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目的 建立19A型肺炎链球菌多糖(Streptococcus pneumoniae type 19A polysaccharide,19APS)结合物中游离PS含量的测定方法.方法 在一定条件下分别用1、3和5 g/L脱氧胆酸钠(sodium deoxycholate,DOC)溶液(pH7.3)沉淀不同浓度的破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT),确定不同浓度DOC沉淀载体蛋白TT的浓度范围.以1 g/L DOC分离结合19 APS(19APS-TT)和游离19APS,测定上清液中的游离PS含量,并验证该DOC沉淀法的准确度和精密度.结果 分别以1和3 g/L DOC沉淀19APS-TT时,TT浓度最好分别控制在<150和<200μg/ml.该DOC沉淀法的准确度和精密度均良好,加标PS回收率为94.0%~107.2%,相对标准偏差均<4%.结论 成功建立了19APS-TT中游离PS含量的测定方法. 相似文献
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目的 建立检测19A型肺炎链球菌荚膜多糖的竞争ELISA方法,检测细菌发酵过程中多糖的表达量。方法 以19A型肺炎链球菌多糖为包被物,待测多糖为竞争物,建立间接竞争ELISA方法,并验证该方法的准确性和精密度。用建立的方法检测不同培养条件下发酵物中的多糖表达量。 结果 最佳多糖包被质量浓度为10 mg/L,多糖抗血清稀释度为1:4×104。当检测范围为39.06~5 000.00 μg/L时,决定系数为0.995。批内和批间相对标准差分别为5.08%~9.58%和5.28%~12.93%。培养物样品加标回收率为95.84%~110.07%。两种不同培养条件下培养物中的多糖表达量分别为312.17 mg/L和1 056.42 mg/L。 结论 新建的方法能用于19A型肺炎链球菌发酵物中多糖表达量的检测,对于优化培养条件及掌握培养物收获时间具有指导意义。 相似文献
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目的 制备2型肺炎链球菌多糖(Streptococcus pneumoniae type 2 polysaccharide,SPNPS2)-破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)结合疫苗(SPNPS2-TT),并研究其免疫原性.方法 采用溴化氰活化SPNPS2,己二酰肼作连接剂,碳二亚胺为耦联剂,将活化的SPNPS2与TT耦联制成SPNPS2-TT.以SPNPS2-TT或单纯SPNPS2免疫Balb/c小鼠,用ELISA检测小鼠血清抗SPNPS2 IgG水平.结果 SPNPS2-TT的各项指标均达到质控标准.SPNPS2-TT免疫小鼠产生的特异件抗SPNPS2 IgG水平显著高于单纯SPNPS2免疫小鼠,且SPNPS2-TT诱生了免疫记忆应答.结论 采用此项技术制备SPNPS2-TT疫苗是可行的. 相似文献
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目的 用植物蛋白胨替代目前肺炎链球菌(pneumococcus,Pn)培养基中的动物蛋白胨,以保证生物制品的安全性。方法 比较大豆蛋白胨与胰蛋白胨的各种成分含量。分别以大豆蛋白胨和胰蛋白胨制备培养基进行9个型Pn大罐培养,比较两种培养基培养对Pn生长和粗制多糖含量的影响。 结果 大豆蛋白胨的总氮含量、氨氮含量和消化系数与胰蛋白胨相近,但大豆蛋白胨的总碳水化合物含量(336.20 μg/g)明显高于胰蛋白胨的总碳水化合物含量(10.56 μg/g)。植物源性培养基培养获得的各型Pn浓度(t=3.851,P<0.05)和粗制多糖含量(t=3.853,P<0.05)明显高于动物源性培养基培养。 结论 植物蛋白胨可替代动物蛋白胨来制备Pn培养基。 相似文献
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目的 用无动物源性培养基筛选高产糖1型肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae serotype 1,PN1)。方法 配制无动物源性培养基,并用此培养基进行高产糖PN1单菌落筛选。比较筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量。 结果 无动物源性培养基筛选前后PN1在发酵培养中的产糖量分别为420和960 mg/L,筛选后PN1的产糖量明显高于筛选前PN1。 结论 以无动物源性培养基筛选PN1可使PN1的产糖量明显提高。 相似文献
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目的 比较以1-氰基-4-二甲氨基吡啶四氟硼酸盐(1-cyano-4-dimethylamino pyridine tetrafluoroborate,CDAP)和溴化氰(cyanogen bromide,CNBr)为活化剂制备的4型肺炎球菌多糖(type 4 pneumococcal polysaccharide,PS4)-白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)结合物(PS4-DT)原液的免疫原性。方法 分别以CDAP或CNBr为活化剂,各制备1批PS4-DT原液,并对原液的相关质量指标进行检测。分别用2种PS4-DT原液,间隔2周皮下注射NIH小鼠3次,末次免疫1周后采集血清,用ELISA检测血清抗体水平,比较不同方法制备的2种PS4-DT原液的免疫原性。结果 2种PS4-DT原液的主要质量指标均符合相关规定的要求,结合PS4的含量分别为257.1和203.1 μg/ml。2种PS4-DT原液均可与PS4抗血清发生特异性反应。抑制ELISA检测显示,2种PS4-DT原液对PS4抗血清的抑制率均达到100%。2种PS4-DT原液免疫小鼠产生的抗PS4抗体水平相近,抗体几何平均滴度分别为970.06和844.49。 结论 不同种方法制备的2种PS4-DT原液在小鼠中的免疫原性相似,且均可诱导小鼠产生较高水平的抗体。 相似文献
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目的 考察能否用单克隆抗体(单抗)替代多克隆抗体(多抗)血清检测23价肺炎球菌多糖疫苗中各型多糖的含量。方法 使用8个血清型(2、3、4、6B、9N、17F、18C、23F)的小鼠抗肺炎球菌荚膜多糖单抗和丹麦国家血清研究所(Statens Serum Institut, SSI)的兔血清多抗,以速率散射免疫浊度法测定23价肺炎球菌多糖疫苗中相应血清型的多糖含量。通过重复性和专属性试验确定单抗的可用性。采用t 检验对单抗和多抗测定结果进行比较。结果 各型单抗与多糖标准品反应标准曲线的相关系数均>0.985 0。用单抗重复检测疫苗多糖3次,质量浓度为40.8~62.1 μg/ml,3次检测结果变异系数均<8.00%。各型多糖回收率为81.6%~124.2%。分别用8个血清型单抗检测其余各型多糖含量,结果均低于或接近于检测下限。单抗与SSI多抗血清的检测结果差异均无统计学意义,t 值为0.210 3~1.926 0,P 值均>0.05。结论 单抗检测重复性好、特异性高,与多抗血清检测结果相仿,因此,单抗可以替代SSI多抗血清用于测定23价肺炎球菌多糖疫苗中的多糖含量。 相似文献
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目的 研究采用过氧化氢法和高压均质法降解对6A型肺炎球菌多糖(type 6A pneumococcal polysaccharide,PnPS6A)结构和抗原性的影响。方法 分别采用过氧化氢法〔将过氧化氢加入多糖(polysaccharide,PS)溶液中,50 ℃反应3 h〕和高压均质法(用高压均质机在5×107 Pa压力下处理PS溶液)降解PnPS6A,降解物经超滤浓缩和冻干后,获得降解的PnPS6A。分别用核磁共振氢谱(nuclear magnetic resonance hydrogen spectrum,1H-NMR)和双向免疫扩散法检测PnPS6A降解物的结构和抗原性,用抑制ELISA检测降解和未降解的PnPS6A的抗原一致性。结果 2种降解方法均能降低PnPS6A的相对分子质量。2种降解的PnPS6A对PnPS6A抗血清抑制的半数有效浓度与未处理的PnPS6A为同一个数量级,表明降解的PnPS6A的抗原性没有改变。1H-NMR分析显示,2种降解的PnPS6A的结构与未处理的PnPS6A一致。结论 2种降解方法都能降低PnPS6A的相对分子质量,而且对PnPS6A的结构和抗原性不会产生影响。 相似文献
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目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌(meningococcus,Men)多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 menignococcal polysaccharide vaccine,MPV4)多糖含量的火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIE)法。方法 分别用A、C、Y、W135群Men菌液、A、C、Y、W135群Men菌液加佐剂、A、C、Y、W135群Men多糖-牛白蛋白结合物免疫家兔,制备特异性抗血清。将制备的抗血清以一定的比例加入琼脂糖凝胶制成平板,并将纯化的多糖作为定量参考品加入抗原孔进行RIE。以多糖含量和对应的RIE峰高作标准曲线并建立直线回归方程。采用优化的RIE法测定MPV4多糖含量和分子大小。结果 菌液加佐剂制备的抗血清效价较理想。在确定的电泳条件下,建立的RIE法制备的标准曲线呈现良好的线性关系,相关系数值均大于0.98。该法特异性较好,未检出各多糖间的交叉反应。采用该法测定3批MPV4多糖含量、分子大小及回收率的结果均与先前的检定结果相符,均符合质控标准。结论 建立的RIE法可作为MPV4多糖抗原含量的测定方法。 相似文献
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目的 建立测定A、C、Y、W135群脑膜炎球菌多糖疫苗(groups A,C,Y,W135 meningococcal polysaccharide vaccine,MPV4)C群多糖含量的双抗体夹心ELISA法.方法 制备抗C群多糖多克隆抗体,所得的多克隆抗体经辛酸-硫酸铵沉淀法纯化后,用过碘酸钠法对其标记辣根过氧化物酶.分别将抗C群多糖多克隆抗体作为包被抗体和酶标二抗,建立双抗体夹心ELISA法,优化反应条件,对C群多糖进行特异性定量测定.结果 建立的双抗体夹心ELISA法特异性较好,未检出与A、Y、W135群多糖的交叉反应.C群多糖在2.5~20.0 ng/ml质量浓度范围的剂量反应曲线线性最佳,相关系数大于0.99.该法的准确度和精密度均较好,试验内和试验间变异系数和多糖回收率分别为0.6% ~9.1%和87.5% ~ 100.0%,定量限度为4.0 ng/ml.采用该法测定3批MPV4显示,C群多糖含量及多糖分子大小KD值和回收率的测定结果均与先前的测定结果一致,均符合暂行质量标准.结论 建立的双抗体夹心ELISA法可用于MPV4 C群多糖的关键质量指标测定. 相似文献