bcl-2反义寡核苷酸对膀胱癌BIU87细胞株的影响

目的:探讨bcl-2反义寡核苷酸对培养的膀胱癌BIU87细胞株的影响.方法:采用bcl-2基因第1外显子的反义寡核苷酸,以硫代磷酸修饰(PS-ASON),序列为5′-TCTCCCAGCGTGCGCCAT-3′,与膀胱癌细胞株BIU87共同孵育作为实验组.加入正义的bcl-2寡核苷酸,序列为5′-TACCGCGTGCGACCCTCT-3′(PS-SON)作为对照组,用流式细胞仪检测细胞凋亡和坏死率,电镜观察细胞形态变化.结果:与对照组相比,实验组的细胞坏死率明显上调,电镜下细胞形态呈坏死改变.结论:bcl-2的反义寡核苷酸引起膀胱癌细胞大量坏死,可能成为膀胱癌的治疗方法之一.     

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响

目的研究bcl-2反义寡核苷酸对人小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响。方法将NCI-H69细胞培养传代,然后将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同寡核苷酸导入细胞中,用Western-Blot法检测Bcl-2蛋白的表达。采用直线加速器分别以不同剂量（0、2、4、6、8、10 Gy）X线照射4组细胞。收集照射后的细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法测定细胞存活分数。结果Western-Blot杂交显示反义寡核苷酸组无Bcl-2蛋白表达,相对正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组及空白对照组Bcl-2蛋白表达明显受到抑制（F=7.24-15.31,q=5.03-7.80,P〈0.01）。细胞经X线照射后,反义寡核苷酸组细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异具有显著性（F=7.24-15.31,q=5.03-7.80,P〈0.01）;正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组与空白对照组相比无统计学差异。4组细胞接受辐射后,反义寡核苷酸组在未照射和照射不同剂量后的存活分数均低于空白对照组,差异有统计学意义（F=11.04-45.56,q=5.10-14.75,P〈0.01）,而正义寡核苷酸和无义寡核苷酸组与空白对照组比较则无统计学差异。结论bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达,增强小细胞肺癌细胞NCI-H69对X线的敏感性。     

bcl-2/bcl-xl和bcl-2反义寡核苷酸对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 比较长循环脂质体介导的bcl-2/bcl-xl反义寡核苷酸(ASON)和bcl-2 ASON对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法 ①分别将包裹bcl-2 ASON的阴离子长循环脂质体 (NA-S) 和阳离子长循环脂质体(PA-S),包裹bcl-2/bcl-xl ASON的阴离子长循环脂质体(NA-D)和阳离子长循环脂质体(PA-D),包裹错配序列的阴离子长循环脂质体(NS)和无义序列的阴离子长循环脂质体(NN),游离bcl-2 ASON (FB1)和bcl-2/bcl-xl ASON (FB2),以及Ph 7.4、0.01 mol/L HEPES(对照组,CON)与 MCF-7细胞孵育.②孵育24 h后,HE染色观察MCF-7细胞凋亡,流式细胞术检测细胞中bcl-2癌蛋白的表达, MTT比色法检测细胞存活率.结果 bcl-2/bcl-xl ASON处理组(包括NA-D、PA-D、FB2)MCF-7细胞胞核固缩, 染色质凝集呈斑块状或边缘成月牙状,凋亡小体形成.NA-S、PA-S、 FB1、NS和NN组细胞凋亡不明显.NA-D与NA-S组、PA-S与PA-D组、FB1与FB2组bcl-2癌蛋白的荧光强度分别为1.92±0.08与2.83±0.16(P=0.028)、4.20±0.18与2.85±0.57(P=0.001)、5 70±1.16与4.35±0.11(P=0.001).孵育24 h后,NA-D与NA-S组、PA-S与PA-D组、FB1与FB2组细胞存活率分别为(0.32±0.03)%与(0.58±0.07)%(P=0.014)、(0 71±0.03)% 与(0.45±0.04)% (P=0.014)、(0.88±0 04)% 与(0.57±0.05)%(P=0.003).结论 抑制bcl-2和bcl-xl基因比单纯抑制bcl-2基因更能诱导肿瘤细胞凋亡.     

反义PCNA与反义bcl-2脱氧寡核苷酸抑制人视网膜色素上皮生长

目的　观察反义增生细胞核抗原 (PCNA)和反义 bcl-2脱氧寡核苷酸对培养的人视网膜色素上皮细胞 (RPE)生长的作用 .方法　用 DNA合成仪合成有 1 8个核苷酸的反义PCNA和 1 5个核苷酸的反义 bcl- 2脱氧寡核苷酸片段 ,以不同浓度加入 RPE培养液 ,培养 2～ 4d,用 SABC法检测细胞PCNA和 bcl- 2的表达 ,用 MTT法及流式细胞仪测定细胞抑制率 .结果　 6 .2 5～ 1 0 0μm ol· L- 1 的反义 PCNA对 RPE的抑制率为 8.3%～ 38.4% ,呈剂量依赖性 ,并抑制细胞 PCNA的表达 .反义 bcl- 2未显示抑制作用 .结论　反义 PCNA脱氧寡核苷酸可抑制近 40 %的 RPE生长 ,其临床应用值得进一步研究     

bcl-2反义寡核苷酸对小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响

目的 研究bcl-2反义寡核苷酸对人小细胞肺癌细胞NCI-H69放射敏感性的影响.方法 将NCI-H69细胞培养传代,然后将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组,通过脂质体将不同寡核苷酸导入细胞中,用Western-Blot法检测Bcl-2蛋白的表达. 采用直线加速器分别以不同剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)X线照射4组细胞.收集照射后的细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡率,MTT法测定细胞存活分数.结果 Western-Blot杂交显示反义寡核苷酸组无Bcl-2蛋白表达,相对正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组及空白对照组Bcl-2蛋白表达明显受到抑制(F=7.24～15.31,q=5.03～7.80,P＜0.01).细胞经X线照射后,反义寡核苷酸组细胞凋亡率明显高于空白对照组,差异具有显著性(F=7.24～15.31,q=5.03～7.80,P＜0.01);正义寡核苷酸组和无义寡核苷酸组与空白对照组相比无统计学差异.4组细胞接受辐射后,反义寡核苷酸组在未照射和照射不同剂量后的存活分数均低于空白对照组,差异有统计学意义(F=11.04～45.56,q=5.10～14.75,P＜0.01),而正义寡核苷酸和无义寡核苷酸组与空白对照组比较则无统计学差异.结论 bcl-2反义寡核苷酸能有效封闭bcl-2基因的表达,增强小细胞肺癌细胞NCI-H69对X线的敏感性.     

脂质体介导Bcl-2反义脱氧寡核苷酸对人卵巢癌细胞作用的研究

目的 探讨bcl-2反义脱氧寡核苷酸体外转染卵巢癌细胞后,对癌细胞bcl-2基因表达调控作用、诱导其凋亡的作用以及对顺铂敏感性的影响.方法 体外培养顺铂耐药的人卵巢上皮性癌细胞系CAOV3,以阳离子脂质体为载体,将bcl-2反义脱氧寡核苷酸片断作用于CAOV3细胞.应用逆转录聚合酶链反应(BT-PCR)技术检测bcl-2基因的表达;流式细胞仪(FACS)检测转染后CAOV3细胞调亡的变化;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色试验检测转染后CAOV3细胞对顺铂敏感性的影响.结果 脂质体介导的bcl-2反义脱氧寡核苷酸作用于CAOV3细胞后,bcl-2基因mRNA 表达水平显著低于对照组(P<0.01),并可诱导卵巢癌细胞凋亡,增强卵巢癌细胞对顺铂的敏感性.结论 脂质体介导的bcl-2反义脱氧寡核苷酸作用于CAOV3细胞,可下调bcl-2基因的表达,诱导卵巢癌细胞凋亡,并增强CAOV3细胞对顺铂的敏感性.     

C-myc反义寡核苷酸对人胆管癌细胞增殖和侵袭力的影响

目的 探讨C-myc反义寡核苷酸(ASODN)对人胆管癌QBC939细胞增殖和侵袭力的影响.方法 合成C-mycASODN,并将其转染QBC939细胞;四甲基噻唑蓝(MTT)实验检测C-myc ASODN抑制QBC939细胞增殖的影响;Transwell法检测C-myc ASODN抑制QBC939细胞侵袭力的影响.结果 ASODN组细胞的存活率低于空白对照组(P<0.05);ASODN组较空白对照组的细胞穿透数目下降(P<0.01);空载体组细胞的存活率及细胞穿透数目较空白对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 C-myc ASODN能抑制QBC939细胞的增殖和侵袭力.     

bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的 探讨bcl-2基因反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞药物敏感性的影响。方法 MTT法测bcl-2 ASODN对U937细胞足叶乙甙(VPl6)敏感性，计算细胞存活率，绘制剂量-效应曲线，直线回归求半数致死量IC50；DNA电泳、AO／EB荧光染色测定细胞凋亡率。结果 VP16与bcl-2 ASODN联合作用比单独用VP16或VP16与SODN细胞存活率显著减少。bcl-2 ASODN作用后VP16对U937细胞的IC50由7．93μoml／L降至2．67μoml／L。与单独VP16作用组相比，bcl-2 ASODN与VP16联合作用后梯状DNA片段明显增加，细胞凋亡率增高。结论 bcl-2 ASODN能促进VP16诱导的白血病细胞凋亡，提高白血病细胞对VP16的敏感性。bcl-2反义寡核苷酸在克服化疗药物耐药性方面，具有良好的应用前景。     

反基因及反义寡核苷酸对人前列腺癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的 探讨三螺旋形成寡核苷酸(TFO)和反义寡核苷酸(ASO)对人前列腺癌裸鼠移植瘤雄激素受体(AR)表达和肿瘤细胞生长的抑制作用.方法 32只荷LNCaP-CA-2前列腺癌移植瘤裸鼠随机分成4组:TFO治疗组、ASO治疗组、序列对照寡核苷酸(SCO)非特异性对照组和阴性对照组.采用瘤内注射给药,寡核苷酸用量25 mg/kg,隔天给药1次,共14次.观察裸鼠体重和肿瘤体积变化.测量移植瘤重量计算抑瘤率,放射免疫分析法检测裸鼠血清前列腺特异抗原(PSA)水平,RT-PCR方法检测肿瘤组织AR Mrna表达,免疫组化和放射配基结合分析方法检测AR蛋白表达.结果 TFO和ASO均能有效抑制移植瘤生长,抑瘤率分别为67.55%和41.06%,与对照组相比差异有统计学意义(均P<0.01).TFO组的瘤重和肿瘤组织AR表达水平显著低于ASO组(均P<0.05),TFO组动物血清PSA水平[(6.6±1.0)ng/ml]也显著低于ASO组[(19.8±3.7)ng/ml,P<0.05].结论 TFO对前列腺癌裸鼠移植瘤AR表达和肿瘤生长的抑制作用强于ASO,具有较好的抗前列腺癌应用前景.     

联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NCI-H446的作用

目的　观察联合应用反义 bcl- 2硫代磷酸寡脱氧核苷酸 (bcl- 2 AS- PS- ODN)和白细胞介素 6 (IL - 6 )AS- PS- ODN对小细胞肺癌细胞株 NCI- H4 4 6增殖和活力的影响。　方法　以 bcl- 2 AS- PS- ODN和 IL- 6 AS- PS-ODN单独及联合作用于 NCI- H4 4 6 ,经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响 ,经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化 ,经半定量 RT- PCR检测 IL - 6 m RNA表达水平的变化。　结果　细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力 ,促进细胞凋亡。 bcl- 2 AS-PS- ODN单独作用时 ,IL- 6 m RNA表达上升 74 .3% ,IL- 6 AS- PS- ODN单独作用以及与 bcl- 2 AS- PS- ODN联合作用时 ,IL- 6分别下调 6 7.7%和 5 2 .4 %。　结论　联合用药较单独用药对 NCI- H4 4 6细胞株显示出更好的抑制效果     

CRKL基因反义寡核苷酸对K562细胞增殖的影响

目的：通过研究CRKL基因反义寡核苷酸对K562细胞增残活性的影响,探讨CRKL基因在Ph^ 慢性粒细胞性白血病（CML）发病中的作用,方法： 脂质体为载体,CRKL基因反义寡核苷酸转染K562细胞,通过活细胸记数,H^3-TdR掺入,RT－PCR等方法观察K562细胞的增殖活性及基因表达的变化,结果,CRKL反义寡核苷酸对K562细胞的增殖有抑制作用,结论：CRKL基因在Ph^ CML的发病中可能有重要作用,可作为CML治疗的新靶点。     

反义寡核苷酸对K_(562)细胞增殖的作用

反义寡核苷酸可以特异地抑制基因表达 ,设计应用与 bcr-abl融合基因m RNA互补的反义寡核苷酸作用于 K562 细胞 ,结果显示 :反义寡核苷酸对 K562 细胞的生长有明显的抑制作用 ,硫代化与未修饰反义寡核苷酸相比有明显的稳定性 ;反义寡核苷酸与VP16联合应用 ,可明显提高对 K562 细胞的增殖抑制作用。反义寡核苷酸的应用将为慢性粒细胞白血病患者自体骨髓移植体外净化提供新的途径     

联合应用反义bcl-2和反义IL-6寡核苷酸对小细胞肺癌细胞株NC1-H446的作用

目的 观察联合应用反义bcl-2硫代磷酸寡脱氧核苷酸(bcl-2AS-PS-ODN)和白细胞介素6(IL-6)AS-PS-ODN对小细胞肺癌细胞株NCI-H446增殖和活力的影响。方法 以bc1-2AS-PS-ODN和IL-6AS-PS-ODN单独及联合作用于NCI-H446，经细胞克隆形成实验、细胞增殖实验观察其对细胞增殖和活力的影响，经细胞凋亡线粒体流式检测试剂盒检测细胞凋亡的变化，经半定量RT-PCR检测IL-6 mRNA表达水平的变化。结果 细胞增殖曲线、细胞克隆形成实验及细胞凋亡实验显示联合用药能更强地抑制细胞活力，促进细胞凋亡。bc1-2AS-PS-ODN单独作用时，IL-6mRNA表达上升74．3％，IL-6AS-PS-ODN单独作用以及与bcl-2AS-PS-ODN联合作用时，IL-6分别下调67．7％和52．4％。结论 联合用药较单独用药对NCI-H446细胞株显示出更好的抑制效果。     

针对汉坦病毒S基因反义寡核苷酸抗病毒效应的研究

目的：研究反义寡核苷酸（asON）体外抗汉坦病毒（HV）的效应。方法：设计合成了分别针对HV S基因片段5′端手柄状结构区的asON1和针对mRNA翻译起始区的asON2，采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测asON作用后HV感染细胞培养上清中HV核蛋白（NP）的表达水平，免疫荧光试验（IFA）检测asON作用后感染细胞膜上NP的表达水平，空斑减少中和试验（PRNT）测定asON作用和HIV感染细胞培养上清液中病毒滴度。结果：asON可抑制NP的合成以及病毒活恬。结论：asON具有一定的抗HV作用，有可能作为一种治疗人HV感染的新途径。     

胃癌bcl-2阳性细胞系MGC-803凋亡模型的建立

应用相差显微镜、电子显微镜、流式细胞术和DNA电泳等方法观察MGC-803胃癌细胞系凋亡的发生。结果显示30μmoL／L bcl-2反义寡核苷酸、2μg／ml顺铂、20μg／ml卡铂、4μg／ml阿霉素、4μg／ml丝裂霉素处理胃癌细胞，24h后观察到凋亡小体出现、染色质浓缩、凋亡峰及DNA梯状条带等凋亡特征性改变。     

反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用的研究

目的：探讨互补于HBV X基因的翻译起始区（as-Xp)、ENⅡ（as-ENⅡ）区的反义寡核苷酸抑制HepG2.2.15细胞生长及抗病毒作用。方法：合成as-Xp、as-ENⅡ，体外作用于HBV DNA转染的HepG2.2.15利用，利用ELISA法检测反义核酸作用前后细胞上清中HBsAg和HBeAg的含量，以HepG2.2.15细胞接种裸鼠制备人肝癌模型，瘤内给予反义寡核苷酸100μg，连续给药5d，取瘤组织采用流式细胞仪（FCM）分析反义核酸诱导瘤细胞凋亡作用，并检测反义核酸作用裸鼠血清中病毒抗原表达情况。结果：as-Xp、as-ENⅡ作用72h的细胞凋亡峰值分别为24％和27．7％，对照为10．89％、7．92％；对荷瘤鼠体内HBsAg和HBeAg的抑制率分别为35％、34％和43％、49％，在体外分别为57％、52％和56％、56％。无关对照序列体内，外无明显的抑制瘤细胞生长和抗病毒作用。结论：as-Xp、as-ENⅡ体内应用可诱导瘤细胞凋亡，并可有效抑制体内，外HBV抗原表达。     

bcl-2反义寡核苷酸增强NCI-H460细胞对紫杉特尔和放射线的敏感性

目的:研究bcl-2反义寡核苷酸作用于非小细胞肺癌细胞株NCI-H460后,细胞对紫杉特尔、放射线敏感性的变化.方法:紫杉特尔与bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸联合作用NCI-H460细胞后,MTT法测紫杉特尔半数抑制率(IC50);NCI-H460经bcl-2反义寡核苷酸或无义寡核苷酸作用后,再用放射线照射,MTT法测定细胞生长抑制率;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平.结果:靶向bcl-2 mRNA蛋白编码区反义寡核苷酸与紫杉特尔联合作用于NCI-H460细胞后紫杉特尔的IC50值为(0.101±0.009) μmol/L,与不加寡核苷酸组紫杉特尔的IC50值[(0.183±0.018) μmol/L]或无义寡核苷酸联用紫杉特尔的IC50值[(0.179±0.016) μmol/L]相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸与放射线联合作用NCI-H460细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,分别与单用放射线及bcl-2无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P＜0.05).bcl-2反义寡核苷酸分别与紫杉特尔、放射线作用于NCI-H460细胞后显著抑制Bcl-2蛋白表达,分别与单用紫杉特尔、放射线或无义寡核苷酸联用紫杉特尔、放射线相比,统计学上具有显著性差异(P＜0.05).结论:靶向bcl-2 mRNA的反义寡核苷酸能增强NCI-H460细胞对紫杉特尔、放射线的敏感性.     

端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸对其酶活性和肿瘤细胞增殖的影响

（1）目的：探讨端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸对肿瘤细胞增殖和端粒酶活性的影响。（2）方法：采用MTT法检测反义寡核苷酸对肿瘤细胞HL－60增殖的影响。采用TRAP－PCR法检测反义寡核苷酸处理肿瘤细胞后端粒酶活性的变化；采用Giemsa染色观察反义寡核苷酸处理后肿瘤细胞形态学变化，采用DNA凝胶电泳和三苯胺法检测反义寡核苷酸处理后肿瘤细胞DNA片段化。（3）结果：端粒酶基因hTRT反义寡核苷酸作用48h对肿瘤细胞增殖出现抑制作用。5μmol/L反义寡核苷酸处理24h后，细胞端粒酶活性下降，并且随作用时间的延长，活性不断降低，96h下降至对照组的44．4％，用5μmol/L反义寡核苷酸处理96h的HL－60细胞出现凋亡的形态学特征，处理24，48，72，96h后凋亡指数为0.053,0.127,0.257,0.315,，用5μmol/L反义寡核苷酸处理HL－60细胞96h后，电泳出现DNA梯状条带。作用24，48，72，96h细胞DNA片段化率分别为17．98％，29．34％，35．43％，41．24％；（4）结论：端粒酶hTRT基因反义寡核苷酸能抑制肿瘤细胞的增殖和端粒酶活性，并能诱导肿瘤细胞HL－60凋亡。     

联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸对裸鼠胆囊癌生长的抑制作用

目的探讨联合转染Survivin和Bcl-2反义寡核苷酸（AsODN）对裸鼠胆囊癌生长抑制作用。方法建立裸鼠胆囊癌皮下移植瘤模型,选择36只裸鼠随机分为3组：对照组、正义寡核苷酸（sODN）组和AsODN组,裸鼠瘤体内分别注射PBS、Survivin和Bcl-2sODN、Survivin和Bcl-2AsODN,12d后处死裸鼠,测量瘤体体积及质量,计算抑瘤率;苏木精-伊红染色观察瘤体组织学变化;免疫组织化学方法检测Survivin及Bcl-2蛋白的表达。结果AsODN组裸鼠瘤体平均体积显著低于对照组、sODN组（F=24.469,q=8.802、7.569,P〈0.01）,其体积抑瘤率为55.53%,sODN组为9.90%;AsODN组裸鼠瘤体平均质量显著低于对照组、sODN组（F=25.376,q=3.168、20.737,P〈0.01）,其质量抑瘤率为56.24%,sODN组为8.47%。AsODN组瘤体中可见大量的凋亡细胞。免疫组化证实AsODN组Survivin表达明显降低,同sODN组相比差异有显著意义（F=15.103,q=5.883、7.191,P〈0.01）;Bcl-2表达亦明显降低,同sODN组相比差异有显著性（F=6.632,q=4.793、4.030,P〈0.05）。结论联合转染Survivin和Bcl-2AsODN可下调Survivin和Bcl-2表达,诱发细胞凋亡,从而抑制裸鼠胆囊癌种植瘤的生长。     

脂质体介导gp130反义寡核苷酸对PC-3细胞增殖影响的研究

目的:研究脂质体介导gp130反义寡核苷酸对人雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞PC-3体外增殖活性的影响。方法:采用细胞计数及MTT比色法评价反义寡核苷酸对PC-3细胞体外增殖的影响,应用荧光免疫细胞化学法检测gp130基因的蛋白表达情况,流式细胞计数评价其对细胞周期的影响。结果:脂质体介导gp130反义寡核苷酸组与正义寡核苷酸组及对照组比较,PC-3细胞增殖活性受到明显抑制。转染48h后,gp130蛋白表达完全受到抑制,细胞周期明显阻滞于G0/G1期,细胞增殖抑制率为53.7%,细胞凋亡率高达51.28%。结论:脂质体介导gp130反义寡核苷酸可抑制人AIPC细胞PC-3体外增殖活性。应用反义技术为AIPC的基因治疗提供了新的思路和探索。