P75NTR 基因在舌鳞状细胞癌细胞凋亡中的作用及其机制

目的：探求p75神经营养因子受体（P75 NTR）基因在舌鳞状细胞癌细胞凋亡中的作用及其可能的分子作用机制。方法p75NTR 特异性小干扰 RNA（siRNA）转染 p75NTR 阳性舌鳞状细胞癌细胞;P75NTR 阳性舌鳞状细胞癌株 Tca8113细胞分为空白对照组、阴性对照组、实验组-776（转染siRNA-P75NTR-776）、实验组-1234（转染 siRNA-P75NTR-1234）。流式细胞仪双染色标记法检测转染率及细胞凋亡;荧光定量 PCR 检测 P75NTR 基因;Western blotting 检测各组 P75NTR 蛋白的表达;四甲基偶氮唑蓝法检测 siRNA 对细胞增殖的影响;细胞免疫荧光标记法观察核转录因子-κB（NF-κB）在细胞质及细胞核中的分布变化。结果测得转染效率为30％;实验组-776、实验组-1234与阴性对照组的凋亡率分别为（20．35±0．18）％、（12．32±1．51）％、（2．63±0．10）％,前两者与阴性对照组相比,差异有统计学意义（t ＝177．20,P ＜0．005;t ＝37．12,P ＜0．005）。P75NTR 基因干扰成功,实验组-776组的 P75NTR蛋白抑制率达31％。P75NTR-siRNA 干扰后实验组-776、实验组-1234与阴性对照组 Tca8113细胞存活率分别为70．02％、78．01％和95．81％,前两者与阴性对照组相比,差异有统计学意义（χ2＝235．3,P ＜0．001;χ2＝117．5,P ＜0．005）。实验组内 NF-κB 在细胞质内分布明显增多。结论P75NTR 能促进舌鳞状细胞癌细胞增殖或抑制其凋亡,其分子机制可能与阻碍 NF-κB 核内转运密切相关。     

TRAIL、Caspase-8和NF-κB蛋白在人骨肉瘤中的表达及其与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨TRAIL、Caspase-8和NF—κB在人骨肉瘤组织及骨软骨瘤组织中的表达规律及其与骨肉瘤细胞凋亡的相互关系。方法应用免疫组化方法,检测TRAIL、Caspase-8和NF—κB蛋白在43例骨肉瘤及15例骨软骨瘤中的表达,并经图像分析系统测量TRAIL、Caspase-8和NF—κB蛋白的平均光密度（0D）值;用TUNEL方法检测骨肉瘤及骨软骨瘤中细胞凋亡。结果TRAIL、Caspase-8蛋白在骨肉瘤中的阳性表达均低于骨软骨瘤组织（P〈0．05）;而NF—κB蛋白在骨肉瘤中的表达高于骨软骨瘤（P〈0．05）。TRATL与Caspase-8蛋白在骨肉瘤中表达呈正相关（P〈0．01）;而TRATL与NF-κB蛋白在骨肉瘤中表达呈负相关（P〈0．01）。骨肉瘤组细胞凋亡指数（AI）显著低于骨软骨瘤组（P〈0．05）;TRAIL、Caspase-8蛋白表达与细胞凋亡均呈正相关（P〈0．01）;而NF—κB蛋白表达与骨肉瘤细胞凋亡呈负相关（P〈0．01）。结论TRAIL基因可能是诱导骨肉瘤细胞凋亡的分子基础,参与了其发生发展过程中细胞凋亡的调控。Caspase-8作为影响细胞凋亡过程的因子,在骨肉瘤发生、发展中发挥作用。NF-κB在骨肉瘤细胞增殖与凋亡中具有重要作用。TRAIL、Caspase-8蛋白呈低表达,可能受NF—κB高表达的调控而不能诱导细胞凋亡。提示三者在骨肉瘤的发生、发展中起协同作用。     

蒿甲醚激活 PPARγ途径抑制小鼠 Lewis 肺癌细胞体外增殖和侵袭机制研究

目的：研究青蒿素类衍生物蒿甲醚（ARE）对小鼠 Lewis 肺癌细胞株（LLC）体外生长和侵袭的影响,探讨其可能的作用机制。方法采用 MTT 法观察 ARE 对 LLC 细胞生长的抑制效应。Trans-well 侵袭实验检测对照组、ARE 组、GW9662[过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）特异性抑制剂]组和 GW9662＋ARE 组4组LLC 细胞的侵袭力。实时 PCR 和 Western blotting 法检测4组细胞 PPARγ、NF-κB p65、Caspase-3 mRNA 和蛋白表达。结果ARE 呈时间和剂量依赖性方式抑制 LLC 细胞生长,24、48、72 h ARE 对 LLC 的 IC50值分别为271．29、189．08、65．99μg／ml。4组中 ARE 组的荧光值最低,为1744．67,对照组为6887．00,GW9662＋ARE 组为4597．00,GW9662组为10012．67,表明 ARE 组侵袭力最弱,而且相比对照组侵袭力明显减弱（t ＝12．411,P ＝0．000）。ARE 组、GW9662组 PPARγmRNA 相对表达量分别为2．276±0．534和0．362±0．206,与对照组相比差异均有统计学意义（t ＝4．785,P ＝0．001;t ＝2．395,P ＝0．044）;ARE 组 PPARγ蛋白表达量为27688．33±3593．06,比对照组（17716．33±2273．95）、GW9662＋ARE 组（21816．00±1644．07）高（t ＝5．159,P ＝0．001;t ＝3．038,P ＝0．016）。NF-κB p65 mRNA 表达量在 GW9662＋ARE 组（0．346±0．149）最低,其次为 ARE 组（0．392±0．187）, GW9662组最高（1．720±0．338）,ARE 组与对照组和 GW9662组相比差异有统计学意义（t ＝3．592,P ＝0．007;t ＝7．851,P ＝0．000）。Caspase-3 mRNA 和蛋白在各组的表达差异没有统计学意义（F ＝1．181, P ＝0．376;F ＝0．647,P ＞0．05）。结论蒿甲醚可以通过上调 PPARγ表达抑制 NF-κB 的途径来抑制 LLC细胞体外增殖和侵袭,提示 PPARγ可能为肺癌治疗提供一个新的靶点。     

核糖体蛋白 S7对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡的影响

目的：初步探讨核糖体蛋白 S7（RPS7）对宫颈癌 HeLa 细胞凋亡的影响。方法用构建的带增强绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的 RPS7重组表达质粒 pIRES2-EGFP-RPS7转染 HeLa 细胞作为实验组,以转染空载体 pIRES2-EGFP 的细胞作为对照组,流式细胞仪检测带绿色荧光细胞的含量, Western blotting 检测细胞中 RPS7蛋白表达;用带有荧光染料藻蓝蛋白（APC）的磷脂结合蛋白-V （Annexin-V）试剂对瞬时过表达和稳定干扰 RPS7的细胞进行染色,流式细胞仪分析细胞凋亡水平。结果在获得的瞬时过表达RPS7的 HeLa 细胞中,细胞凋亡水平明显高于转染空载体的细胞[（10．00±0．60）％∶（5．73±0．61）％],差异有统计学意义（t ＝8．63,P ＝0．001）。另一方面,抑制 RPS7表达的Sh-RPS7细胞凋亡水平低于对照细胞[（3．08±0．49）％∶（5．97±0．63）％],差异有统计学意义（t ＝6．40,P ＝0．003）。结论上调 RPS7表达具有促进 HeLa 细胞凋亡的作用,而下调 RPS7表达可抑制HeLa 细胞的凋亡。     

NF-κB抑制剂增敏卡铂对卵巢癌细胞毒性作用的机制研究

[目的]探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（PDTC）增敏卡铂对卵巢癌细胞的毒性作用及其机制。[方法]采用凝胶迁移率变动试验（EMSA）法,观察卡铂作用下和卡铂与PDTC共同作用下NF-κB的活化反应;MTT和流式细胞仪分别比较2种情况下SKOV3细胞的生长情况和凋亡率;RT-PCR方法检测2种情况下survivinmRNA的表达。[结果]EMSA实验结果表明,卡铂可以诱导NF-κB活化,PDTC可以抑制此作用。PDTC预处理后可增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。卡铂作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率分别为3.4%、20.1%;卡铂＋PDTC作用24h、48h后卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率明显增加,分别为14.0%、32.7%,与卡铂组相比有显著性差异（P〈0.01）。卡铂作用3d、5d后卵巢癌SKOV3细胞中survivinmRNA的相对表达量分别为0.48±0.04、0.57±0.03,卡铂＋PDTC组分别为0.33±0.04、0.38±0.04,对应时间点两组差异显著（P〈0.01）。[结论]卡铂能诱导NF-κB的活化,NF-κB抑制剂可以增强卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。NF-κB可能通过上调SKOV3细胞内survivinmRNA的表达来抵抗卡铂诱导的SKOV3细胞的凋亡。     

沉默HOXC10基因促进骨肉瘤MG-63细胞凋亡及其机制

目的:探讨沉默同源框C10（Homeobox C10,HOXC10）基因表达对骨肉瘤细胞MG-63细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨可能的作用机制。方法:采用脂质体转染法将特异性针对HOXC10基因的shRNA转入骨肉瘤MG-63细胞（HOXC10-shRNA组）,同时以转染Scramble-shRNA作为对照组（Scramble-shRNA组）,分别应用实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测HOXC10 mRNA及蛋白的表达水平。转染处理后,分别采用CCK-8法及FCM法检测骨肉瘤MG-63细胞的增殖抑制率及凋亡情况,采用蛋白质印迹法检测HOXC10、ATM和核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB)及凋亡相关蛋白Survivin和Caspase-3的表达水平。结果:HOXC10-shRNA转入MG-63细胞后,HOXC10 mRNA和蛋白的表达水平均明显下调（P均<0.05）。与Scramble-shRNA组细胞活力（0.95±0.12）%和凋亡率（4.35±0.52）%相比,HOXC10-shRNA组细胞活力（0.38±0.06）%明显下降,细胞凋亡率为（18.19±3.76）%明显升高（P均<0.05）;ATM/NF-κB信号通路中相关蛋白ATM、NF-κB及Survivin的表达水平均明显下调（P均<0.05）,而Caspase-3表达明显上调（P<0.05）。结论:沉默HOXC10基因表达后可抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与调控ATM/NF-κB信号通路的活化相关。     

Dishevelled 2对弥漫大B细胞淋巴瘤OCI-Ly10细胞凋亡的影响

目的：观察Dishevelled（DVL）对弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）细胞株OCI-Ly10凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法构建DVL2过表达慢病毒质粒并进行病毒包装,转染OCI-Ly10细胞。在肿瘤坏死因子α（TNF-α）重组蛋白刺激和不刺激的情况下,采用流式细胞术检测转染病毒后OCI-Ly10细胞的凋亡率。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测NF-κB通路下游调控的抗凋亡基因A20和GADD45β的表达情况。结果成功将病毒转染OCI-Ly10细胞,实现DVL2过表达。当DVL2过表达后,无TNF-α刺激时,OCI-Ly10细胞凋亡率较空载对照组增加[（15.46±2.37）%比（11.72±3.53）%,P＝0.03）],抗凋亡基因A20的mRNA相对表达量较空载对照组下降（0.66±0.01比1,P＝0.04）,GADD45β的mRNA相对表达量较空载对照组下降,但差异无统计学意义（0.79±0.15比1,P＝0.642）。在TNF-α刺激下DVL2过表达的OCI-Ly10细胞凋亡率高于空载对照组[（22.78±4.56）%比（12.79±2.89）%,P＝0.007],A20和GADD45βmRNA表达明显增加,但是DVL2增加幅度小于空载对照组（A20：3.75±0.14比6.89±0.10,P＝0.008;GADD45β：4.75±0.21比6.14±0.08,P＝0.03）。结论 DVL可促进OCI-Ly10细胞凋亡,其作用机制可能与通过抑制NF-κB通路进而抑制其下游的抗凋亡基因有关。     

K562及其耐药细胞株K562／A02对rmhTRAIL的敏感性及NF-κB表达

[目的]探讨K562及其耐药细胞株K562／A02对rmhTRAIL敏感性及NF-κB（RelA／p65）的表达。[方法]观察rmhTRAIL作用后K562、K562／A02细胞形态变化，采用碘化丙啶染色法流式细胞术定量检测细胞凋亡比例，MTT法测定rmhTRAIL抑制细胞增殖率，半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测K562、K562／A02细胞的NF-κB（RelA/p65）mRNA表达水平。[结果]rmhTRAIL可诱导K562、K562／A02细胞凋亡，有典型的细胞形态改变；流式细胞术检测显示K562／A02的sub—G1百分比大于K562（P〈0．05）；rmhTRAIL对K562／A02的增殖抑制作用优于K562（P〈0．05）；K562和K562／A02均高表达NF-κB（RelA/p65）mRNA，两者无统计学意义（p〉0．05）。[结论]rmhTRAIL可以诱导K562、K562／A02细胞凋亡；rmhTRAIL对K562／A02促凋亡和抑制增殖作用优于K562；NF-κB（RelA／p65）未显示出其在K562及其耐药细胞株K562／A02对rmhTRAIL敏感性差异中的作用。     

赖氨匹林对黑色素瘤B16细胞的增殖抑制作用

[目的]探讨非甾体抗炎药赖氨匹林（Aspisol）对小鼠黑色素瘤细胞株B16的增殖抑制作用及其可能的机制。[方法]应用MTF比色法分析细胞生长抑制作用,流式细胞技术测定凋亡率,应用Western blot分别检测COX-2蛋白和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。[结果]2～8mmol／L赖氨匹林可抑制B16细胞的生长,且其作用具有剂量和时间依赖性（P〈0．01）。赖氨匹林（2、4、8mmol／L）作用24h后诱导B16细胞的凋亡率分别为5．05％±1．23％、9．25％±1．46％、14．80％±1．98％,并呈浓度依赖性;与对照组（0．18％±0．13％）比较差异有显著性（P〈0．01）。赖氨匹林抑制B16细胞COX-2蛋白的表达（P〈0．05）;赖氨匹林可促进Bax蛋白表达（P〈0．05）,但抑制Bcl-2的表达（P〈0．05）。[结论]赖氨匹林通过影响COX-2蛋白的表达,调节凋亡相关蛋白表达,抑制B16细胞增殖。     

DC-CIK联合化疗对乳腺癌患者Treg细胞表达及预后的影响

目的：探讨树突状细胞（DC）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）联合化疗对乳腺癌患者Treg 细胞表达和预后的影响。方法试验组42例患者术后接受 DC-CIK 细胞联合化疗,对照组38例患者仅接受单纯化疗,比较两组患者治疗后外周血中 Treg 细胞表达量,比较两组近期疗效、无进展生存期（PFS）、总生存期（OS）以及治疗后的生命质量。结果治疗后1周试验组患者外周血中 Treg 细胞表达量明显低于对照组[（11．37±1．10）％∶（14．25±0．95）％],治疗后2周试验组患者外周血中 Treg 细胞表达量明显低于对照组[（7．94±1．12）％∶（9．14±1．21）％],差异均有统计学意义（t ＝12．470,P ＝0．000;t ＝4．606,P ＝0．000）。试验组临床有效率与对照组比较（47．62％∶44．74％）,差异无统计学意义（χ2＝0．07,P ＝0．80）;试验组疾病控制率明显高于对照组（80．95％∶60．53％）,差异有统计学意义（χ2＝4．06,P ＝0．04）。试验组患者的 PFS[（7．50±1．45）个月∶（5．50±1．52）个月]和 OS[（13．50±3．20）个月∶（11．50±3．25）个月]均明显长于对照组,差异均有统计学意义（t ＝6．021,P ＝0．000;t ＝2．771,P ＝0．007）。治疗后试验组患者在躯体功能（72．85±12．01∶57．42±13．07）、情绪功能（68．45±9．97∶44．79±9．15）、认知功能（67．54±9．95∶62．37±10．34）、社会功能（65．72±12．17∶49．37±8．45）和总体生命质量（71．43±11．50∶59．48±12．45）方面的评分均明显高于对照组,差异均有统计学意义（t ＝5．503,P ＝0．000;t ＝11．020,P ＝0．000;t ＝2．278,P ＝0．025;t ＝7．032,P ＝0．000;t ＝4．463,P ＝0．000）。结论DC-CIK 联合化疗能够显著降低乳腺癌患者外周血中 Treg 细胞的表达,改善免疫抑制情况,同时提高疗效,延长 PFS,提高患者的生命质量。     

骨肉瘤Kv1.5钾离子通道表达意义的研究

目的 研究表明,Kv1.5钾离子通道参与了多种肿瘤的生物学行为,但其在骨肉瘤中的表达和作用尚未明确.本研究拟检测Kv1.5钾离子通道在骨肉瘤中的表达,并探讨小干扰RNA(small interfering,siRNA)沉默Kv1.5表达后对骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的影响及可能的调控机制.方法 实验分组,Kv1.5-siRNA转染细胞为实验组,control-siRNA转染细胞为对照组,未处理细胞为空白组.采用siRNA抑制Kv1.5的表达,并分别采用CCK-8法、克隆形成率、流式细胞仪和Tunel法检测MG-63细胞增殖、生长、周期和凋亡的变化.采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测骨肉瘤细胞中周期和凋亡相关基因的表达水平.结果 Kv1.5在骨肉瘤细胞和组织中均异常高表达.CCK-8法检测结果示,Kv1.5-siRNA组细胞增殖水平为(53.87±5.91)％,与control-siRNA组的(99.14±7.87)％相比差异有统计学意义,Z=-3.49,P＜0.001;与空白组(100.00±8.37)％相比差异有统计学意义,Z=-3.57,P＜0.001.克隆形成实验结果示,Kv1.5-siRNA组克隆形成数为164.00±7.66,与control-siRNA组(223.20±11.41)相比,Z=-2.61,P=0.008;与空白组(228.20±12.62)相比,Z=-2.40,P=0.016.流式细胞周期结果示,Kv1.5-siRNA组G0/G1期所占比例为(68.81±0.55)％,与control-siRNA组(41.22±0.61)％相比,Z=-2.15,P=0.031;与空白组(40.79±0.52)％相比,Z=-2.31,P=0.029.流式细胞凋亡结果示,Kv1.5-siRNA组(30.23±1.74)％与control-siRNA组(14.10±1.27)％相比,Z=-2.04,P=0.039;与空白组(12.85±1.02)％相比,Z=-2.09,P=0.035.Tunel法结果示,Kv1.5-siRNA组凋亡指数为(35.20±3.14)％,与control-siRNA组(8.03±1.50)％相比,Z=-2.41,P=0.015;与空白组(8.22±1.32)％相比,Z=2.25,P=0.019.沉默Kv1.5表达可明显下调骨肉瘤中Cyclin A、Cyclin D1、Cyclin E、Bcl-2和Bik基因的表达,同时上调p21、p27、Bax、Bcl-XL和Caspase-3基因的表达,与对照组相比,P值均＜0.05.结论 Kv1.5钾离子通道参与了骨肉瘤细胞增殖、周期和凋亡的过程,其作用机制可能与调控周期依赖激酶和Bcl-2家族的相关因子有关.     

肿瘤干细胞在食管癌放射线抵抗中的作用及分子机制研究

目的：探究肿瘤干细胞在食管癌放射线抵抗中的作用及其分子机理,为食管癌的放疗提供理论参考。方法采用8 GyX线照射食管癌细胞系TE1,建立并筛选出放射线抵抗的食管癌细胞系TE1－res。利用细胞计数法比较增殖情况,采用流式细胞术比较CD44（ high） CD24（－） CD133（＋）分子表达及其凋亡情况,克隆形成实验比较克隆形成率及细胞存活曲线,BSP方法比较抑癌基因甲基化程度。成组t 检验或方差分析差异。结果 TE1－res 细胞比 TE1细胞增殖能力增强（平均值20．84×105∶4．46×105／d,P＝0．008）,CD44（high） CD24（－）CD133（＋）细胞比例升高[（38．0±2．9）％∶（10．1±1．3）％,P＝0．001],抗凋亡能力增强（平均值33．23％∶10．50％,P＝0．003）,8 Gy照射后克隆形成率升高[（14．3±2．6）％∶（0．9±0．3）％,P＝0．011],D0值升高（3．28 Gy ∶2．19 Gy,P＝0．125）, SPINT2、CDKN1B、DKK1、TP53、PPP2R1B抑癌基因启动子区甲基化水平升高[（89．7±4．9）％∶（5．0±0．5）％（P＝0．001）、（92．3±4．7）％∶（10．4±0．7）％（P＝0．001）、（90．7±3．7）％∶（7．9±0．4）％（P＝0．001）、（83．4±5．7）％∶（17．2±1．2）％（P＝0．002）、（90．2±6．7）％∶（4．4±1．2）％（P＝0．002）]。结论肿瘤干细胞在食管癌放射线抵抗中具有重要作用,放射线抵抗与SPINT2、CDKN1B、DKK1、TP53及PPP2R1B等抑癌基因启动子区的高甲基化水平密切相关。     

抑制NF-κB的表达对射线诱导HeLa细胞株凋亡的影响

背景与目的：TNF、某些化疗药物以及电离辐射可以活化NF-κB,从而抑制细胞凋亡。NF-κB的活化可以通过特异性抑制剂吡咯二硫氨基甲酸脂（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）得到抑制。本实验的目的在于探讨抑制NF-κB的表达在宫颈癌HeLa细胞对射线诱导的细胞凋亡中的影响。方法：将HeLa细胞分为实验组加入PDTC（100μmol/L）及对照组不加PDTC。两组均给予直线加速器照射,剂量分别为0、2、4、6Gy,均作用2 h。用Western blot法来观察细胞核内NF-κB含量的变化,用TUNEL法来检测细胞的凋亡,用MTT法测细胞增殖。结果：辐射可以使HeLa细胞内NF-κB的表达增多,PDTC可以抑制由射线介导的NF-κB的增加。抑制了由射线介导的NF-κB的增加,不仅使得HeLa细胞的增殖受到明显的抑制（P〈0.05）也使凋亡指数大大增加（P〈0.001）。结论：在宫颈癌HeLa细胞中抑制NF-κB的表达可以增加由射线介导的细胞凋亡,增加了细胞对射线的反应。     

拓扑替康对卵巢癌SKOV3细胞水通道蛋白5及NF-κB表达的影响

背景与目的：水通道蛋白5（aquaporin 5,AQP5）的表达异常与卵巢癌细胞的浸润转移和血管形成有关。核转录因子NF-κB参与细胞的增殖、分化、凋亡,且能影响肿瘤细胞对化疗的敏感性。本研究探讨拓扑替康（topotecan,TPT）对卵巢癌SKOV3细胞中AQP5、核转录因子（nuclear factor kappa B,NF-κB）及其抑制因子（inhibitor kappa B,IκKBa）表达的影响。方法：用不同浓度TPT作用SKOV3细胞不同时间后,应用MTT法检测并计算卵巢癌细胞增殖抑制率,蛋白质印迹法检测AQP5、NF-κB及IκBα蛋白表达。并分析各蛋白表达水平的相关性。结果：0．4μg／mL TPT与SKOV3细胞温育24h,AQP5、胞浆和胞核NF-κB p65以及胞浆IκKBa表达随着作用时间延长均明显下降,并维持至72h后（P〈0．05）。不同浓度（0．2μg／mL、0．4μg／mL、0．6μ／mL、0．8μg／mL）TPT作用于SKOV3细胞24h,随着TPT浓度增加,SKOV3细胞AQP5表达量逐渐减少（P〈0．05）,0．8μg／mL TPT AQP5表达抑制率为57．9％;同时,细胞核NF-κBp65、IκKBa表达量也逐渐减少。TPT对细胞的增殖抑制率与AQP5表达呈负相关（r=-0．965;P〈0．05）,AQP5表达与NF-κB p65和IκKBa呈正相关（r=0．903,0．896;P〈0．05）。结论：TPT抑制肿瘤细胞增殖时下调AQP5及核转录因子NF—κB表达。     

肝癌细胞 miR-183表达及上下游调控机制探讨

目的： miR-183的显著上调已成为临床肝肿瘤发生的普遍特征,但其在肝癌发生中的分子机制亟待阐明。本研究探讨肝癌细胞 Hep3B 中 miR-183的表达及其上游调控机制和下游靶标蛋白变化。方法 MTT 法检测人正常肝细胞株 LO2及人肝癌细胞株 HepG2、Hep3B 的细胞增殖活性。提取细胞的总 RNA 和蛋白,采用 RT-qPCR 和蛋白印迹法分别检测细胞株中 miR-183的表达和细胞外信号调节激酶1／2（extracellular signal-regulated kinase 1／2,ERK1／2）、磷酸化 ERK1／2（phospho-ERK1／2,p-ERK1／2）、磷酸化胞内磷脂酰肌醇激酶（phospho-phosphatidylinositol-3-kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶 B（phospho-protein kinase B,p-AKT）、NF-κB 抑制蛋白α亚基（nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor,alpha,IκBα）和程序性细胞死亡因子4（programmed cell death factor 4,PDCD4）的蛋白水平。用抑制剂分别抑制 Hep3B 细胞 ERK、PI3K、AKT 和 NF-κB 信号分子的活性并检测 miR-183的表达水平及 PD-CD4蛋白表达水平。结果 LO2、HepG2和 Hep3B 细胞在48 h 的增殖倍数分别为8．76±0．22、16．61±1．59和19．86±0．69,F ＝159．90,P ＜0．001。与 LO2（41．68±9．62）和 HepG2（41．53±1．20）细胞相比,Hep3B（69．15±11．02）的 miR-183细胞表达水平显著升高,F ＝10．250,P ＝0．012。与 LO2相比,Hep3B 细胞的 p-ERK1、ERK1、p-AKT 和 IκBα的蛋白水平明显升高,分别为 LO2的10．87、24．68、6．67和1．92倍;PDCD4的蛋白水平明显下降,为 LO2的0．14倍。与LO2细胞相比,HepG2细胞的 IκBα和 PDCD4蛋白表达明显升高,分别为 LO2的4．46和7．90倍。抑制 ERK 的活性后24 h,miR-183表达水平显著上升,F ＝215．459,P ＜0．001;抑制 Hep3B 细胞的 PI3K 活性后12和24 h,miR-183表达水平显著降低,F ＝80．215,P ＜0．001;抑制 AKT 的活性后12和24 h,miR-183表达水平显著下降,F ＝101．947,P ＜0．001;抑制 NF-κB 的活性后12和24 h,miR-183表达水平没有显著变化,F ＝1．826,P ＝0．216。抑制 ERK 和 NF-κB 信号分子活性对 PDCD4的蛋白表达没有显著影响。抑制 PI3K 和 AKT 信号分子活性可明显提升 PDCD4的蛋白表达水平。结论在 Hep3B 细胞中,PI3K／AKT 对 miR-183的表达有显著的促进作用,而 ERK 对 miR-183的表达有显著的抑制作用,NF-κB 不是调控 miR-183表达的主要信号分子。PDCD4是 miR-183的重要下游靶蛋白。     

头颈部鳞癌中Toll样受体-3的表达及意义

[目的]探讨Toll样受体-3（TLR3）在人类头颈部鳞状细胞癌（HNSCC）的表达，及其与NF—κB的关系。[方法]运用Western blot检测7种HNSCC细胞株、HNSCC组织和癌旁组织、白斑和正常的口鼻腔黏膜中TLR3和NF—κB蛋白的表达。[结果]在HNSCC细胞株中TLR3和NF—κB均表达：在HNSCC组织中TLR3表达率为70％，并与NF-κB的表达呈正相关（r=0．952，P〈0．001）；在癌旁组织、白斑和正常口鼻腔黏膜中均不表达TLR3。[结论]TLR3可能与头颈部肿瘤的形成有关．有可能为肿瘤治疗提供潜在的新靶点。     

辛伐他汀对NB4细胞分化与凋亡的影响

 目的　探讨磁性纳米Fe3O4颗粒（Fe3O4-MNP）联合多柔比星（ADM）对Raji细胞的影响。方法　采用MTT法检测细胞的增殖,锥虫蓝染色计数细胞的活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测p53和NF-κB的表达水平。结果　ADM及Fe3O4-MNP-ADM对Raji细胞的生长抑制率与药物浓度、作用时间呈正相关（r＝0.412,P＝0.027;r＝0.523,P＝0.014）;12、24、48 h细胞凋亡率二者分别为8.76 % 比 14.85 %、35.08 %比 44.50 %、44 %比69.4 %,差异有统计学意义（P＝0.012、0.041、0.024）;Western blot检测示ADM组与Fe3O4-MNP-ADM组NF-κB蛋白的灰度条带与内参比较分别为4.22±0.32、3.31±0.28,p53蛋白的条带灰度值分别为1.042±0.114、1.270±0.091,差异具有统计学意义（t＝-54.416,P＝0.035;t＝33.963,P＝0.047）。结论　Fe3O4-MNP联合ADM能够有效抑制Raji细胞增殖并诱导其凋亡,作用机制可能与增强p53蛋白活化、抑制NF -κB通路的激活有关。     

非小细胞肺癌组织中HER和COX-2及NF-κB的表达及其临床意义

目的：探讨EGFR、HER-2、COX-2和NF-κB在非小细胞肺癌（non-small cell lung caneer,NSCLC）组织中的表达以及与术后生存的关系。方法：采用免疫组化方法对114例NSCI,C标本进行EGFR、HER-2、COX-2和NF-κB表达的检测。并且分析上述指标与临床病理特征和预后的关系。结果：EGFR、HER-2、COX-2和NF-κB表达率分别为69．3％（79／114）、19．3％（22／114）、72．8％（83／114）和86．8％（99／114）。鳞癌与腺癌各指标表达率差异无统计学意义,EGFR（P=0．U4）、HER-2（P=0．409）、COX2（P=0,162）和NF-κB（P=0．857）的单独表达与预后无关;而EGFR和COX-2均为强阳性（＋＋＋）者预后差,P=0．001。NF-κB的表达与COX-2（P=0．000）及EGFR（P=0．029）的表达密切相关。结论：EGFR、COX2和NF-κB在NSCLC组织中均高表达,EGFR和COX-2均强阳性表达,为独立的预后差的因素。EGFR联合COX-2可能成为NSCLC的有效治疗靶点。     

SIRT-1、NF-κB 在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的：探讨沉默交配型信息调节因子2同源蛋白-1（SIRT-1）、核转录因子-κB（NF-κB）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学 SP 法,检测108例 NSCLC和48例癌旁正常组织中 SIRT-1、NF-κB 的表达情况,并结合临床资料进行相关性分析。结果在NSCLC 组织中,SIRT-1、NF-κB 的阳性表达率分别为90.7％（98/108）、94.4％（102/108）,均明显高于癌旁正常组织的4.2％（2/48）、16.7％（8/48）,差异有统计学意义（χ2＝108.237,P ＝0.000;χ2＝96.683, P ＝0.000）,且两者表达呈正相关（r ＝0.480,P ＝0.000）;NSCLC 组织中 SIRT-1的表达与肿瘤大小（r ＝0.227,P ＝0.018）、TNM 分期（r ＝0.298,P ＝0.002）及淋巴结转移（r ＝0.280,P ＝0.003）呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关（r ＝-0.300,P ＝0.002）,与性别、年龄、组织学类型无关。NSCLC 组织中 NF-κB的表达与 TNM 分期（r ＝0.256,P ＝0.009）及淋巴结转移（r ＝0.261,P ＝0.006）呈正相关,与肿瘤分化程度呈负相关（r ＝-0.235,P ＝0.013）,与性别、年龄、组织学类型、肿瘤大小无关。结论 SIRT-1、NF-κB在 NSCLC 中表达均明显高于癌旁正常组织,且与淋巴结转移、TNM 分期及组织分化程度密切相关, SIRT-1尚与肿瘤大小密切相关。提示 SIRT-1、NF-κB 高表达在 NSCLC 发生发展中可能具有重要作用。     

POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的信号调控

目的:旨在探讨原癌基因POKemon和核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB) p65在肝癌细胞中的信号调控作用.方法:采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQ-PCR)和蛋白质印迹法分别检测POKemon、NF-κB p65 mRNA和蛋白在肝癌细胞株HepG2和SMMC7721及人胚胎肝细胞LO2中的表达情况;随后应用小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)法依次分别抑制POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞中的表达,观察二者在肝癌细胞中的变化,并应用FCM法检测对肝癌细胞凋亡的影响.结果:POKemon和NF-κB p65在肝癌细胞HepG2和SMMC7721中的表达量明显高于人胚胎肝细胞LO2;特异性针对POKemon基因的siRNA抑制POKemon的表达后,NF-κB p65在HepG2和SMMC7721细胞中的表达量也明显下降,转染前后分别为2.12±0.14vs 1.37±0.11和2.08±0.16vs 1.35±0.13,差异有统计学意义(P＜0.05),且肝癌细胞凋亡明显增加分别为(5.07±0.46)％vs (39.65±3.75)％和(5.71±0.83)％vs (33.21±3.66)％,差异有统计学意义(P＜0.05);特异性针对NF-κB基因的siRNA抑制NF-κB p65的表达后,POKemon在HepG2和SMMC7721细胞中的表达则无明显变化,其表达量转染前后分别为1.86±0.12vs 1.90±0.13和1.91±0.11 vs 1.85±0.11,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显提高HepG2和SMMC7721细胞的凋亡率,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:原癌基因POKemon可通过调控NF-κB p65的表达而阻遏肿瘤细胞凋亡,促进肝癌的发生、发展.