NDRG2对A549肺癌细胞增殖的抑制作用

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对于肺癌细胞系增殖的抑制作用。方法:将NDRG2基因转染进肺癌细胞系A549,采用G418筛选出稳定高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag并将仅转染载体的A549/pcDNA3.1(+)作为阴性对照。Western blot检测NDRG2在转染细胞中的表达水平。MTT、平板克隆形成试验检测转染前后细胞增殖作用的差异,流式细胞仪检测转染后细胞的周期分布状态。结果:成功构建高表达NDRG2的亚克隆细胞系A549/NDRG2-flag。证实了NDRG2的高表达能够抑制肺癌细胞系的增殖(P<0.01),使肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。结论:NDRG2高表达后能够有效抑制肺癌细胞系A549增殖并阻滞细胞周期滞留在G0/G1期。     

NDRG2 siRNA对宫颈癌Hela细胞顺铂化疗敏感性影响的研究

目的：探讨人源N-myc下游调节基因2（N-Myc downstream-regulated gene 2,NDRG2）小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）对宫颈癌Hela细胞的化疗增敏作用。方法：利用化学合成的针对NDRG2特异性siRNA借助脂质体转染宫颈癌Hela细胞。采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测NDRG2mRNA和蛋白在宫颈癌Hela细胞的表达情况。通过MTT法检测该细胞在顺铂作用下的体外存活率。结果：化学合成的NDRG2特异性siRNA oligomer可使Hela细胞的NDRG2表达水平明显降低,增强了顺铂对Hela细胞体外生存的抑制能力。转染Negative-control oligomer的Hela细胞与转染NDRG2siRNA oligomer HSS126269的Hela细胞相比,其存活情况出现明显差异,IC50值分别为（6.69±0.33）和（1.69±0.25）μg/L,差异有统计学意义,t=17.311,P=0.003。结论：抑制NDRG2表达可以提高宫颈癌Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,具有一定的临床应用前景。     

Twist基因转染对人宫颈癌细胞生物学行为影响的观察

目的:构建人Twist基因真核表达载体,并建立稳定高表达Twist的人宫颈癌HCC94细胞系,研究转染前后HCC94细胞生物学行为。方法:用RT-PCR法扩增人低分化宫颈癌HCE1细胞中Twist开放阅读框架,将PCR产物克隆到pZsGreen-C1真核表达载体,构建重组质粒pZsGreen-C1/Twist并鉴定。采用脂质体法把重组载体转染入人高分化宫颈癌HCC94细胞,经G418筛选获得稳定高表达Twist的细胞克隆,并进行荧光,蛋白质印迹法和Realtime RT-PCR检测;MTT法和侵袭小室实验研究转染前后HCC94细胞的增殖、黏附和迁移能力。结果:成功构建pZsGreen-C1/Twist真核表达载体,筛选出稳定高表达人Twist的p-tw-1克隆,经荧光显微镜观察其转染效率>70%。Realtime RT-PCR扩增曲线和熔点曲线显示,Twist基因有效扩增,p-tw-1组、p-tw-v(转染空载体)组和HCC94(未转染)组mRNA相对表达量分别为4.14±2.26、2.03±1.10和1.90±0.78,p-tw-1组相对于其他两组水平明显上调,差异有统计学意义,F=10.24,P=0.001;而对照组之间差异无统计学意义,P=0.146。蛋白质印迹法检测结果显示,Twist基因稳定表达,p-tw-1组、p-tw-v组和HCC94组IOD与GAPDH比值分别为0.65、0.33和0.30。p-tw-1组细胞从第4天起生长趋势快于p-tw-v组和HCC94组,差异有统计学意义,F=24.113,P=0.000;而两对照组之间差异无统计学意义,P=0.229。P-tw-1、P-tw-v和HCC94组平均穿膜细胞数分别为(263.67±18.04)、(126.00±17.69)和(116.33±9.87)个,p-tw-1组细胞数明显增多,差异有统计学意义,F=83.093,P=0.000;p-tw-v与HCC94组之间差异无统计学意义,P=0.478。P-tw-1、P-tw-v和HCC94组黏附细胞平均A值分别为0.38±0.01、0.53±0.01和0.57±0.01,p-tw-1组A值明显降低,差异有统计学意义,F=65.086,P=0.000;p-tw-v组与HCC94组之间差异无统计学意义,P=0.244。结论:Twist基因高表达可增强宫颈癌细胞增殖和迁移能力,降低其黏附能力;Twist真核表达载体和稳定高表达Twist的HCC94细胞系构建为进一步研究Twist功能奠定了基础。     

靶向抑制survivin对结肠癌细胞凋亡及增殖效应的影响

目的探讨survivin反义寡核苷酸对结肠癌细胞凋亡及增殖效应的影响及机制。方法在脂质体介导下将不同浓度的survivin反义寡核苷酸（ASODN）转染入结肠癌细胞株SW480，用免疫组化染色检测结肠癌细胞株survivin蛋白的表达；激酶活性检测法测定细胞内caspase-3活性变化；用流式细胞仪检测Annexin—V—FITC标记的凋亡细胞；用四唑盐比色法（MTT）检测细胞生长活性及其生长抑制率。结果survivin ASODN能有效下调survivin蛋白表达，细胞凋亡率及生长抑制率也随转染剂量增加而逐渐递增，与对照组比较差异有显著性（P〈0．01）。同时，各ASODN组caspase-3活性明显高于对照组（P〈0．01），且随浓度的增加caspase-3活性越高。结论脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以有效降低细胞内survivin蛋白的表达，诱导细胞发生凋亡，抑制结肠癌细胞生长。     

凝血因子Ⅶa促进SW620细胞增殖与迁移的机制探讨

目的 体外探讨凝血因子Ⅶa促进结肠癌细胞株SW620增殖与迁移的作用机制.方法 采用蛋白酶激活受体2激动剂(PAR2-AP)、凝血因子Ⅶa等处理SW620细胞,以实时定量PCR检测SW620细胞中白细胞介素8(IL-8)、组织因子(TF)及半胱氨酸蛋白酶7(caspase-7)mRNA的表达水平;以酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清IL-8蛋白的含量;以Xa生成法检测细胞TF活性;以Western blot法检测细胞磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)水平.结果 PAR2-AP、凝血因子Ⅶa能够增加SW620细胞中IL-8基因和蛋白的表达,上调TF mRNA水平及活性,下调caspase-7基因表达和p-p38 MAPK水平,单克隆抗TF及抗PAR2抗体均可抑制凝血因子Ⅶa的作用.结论 凝血因子Ⅶa与细胞表面TF形成复合物,通过活化PAR2,上调结肠癌细胞株SW620中IL-8、TF的表达,下调细胞caspase-7表达,从而促进细胞增殖与迁移能力,p38 IVIAPK在此过程中起负性调节作用.     

NDRG 1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的研究NDRG1基因转染对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法将重组真核表达质粒pEGFP-NDRG1-N3和空载体pEGFP-N3采用阳离子脂质体Lipofectamine转染HT-29人结肠癌细胞株,通过荧光倒置显微镜检测绿色荧光蛋白的表达。免疫组织化学染色检测转染前后HT-29细胞NDRG1的表达。并通过多种体外实验（流式细胞术法、24-transwell法、扫描电镜和透射电镜等）研究NDRG1对HT-29人结肠癌细胞株体外增殖、侵袭和迁移能力及表面和超微结构的影响。结果流式细胞术结果显示,与未转染组和转染pEGFP-N3空载体组比较,pEGFP-NDRG1-N3组细胞生长周期G0/G1期比例增高,S期明显减低,差异有统计学意义（P〈0.05）。细胞侵袭和迁移实验的结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组细胞与空载体和空白对照组比较,穿过微孔膜的细胞数均明显减少,差异有统计学意义（P〈0.05）。扫描和透射电镜结果显示,转染pEGFP-NDRG1-N3组HT-29细胞生长增殖受抑制,细胞分化程度有增高趋势。结论 NDRG1基因可明显抑制HT-29人结肠癌细胞的体外增殖活性,降低其侵袭和迁移能力,促进其分化,提示其可作为一种候选的肿瘤转移抑制基因。     

羟基磷灰石纳米粒子-Mg2＋对结肠癌SW480/M5细胞基因转染的效果研究

目的 探讨新型非病毒载体羟基磷灰石纳米粒子（nHAP）在肿瘤基因治疗中的作用及可能机制.方法 nHAP经氯化镁修饰后,经琼脂糖凝胶电泳判断nHAP-Mg2＋与DNA的结合和保护作用.以增强型绿色荧光蛋白真核表达载体PEGFP-N1为报告基因,以脂质体作为基因载体转染到人类结肠癌SW480/M5细胞,流式细胞术测定转染效率和平均荧光值.四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法评价nHAP-Mg2＋对细胞生长的影响.结果 在质量比合适时,nHAP-Mg2＋与DNA能够完全结合并对DNA起到保护作用.单独应用nHAP-Mg2＋时无基因转移功能,联合脂质体共同作为基因转染的载体可成功将PEGFP-N1基因导入SW480/M5细胞,其转染效率和平均荧光强度高于单用脂质体组（P＜0.05）.单纯应用nHAP-Mg2＋和联合脂质体时,随着nHAP-Mg2＋量的增加（0 ～ 50 μg/ml）对SW480/M5细胞的生长抑制作用增强（P＜0.05）.结论 nHAP-Mg2＋具有结合和保护质粒DNA的作用.作为脂质体的辅助载体,不但可以提高基因转染效率和稳定表达,还可增强基因治疗的抗肿瘤效果.     

野生型PTEN基因对胶质细胞瘤侵袭力的影响

目的观察转入野生型PTEN基因的胶质瘤细胞体外侵袭力改变,探索PTEN基因对胶质瘤细胞影响方式.方法构建野生型PTEN基因的pcDNA3.1 Hygro(-)真核质粒载体,并用于转染PTEN基因失活的U251细胞系,采用重组基底膜侵袭模型,观察转染前后细胞侵袭力的改变.结果转染PTEN基因可以明显抑制U251细胞的侵袭力.结论 PTEN基因可通过抑制胶质瘤细胞的侵袭力达到抑制肿瘤生长.     

人结肠癌SW620细胞表面抗原CD133的表达具有可塑性

目的:探讨CD133抗原在人结肠癌细胞SW620中表达是否具有可塑性。方法:对SW620细胞进行流式细胞活化荧光分析,分选出CD133-和CD133+细胞亚群。对这2种亚群细胞进行单层培养传代、悬吊法三维球培养及无糖或无血清培养液培养后,应用免疫染色与荧光定量PCR法检测CD133表达变化。结果:结肠癌SW620细胞中存在CD133-与CD133+两种亚群。分选后的CD133-与CD133+亚群细胞在单层培养时CD133表达无明显变化;在三维球培养时,CD133-亚群细胞中出现明显的CD133抗原及mRNA表达(P<0.05);而在无血清培养时,CD133-与CD133+两亚群细胞的CD133表达无变化;在无糖培养时,CD133-亚群细胞中出现CD133阳性表达。结论:人结肠癌SW620细胞中表面抗原CD133表达具有可塑性,可受不同培养条件的调节。     

分化相关基因NDRG1的研究进展

目的:总结分化相关基因NDRG1的研究进展,探讨NDRG1在肿瘤等疾病治疗中的应用价值.方法:应用PubMed和CNKI期刊全文数据库检索系统,以"NDRG1、肿瘤转移、细胞分化"为关键词,共检索到1997-2010年相关文献159篇,纳入标准:1)NDRG1的表达及调控;2)NDRG1在肿瘤中的表达及临床意义.根据标准纳入分析30篇参考文献.结果:NDRG1属NDRG家族成员,受p53、PTEN和缺氧等多种因素调控,主要参与细胞的生长发育和分化、成熟,近年发现,NDRG1与人类肿瘤的发生发展、侵袭及转移密切相关,是影响恶性肿瘤预后的新指标.结论:有关NDRG1的研究可能为肿瘤预后判断及分化治疗提供新的依据.     

应用组织芯片技术研究抑癌候选基因NDRG2在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义

目的:应用组织芯片技术分析抑癌候选基因NDRG2在人类甲状腺癌组织、甲状腺正常组织及甲状腺良性病变组织中的表达情况.方法:采用小鼠抗NDRG2单克隆抗体的免疫组织化学ABC法,研究NDRG2在不同甲状腺组织的表达,并分析NDRG2在不同甲状腺组织中的表达差异.结果:免疫组化结果显示,甲状腺癌组织与甲状腺良性病变组织中DNRG2的表达相比较呈显著性差异(P＜0.05),甲状腺癌组织与正常甲状腺组织中DNRG2的表达相比较呈显著性差异(P＜0.05).甲状腺良性病变组织与正常甲状腺组织中DNRG2的表达相比较呈显著性差异(P＜0.05).结论:NDRG2在甲状腺癌组织中呈低表达,提示其可能对甲状腺癌的发生或发展有重要作用,这不仅为研究甲状腺癌的发病机制进一步提供了线索,而且对甲状腺癌的诊断和治疗具有重要意义.     

应用组织芯片技术研究抑癌候选基因NDRG2在甲状腺肿瘤组织中的表达及其意义

目的：应用组织芯片技术分析抑癌候选基因NDRG2在人类甲状腺癌组织、甲状腺正常组织及甲状腺良性病变组织中的表达情况。方法：采用小鼠抗NDRG2单克隆抗体的免疫组织化学ABC法,研究NDRG2在不同甲状腺组织的表达,并分析NDRG2在不同甲状腺组织中的表达差异。结果：免疫组化结果显示,甲状腺癌组织与甲状腺良性病变组织中DNRG2的表达相比较呈显著性差异（P〈0．05）,甲状腺癌组织与正常甲状腺组织中DNRG2的表达相比较呈显著性差异（P〈0．05）。甲状腺良性病变组织与正常甲状腺组织中DN—RG2的表达相比较呈显著性差异（P〈0．05）。结论：NDRG2在甲状腺癌组织中呈低表达,提示其可能对甲状腺癌的发生或发展有重要作用,这不仅为研究甲状腺癌的发病机制进一步提供了线索,而且对甲状腺癌的诊断和治疗具有重要意义。     

c-myc反义寡核苷酸对表达FHIT基因的结肠癌细胞增殖及凋亡作用的影响

目的：观察脂质体介导的c—myc反义寡核苷酸对表达FHIT基因的结肠癌细胞增殖及凋亡作用的影响。方法：用脂质体法将重组FHIT基因的PRC／CMV质粒和空载体质转染到人结肠细胞株SW480，随后分别转染c—myc反义寡核苷酸。Western blot法检测细胞FHIT和c—myc的表达；MTF法检测细胞的增殖；AO／EB染色法和流式细胞分析技术检测细胞的凋亡。结果：转染FHIT基因后，SW480细胞有明显的FHIT蛋白表达而转染空载体的细胞未检测到FHIT蛋白表达。C—myc反义寡核苷酸转染后，对SW480细胞c—myc的表达有明显的抑制作用（P〈0．01）；对FHIT＋／-SW480细胞的增殖均有明显的抑制作用（P〈0．01），且对FHIT＋SW480细胞的抑制作用明显强于FHIT—SW480细胞（P〈0．05）。同时，c-myc反义寡核苷酸对FHIT＋／-SW480细胞的凋亡均有明显的促进作用，对FHIT＋SW480细胞凋亡的促进作用明显强于FHIT—SW480细胞（P〈0．05）。结论：FHIT基因的表达和癌基因c—myc的表达抑制共同作用可以发挥较强的抗肿瘤细胞的效果，为多基因联合干预治疗肿瘤奠定了理论基础。     

腺病毒介导NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响

目的:研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响.方法:腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109,逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测NDRG2基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基嚷唑基四唑法(MTT法)绘制细胞生长曲线,流式细胞仪(FCM)分别分析细胞周期和细胞凋亡.结果:腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞增殖受到明显抑制(P＜0.05);流式细胞仪检测显示,与对照组相比,感染后48小时Eca-109细胞G2期细胞明显减少(P＜0.01),S期细胞明显增多(P＜0.01);转染后的Eca-109细胞中凋亡细胞明显增多,感染48h后达16.0%.结论:过表达NDRG2可明显抑制人食管鳞癌细胞Eca-109的增殖并诱导细胞凋亡.     

磷脂酶Cε1的过表达可抑制结肠癌SW6 20细胞的迁移并诱导其凋亡

目的:探讨磷脂酶Cε1(phospholipase C epsilon-1,PLCE1)基因过表达对结肠癌细胞迁移、细胞周期及凋亡等生物学特性的影响。方法:采用脂质体转染的方法建立PLCE1过表达的SW620细胞株,实验分为3组:亲本细胞组(未转染基因),对照组[转染含绿色荧光蛋白(greenfluorescent protein,GFP)的空质粒],实验组(转染质粒pcDNA-DEST53-PLCE1)。分别采用实时荧光定量-PCR(real-time fluorogenic quantitative-PCR,RFQPCR)和蛋白质印迹法检测PLCE1 mRNA和蛋白在SW620细胞中的表达;Transwell小室法检测PLCE1过表达对SW620细胞迁移能力的影响,FCM法检测对细胞周期及凋亡率的影响,DNA Ladder法检测对细胞凋亡的影响。结果:PLCE1过表达可抑制结肠癌SW620细胞的迁移能力,实验组迁移细胞数为(8.80±1.72)个,而亲本组和对照组分别为(32.6±2.42)和(32.2±3.25)个,3组间差异有统计学意义(P<0.01)。PLCE1过表达可导致结肠癌细胞周期G1期延长,并出现凋亡。结论:PLCE1过表达可抑制结肠癌细胞的迁移能力,并引起细胞凋亡。PLCE1基因过表达使SW620结肠癌细胞恶性程度降低,该基因可能是新的结肠癌相关抑癌基因。     

沉默胶质瘤相关癌基因同源物2基因对结肠癌细胞系SW620增殖和凋亡的影响

背景与目的：胶质瘤相关癌基因同源物2（glioma-associated oncogene homolog 2,Gli2）是Hedgehog 信号通路重要的转录因子,它不仅与正常细胞的生长密切相关,而且在多种肿瘤细胞中异常激活。探讨Gli2对结肠癌细胞系SW620增殖和凋亡的影响及其可能机制。方法：以Gli2干扰慢病毒载体感染SW620细胞,实验设干扰组、空病毒载体组和对照组,采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）和蛋白［质］印迹法（Western blot）检测细胞中Gli2 mRNA表达和蛋白水平,采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK-8）、集落形成实验和倍增时间检测细胞的增殖情况,流式细胞术（flow cytometry）检测各组细胞周期和凋亡情况,Western blot法检测细胞中ERK1/2、p-ERK1/2、Bcl-2、Bax和cyclin D1蛋白水平。结果：SW620细胞转染慢病毒载体72 h后,可见明显的荧光表达;与空病毒载体组和对照组相比,干扰组细胞的Gli2基因表达被有效抑制（P<0.05）;细胞增殖能力明显降低（P<0.05）;细胞周期阻滞,G ₁ 期细胞比例增高（P<0.05）;细胞凋亡率明显增加（P<0.05）;p-ERK1/2、Bcl-2和cyclin D1的蛋白表达量降低（P<0.05）,Bax表达增加（P<0.05）。结论：沉默Gli2可以明显抑制结肠癌细胞系SW620的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与p-ERK1/2 、Bcl-2和cyclin D1表达的下调和Bax表达上调相关。     

抑癌基因 NDRG2 的研究进展

NDRG2属于NDRG家族（N—mycdown—streamregulatedgenefamily）,是一种与细胞增殖和分化相关的抑癌基因,分布广泛且生物学功能复杂,在全身多种组织器官均有表达。参与组织胚胎发育、细胞分化并且与血液免疫系统关系密切。在缺血再灌注损伤中对组织起保护作用。与肿瘤的发生、发展和转归密切相关。本文就NDRG2最近研究进展作一综述。     

干扰素诱导跨膜蛋白1协同干扰素抑制结肠癌细胞增殖

目的：研究干扰素诱导跨膜蛋白1(interferon induced transmembrane protein 1,IFITM1)协同干扰素对结肠癌细胞株SW480增殖的影响。方法：将IFITM1基因亚克隆到真核表达载体pEGFP-C3,IFITM1/pEGFP-C3重组质粒转染结肠癌细胞株SW480,G418 500mg/L筛选阳性克隆细胞。激光共聚焦显微镜及RT-PCR检测IFITM1的表达。实验设pEGFP- C3/SW 480组、IFITM1/SW 480组、IFITM1/anti-IFITM1/SW 480、空白组,除空白组外,每组加入IFN_(-α) 1000 U/mL。MTT检测细胞的增殖性。结果：IFITM1/pEGFP-C3重组质粒转染SW480细胞后,激光共聚焦显微镜观察到绿色荧光融合蛋白位于细胞膜周围,RT-PCR在IFITM1/SW 480细胞中检测到IFITM1 mRNA表达,SW 480细胞及pEGFP-C3/SW480细胞中未见IFITM1 mRNA表达。MTT分析细胞增殖示pEGFP-C3/SW 480组、IFITM1/SW 480组、IFITM1/anti-IFITM1/SW 480组的D_(570mm)处值分别0.745±0.0267、0.346±0.0316、0.696±0.0613,空白组的D_(570mm)值是0.835±0.0362,IFITM1/SW 480细胞增殖比pEGFP-C3/SW 480细胞及IFITM1/anti-IFITM1/SW 480细胞低(P＜0.05)。而pEGFP-C3/SW 480细胞的增殖与IFITM1/anti-IFITM1/SW 480细胞增殖相比无显著差异(P＞0.05)。结论：IFITM1可协同IFN-α抑制SW 480细胞体外增殖。     

腺病毒介导NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响

目的：研究抑癌候选基因NDRG2在体外对人食管鳞癌细胞系Eca-109增殖和凋亡的影响。方法：腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109,逆转录酶-多聚酶链反应（RT-PCR）和Western blot法分别检测NDRG2基因的mRNA和蛋白表达水平,甲基噻唑基四唑法（MTT法）绘制细胞生长曲线,流式细胞仪（FCM）分别分析细胞周期和细胞凋亡。结果：腺病毒介导NDRG2转染人食管鳞癌细胞系Eca-109后,NDRG2的mRNA和蛋白表达水平明显上调,细胞增殖受到明显抑制（P〈0.05）;流式细胞仪检测显示,与对照组相比,感染后48小时Eca-109细胞G2期细胞明显减少（P〈0.01）,S期细胞明显增多（P〈0.01）;转染后的Eca-109细胞中凋亡细胞明显增多,感染48h后达16.0%。结论：过表达NDRG2可明显抑制人食管鳞癌细胞Eca-109的增殖并诱导细胞凋亡。