红细胞丙酮酸激酶缺乏症发病的分子机理

丙酮酸激酶（ＰＫ）有四种同工酶：Ｌ、Ｒ、Ｍ１和Ｍ２。在成熟红细胞中以Ｒ型为主，由ＰＫＬＲ基因编码，现已分离并确定了人类Ｌ及Ｒ型ｃＤＮＡ全长核苷酸序列。到目前为止，已发现基因突变有３５种，其中以点突变最常见。基因突变和ＰＫ缺乏之间的因果关系尚未肯定。随着对ＰＫ基因的全面了解和分子生物学技术的广泛应用，给本病的诊断，特别是产前诊断带来很大帮助。     

红细胞丙酮酸激酶缺乏症发病的分子机理

丙酮酸激酶(Pyruvate Kinase,PK)有四种同工酶:L、R、M_1和M_2。在成熟红细胞中以R型为主,由PKLR基因编码,现已分离并确定了人类L及R型cDNA全长核苷酸序列。到目前为止,已发现基因突变有35种,其中以点突变最常见。基因突变和PK缺乏之间的因果关系尚未肯定。随着对PK基因的全面了解和分子生物学技术的广泛应用,给本病的诊断,特别是产前诊断带来很大帮助。     

MN合并ABO新生儿溶血病并丙酮酸激酶缺乏症的基因学诊断及文献复习

目的 探讨抗-M引起的新生儿溶血病合并丙酮酸激酶缺乏症(PKD)的临床及遗传学特点.方法 回顾分析1例不明原因反复妊娠晚期不良妊娠结局的孕妇临床资料,对其胎儿进行跟踪调查,监测贫血状态、输血情况等.在知情同意情况下,采集患儿及父母外周血进行血型和血型抗体检测、新生儿溶血病检测及疾病相关基因目标序列捕获和测序.复习相关文...     

PK-LR基因新突变丙酮酸激酶缺乏症患儿经异基因造血干细胞移植治愈

目的 通过对2例丙酮酸激酶缺乏症(PKD)患儿临床症状及PK-LR基因新突变类型的报道,探讨PKD的PK-LR基因诊断方法及行异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)的疗效.方法 选择2009年2月及2013年8月,上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心收治的2例PKD患儿作为研究对象.本研究遵循的程序符合上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心人体试验委员会所制定的伦理学标准,得到该委员会批准,征得受试对象监护人的知情同意,并与之签署临床研究知情同意书.通过上海儿童医学中心检验科采集2例患儿的血液标本,采用Sanger基因测序及全外显子捕获测序对2例患儿PK-LR基因进行检测分析.采用allo-HSCT对2例患儿进行治疗,并分别对2例患儿进行随访.回顾性分析该2例患儿的临床症状、诊断方法及治疗方案.结果 ①2例PKD患儿丙酮酸激酶(PK)活性均降低,分别为8.00 IU/gHb与7.61 IU/gHb.②2例PKD患儿PK-LR基因检测分析共发现4种PK LR基因错义突变.其中,PK-LR基因c.941T＞C(p.Ile314Thr)突变已有文献报道,c.119G＞A(p.Arg40Gln),c.1015G＞A(p.Asp339Asn)及c.848T＞C(p.Va1283Ala)突变为PK-LR基因新的突变类型.4种突变的SIFT功能预测结果分别为0.20,0.37,0及0.23.③2例PKD患儿均接受allo-HSCT.患儿1于移植后第14天粒系及红系造血功能获得恢复,移植后第19天血小板(PLT)计数＞5×101 0/L,移植后第22天造血干细胞(HSC) 100％嵌合,患儿血型亦转换为供者血型.患儿2于移植后第12天粒系及红系造血功能获得恢复,移植后第19天PLT计数＞3×1010/L,移植后第18天HSC 100％嵌合,患儿血型亦转换为供者血型.④对2例PKD患儿分别随访5年和1年,患儿生存状况良好,造血系统及其他系统指标均为正常,获得成功治愈.结论 全外显子捕获基因测序方法可用于临床PKD基因诊断及PK-LR基因新型突变类型的发现;PK-LR基因新突变类型c.G119G＞A(p.Arg40Gln),c.1015G＞A(p.Asp339Asn)及c.848T＞C(p.Va1283Ala)亦可导致PKD的发生;allo-HSCT治疗本研究中2例PKD患儿是有效、可行的.     

血清丙酮酸激酶与血糖关系的探讨

丙酮酸激酶 ( Pruvate kinase,简称 PK,EC.37.1 .4 0 )此酶是糖酵解的关键酶之一 ,它是一种变构酶 ,在人体内 ,丙酮酸激酶存在着三种同工酶 ,即 L型又称肝型 ,M型又称肌肉型和 A型。关于 PK的研究有很多 ,并建立了测定血清PK活性的方法。测定方法稳定、简便、快速 ,适用于手工或自动化分析 ,血清 PK正常参考值和测定实验条件已有报道 [1 ] ,且 PK在急性心肌梗塞的动态变化中很有临床应用价值 ,并认为 PK是诊断早期心肌梗塞的一个很重要的血清酶指标 [2 ] ,已得到肯定。但在 PK与血糖方面研究甚少 ,下面笔者就血糖与血清 PK的关系进…     

遗传性红细胞磷酸果糖激酶缺缺乏症：一家系四例报告

报告一家系４例红细胞磷酸果糖激酶（ＰＦＫ）缺乏病例。先证ＰＦＫ活力为正常的５５％。有黄疸、脾大和胆结石等溶血症状、不伴症。患父亲、母亲及儿子酶活力分别为正常值的６３％，７４％和７５％，均无临床症状。４人均显示ＰＦＫ稳定性明显下降。虱ＰＦＫ对ＡＴＰ抑制作用的敏感性增高而对枸橼酸抑制作用的敏感性降低，表现为ＰＦＫ－Ｌ４亚基的动力学特性。结果提示，患红细胞中ＰＦＫ－Ｍ亚基可能为一种不稳定变异型。     

红细胞丙酮酸激酶测定方法的建立和应用

红细胞丙酮酸激酶测定方法的建立和应用中国医学科学院输血研究所余蓉，袁理，方静致，陈宪辉，尚云丙酮酸激酶（ＰｙｒｕｒａｔｅＫｉｎａｓｅ，简称ＰＫ，ＥＣ２·７·１．４０）是红细胞糖代谢过程中重要酶之一，是由四个亚基组成的四聚体，其分子量为２０５ｋｄ～２２...     

血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶与其他肺癌标志物联合检测对肺癌的诊断价值

目的 探讨血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)、神经元特异烯醇化酶（NSE）和细胞角蛋白19（CYFRA21-1）联合测定对肺癌的诊断价值。方法 用ELISA法分别检测肺癌患者组95例，良性肺部疾病组80例和健康体检组100名血中的TuM2-PK、NSE和CYFRA21-1的水平含量。结果 肺癌组3种指标水平均明显高于良性肺疾病组和健康对照组，差异有统计学意义（P<0.01）；TuM2-PK诊断肺癌的敏感度为66.3%，特异度为95%；TuM2-PK和NSE联合检测肺癌的阳性率最高为81%。结论 3项指标对肺癌辅助诊断均有一定的价值，TuM2-PK和NSE联合检测可以提高对肺癌的阳性诊断, TuM2-PK可作为一种新肺癌标志物应用。     

肺癌患者肿瘤型M2丙酮酸激酶水平及其临床意义

目的通过检测肺癌患者血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶(TU M2-PK)水平并进行分析,为临床诊治提供依据。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测95例肺癌患者、80例良性肺部疾病患者和100名健康体检者血浆TU M2-PK水平,并进行比较分析。结果肺癌组血浆TU M2-PK与良性肺疾病组和健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.01);随病程进展肺癌患者TU M2-PK的阳性率逐步升高,肺癌Ⅲ、Ⅳ期患者TU M2-PK阳性率(80%、88%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者(40%、56%)(P<0.05);有淋巴结转移的患者TU M2-PK阳性率(78%)明显高于未转移患者(33%)(P<0.05)。TU M2-PK诊断肺癌的灵敏度为69%,特异性为96%。结论TU M2-PK对肺癌的辅助诊断有一定的临床价值,可以作为一项新的肺癌标志物应用。     

Six novel variants in the PKLR gene associated with pyruvate kinase deficiency in Argentinian patients

BackgroundPyruvate kinase deficiency (PKD) is a rare recessive congenital hemolytic anemia caused by mutations in the PKLR gene. The disease shows a marked variability in clinical expression. We studied the molecular features of nine unrelated Argentinian patients with congenital hemolytic anemia associated with erythrocyte pyruvate kinase deficiency. Design and Methods: Routine hematologic investigations were performed to rule out other causes of chronic hemolytic anemia. Sanger sequencing and in-sílico analysis were carried out to identify and characterize the genetics variants. Results: Six different novel missense variants were detected among the 18 studied alleles: c.661 G > C (Asp221His), c.956 G > T (Gly319Val), c.1595 G > C (Arg532Pro), c.347 G > A (Arg116Gln), c.1232 G > T (Gly411Val), c.1021G > A (Gly341Ser). Structural implications of amino-acid substitutions were correlated with the clinical phenotypes seen in the probands. Conclusions: This is the first comprehensive report on molecular characterization of pyruvate kinase deficiency in Argentina and the second from South America that would contribute to our knowledge on the distribution and frequency of PKLR variants in our population but also offer new insights into the interpretation of the effect of PKLR variants and phenotype.     

肿瘤型M2丙酮酸激酶与癌类抗原19-9联合检测在胰腺癌诊断中的应用

目的:探讨肿瘤型M2丙酮酸激酶(TumorM2-PK,TuM2-PK)、糖类抗原19-9(CA19-9)在胰腺癌中的表达特性。方法:采用ELISA法分别检测50例胰腺癌患者、35例胰腺炎患者及80名健康体检人血中TuM2-PK、CA19-9含量。结果:胰腺癌患者血中TuM2-PK、CA19-9值分别是(164.9±41.3)U/mL、(630.1±200.3)U/mL。在胰腺癌的诊断中单独检测时TuM2-PK、CA19-9敏感性分别为75%、74.5%,特异性分别为90%、85%,联合测定敏感性、特异性分别达到82.3%、100%。结论:联合检测TuM2-PK、CA19-9有助于提高对胰腺癌诊断的特异性和敏感性。     

血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶对乳腺癌的辅助诊断意义

目的探讨血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶（Tu M2-PK）检测对乳腺癌的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测82例乳腺癌患者、20例乳腺良性肿瘤患者及30名健康对照者血浆Tu M2-PK水平,同时比较乳腺癌患者不同TNM分期血浆Tu M2-PK水平并进行统计学分析。结果乳腺癌患者血浆Tu M2-PK水平高于乳腺良性肿瘤患者及健康对照组（P〈0.05）,乳腺良性肿瘤患者与健康对照组血浆Tu M2-PK水平差异无统计学意义。不同TNM分期中,Ⅲ期乳腺癌患者血浆Tu M2-PK水平高于Ⅰ期（P〈0.05）,而Ⅳ期Tu M2-PK水平则低于Ⅱ期与Ⅲ期（P〈0.05）;血浆Tu M2-PK检测乳腺癌的敏感性为65.85%,特异性为70.00%,阳性似然比为2.20,阴性似然比为0.49,阳性预测值为90.00%,阴性预测值为33.33%。结论血浆Tu M2-PK对乳腺癌的辅助诊断有较高的临床价值,并对乳腺癌的临床分期、浸润转移的判断有一定的意义。     

血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶对乳腺癌的辅助诊断意义

目的探讨血浆肿瘤型M2丙酮酸激酶(Tu M2-PK)检测对乳腺癌的诊断价值。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测82例乳腺癌患者、20例乳腺良性肿瘤患者及30名健康对照者血浆Tu M2-PK水平,同时比较乳腺癌患者不同TNM分期血浆Tu M2-PK水平并进行统计学分析。结果乳腺癌患者血浆Tu M2-PK水平高于乳腺良性肿瘤患者及健康对照组(P<0.05),乳腺良性肿瘤患者与健康对照组血浆Tu M2-PK水平差异无统计学意义。不同TNM分期中,Ⅲ期乳腺癌患者血浆Tu M2-PK水平高于Ⅰ期(P<0.05),而Ⅳ期Tu M2-PK水平则低于Ⅱ期与Ⅲ期(P<0.05);血浆Tu M2-PK检测乳腺癌的敏感性为65.85%,特异性为70.00%,阳性似然比为2.20,阴性似然比为0.49,阳性预测值为90.00%,阴性预测值为33.33%。结论血浆Tu M2-PK对乳腺癌的辅助诊断有较高的临床价值,并对乳腺癌的临床分期、浸润转移的判断有一定的意义。     

肿瘤型M2丙酮酸激酶在肺癌诊断中的应用

目的 探讨肿瘤型M2丙酮酸激酶（TuM2-PK）在肺癌患者血中的表达水平及其临床应用价值。方法 用ELISA法分别检测92例肺癌、77例良性肺部疾病患者和106名健康体检者血浆中的TuM2-PK表达水平，并进行比较分析。结果 TuM2-PK浓度和阳性率分别为肺癌组22．1U／ml和71％，良性肺疾病组10．5U／ml和4％，健康对照组8U／ml和3％，肺癌组明显高于后两组（P〈0．01）。Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者TuM2-PK阳性率（分别为83％和88％）高于Ⅰ或Ⅱ期肺癌（分别为43％和56％，P均〈0．05）；有淋巴结转移患者TuN2-PK阳性率（79％）高于未发现转移患者（35％，P〈0．05）。TuM2-PK诊断肺癌的敏感度为71．0％，特异度为96．7％，阳性预测值91．5％，阴性预测值86．8％，准确性88．0％。结论 TuM2-PK对肺癌的辅助诊断有较高的临床价值，并对临床分期、判断淋巴结转移及临床治疗具有一定的指导意义。     

肿瘤型M2丙酮酸激酶表达水平与非小细胞肺癌患者近期疗效及预后的关系

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者治疗前后血浆中肿瘤型M2丙酮酸激酶(TuM2-PK)的表达水平及其与肿瘤的近期疗效及预后的关系.方法 用ELISA法分别检测83例NSCLC患者(其中31例NSCLC患者手术治疗,52例患者失去外科手术机会而行内科治疗)和106例健康对照者血浆中的TuM2-PK表达水平,并进行24个月的随访.结果 NSCLC手术后血浆TuM2-PK浓度(13.5 U/ml)与术前(25.4U/ml)相比,差异有统计学意义(P<0.05).经内科治疗后,缓解组血浆TuM2-PK浓度(11.5 U/ml)与治疗前(22.6 U/ml)相比显著下降(P<0.05);进展组血浆TuM2-PK浓度(60.8 U/ml)与治疗前(23.7 U/ml)相比显著升高(P<0.05);稳定组血浆TuM2-PK浓度治疗前后差异无统计学意义(P>0.05).手术后TuM2-PK阳性率显著下降,而化疗后阳性率下降不明显.在随访期间,手术后TuM2-PK阳性患者肿瘤复发或转移率(67%,6/9)高于术后阴性患者(5%,1/20).结论 检测NSCLC患者血中肿瘤标志物TuM2-PK表达水平对预测肿瘤微转移有一定的临床意义,有助于疗效的评估以及预后的预测.     

原肌球蛋白、丙酮酸激酶在急性早幼粒细胞白血病耐药细胞中表达上调

目的应用蛋白质组学方法筛选人急性早幼粒细胞白血病（APL）维甲酸敏感细胞株（NB4细胞株）和维甲酸耐药细胞株（NB4-R1细胞株）的耐药相关蛋白。方法利用双向凝胶电泳技术检测，比较NB4和NB4-R1细胞株的总蛋白，建立二维凝胶电泳（two-dimensional gel ectmphoresis，2-DE）图谱。从多个差异蛋白质点中选择出2个在NB4-R1细胞株中表达明显上调的蛋白质点进行MALDI-TOF-MS生物质谱分析，并用Mascot软件在SwissProt和NCBInr数据库中进行同源比较和分析鉴定。结果确定表达明显上调的两个蛋白质分别为原肌球蛋白（tmpomyosin，TM）和丙酮酸激酶（Pymvate kinase，PK）。结论本研究表明维甲酸耐药细胞中原肌球蛋白和丙酮酸激酶表达上调，提示它们在肿瘤耐药中有重要作用。     

肿瘤型M2-丙酮酸激酶在乳腺癌诊断与疗效监测中的价值

目的 评估肿瘤型M2-丙酮酸激酶(Tu M2-PK)在乳腺癌诊断与疗效监测中的应用价值.方法 用ELISA检测63例乳腺癌患者、22例乳腺良性疾病患者及40名健康对照者血浆Tu M2-PK水平,并与糖类抗原15-3(CA15-3)、癌胚抗原(CEA)测定结果对比分析.结果 根据受试者工作特征(ROC)曲线分析,Tu M2-PK检测乳腺癌的临界值为14.1 U/ml,敏感度为46.0%,特异度为86.0%,提示其诊断价值高于CA15-3(敏感度为42.8%,特异度为85.4%)和CEA(敏感度为36.5%,特异度为90.0%).乳腺癌患者血浆中TU M2-PK水平(13.3 U/ml)明显高于健康对照(7.2 U/ml,U=408.5,P<0.05)以及乳腺良性疾病患者(11.1 U/ml,U=509.0,P<0.05).乳腺癌患者血浆TUM2-PK水平及敏感度随着肿瘤分期、分级的升高而升高;淋巴结转移患者TU M2-PK水平(23.3 U/ml)显著高于未转移者(10.9 U/ml,U=237.0,P<0.01).TU M2-PK水平与疗效密切相关,病情恶化或出现转移时TU M2-PK升高,在临床治疗有效时又有所下降;而患者病情稳定时,基本维持在同一水平.结论 TU M2-PK测定可提高对乳腺癌诊断的敏感度,是乳腺癌患者病情监测、疗效观察及预后判断的有效指标.