CTLA4Ig-重组腺病毒载体延长大鼠异基因原位移植气管存活期

目的　研究腺病毒介导的CTLA4Ig基因在大鼠异基因原位气管移植中的作用。 方法　建立异基因大鼠原位气管移植模型。分别采用腹腔注射生理盐水 (Saline组 ,2ml/只 )、腹腔注射CTLA4Ig重组腺病毒载体 (Ad CTLA4Ig组 ,2× 10 9PFU/只 )和肌肉注射环胞素A(CsA组 ,5mg/kg) ,观察术后大鼠的存活时间和移植气管的病理改变。 结果　Ad CTLA4Ig组大鼠存活时间为(2 7 3± 5 88)d ,较Saline组 (7 3± 1 63 )d和CsA组 (18 3± 1 70 )d明显延长 (P <0 0 5 )。同时 ,术后 10dAd CTLA4Ig组大鼠气管组织学改变与CsA组大鼠比较无明显差异。结论　Ad CTLA4Ig可延长大鼠异基因原位移植气管的存活时间     

CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究

目的　探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法　供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果　CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。     

创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮移植存活期的临床应用

目的　观察创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮存活期的临床效果。方法　 12例大面积烧伤切痂创面应用CTLA4Ig重组腺病毒自体微粒皮和异体皮移植。临床观察异体皮存活时间、微粒皮封闭创面情况、用EP Ⅰ型水蒸仪测定创面水分蒸发量及组织学观察。结果　创面应用CTLA4Ig重组腺病毒能显著延长异体皮移植物的成活期 [对照组 ( 16.9± 3 .7)d ,实验组 ( 2 5 .6± 5 .5 )d] ,淋巴细胞浸润较少 ,自体微粒皮移植创面愈合率明显增高 ;实验部位水分蒸发量保持较低水平 ,而对照部位于术后 9d逐渐升高。结论　局部应用CTLA4Ig 重组腺病毒是一种有效延长烧伤创面异基因移植皮肤存活期的方法。     

CTLA4Ig基因转染对大鼠胰岛移植的影响

目的 研究ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因在糖尿病大鼠体内表达及其产物延长胰岛移植物存活的作用。方法 利用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ载体包裹ＣＴＬＡ４Ｉｇ ｃＤＮＡ质粒后转染鼠胰岛和肌肉细胞，检测移植后ＣＴＬＡ４ｉＧ基因表达水平，观察ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因表达在延长糖尿病鼠胰岛移植物和大鼠存活时间的作用。结果 Ａ组胰岛移植第７天２只大鼠血清ＣＴＬＡ４Ｉｇ呈阳性（阳性率２０％），分别为１４ｎｇ＝ｍｌ、３１ｎｇ／ｍｌ。Ｂ组胰     

抗Ia单克隆抗体对异基因小鼠皮肤移植物的影响

目的　探讨抗Ia抗体对移植皮片存活期的影响。方法　用A .TL鼠 (H 2 k)皮肤及淋巴细胞免疫A .TH鼠(H 2 S) ,取脾细胞与骨髓瘤细胞 (P3U1 )融合后 ,经HAT培养基选择性培养 ,得到杂交瘤细胞 ,用补体依赖的细胞毒试验检测上清中的抗体与人B细胞反应的活性 ,阳性孔细胞以有限稀释法进行克隆化 ,得到抗Ia单克隆抗体 ,预先将抗Ia抗体注入异基因皮肤移植的受体小鼠腹腔后 ,观察移植皮片存活期。结果　实验组皮肤移植物存活期与对照组相比明显延长 (P <0 .0 1 )。结论　抗Ia单克隆抗体能延长异基因移植皮片存活期     

CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植的体外实验研究

目的 探索重组腺病毒载体（Recombinant adenovirus,rAdv）介导CTLA4Ig基因转染猪皮异种移植免疫耐受的分子机制。方法 构建CTLA4Ig重组腺病毒载体,转染猪树突状细胞（Dendritic Cell,DC）,以猪表皮细胞匀浆液为刺激原,观察DC递呈猪表皮抗原刺激人T细胞增殖、活化及信号转导的影响;同时,以CTLA4Ig转染小鼠DC细胞,观察该DC膜表面分子CD40、CD80表达。结果 CTLA4Ig转染DC能显著抑制人外周血T淋巴细胞增殖能力（P＜0.01）和T细胞肌醇磷脂信号系统转导活性,IL－2分泌亦受到明显抑制（P＜0.05）;转染CTLA4Ig的小鼠DC膜表面分子CD80表达降低（P＜0.05）。结论 腺病毒介导CTLA4Ig基因转染转皮能诱导人外周血T淋巴细胞免疫耐受。     

供体脾细胞输注增强CTLA4Ig致小鼠皮肤移植耐受的研究

目的：研究联合应用供者特异性脾细胞输注（donor-specific-spleen-cell-transfusion,DST)与CTLA4Ig对促进小鼠皮肤移植物存活的作用。探索CTLA4Ig促进移植物存活的作用机制。方法：单独或联合应用CTLA4Ig及供者特异性脾细胞输注，同时行皮肤移植，观察皮肤移植物存活时间并检测受者脾细胞对供者细胞的单向混合淋巴细胞反应。结果：联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig使小鼠皮肤移植物的存活时间延长，并使受者脾细胞对供者细胞的反应性特异性降低，与未处理组、单用CTLA4Ig或供者特异性脾细胞输注处理组相比有显著性差异（P＜0．01）。结论：联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig可促进皮肤移植物的存活。移植物中过客淋巴细胞的存在可能对CTLA4Ig诱导免疫耐受有促进作用。     

烧伤创面的皮肤移植近况

<正> 采用切痂植皮术,尽早消灭创面是抢救大面积深度烧伤病人的重要措施,但此类患者自体皮源常严重不足。为了解决烧伤治疗中皮源供应问题,自1881年Girdner报道应用尸体皮移植以来,许多学者对异体,异种     

重组腺病毒介导的CTLA4Ig基因在哺乳动物体内表达的研究

目的 了解CTLA4Ig腺病毒在不同哺乳动物体内的转染能力及表达情况。方法 用所构建的CTLA4Ig腺病毒通过静脉或腹腔注射到Balb/c小鼠，Wistar大鼠，兔，小香猪，羊体内，应用蛋白质斑点印记检测CTLA4Ig在以上动物血清中的表达情况，同时还观察各动物脏器的病理改变及动物的生存情况。结果 重组腺病毒转染7d后大鼠，小鼠血清出现CTLA4Ig持续表达2周。各动物未见异常死亡，各脏器未见明显病理改变。结论 CTLA4Ig重组腺病毒能够有效转染Balb/c小鼠，Wistar大鼠。     

异品系皮肤移植大鼠γδ T细胞培养液与血浆IFN-γ和IL-4水平观察

-4比值均高于对照组;大鼠外周血γδT细胞培养上清IFN-γ、IL-4含量与血浆IFN-γ、IL-4含量分别呈正相关关系.结论 异品系皮肤移植排斥反应发生过程中γγδT细胞能分泌IFN-γ和IL-4,而γδT细胞IFN-γ/IL-4细胞因子的分泌模式可能影响血浆细胞因子格局,从而参与了移植免疫应答过程.     

CTLA4Ig基因表达对鼠心脏移植免疫抑制作用的研究

大鼠ＤＡ和Ｌｅｗｉｓ分别作为移植的供受体。心脏移植前１周,用腺病毒作载体将ＣＴＬＡ４Ｉｇ基因导入Ｌｅｗｉｓ鼠体内,研究该基因在鼠体内的表达以及对同种心脏移植后的免疫抑制作用。以编码β－半乳糖苷酶有复制缺陷的腺病毒重组体（Ａｄｅｘ／ＬａｃＥ）为对照组。ＲＴ－ＰＣＲ法检测基因的表达,并用流式细胞仪测定ＣＴＬＡ４Ｉｇ蛋白质浓度变化。用移植物生存时间判断免疫抑制效果。结果显示：导入鼠体现人的ＣＴＬＡ４Ｉdi     

腺相关病毒载体介导的CTLA4Ig表达对大鼠肝移植免疫抑制作用的实验研究

目的:将CTLA4Ig腺相关病毒载体经门静脉导入移植肝中,研究该基因在移植肝中的表达以及对同种异体大鼠肝移植排斥反应的抑制作用。方法:二袖套法建立大鼠肝移植模型,供体为SD大鼠,受体为Wistar大鼠,受体随机分成3组,每组12对,对照组:将1011v.g.pSNAV鄄LacZ病毒液灌注移植肝门静脉并冷保存1h;CsA组:移植后第1~7天腹腔内注射CsA8mg(kg·d);基因转染组:供肝加用1011v.g.pSNAV鄄CTLA4Ig病毒液灌注移植肝门静脉并冷保存1h,术后1周剖腹取肝、脾和血标本。RT鄄PCR检测移植肝中CTLA4Ig的表达,双抗体夹心法测定血中CTLA4Ig浓度,TUNEL法检测肝细胞、脾淋巴细胞凋亡情况,并观察大鼠生存时间。结果:基因转染组大鼠生存时间平均为61天,与对照组10天比较差异有显著性(P<0.05)。基因转染组大鼠的肝脏中能扩增出特异性约500bp条带,而对照组未能扩增出相应条带,基因转染组血中CTLA4Ig浓度为(41.87±11.02)μg/ml,明显高于对照组(0.49±0.16)μg/ml,基因转染组大鼠肝移植术后1周肝细胞凋亡计数(5.88±1.88)%与对照组(28.25±6.50)%相比较差异有显著性(P<0.05)。基因转染组大鼠肝移植术后1周脾淋巴细胞凋亡计数(57.62±10.83)%与对照组(16.37±3.11)%相比较差异有显著性(P<0.05)。结论:经门静脉供肝灌注pSNAV鄄CTLA4Ig能在大     

伤安素(OUR)在大面积烧伤微粒皮移植异种皮覆盖的临床观察

目的观察伤安素碳纤维敷料对大面积深度烧伤切痂微粒皮移植异种皮覆盖的治疗作用。方法选择50%TBSA以上深度烧伤患者76例,分为对照组(碘伏纱布,棉垫包扎)和治疗组(伤安素碳纤维敷料,棉垫包扎),创面深度均为Ⅲ度切痂创面,观察面积为30%～51%[(31±4.6)%];创面处理时间:手术部位24 h内0.5%碘伏包扎,每日换药1次。手术切痂时间:治疗组伤后5～7 d[(5.80±0.14)d],对照组伤后5～7 d[(5.71±0.21)d],非手术部位全部用SD-Ag暴露和烤架促进成痂,观察渗出情况、异种皮排异时间、残余创面炎症反应、创面愈合时间、创面愈合质量。结果治疗组吸收容量大,异种皮排异时间较对照组平均延长4.76 d,残余创面炎症反应轻,创面愈合时间较对照组平均缩短5.80 d。结论伤安素碳纤维敷料具有吸水性强、可抑制细菌生长、延长异种皮排异时间、促进创面愈合、减少瘢痕形成等优点。     

腺病毒介导CTLA4Ig基因在体外培养细胞中的表达

目的 鉴定腺病毒介导免疫调节基因CTLA4Ig在体外培养细胞中的表达能力和细胞毒性。方法 以肾小管上皮细胞（PK－15），血管内皮细胞（ECV－304）为靶细胞，观察感染强度为100，200，400时CTLA4Ig重组腺病毒转梁靶细胞后不同时相细胞存活百分率；以免疫组化以及Westerb blot分别检测CTLA4Ig在细胞以及上清中的表达。结果 转染后2d,4d，转染组两种细胞存活百分率与对照组相比无显著差异；转染后24h,CTLA4Ig在PK－15和ECV－304中的阳性率表达率分别为93．7％和90．2％；Westerb blot检测到两种细胞上清中均有CTLA4Ig表达。结论 重组腺病毒对非包装靶细胞毒性很小，能够介导CTLA4Ig基因对靶细胞的高效转染，并使其表达分泌型CTLA4Ig，具备了以基因治疗诱导免疫耐受的潜能，为介导CTLA4Ig基因转染移植物和抗原提呈细胞提供了一种安全有效的载体。     

CTLA-4Ig预防小鼠自身免疫性肝炎的实验研究

目的：研究CTLA－4Ig在防治C57BL／6小鼠自身免疫性肝炎上的作用。方法：通过用C57BL／6近交系小鼠的肝特异性抗原与弗氏完全佐剂混合物免疫攻击小鼠,同时用CTLA－4Ig治疗,观察小鼠的肝脏组织学改变。结果：随着免疫次数的增多,治疗组结果与正常对照组相似;而病理模型组发现炎细胞的浸润,肝细胞的肿胀、灶性坏死甚至广泛坏死,这与正常对照组有明显差异。结论：CTLA－4Ig能有效地预防C57BL／6小鼠自身免疫性肝炎。     

人CTLA4Ig基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的:用AdEasy腺病毒载体系统构建CTLA4Ig重组腺病毒,以感染树突状细胞使其递呈抗原至T淋巴细胞功能受阻.方法:双酶切、凝胶回收方法从质粒pCDM8-CTLA4Ig提取目的基因CTLA4Ig,构建成腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CTLA4Ig;经酶切线性化后的pAdTrack-CTLA4Ig与AdEasy-1进行同源重组,经酶切线性化转染入HEK293细胞进行包装.结果:卡那霉素抗性筛选和PacⅠ酶切确证重组腺病毒质粒pAd-CTLA4Ig,PacⅠ酶切产生30 kb和4.5 kb 2个片断为同源重组.重组腺病毒质粒经293细胞包装后可观察到绿色荧光,收获病毒并制备出高滴度重组腺病毒(病毒滴度为1.6×109).结论:成功构建了携带CTLA4Ig基因的重组腺病毒载体,为利用CTLA4Ig基因转染树突状细胞的基因治疗奠定了基础.     

重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞活化的抑制作用

目的 探讨基因重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。方法 于不同时相点在Con A刺激的小鼠脾淋巴细胞及BALB/c与昆明种小鼠混合淋巴细胞培养中加入不同剂量hCTLA4Ig，应用^3H-TdR掺入法测定淋巴细胞增殖情况。结果 重组hCTLA4Ig能显著抑制ConA刺激的脾淋巴细胞及混合淋巴细胞反应中的细胞增殖。结论 重组hCTLA4Ig能抑制鼠淋巴细胞的活化。