创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮移植存活期的临床应用

目的　观察创面局部应用CTLA4Ig重组腺病毒延长异体皮存活期的临床效果。方法　 12例大面积烧伤切痂创面应用CTLA4Ig重组腺病毒自体微粒皮和异体皮移植。临床观察异体皮存活时间、微粒皮封闭创面情况、用EP Ⅰ型水蒸仪测定创面水分蒸发量及组织学观察。结果　创面应用CTLA4Ig重组腺病毒能显著延长异体皮移植物的成活期 [对照组 ( 16.9± 3 .7)d ,实验组 ( 2 5 .6± 5 .5 )d] ,淋巴细胞浸润较少 ,自体微粒皮移植创面愈合率明显增高 ;实验部位水分蒸发量保持较低水平 ,而对照部位于术后 9d逐渐升高。结论　局部应用CTLA4Ig 重组腺病毒是一种有效延长烧伤创面异基因移植皮肤存活期的方法。     

CTLA4Ig-重组腺病毒载体延长大鼠异基因原位移植气管存活期

目的　研究腺病毒介导的CTLA4Ig基因在大鼠异基因原位气管移植中的作用。 方法　建立异基因大鼠原位气管移植模型。分别采用腹腔注射生理盐水 (Saline组 ,2ml/只 )、腹腔注射CTLA4Ig重组腺病毒载体 (Ad CTLA4Ig组 ,2× 10 9PFU/只 )和肌肉注射环胞素A(CsA组 ,5mg/kg) ,观察术后大鼠的存活时间和移植气管的病理改变。 结果　Ad CTLA4Ig组大鼠存活时间为(2 7 3± 5 88)d ,较Saline组 (7 3± 1 63 )d和CsA组 (18 3± 1 70 )d明显延长 (P <0 0 5 )。同时 ,术后 10dAd CTLA4Ig组大鼠气管组织学改变与CsA组大鼠比较无明显差异。结论　Ad CTLA4Ig可延长大鼠异基因原位移植气管的存活时间     

共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用对移植肾存活的影响

目的:探讨共刺激阻断剂CTLA4Ig与雷帕霉素(Rapamycin,RPM)联合应用对大鼠移植肾存活的影响.方法:肾移植大鼠分为对照组、CTLA4Ig组、RPM组和CTLA4Ig RPM组,观察术后血肌酐和移植肾病理改变、移植肾存活时间.结果:与对照组相比,CTLA4Ig组、RPM组、CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间均显著延长(P＜0.01),其中,CTLA4Ig RPM组移植肾存活时间最长(76.5±17.1d),术后15天、30天该组血肌酐浓度最低;术后30天,仍然存活的CTLA4Ig组移植肾显示较多淋巴细胞浸润,CTLA4Ig RPM组移植肾显示很少淋巴细胞浸润.结论:共刺激阻断剂与雷帕霉素联合应用可有效抑制排斥反应,显著延长大鼠移植肾存活时间.     

CTLA4-Ig腺病毒基因局部转染诱导大鼠肾移植免疫耐受

目的通过CTLA4-Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的肾脏移植免疫耐受,并探讨相关机制。方法以CTLA4-Ig基因重组腺病毒为载体,将CTLA4-Ig基因局部转染入SD大鼠肾脏。将SD对Wistar大鼠原位肾移植模型分为三组:组Ⅰ为空白对照组;组Ⅱ为EGFP空载体对照组;组Ⅲ为CTLA4-Ig基因转染组。观察大鼠存活时间及肾功能变化。结果组Ⅰ移植肾存活时间8.17±1.17d;组Ⅱ移植肾存活时间8.00±1.55d;组Ⅲ存活时间31.33±6.77d。组Ⅲ存活时间明显延长。转染组术后血清肌酐较同期对照组为低。结论CTLA4-Ig基因局部转染供肾的基因治疗,可诱导异基因大鼠间的肾脏移植免疫耐受,延长肾脏移植物存活时间。     

CTLA4Ig延长同种异体大鼠耳廓移植存活的实验研究

研究CTLA4Ig对异体复合组织移植的免疫抑制作用。方法 :以BN大鼠为供体 ,Lewis大鼠为受体进行异体耳廓移植 ,术后分组应用不同剂量CTLA4Ig治疗 ,观察移植耳廓的排斥反应及存活时间 ,检测术后血清IL - 2含量变化。结果 :对照组平均存活 (7.8± 1.9)d ,CTLA4Ig 0 .1mg/kg·d治疗组存活 (8.1± 1.6 )d ,与对照组比无明显差异 (P >0 .0 5 ) ;1.0mg/kg·d组与 5 .0mg/kg·d组分别为 (15 .5± 2 .3)d与 (2 8.8± 3.6 )d ,异体耳廓的存活时间显著延长 (P <0 .0 1) ,且IL - 2含量较对照组明显下降。结论 :CTLA4Ig能延长异体耳廓复合组织移植后的存活 ,其疗效与剂量相关。     

CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠心脏移植耐受

目的: 通过CTLA4Ig腺病毒基因治疗诱导异基因大鼠之间的心脏移植耐受,并探讨相关机制.方法: 将异基因DA大鼠的心脏移植给受体LEW大鼠,同时经门静脉输注CTLA4Ig腺病毒(1×109～5×109 pfu*ml-1).通过RT-PCR检测CTLA4Ig的体内表达,观察记录心脏移植物的存活时间,通过MLR、IL-2逆转实验,Th1/Th2型细胞因子表达的检测,研究耐受的机制.结果:用LacZ腺病毒载体(AdLacZ)治疗组,不能延长移植物的存活,用CTLA4Ig腺病毒基因治疗组,DA大鼠的心脏移植物明显延长.RT-PCR实验证明,CTLA4Ig基因在受体内不同的组织表达量有所不同,并且随着时间的推移表达下降.Th1和Th2型细胞因子的检测显示,耐受大鼠体内未发现这两类细胞因子的偏移现象.MLR证明耐受大鼠的免疫应答表现为供体特异性,IL-2逆转实验表明,该耐受与克隆失活有关.结论: 在手术中给予CTLA4Ig腺病毒进行基因治疗,可诱导异基因大鼠间的心脏移植耐受,延长心脏移植物存活,该移植耐受表现为供体特异性,其形成与克隆失活有关,未发现Th1/Th2型细胞因子的偏移现象.     

腺病毒介导CTLA-4Ig基因转染对大鼠移植肾存活的影响

目的　探讨CTLA 4Ig基因重组腺病毒 (AdvCTLA 4Ig)有效转染大鼠肾脏的方法并初步观察该基因转染对移植肾存活的影响。方法　AdvCTLA 4Ig对大鼠肾脏分别转染 3h ,包括 :4℃下转染 (A组 )、经肾动脉注射在体转染 (B组 )、阻断肝脏血流以及肾血管以下躯体血流后经肾动脉注射在体转染 (C组 )以及对照 ;以免疫荧光法检测基因转染效率 ;以转染效率最高组肾脏行同种移植 ,未转染组为对照 ,观察移植肾存活时间。结果　A组、B组以及对照组肾脏内未见荧光显示 ,C组肾小管显示阳性荧光 ,肾小球内未见荧光显示 ;各组肾脏光镜下结构正常 ;转染组移植肾存活时间较对照组明显延长 ( 2 6 6± 6 9)dvs ( 8 1± 1 60 )d ,P <0 0 1。结论　高滴度CTLA 4Ig基因重组腺病毒可使在体肾脏中肾小管获得有效转染 ;该基因转染的肾脏移植后存活时间明显延长     

CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究

目的　探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法　供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果　CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论　从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。     

CTLA4 Ig在诱导小鼠心脏移植免疫耐受中的作用

目的　通过建立小鼠心脏移植模型 ,探讨CTLA4Ig在免疫抑制和诱导免疫耐受中的作用。方法　建立小鼠心脏移植模型 ,供体分别为DBA/2和 6 15新生鼠心脏 ,受体为BALB/c小鼠 ,移植后分别予以CTLA4Ig 0 .1、1、5mg·kg-1·d-1,治疗 1周 ,观察不同剂量CTLA4Ig对新生鼠移植心脏存活时间的影响 ;BALB/c小鼠首次移植 2周后再次移植DBA/2或 6 15新生鼠心脏 ,观察CTLA4Ig对再次移植心脏存活的影响。结果　与对照组相比 ,CTLA4Ig 0 .1mg·kg-1·d组 ,移植心脏的存活时间不能延长 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d和 5mg·kg-1·d-1组能显著延长心脏的存活时间 ,但两组间差异不显著 (P >0 .0 5 )。再次移植 6 15心脏各组 ,移植心脏的存活时间均无显著延长 ,而再次移植DBA/2新生鼠心脏 ,CTLA4Ig 1mg·kg-1·d-1和 5mg·kg-1·d-1组 ,其移植心脏的存活时间仍然能显著延长 (P <0 .0 1)。结论　CTLA4Ig能延长新生鼠心脏移植存活时间 ,且能诱导抗原特异性免疫耐受     

大鼠移植肠局部CTLA4Ig基因转染的可行性研究

目的：探讨CTLA4Ig基因能否在移植小肠局部转染表达。方法：移植前经肠系膜上动脉给供肠灌注脂质体包裹的CTLA4I异cDNA重组质粒，应用免疫组织学及逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)观察移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达。结果：免疫组织学及RT-PCR结果显示在移植后48h移植小肠中有大量CTLA4Ig转基因产物的表达。结论：经肠系膜上动脉体外灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA重组质粒可有效转染移植小肠。     

供体脾细胞输注增强CTLA4Ig致小鼠皮肤移植耐受的研究

目的：研究联合应用供者特异性脾细胞输注（donor-specific-spleen-cell-transfusion,DST)与CTLA4Ig对促进小鼠皮肤移植物存活的作用。探索CTLA4Ig促进移植物存活的作用机制。方法：单独或联合应用CTLA4Ig及供者特异性脾细胞输注，同时行皮肤移植，观察皮肤移植物存活时间并检测受者脾细胞对供者细胞的单向混合淋巴细胞反应。结果：联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig使小鼠皮肤移植物的存活时间延长，并使受者脾细胞对供者细胞的反应性特异性降低，与未处理组、单用CTLA4Ig或供者特异性脾细胞输注处理组相比有显著性差异（P＜0．01）。结论：联合应用供者特异性脾细胞输注及CTLA4Ig可促进皮肤移植物的存活。移植物中过客淋巴细胞的存在可能对CTLA4Ig诱导免疫耐受有促进作用。     

Effects of CTLA4-Ig Gene-modified Dendritic Cells on the Corneal Allografts

The success of corneal transplantationis most a-mongtransplant operation,but thei mmunorejectionisthe pri mary reasonfor the failure of corneal transplan-tation currently.Decreasing the i mmunologic rejectionis helpful to advance the success rate of the operation.Dendritic cells(DCs)are the most i mportant antigenpresenting cells(APC)[1]and have double functions inthei mmunity system.Langerhans cells(LC)are theDCs on the corneal epithelium.Recent studies indica-tedthat LCplayi mportant ro…     

重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞活化的抑制作用

目的 探讨基因重组hCTLA4Ig对小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。方法 于不同时相点在Con A刺激的小鼠脾淋巴细胞及BALB/c与昆明种小鼠混合淋巴细胞培养中加入不同剂量hCTLA4Ig，应用^3H-TdR掺入法测定淋巴细胞增殖情况。结果 重组hCTLA4Ig能显著抑制ConA刺激的脾淋巴细胞及混合淋巴细胞反应中的细胞增殖。结论 重组hCTLA4Ig能抑制鼠淋巴细胞的活化。     

Inhibition of rejection in murine islet xenografts by CTLA4Ig and CD40LIg gene transfer

Background Costimulatory signals play a vital role in T cell activation. Blockade of costimulatory pathway by CTLA4Ig or CD40LIg have enhanced graft survival in experimental transplantation models yet mechanisms remain undetermined.We investigated the effects of CTLA4Ig and CD40LIg gene transfer on islet xenografts rejection in rats.Methods Human islets were infected with recombinant adenoviruses containing CTLA4Ig and CD40LIg genes and implanted beneath the kidney capsule of diabetic rats. Levels of blood sugar, morphological changes, and survival of grafts were recorded. Expressions of CTLA4Ig, CD40LIg and insulin were detected by immunohistochemical staining and cytokines levels were quantified by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）.Results Blood glucose levels in transplant rats decreased to normal level on the 2nd day post transplantation. The mean blood glucose in the control group, CTLA4Ig transfected group, CD40LIg transfected group and CTLA4Ig ＋CD40LIg cotransfected group increased on days 8, 24, 21, 68, post transplantation respectively. The grafts in control group, CTLA4Ig transfected group, CD40LIg transfected group and CTLA4Ig ＋ CD40LIg cotransfected group survived for （8±1）, （29±4）, （27±3）, and （74±10） days, respectively. Survival in CTLA4Ig ＋ CD40LIg cotransfected group was significantly longer. Survivals of CTLA4Ig transfected group and CD40LIg transfected group were significantly longer than control group. In controJ animals, serum interleukin-2 and tumor necrosis factor a concentration significantly increased within seven days post transplantation. Haematoxylin eosin staining of grafts showed live islets in situ of transplant rats without inflammatory cell infiltration. Immunohistochemical staining confirmed the expression of insulin at islets in all experimental groups.Conclusions Transfer of CTLA4Ig and CD40Llg genes, especially the cotransfer of both, inhibits rejection of murine islet xenografts. Downregulated expressions of Th1 cells related cytokines might be related to the beneficial effects.     

局部CTLA4Ig转基因治疗大鼠小肠移植排斥

目的 :研究CTLA4Ig基因在小肠局部转染表达及其表达产物对小肠移植物存活的作用。方法 :移植前经肠系膜上动脉供给肠灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA ,应用免疫组织学及RT PCR观察移植小肠中CTLA4Ig转基因产物的表达。结果 :免疫组织学及RT PCR结果显示在移植后 2 8天内移植小肠中有CTLA4Ig转基因产物的表达 ,18例移植小肠中的 11例在受体内的存活时间超过 90天。结论 :经肠系膜上动脉体外灌注脂质体包裹的CTLA4IgcDNA可有效转染移植小肠 ,转染的移植小肠在受体内可长时间存活     

联合阻断CD28和ICOS对移植胰岛功能影响的实验研究

目的:探讨CTLA-4Ig及可溶性B7RP-1融合蛋白联合阻断CD28和ICOS对移植胰岛功能的影响。方法:在异种胰岛移植模型的基础上48只实验动物随机分成4组,每组12只,供体为SD大鼠,受体为近交系昆明小鼠。联合处理组(A组):分别于移植后0、2、4d和1、3、5d腹腔内注射CTLA-4Ig和可溶性B7RP-1融合蛋白组;可溶性B7RP-1融合蛋白处理组(B组):移植后1、3、5d腹腔内注射可溶性B7RP-1融合蛋白组;CTLA-4Ig处理组(C组):移植后0、2、4d腹腔内注射CTLA-4Ig组;对照组(D组):单纯胰岛移植,不做CTLA-4Ig和可溶性B7RP-1融合蛋白处理组。通过观察大鼠胰岛移植后移植物存活时间和移植胰岛病理改变,并用RT-PCR方法检测IL-2和IL-10在移植组织中的表达情况。结果:联合处理组大鼠移植胰岛存活时间较对照组及CTLA-4Ig处理组和可溶性B7RP-1融合蛋白组明显延长,移植胰岛光镜检查接近正常,IL-2mRNA表达差异有显著性[(42.55±6.34)%VS(112.55±15.34)%,P<0.01],IL-10mRNA表达差异无显著性[(105.35±15.16)%VS(102.23±16.02)%,P>0.05]。结论:应用CTLA-4Ig+可溶性B7RP-1融合蛋白联合阻断CD28和ICOS,可以明显的抑制排斥反应,提高移植物的存活率。     

重组腺病毒介导的CTLA4Ig基因在哺乳动物体内表达的研究

目的 了解CTLA4Ig腺病毒在不同哺乳动物体内的转染能力及表达情况。方法 用所构建的CTLA4Ig腺病毒通过静脉或腹腔注射到Balb/c小鼠，Wistar大鼠，兔，小香猪，羊体内，应用蛋白质斑点印记检测CTLA4Ig在以上动物血清中的表达情况，同时还观察各动物脏器的病理改变及动物的生存情况。结果 重组腺病毒转染7d后大鼠，小鼠血清出现CTLA4Ig持续表达2周。各动物未见异常死亡，各脏器未见明显病理改变。结论 CTLA4Ig重组腺病毒能够有效转染Balb/c小鼠，Wistar大鼠。     

重组腺病毒介导的CTLA-4Ig基因在人源性细胞中的表达

目的：了解CTLA－4Ig重组腺病毒在不同人细胞中的转染能力及表达效率，为其器官转染研究及其治疗应用奠定基础。方法：用所构建的CTLA－4Ig腺病毒感染培养的HeLa细胞，人成纤维细胞，人脐静脉内皮细胞，应用免疫组化检测CTLA－4Ig的表达情况，结果：与重组腺病毒共培养6h使HeLa细胞获得转染，12h开始表达，36h表达达高峰；人成纤维细胞8h获得转染，24h开始表达，60h后达高峰，人脐静脉内皮细胞4h获得转染，12h开始表达，36h后达高峰。结论：CTLA－4Ig重组腺病毒能高效转染HeLa细胞，人成纤维细胞，人脐静脉内皮细胞。