 方法：健康成年新西兰大白兔96只,随机选取72只采用石膏外固定方法制作兔膝骨关节炎模型。确定造模成功后再随机分为3组,模型组不做处理;中药治疗组每日灌胃方药提取液24 mL/kg,药物对照组每日灌胃葡立胶囊（盐酸氨基葡萄糖）24 mg/kg,1次/d,至造模成功后8周。另外24只新西兰大白兔作为空白对照。 结果与结论：PCR 方法定量分析骨关节炎模型组软骨组织中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶13表达水平均显著高于其他3组。中药治疗组及药物对照组中基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3及基质金属蛋白酶13的表达较模型组明显降低。说明温阳益髓中药治疗兔膝骨关节炎能够有效抑制兔骨关节炎软骨基质金属蛋白酶的表达。     

电针对实验性兔膝骨关节炎模型白细胞介素-1β和基质金属蛋白酶-1表达的影响

目的:观察电针治疗前后兔膝骨关节炎(KOA)模型关节冲洗液中细胞因子白介素-1 β(IL-1 β)和软骨中基质金属蛋白酶-1(MMP-1)表达的变化,探讨电针治疗KOA的作用机制.方法:将30只新西兰大耳兔随机分为正常组、模型组及电针组.正常组为对照组,模型组和电针治疗组采用左膝关节伸直位管型石膏固定6周制作KOA模型,电针治疗组电针治疗14d.分别观察各组兔造模结束和治疗后左膝关节冲洗液中IL-1 β含量变化,治疗后各组兔左股骨内侧髁软骨MMP-1表达的变化.结果:采用放免法行关节冲洗液IL-1 β含量测定,造模结束后正常组与模型组、电针治疗组组间比较,其后两者明显高于前者(P＜0.05),治疗结束后模型组、电针治疗组组间比较,前者显著高于后者(P＜0.05).治疗结束后软骨免疫组化法MMP-1测定,模型组和电针治疗组的MMP-1阳性率明显高于正常组(P＜0.05),且模型组MMP-1阳性率高于电针治疗组(P＜0.05).结论:电针能有效治疗KOA,其作用机制可能是电针使KOA关节中细胞因子IL-1 β和软骨中MMP-1的含量减少,从而降低Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的降解,促进新的Ⅱ型胶原和蛋白聚糖合成,改善血液循环,促进经气运行,从而有利于关节渗出液吸收,促进软骨的修复.     

电针对兔膝骨关节炎软骨细胞基质金属蛋白酶-13表达的影响

目的:探讨电针对兔膝骨关节炎(KOA)模型软骨细胞基质金属蛋白酶-13(MMP-13)表达的影响。方法:30只新西兰大耳兔随机分为正常组、模型组及电针治疗组。正常组不造模,模型组和电针治疗组均采用左膝关节伸直位管型石膏固定法,建立KOA模型。喂养6周后,电针组电针治疗10d。各组均取股骨内侧髁软骨,观察软骨细胞及MMP-13的变化。结果:按Mankin评分比较软骨结构,各组间差异有显著性(P<0.05)。正常组MMP-13未检出,模型组MMP-13检出率较高,电针治疗组MMP-13检出率下降。MMP-13在KOA软骨细胞中的表达与正常组差异有显著性意义,电针治疗组与模型组差异有显著性意义(P<0.01)。结论:电针治疗促使兔骨关节炎模型软骨细胞重新排列,减少软骨细胞中MMP-13表达,对OA治疗有一定作用。     

维药买朱尼对骨关节炎大鼠模型关节软骨中基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶抑制剂1的影响

背景:骨关节炎患者关节软骨的损害与基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶抑制剂失平衡有关.目的:观察基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶抑制剂1在关节软骨中的表达及维药买朱尼对其影响.方法:将20只SD大鼠采用改良Hulth造模法建立大鼠膝骨关节炎模型,按随机数字表法随机等分为买朱尼组和模型组,建模第2周开始分别灌胃维药买朱尼和生理盐水,连续4周.结果与结论:相比于模型组,买朱尼组大鼠膝关节软骨退变程度减轻,软骨大体评分及Mankin评分降低(P < 0.05),且膝关节软骨细胞中基质金属蛋白酶1的表达降低,基质金属蛋白酶抑制剂1的表达增加(P < 0.05).说明维药买朱尼可以通过下调基质金属蛋白酶1的表达水平、上调抑制剂的表达水平,对软骨产生保护作用.     

体外冲击波治疗兔膝骨关节炎：白细胞介素1β及基质金属蛋白酶13的表达

背景：白细胞介素1β和基质金属蛋白13能促进软骨细胞的分解代谢,抑制软骨细胞的合成修复能力,引起细胞外基质的降解,在骨关节炎的发生中有十分重要的作用。 目的：观察体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨细胞中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13表达的影响。 方法：将30只新西兰兔随机分为治疗组、模型组、对照组,每组10只。治疗组和模型组均采用改良伸直位固定6周,制备兔膝骨关节炎模型。治疗组造模后给予体外冲击波治疗1次,能流密度0.1 mJ/mm2,冲击次数1000次。对照组不作任何处理。各组兔于治疗后4周处死,取膝关节液和关节软骨。苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色法检测各组膝关节病理学形态改变,采用酶联免疫吸附法测定关节液白细胞介素1β水平,免疫组化法检测白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达。 结果与结论：治疗组和模型组关节液白细胞介素1β水平较对照组明显增高（P 〈0.01）,治疗结束后治疗组关节液白细胞介素1β水平较模型组下降（P 〈0.05）。治疗组和模型组软骨组织Mankin评分较对照组明显增高（P〈0.01）,治疗结束后治疗组软骨组织Mankin评分较模型组下降（P〈0.05）。治疗组和模型组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较对照组明显增高（P〈0.01）,治疗结束后治疗组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较模型组下降（P〈0.05）。结果可见体外冲击波能下调膝骨关节炎软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达,促进Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成,从而对膝骨关节炎起防治作用。     

基质金属蛋白酶13在骨关节炎中的研究进展

骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是最常见的关节炎形式,通常以关节疼痛和功能障碍为主要表现,严重影响患者的生活质量。OA主要是退行性病变,多发于60岁以上的老年人,随着我国逐步进入老龄化社会,骨关节炎越来越受到关注。已有大量实验证明基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)可以强有力的降解软骨基质的主要成分—II型胶原,除此之外,MMP-13还可降解软骨基质中的蛋白多糖、IV型和IX型胶原蛋白、骨粘连蛋白及软骨基底膜聚糖,在OA的发生发展中起到重要作用,近几年许多关于MMP-13抑制剂的研究给OA的治疗带来了新希望。本综述将近几年MMP-13及其在骨关节炎方面的研究进展进行总结,希望能对此方面的研究人员起到参考作用。     

基质金属蛋白酶在骨关节炎中的作用

骨关节炎（osteoarthritis,OA）是一种以关节软骨退行性变为主要病理特征的慢性进行性骨关节疾病,是所有关节性疾病中最常见的一种,其患病率随着年龄的增长而增长,年龄超过65岁的人有80％受其影响,在世界范围内有13．5亿的人们受到该病的影响。但OA的发病机制至今仍未明确,临床诊断缺乏有效的指标。近年研究发现,OA关节软骨细胞外基质合成与降解失衡是造成变性的重要原因之一。     

玻璃酸钠与膝骨关节炎患者关节液中基质细胞衍生因子1和基质金属蛋白酶3,9,13水平的相关性

背景：膝关节内滑液和软骨中玻璃酸钠在骨关节炎的发生发展中起重要作用,近来有研究表明基质细胞衍生因子1、基质金属蛋白酶3,9,13对骨关节炎软骨退变均存在影响。目的：探讨关节腔注射玻璃酸钠后对膝骨关节患者关节液中基质细胞衍生因子1和基质金属蛋白酶3,9,13水平的影响及两者之间的相关性。方法：20例膝骨关节炎并有关节积液患者于注射玻璃酸钠前及注射后1,2,3,4周抽取关节液,应用双抗体夹心ELISA法测定基质细胞衍生因子1,基质金属蛋白酶3,9,13水平并进行相关性分析。结果与结论：注射玻璃酸钠后关节液中基质细胞衍生因子1,基质金属蛋白酶3,9,13水平均有所下降,基质细胞衍生因子1、基质金属蛋白酶3,9组注射前与注射后1周,注射后1周与注射后2周比较、基质金属蛋白酶13组注射前与注射后1周比较,差异无显著性意义（P〉0.05）,其余各组两两相比差异均有显著性意义（P〈0.05）。相关性分析结果显示基质细胞衍生因子1与基质金属蛋白酶3,9,13水平变化呈正相关。     

基质金属蛋白酶家族与膝骨关节炎成因机制相关性研究进展

正膝骨关节炎(KOA)是一种退行性骨关节疾病,多见于中老年人,也是导致老年人病残的重要因素之一[1]。其典型临床表现主要为膝关节反复发作的疼痛、关节变形及不同程度功能障碍[2],其病理特征主要表现为关节软骨破坏、软骨下骨硬化以及骨赘形成[3]等。其作用机制尚未完全明确,一般认为与外伤、软骨代谢异常、细胞因子、免疫、酶对软骨基质的降解等多种因素有关。曹峻岭[4]经实验证实,关节病早期是由于蛋白聚糖的丢失引起软骨退变、     

基质金属蛋白酶2,9及其抑制剂3在脑梗死中的作用

目的通过注入自体血栓形成大鼠脑梗死模型,研究其不同时段基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase,MMP）2、9和基质金属蛋白酶抑制剂（tissue inhibitor metalloproteinase,TIMP）3的表达规律。方法66只成年Sprague Dawley大鼠随机分为3组,空白对照组（6只）、假手术对照组（30只）和手术实验组（30只）。实验组给予自体血栓经颈内动脉注入制备大鼠脑梗死标本;假手术对照组做同样处理,但不给予血栓注入干预,于术后24h,48h,3d,5d,7d麻醉并灌注固定取脑。观察大鼠行为学改变;采用免疫组化方法检测标本MMP-2,MMP-9,TIMP-3表达,了解其与病变之间关系。结果实验组大鼠行为学改变较其他组明显;HE染色下,组织病理变化明显;免疫组化染色显示MMP-2,MMP-9,TIMP-3表达均较其他两组增高,统计学结果显著性差异（P〈0．05）。结论MMP-2和MMP-9在脑梗死中与疾病损伤相关,TIMP-3有对抗作用。     

氦-氖激光对兔正畸牙移动牙周组织中基质金属蛋白酶-9表达的影响

目的　研究He Ne激光照射对兔实验性牙移动牙周组织中基质金属蛋白酶 9(MMP 9)表达的影响 ,探讨He Ne激光局部照射对促进正畸牙齿移动及牙周组织改建的可行性。方法　 3 0只大耳白兔 ,随机分为 6组 ,每组 5只 ,其中实验动物右侧为照射侧 ,左侧为对照侧。各组动物分别经正畸实验装置给予持续 1,3 ,5 ,7,14及 2 1d的加力处理 ,同时实验动物右侧局部牙周组织给予He Ne激光照射 ,左侧则不进行特殊处理。各组实验动物分别于实验结束后处死 ,对实验样本进行MMP 9免疫组织化学染色、图像分析 ,观察兔实验性牙移动牙周组织中MMP 9表达与分布的变化 ,并进行统计学分析。结果　He Ne激光照射侧压力区与张力区MMP 9的表达增强现象均较对照侧出现得早 ,且峰值亦较对照侧高。张力区兔牙周组织中MMP 9表达灰度分析表明 ,术后第 5 ,7天时 ,照射侧与对照侧间差异有显著性意义 (P <0 .0 5 ) ,压力区兔牙周组织中MMP 9表达灰度分析表明 ,术后第 3 ,5 ,7天时 ,照射侧与对照侧间差异有显著性意义 (P <0 .0 5或0 .0 1)。结论　He Ne激光照射增强了兔正畸牙周组织中MMP 9的表达 ,提示He Ne激光照射促进了正畸牙移动过程中的血管化反应及骨改建过程。     

睾酮干预雄兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的表达

背景：睾酮对骨关节炎的作用尚无一致的观点,其调节软骨代谢的作用鲜有文献报道。目的：观察睾酮对膝骨关节炎雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1表达的影响。方法：24只雄兔随机分成4组,采用改良Hulth法建立右膝骨关节炎模型;假去势组不切除睾丸,其余3组切除双侧睾丸。第8周末处死假去势组和去势8周组兔取材。第9周开始,激素组肌注生理剂量十一酸睾酮（6mg/kg,2周1次）,去势16周组正常喂养,并于16周末处死并取材。结果与结论：大体和组织学观察显示各组兔膝关节软骨的病变程度为假去势组优于去势8周组,激素组优于去势16周组。免疫组化染色显示胰岛素样生长因子1在所有兔膝关节软骨中均有表达,阳性细胞个数假去势组高于去势8周组（P〈0.05）,激素组高于去势16周组（P〈0.05）,去势8周组与去势16周组差异无显著性意义（P〉0.05）。说明睾酮可通过上调去势雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1的表达,延缓软骨退变。     

睾酮干预雄兔膝骨关节炎软骨中胰岛素样生长因子1的表达

背景:睾酮对骨关节炎的作用尚无一致的观点,其调节软骨代谢的作用鲜有文献报道.目的:观察睾酮对膝骨关节炎雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1 表达的影响.方法:24 只雄兔随机分成4 组,采用改良Hulth 法建立右膝骨关节炎模型;假去势组不切除睾丸,其余3 组切除双侧睾丸.第8 周末处死假去势组和去势8 周组兔取材.第9 周开始,激素组肌注生理剂量十一酸睾酮(6 mg/kg,2 周1 次),去势16 周组正常喂养,并于16 周末处死并取材.结果与结论:大体和组织学观察显示各组兔膝关节软骨的病变程度为假去势组优于去势8 周组,激素组优于去势16 周组.免疫组化染色显示胰岛素样生长因子1 在所有兔膝关节软骨中均有表达,阳性细胞个数假去势组高于去势8 周组(P <0.05),激素组高于去势16 周组(P < 0.05),去势8 周组与去势16 周组差异无显著性意义(P > 0.05).说明睾酮可通过上调去势雄兔关节软骨中胰岛素样生长因子1 的表达,延缓软骨退变.     

兔软骨细胞与脱细胞软骨基质的生物相容性

目的:将体外培养的兔软骨细胞种植到脱细胞软骨基质上,进行细胞形态学观察、细胞黏附及增殖活性的测定,检测制备的脱细胞软骨基质与软骨细胞的相容性,分析脱细胞软骨基质作为软骨组织工程支架的可能性。方法:实验于2005-03/09在哈尔滨医科大学附属第二医院科研中心完成。选取兔龄6个月的清洁级健康雄性日本大耳白兔,麻醉后无菌条件下显露兔双侧膝关节,切取股骨远端和胫骨近端关节软骨,经脱细胞处理制备成脱细胞软骨基质微粒作为软骨支架,并分离培养软骨细胞。将培养至第2代的软骨细胞用于实验,随机分为脱细胞基质组和空白对照组,每组复孔为6孔。脱细胞基质组将脱细胞基质颗粒单层铺满培养板孔底,接种软骨细胞。空白对照组单纯接种软骨细胞。倒置显微镜及扫描电镜观察软骨细胞与脱细胞软骨基质的黏附情况,通过四甲基偶氮唑盐法检测细胞接种2,6,12,24h细胞黏附性,测定细胞接种后1,3,5,7d时细胞的增殖活性,测定细胞培养1,2,3d时上清液中的羟脯氨酸含量。结果:①软骨细胞在脱细胞基质上黏附的形态学观察:扫描电镜观察脱细胞基质颗粒呈不规则多角形,软骨巢内的软骨细胞消失,表面粗糙不平。倒置相差显微镜下观察软骨细胞刚开始为小圆形,折光性较强,接种2h后有少量细胞开始黏附于脱细胞基质上,随时间的延长细胞黏附数量增加。②接种后不同时间点两组软骨细胞黏附情况的测定结果:与空白对照组比较,接种2h时脱细胞基质组软骨细胞黏附性明显降低(P<0.05),而在接种6,12,24h时两组基本相似(P>0.05)。③接种后不同时间点两组软骨细胞增殖能力的比较:接种1,3,5,7d时,脱细胞基质组软骨细胞增殖活性分别高于空白对照组21.4%,32.7%,32.5%,25.4%,差异显著(P<0.05)。④接种后不同时间点两组软骨细胞羟脯氨酸含量的比较:接种后第1,2天,脱细胞基质组上清液中的羟脯氨酸含量与空白对照组接近(P>0.05)。接种第3天时,脱细胞基质组羟脯氨酸含量高于空白对照组20.28%,差异显著(P<0.05)。结论:实验制备的脱细胞软骨基质能够明显刺激增殖软骨细胞,且与软骨细胞具有良好的相容性,为组织工程支架的应用提供了新的材料。     

兔软骨细胞与脱细胞软骨基质的生物相容性

目的：将体外培养的兔软骨细胞种植到脱细胞软骨基质上，进行细胞形态学观察、细胞黏附及增殖活性的测定，检测制备的脱细胞软骨基质与软骨细胞的相容性，分析脱细胞软骨基质作为软骨组织工程支架的可能性。 方法：实验于2005-03／09在哈尔滨医科大学附属第二医院科研中心完成。选取兔龄6个月的清洁级健康雄性日本大耳白兔，麻醉后无菌条件下显露兔双侧膝关节，切取股骨远端和胫骨近端关节软骨，经脱细胞处理制备成脱细胞软骨基质微粒作为软骨支架，并分离培养软骨细胞。将培养至第2代的软骨细胞用于实验，随机分为脱细胞基质组和空白对照组，每组复孔为6孔。脱细胞基质组将脱细胞基质颗粒单层铺满培养板孔底，接种软骨细胞。空白对照组单纯接种软骨细胞。倒置显微镜及扫描电镜观察软骨细胞与脱细胞软骨基质的黏附情况，通过四甲基偶氮唑盐法检测细胞接种2，6，12，24h细胞黏附性，测定细胞接种后1，3，5，7d时细胞的增殖活性，测定细胞培养1，2，3d时上清液中的羟脯氨酸含量。 结果：①软骨细胞在脱细胞基质上黏附的形态学观察：扫描电镜观察脱细胞基质颗粒呈不规则多角形，软骨巢内的软骨细胞消失，表面粗糙不平。倒置相差显微镜下观察软骨细胞刚开始为小圆形，折光性较强，接种2h后有少量细胞开始黏附于脱细胞基质上，随时间的延长细胞黏附数量增加。②接种后不同时间点两组软骨细胞黏附情况的测定结果：与空白对照组比较，接种2h时脱细胞基质组软骨细胞黏附性明显降低（P〈0．05），而在接种6，12，24h时两组基本相似（P〉0．05）。③接种后不同时间点两组软骨细胞增殖能力的比较：接种1，3，5，7d时。脱细胞基质组软骨细胞增殖活性分别高于空白对照组21．4％．32．7％,32．5％，25．4％，差异显著（P〈0．05）。④接种后不同时间点两组软骨细胞羟脯氨酸含量的比较：接种后第1，2天，脱细胞基质组上清液中的羟脯氨酸含量与空白对照组接近（P〉0．05）。接种第3天时，脱细胞基质组羟脯氨酸含量高于空白对照组20．28％，差异显著（P〈0．05）。 结论：实验制备的脱细胞软骨基质能够明显刺激增殖软骨细胞，且与软骨细胞具有良好的相容性，为组织工程支架的应用提供了新的材料。