RNA干扰EMS1基因表达对人胃癌MGC803细胞增殖和迁移的影响

目的探讨RNA干扰EMS1基因表达对人胃癌MGC803细胞增殖和迁移的影响。方法为检测下调EMS1基因表达后MGC803细胞功能的变化,运用平皿集落形成实验检测其增殖能力;流式细胞仪分析细胞周期和凋亡;Transwell迁移和侵袭实验观察细胞迁移和侵袭能力的变化。结果下调MGC803细胞中EMS1基因表达后,MGC803细胞增殖、迁移和侵袭能力受到抑制,与对照组相比差异有显著性(P0.05),而对细胞周期和凋亡无明显影响。结论 RNA干扰EMS1基因可抑制胃癌MGC803细胞的增殖和迁移侵袭能力。     

过表达PI3K p55γ N末端氨基酸可抑制MGC803胃癌细胞的黏附性

目的:研究磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)p55γ调节亚基N末端24个氨基酸(N24)过表达对胃癌细胞MGC803黏附性的影响,并初步探讨其作用的分子机制。方法:通过脂质体介导用p EGFP-N24和p EGFP-C1质粒分别进行基因转染,建立稳定表达融合蛋白GFP-N24和GFP的MGC803细胞系。倒置显微镜下观察转染细胞的形态学变化,免疫印迹实验鉴定转染基因的蛋白表达,细胞黏附实验检测转染细胞的黏附性,免疫印迹实验检测细胞黏附分子上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)和钙紧张素(β-catenin)的表达,酶谱实验检测基质金属蛋白酶9(MMP9)和尿激酶型纤溶酶原活化因子(u PA)的表达。结果:建立了稳定表达融合蛋白GFP-N24的MGC803/GFP-N24细胞系和表达GFP的MGC803/p EGFP-C1细胞系,但GFP-N24的表达量明显低于GFP。基因转染使MGC803细胞的形态由铺路石样转变为成纤维细胞样,胞浆分泌颗粒明显增加。表达GFP-N24的MGC803细胞在纤黏连蛋白和胶原上的黏附性与对照组细胞相比明显下降(P0.05)。GFP-N24的表达使MGC803细胞黏附分子E-cadherin的表达增高,而Wnt信号通路关键分子β-catenin的表达降低,但不影响肿瘤转移相关蛋白MMP9和u PA的表达与分泌。结论:PI3K p55γN末端氨基酸过表达通过影响E-cadherin和β-catenin的表达而抑制胃癌MGC803细胞的黏附性。     

miR-205-5p抑制体外胃癌细胞系增殖、迁移和侵袭

目的探讨miR-205-5p靶向RAS致癌家族基因2B(RAP2B)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法 RT-qPCR和Western blot检测胃癌细胞AGS、MGC803、MKN-28、SGC-7901和正常胃黏膜细胞GES-1中miR-205-5p和RAS致癌家族基因2B的表达。分别构建过表达miR-205-5p和抑制RAP2B表达的AGS细胞株,采用MTT法检测细胞活力;Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力;Western blot检测RAP2B、cyclin D1、MMP-2、MMP-9、GSK-3β和β-catenin蛋白的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-205-5p对RAP2B的靶向作用。结果与正常胃黏膜细胞相比,4种胃癌细胞中miR-205-5p的表达显著降低,RAP2B的表达显著升高(P0.05)。过表达miR-205-5p或抑制RAP2B表达均可显著抑制AGS细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制cyclin D1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达(P0.05)。miR-205-5p可负性调控RAP2B的表达。结论 miR-205-5p通过靶向RAP2B抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-433-3p靶向HP1BP3抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力

目的：探究微小RNA-433-3p(miR-433-3p)对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，以及miR-433-3p靶向异染色质蛋白1结合蛋白3(HP1BP3)对胃癌细胞的调控作用。方法：将人胃癌细胞系HGC-27和AGS分为阴性对照（NC）mimic组、miR-433-3p mimic组、NC siRNA (si-NC)组和HP1BP3 siRNA (si-HP1BP3)组，分别转染NC mimic、miR-433-3p mimic、si-NC和si-HP1BP3。RT-qPCR检测miR-433-3p在HGC-27和AGS细胞中的表达；CCK-8法和细胞集落形成实验检测细胞增殖；划痕愈合实验检测细胞迁移；Traswell实验检测细胞侵袭；Western blot检测HP1BP3蛋白表达。结果：与NC mimic组相比，miR-433-3p mimic组HGC-27和AGS细胞中miR-433-3p表达升高。过表达miR-433-3p抑制HGC-27和AGS细胞的增殖、迁移和侵袭，抑制HP1BP3蛋白表达；敲减HP1BP3抑制HGC-27和AGS细胞的增殖和迁移。结论：miR-433...     

miRNA-542-3p对胃腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的研究microRNA-542-3p(miR-542-3p)在人胃腺癌细胞系及组织中的表达水平及对胃腺癌细胞侵袭转移的影响。方法通过RT-PCR检测miR-542-3p在人正常胃粘膜上皮细胞GES-1及人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823中的表达水平;同时应用RT-PCR检测miR-542-3p在50组患者胃腺癌和癌旁组织中的表达差异。体外实验通过外源转染miR-542-3p的模拟物和抑制剂,分别于24,36,48h检测SGC-7901的转染效率,选取最佳转染时间。应用划痕实验和Transwell评估细胞侵袭转移能力的变化。结果胃腺癌细胞系SGC-7901和BGC-823中miR-542-3p的表达水平低于其在GSE-1中的表达水平(P0.05);miR-542-3p在癌组织中表达低于癌旁组织(P0.05)。24 h后,miR-542-3p模拟物组侵袭转移能力显著低于对照组(P0.05),而miR-542-3p抑制剂组侵袭转移能力显著高于对照组(P0.05)。结论miR-542-3p在多种人胃癌细胞和胃腺癌组织中呈低表达,miR-542-3p抑制胃腺癌SGC7901细胞的侵袭转移能力。     

Annexin A3高表达对胃癌 MGC803细胞增殖及凋亡的作用

目的：探讨Annexin A3高表达对胃癌MGC803细胞增殖及凋亡的影响。方法构建重组质粒pYr-ads-4-Annexin A3,转染至胃癌MGC803细胞,G418筛选稳定表达株,Western b1ot法检测转染前后Annexin A3蛋白表达变化;以空载体转染组及未转染MGC803细胞为对照,采用CCK8、平板克隆和流式细胞仪技术检测Annexin A3高表达对MGC803细胞增殖、克隆形成及细胞周期的作用。结果成功构建重组质粒pYr-ads-4-Annexin A3;pYr-ads-4-Annexin A3稳定转染细胞株中Annexin A3蛋白表达均明显高于空载体转染及未转染MGC803细胞组（ P<0.05）;CCK8实验显示,pYr-ads-4-Annexin A3组中肿瘤细胞数目显著多于空载体转染及未转染MGC803细胞组（ P<0.05）;平板克隆实验发现,pYr-ads-4-Annexin A3组中肿瘤细胞形成克隆数量多于其余两组（P<0.05）;流式细胞仪检测结果提示,Annexin A3高表达抑制了MGC803细胞凋亡（P<0.05）。结论 An-nexin A3在胃癌的发生过程中起重要作用,其机制可能与促进胃癌细胞增殖和抑制肿瘤细胞凋亡有关,提示Annexin A3可能成为胃癌治疗的新靶点。     

Dickkopf-1沉默通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及上皮-间充质转化

目的:探讨分泌蛋白Dickkopf-1(DKK1)在人胃癌细胞中的表达及其对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法:以real-time PCR和Western blot法检测DKK1在人胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(MKN-45和SGC-7901)中的表达水平;以RNA干扰法沉默DKK1,沉默效果以real-time PCR、Western blot及ELISA法验证;Transwell实验检测细胞侵袭能力,以丝裂霉素C抑制细胞增殖;real-time PCR及Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)水平。结果:DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中的表达明显高于GES-1细胞,表明DKK1在胃癌细胞中表达显著升高;DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中被成功沉默后,细胞侵袭能力显著下降,并具有时间依赖性,同时伴随E-cadherin表达增高及N-cadherin和vimentin表达下降,表明DKK1沉默能够显著抑制胃癌细胞侵袭和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT);经外源性重组DKK1(r DKK1)转染肿瘤细胞后,进一步证实DKK1具有促胃癌细胞侵袭的作用,并可促进EMT进程;DKK1沉默通过下调β-catenin水平来实现其对胃癌细胞侵袭及EMT的抑制作用。结论:DKK1在人胃癌细胞中表达显著增高,且DKK1沉默能够通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及EMT过程。     

β-拉帕醌对胃癌细胞生长与侵袭的抑制作用及机制

目的：探讨β-拉帕醌体外抑制胃癌细胞增殖和迁移及诱导凋亡的作用及机制。方法应用噻唑蓝（ MTT）及平板克隆实验检测β-拉帕醌对SGC-7901与AGS胃癌细胞增殖的影响,划痕实验检测β-拉帕醌抑制胃癌细胞的迁移能力,流式细胞术检测β-拉帕醌诱导胃癌细胞凋亡的作用。应用Western b1ot法检测β-拉帕醌处理胃癌细胞前后其增殖、迁移、上皮-间质转化（ epithe1ia1-mesenchyma1 transition,EMT）及凋亡分子标志物的变化。结果β-拉帕醌可显著抑制SGC-7901和AGS胃癌细胞的增殖能力,并下调增殖与周期相关Skp2和DEK蛋白的表达（ P均<0.05）;经β-拉帕醌处理后,胃癌细胞的迁移能力明显下降,且显著下调MMP-2/9和Ezrin蛋白以及EMT间质标志物的表达,上调EMT上皮标志物表达水平;另外,β-拉帕醌增加胃癌细胞的凋亡,下调BCL-2/Bax比值以及上调活化型Caspase-3/8/9的表达。结论β-拉帕醌对胃癌细胞有明显的抑制增殖及诱导凋亡的作用,并可通过MMPs和EMT途径抑制胃癌细胞的迁移能力。     

淫羊藿苷通过下调转移相关蛋白2抑制MGC803细胞的增殖、迁移和侵袭

目的探讨淫羊藿苷是否通过调控转移相关蛋白2(MTA2)表达抑制人胃癌细胞系MGC803细胞增殖、迁移和侵袭及其作用机制。方法以不同浓度淫羊藿苷干预MGC803细胞,MTT法检测细胞活力; Transwell小室法和Western blot分别检测细胞迁移和侵袭及MMP-2、MMP-9和MTA2蛋白表达;将MTA2 siRNA转染至MGC803细胞后检测细胞活力、迁移和侵袭;将pc DNA-MTA2转染至MGC803细胞,联合淫羊藿苷处理,MTT法和Traswell小室法检测细胞活力、迁移和侵袭。结果不同浓度淫羊藿苷均能有效抑制MGC803细胞活力。以200μmol/L淫羊藿苷干预MGC803细胞后,细胞迁移和侵袭能力下降(P0. 05),MMP-2、MMP-9、MTA2蛋白表达下调。敲减MTA2能够抑制细胞活力、迁移和侵袭。过表达MTA2可部分逆转淫羊藿苷对MGC803细胞活力、迁移和侵袭的抑制作用。结论淫羊藿苷能够通过调控MTA2、MMP-2和MMP-9蛋白表达,抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

14-3-3σ调控p27抑制Ratl-Akt细胞增殖

目的:研究腺病毒介导14-3-3σ(Ad-14-3-3σ)对Akt过表达Ratl-Akt细胞增殖的影响,并探讨其作用是否通过调控p27而实现.方法:通过5-溴-2'脱氧尿嘧啶(BrdU)实验检测Ad-14-3-3σ对Rat1-Akt细胞增殖的影响,并通过激酶分析法和免疫荧光实验探讨Ad-14-3-3σ对p27磷酸化水平及其在细胞内定位的影响.结果:Ad-14-3-3σ转染的细胞BrdU阳性率(45%)低于PBS处理组(100%)或Ad-β-gal转染的对照组细胞(98%).14-3-3σ可降低磷酸化p27的水平和减少Akt介导的p27在胞浆中的定位.结论:转染14-3-3σ基因能抑制Akt过表达细胞株Ratl-Akt增殖,14-3-3通过降低Akt激酶磷酸化p27的活性,阻断Akt介导的p27胞浆错位,从而发挥其抑制Ratl-Akt细胞增殖.     

14-3-3σ调控p27抑制Rat1-Akt细胞增殖

目的： 研究腺病毒介导14-3-3·σ（Ad-14-3-3·σ）对Akt过表达Rat1-Akt细胞增殖的影响，并探讨其作用是否通过调控p27而实现。 方法： 通过5-溴-2′脱氧尿嘧啶（BrdU）实验检测Ad-14-3-3·σ对Rat1-Akt细胞增殖的影响，并通过激酶分析法和免疫荧光实验探讨Ad-14-3-3·σ对p27磷酸化水平及其在细胞内定位的影响。 结果： Ad-14-3-3σ转染的细胞BrdU阳性率（45%）低于PBS处理组（100%）或Ad-β-gal转染的对照组细胞（98%）。14-3-3σ可降低磷酸化p27的水平和减少Akt介导的p27在胞浆中的定位。 结论： 转染14-3-3σ基因能抑制Akt过表达细胞株Rat1-Akt增殖，14-3-3σ通过降低Akt激酶磷酸化p27的活性，阻断Akt介导的p27胞浆错位，从而发挥其抑制Rat1-Akt细胞增殖。     

siRNA干扰14-3-3ζ基因可体外促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡

目的探讨siRNA干扰14-3-3ζ基因对人胃腺癌细胞系SGC-7901增殖凋亡的影响及其作用机制。方法利用siRNA干扰技术降低14-3-3ζ基因的正常表达的SGC-7901细胞为实验组,siRNA-control的对照组和未加处理的空白组。用实时荧光定量PCR和Western blot检测14-3-3ζ基因mRNA的表达水平和蛋白表达水平;CCK8实验检测各组SGC-7901细胞的增殖;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;Western blot检测周期和凋亡相关蛋白P53、cyclin D1、PUMA、Bax和Bcl-2。结果 siRNA干扰组14-3-3ζ基因的mRNA和蛋白表达水平低于空白组和对照组(P0.05);CCK8检测细胞增殖较对照组显著降低(P0.05);siRNA干扰组细胞周期G0/G1的比率较对照组高,而G2/M和S期则显著降低(P0.05);siRNA干扰组的细胞凋亡率也显著升高(P0.05);相关通路蛋白在siRNA干扰组中cyclin D1和Bcl-2表达降低,P53、PUMA、Bax蛋白表达增高(P0.05)。结论 siRNA干扰14-3-3ζ可以通过P53通路,下调cyclin D1抑制SGC-7901细胞增殖并阻滞周期,上调PUMA、Bax蛋白和下调Bcl-2蛋白促进细胞凋亡。     

miR-363-3p在胃癌组织中的表达及其对细胞系HGC-27增殖、迁移与侵袭功能的影响

目的探讨miR-363-3p在胃癌及癌旁样本中的表达差异,并分析其在胃癌细胞系中的功能。方法使用realtime PCR检测59例胃癌组织及对应癌旁组织中miR-363-3p的表达差异;使用miR-363-3p模拟物(miR-363-3pmimic)实现miRNA在胃癌细胞系HGC-27中的过表达,经增殖实验、划痕实验和Transwell实验,检测miR-363-3p对HGC-27细胞功能的影响。结果 miR-363-3p抑制胃癌细胞系HGC-27细胞增殖(P0.05,P0.01),抑制胃癌细胞系HGC-27细胞迁移(P0.001),miR-363-3p对抑制胃癌细胞系细胞的侵袭(P0.05)。结论 miR-363-3p在胃癌发生中可能起到抑癌作用,并有可能成为对胃癌治疗的一个新靶点。     

褪黑素借下调CDC25A与p21表达及磷酸化抑制人胃癌细胞增殖

目的:探索褪黑素抑制胃癌细胞作用及分子机制。方法:采用褪黑素处理人胃癌细胞系AGS和MGC803,倒置显微镜下观察细胞形态及结构变化;流式细胞仪检测褪黑素对细胞周期、细胞增殖的影响;并分析与细胞周期、细胞增殖相关蛋白CDC25A、p21表达及磷酸化水平来确定褪黑素对胃癌细胞作用的分子机制。结果:褪黑素作用后,AGS和MGC803细胞形态发生明显变化;细胞增殖相关蛋白CDC25A、p21表达及磷酸化下调;G0/G1期细胞上升,S期和G2/M期细胞下降,引起细胞周期阻滞在G1/S期,抑制胃癌细胞增殖。结论:褪黑素通过下调CDC25A、p21表达及磷酸化水平,引起AGS和MGC803胃癌细胞周期阻滞在G1/S期,抑制胃癌细胞增殖。     

环状RNA ATP2B1靶向miR-452-5p降低胃癌细胞系的增殖和侵袭

目的 探讨环状RNA circATP2B1对胃癌细胞增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法 收集2018年7月至2021年2月福建医科大学附属泉州第一医院胃肠肝胆外科行手术切除并病理学诊断的44例胃癌组织标本及癌旁组织标本。选取4株胃癌细胞系(SGC7901、HS-746T、MGC803、BGC823)和正常胃黏膜上皮细胞系(GES-1)。RT-qPCR检测胃癌组织和细胞系中circATP2B1表达。将circATP2B1表达最低的胃癌细胞分为对照组(转染阴性对照质粒)和实验组(转染circATP2B1过表达质粒)。分别采用MTT法和Transwell小室法检测各组胃癌细胞的增殖活性和侵袭能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因实验分析circATP2B1可能的作用机制，RT-qPCR和Western blot检测circATP2B1下游基因的表达。结果 胃癌组织circATP2B1表达量显著低于癌旁组织(0.92±0.08 vs 3.62±0.23,P<0.01)。胃癌细胞系circATP2B1表达量均显著低于GES-1细胞(P<0.01),其中以HS-746T细胞的表达量...     

LncRNA ZFAS1作为ceRNA吸附miR-541-3p调控胃癌侵袭转移北大核心CSCD

目的:本研究旨在探讨长链非编码RNA锌指蛋白反义链1(ZFAS1)作为ceRNA吸附miR-541-3p对胃癌侵袭转移的影响。方法:qRT-PCR对癌旁组织、胃癌组织以及人胃黏膜上皮细胞株、胃癌细胞株中ZFAS1和miR-541-3p的表达进行检测。验证ZFAS1和miR-541-3p的之间的靶向关系。取ZFAS1表达最高的细胞用于后续试验并转染miR-541-3p inhibitor、ZFAS1-shRNA等。MTT检测细胞增殖,Western blot检测侵袭转移相关因子的表达,Transwell测定细胞侵袭,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:癌组织中ZFAS1表达增多而miR-541-3p表达减少,ZFAS1能够靶向抑制miR-541的表达(均P<0.05)。抑制ZFAS1表达能够抑制胃癌细胞增殖、侵袭以及侵袭转移相关因子的表达,诱导细胞凋亡,而敲除miR-541-3p后效果则相反(均P<0.05)。ZFAS1-shRNA对胃癌细胞的作用能够被miR-541-3p inhibitor挽救。结论:ZFAS1能够作为ceRNA吸附miR-541-3p,从而抑制胃癌细胞增殖和侵袭转移,促进细胞凋亡。     

胃癌中MCU的表达及对胃癌细胞转移的作用

目的探讨线粒体钙单向转运蛋白(mitochondrial calcium uniporter, MCU)在胃癌组织中的表达以及对胃癌细胞转移的影响。方法采用免疫组化SP法检测60例原发性胃癌和癌旁组织中MCU的表达;采用免疫荧光法和Western blot法检测20例新鲜胃癌组织及癌旁组织中MCU的表达。采用CCK-8实验检测MCU诱导剂(Spermine)对人胃癌细胞(MGC-803)增殖的影响。应用Transwell和细胞划痕实验检测对照组、Spermine组、siRNA MCU组对MGC-803细胞侵袭和迁移能力的影响。根据不同分组,干预48 h,通过线粒体膜电位检测钙离子,Western blot法检测MCU蛋白的表达水平。结果胃癌组织中MCU表达水平显著高于癌旁组织。细胞实验结果显示,Spermine对MGC-803细胞增殖的影响呈剂量依赖性。Spermine显著增加MGC-803细胞迁移和侵袭能力,siRNA MCU组显著降低细胞侵袭和迁移的细胞数量。线粒体膜电位结果表明,MCU调控胃癌细胞线粒体膜电位钙离子的水平。siRNA MCU组显著降低HIF-1α、TGF-β和增加E-cadherin蛋白的表达。结论 MCU在胃癌组织中高表达并促进胃癌细胞侵袭和迁移,对HIF-1α和TGF-β表达具有调控作用。     

miR-134-3p靶向细胞周期蛋白D1抑制胃癌细胞增殖的作用及机制

目的：研究mi R-134-3p靶向细胞周期蛋白D1(CCND1)抑制胃癌细胞增殖的作用及机制。方法：收集手术切除的胃癌组织及癌旁组织，培养正常胃黏膜上皮细胞株GES-1及胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901、BGC-823，检测mi R-134-3p、CCND1的表达水平；BGC-823细胞分组并转染阴性对照(NC)模拟物或mi R-134-3p模拟物、感染NC腺病毒或CCND1腺病毒，检测细胞增殖抑制率、细胞周期比例、mi R-134-3p及CCND1表达水平；双荧光素酶报告基因验证mi R-134-3p与CCND1的靶向结合；饲养BALB/c裸鼠，皮下注射感染NC腺病毒或mi R-134-3p腺病毒的BGC-823，成瘤后测定移植瘤质量、体积及CCND1表达水平。结果：与癌旁组织相比，胃癌组织中mi R-134-3p表达水平明显降低、CCND1表达水平明显升高(P<0.05)，且mi R-134-3p与CCND1呈负相关；与GES-1细胞相比，BGC-823、MGC-803、SGC-7901细胞中mi R-134-3p表达水平明显降低，CCND1表达水平明显升高(P&...     

siRNA介导S100A4基因沉默对胃癌细胞中MMP-2和E-cadherin表达及细胞侵袭能力的影响

目的观察用RNA干扰技术沉默人胃癌细胞株MGC-803中钙结合蛋白S100A4的基因,对基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和E-钙黏素(E-cadherin)表达变化,探讨S100A4对胃癌细胞侵袭能力的影响及作用机制。方法采用RNA干扰技术将针对S100A4和非特异性阴性对照序列的si RNA转染至人胃癌MGC-803细胞,利用荧光实时定量RT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测S100A4基因和蛋白的表达,筛选S100A4基因沉默组和阴性对照组细胞。采用Western Blot方法检测MMP-2和E-cadherin蛋白表达。利用Transwell Matrigel方法检测各实验组中MGC-803细胞体外侵袭能力。结果成功建立S100A4基因沉默的人胃癌MGC-803细胞。S100A4基因沉默的胃癌MGC-803细胞中MMP-2蛋白表达降低,而E-cadherin蛋白表达明显上调;细胞体外侵袭能力亦显著下降。结论 S100A4能通过调控MMP-2和E-cadherin的表达影响胃癌细胞MGC-803的侵袭能力。