308 nm准分子激光对豚鼠皮肤黑素细胞的影响

目的:研究308 nm准分子激光对皮肤色素沉着的诱导作用,为其治疗白癜风提供科学依据.方法:以正常棕黄色豚鼠皮肤为实验模型,用不同剂量的308 nm准分子激光进行照射,分别采用肉眼评估、黑素细胞染色(Imokawa法)及黑素颗粒染色(Fontana-Masson法)研究该激光的致色素沉着作用;对不同照射剂量组豚鼠皮肤中的一氧化氮合酶(NOS)进行免疫组化染色,间接观察黑素调节因子一氧化氮(NO)的变化情况;苏木精-伊红染色观察表皮组织学改变.结果:各组的色素沉着评分、平均黑素数量以及多巴阳性黑素细胞数之间差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:308 nm准分子激光可诱导豚鼠皮肤色素沉着,且这种效应随着照射剂量的上升而增强.     

中药槲皮素对皮肤增色作用的动物实验研究

目的研究槲皮素对豚鼠表皮中黑素细胞的影响,观察外用槲皮素对实验动物的安全性和疗效,为白癜风等色素减退性皮肤病的中药治疗提供实验依据。方法用槲皮素乙醇提取液外涂豚鼠背部皮肤并予红外线照射,5周后对涂药皮肤和对照皮肤进行活检。用不同的染色方法分别制备病理切片,观察黑素细胞形态学改变,统计给药后表皮病理切片中黑素细胞数目和黑素含量。结果豚鼠表皮外用槲皮素后黑素细胞数目明显增加,槲皮素实验组多巴阳性黑素细胞数及含黑素颗粒细胞数均较空白对照组显著增多,与阳性对照组8-甲氧补骨脂素(8-MOP)差异无显著性。结论槲皮素对棕黄色豚鼠背部皮肤有增色作用,具有促进黑素细胞增殖和黑素合成的功能。     

止血环酸对紫外线诱导的色素斑黑素细胞的影响

摘要 目的：研究止血环酸皮内注射对黄褐斑皮损黑素细胞的影响,为外用止血环酸治疗黄褐斑提供实验依据。方法：采用紫外线照射豚鼠裸露皮肤制作黄褐斑动物模型,随机分为实验组和对照组,实验组黄褐斑皮损内注射止血环酸。通过免疫组化方法检测HMB45表达阳性的黑素细胞,Masson Fontanna-Ponceau染色检测黑素含量,图像分析用药前后黑素细胞和黑素的变化。结果：止血环酸注射后较注射前,黄褐斑皮损内黑素细胞无明显差异（P>0.05）,黑素明显减少,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：皮内注射止血环酸对黑素细胞无明显影响,但可以抑制黑素生成。     

卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响

目的 探讨卡泊三醇对黑素细胞黑素合成的影响及其作用的可能机制.方法 用噻唑蓝比色法(MTT法)、酶学方法及NaOH法,观察卡泊三醇对黑素细胞增殖及色素合成的作用;RT-PCR和蛋白印迹分别检测卡泊三醇对黑素细胞酪氨酸酶基因转录和蛋白表达水平的影响.结果 10~(-9)～10~(-5) mol/L浓度范围的卡泊三醇对体外培养的黑素细胞增殖的影响与空白对照组比较差异无统计意义(P＞0.05).同样浓度范围下,10~(-9)、10~(-8)mol/L浓度的卡泊三醇能明显增强黑素细胞的酪氨酸酶活性和促进黑素细胞的黑素含量,与空白对照组比较,酪氨酸酶活性可分别升高137%、123%(P＜0.05),黑素含量分别增加40.63%、18.75%(P＜0.05).其中10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇增强黑素细胞的酪氨酸酶活性及促进黑素细胞的黑素含量最明显.与高浓度组、空白对照组比较,10~(-9) mol/L浓度的卡泊三醇使酪氨酸酶蛋白表达增高也最明显.较空白对照组增高270.4%(P＜0.05).结论 卡泊三醇对黑素细胞增殖无影响,可增加黑素细胞酪氨酸酶蛋白表达水平,提高酪氨酸酶活性,从而促进黑素细胞的黑素合成.     

中波高能紫外线诱导豚鼠皮肤色素沉着改变的实验研究

目的 观察中波高能紫外线对皮肤色素沉着的诱导作用及其色素增加的作用机制。方法 以正常棕黄色豚鼠皮肤为实验模型,在其背部脱毛处理后,取4个相邻的区域依次作为对照组和低、中、高剂量中波高能紫外线照射组,分别采用肉眼评估、黑素细胞染色（Imokawa法）以及黑素颗粒染色（Masson-Fontana法）方法,研究中波高能紫外线所致色素沉着作用;应用免疫组化染色法对不同照射剂量组豚鼠皮肤中的一氧化氮合酶（NOS）进行检测;HE染色观察表皮组织学改变。结果 各照射组均出现不同程度的色素沉着,除中、高剂量组色素沉着评分结果差异无统计学意义外,其余各组的色素沉着评分平均黑素数量以及多巴阳性黑素细胞数之间的差异均具有统计学意义（P < 0.05）,且中剂量组结果高于高剂量组。诱导型NOS的表达呈照射剂量依赖式递增,对照组和低、中、高剂量组诱导型NOS含量评分中位数分别为0.50、1.25、1.75、2.00,组间差异具有统计学意义（P < 0.05）。结论 中波高能紫外线可诱导豚鼠皮肤色素增加,且这种效应有一定的剂量依赖性,但并非剂量越高越好。短期内接受中波高能紫外线照射是安全有效的。     

内皮素拮抗剂对中波紫外线诱导豚鼠色素沉着的观察

目的 探讨内皮素拮抗剂对紫外线诱导豚鼠色素沉着的治疗作用.方法 用中波紫外线(UVB)照射豚鼠皮肤制作色素沉着模型.模型制作成功后,模型动物分为空白对照组(生理氯化钠溶液)、内皮素拮抗剂组及熊果苷组(阳性对照).分别于中波紫外线(UVB)照射前、15 d后及30 d后,用Mexameter(R) MX 18检测豚鼠背部皮肤的黑素指数.连续治疗30 d后比较黑素指数、表皮内黑素细胞数目和黑素含量等指标.结果 UVB照射30 d时,豚鼠背部9块UVB照射区域的黑素指数显著高于照射前(P＜ 0.000 1).外涂1‰内皮素拮抗剂的照射区域30 d后的黑素指数值明显降低,和熊果苷组比较,差异有统计学意义(P＜ 0.000 1).内皮素拮抗组黑素含量指数1明显低于空白对照组(P＜0.05).而3组间黑素含量指数2差异无统计学意义(P＞ 0.05).结论 外涂内皮素拮抗剂对UVB照射诱导豚鼠的色素沉着有一定治疗作用.     

姜黄素对人表皮黑素细胞活性、迁移及c-kit mRNA表达量的影响

目的 探讨姜黄素对人表皮黑素细胞活性、黑素细胞迁移及c-kit mRNA相对表达量的影响。方法 不同浓度（5、10、20、30 μmol/L）姜黄素对人表皮黑素细胞活性影响实验,分为阴性对照组（添加MelM-2完全培养基 + 细胞）、药物对照组（MelM-2完全培养基 + 姜黄素）、空白对照组（仅添加MelM-2完全培养基）及实验组（MelM-2完全培养基 + 姜黄素 + 细胞）,用MTS法分别检测培养24 h、48 h后细胞活性。划痕实验检测黑素细胞迁移的情况,实时荧光定量PCR检测黑素细胞c-kit mRNA相对表达量。实验分为对照组（仅添加MelM-2完全培养基 + 细胞）及3个浓度（5、10、20 μmol/L）实验组。 结果 不同浓度（5、10、20、30 μmol/L）姜黄素培养基培养黑素细胞24 h、48 h时,与对照组相比,30 μmol/L组均可明显抑制黑素细胞的增殖（P < 0.05）,其他浓度差异无统计学意义（均P > 0.05）。划痕实验结果显示,与对照组相比,在培养48 h时,5、10、20 μmol/L姜黄素均能显著抑制黑素细胞迁移（均P < 0.05）。实时荧光定量PCR检测结果显示,与对照组相比,经各浓度（5、10、20 μmol/L）姜黄素作用48 h后,均可明显抑制黑素细胞c-kit mRNA相对表达量（均P < 0.05）。 结论 低浓度的姜黄素（≤ 20 μmol/L）对黑素细胞无明显细胞毒性,30 μmol/L的姜黄素能够促进黑素细胞的凋亡。姜黄素（≤ 20 μmol/L）可抑制黑素细胞的迁移,并下调人表皮黑素细胞c-kit mRNA的相对表达量。     

赤芍等5种上调酷氨酸酶活性中药乙醇提取液对棕黄色豚鼠背部皮肤的增色作用

为了研究中药对黑素细胞生物学特性的影响,筛选有增色作用的中药,为应用中药治疗白癜风等色素减退性皮肤病提供实验诊据。选定体外对酷氨酸酶活性有显著激活作用的中药5味,用中药乙醇提取液外涂棕黄色豚鼠背部皮肤,然后取材,进行HE、Schmorl、Imokawa等方面染色,观察外用中药后黑素细胞数量和形态的改变。结果,赤芍、川芎、菟丝子、补骨脂、刺蒺藜等中药组多巴阳性黑素细胞数、含黑素颗粒细胞数及黑素含量指数均较空白对照组明显增多（P＜0.01或P＜0.05),其中菟丝子、赤芍组与阳性对照组0.1%8-MOP酊外用无显著性差异（P＞0.05)。提示赤芍、川芎、菟丝子、补骨脂、刺蒺藜等中药具有增色作用,临床上可试用于白癜风等色素减退性皮肤病。     

白癜风皮损黑素细胞HMB-45、酪氨酸酶及其相关蛋白1的免疫组化研究

目的:研究白癜风白斑处黑素细胞分布及酪氨酸酶(TYR)等标记分子的表达情况。方法:对吸疱法所取白斑皮肤以免疫组化染色识别TYR、酪氨酸酶相关蛋白1(TRP1)和HMB-45,以Mias99彩色图像分析软件定量图像分析阳性表达的强弱。结果:白斑处黑素细胞数目明显低于正常对照(P<0.01),患者非皮损处与正常人皮肤比较差异无显著性(P>0.05)。皮损处黑素细胞树突减少,平均为3.4个,低于对照组(P<0.05)。残留黑素细胞各抗体呈强阳性染色。白斑毛囊之间可见黑素细胞散在、呈围管样分布。白斑处阳性细胞HMB-45图像灰度值低于正常着色皮肤(P<0.05),而TRP1高于正常皮肤(P<0.01),TYR与正常皮肤无差异(P>0.05)。结论:白斑处仍然有黑素细胞。残存黑素细胞树突回缩、数目变少,而且黑素细胞中黑素细胞标记分子表达异常。     

雌二醇对黑素细胞Wnt5A、ROR2及β-catenin表达的影响

目的:明确雌二醇对体外培养的黑素细胞非经典Wnt5A/ROR2通路中Wnt5A、ROR2及β-catenin表达的影响.方法:将体外黑素细胞随机分为2组(n=6):DMEM培养液组(A组)和50 nM雌二醇组(B组).孵育6h后采用Western blotting检测Wnt5A、ROR2及α-catenin的表达.结果:与A组相比,B组Wnt5A及ROR2的表达均明显上调(P＜0.05),而α-catenin的表达无显著性差异(P＞0.05).结论:雌二醇诱导黄褐斑形成可能与激活非经典Wnt5A/ROR2通路有关.     

槲皮素和原花青素对豚鼠白癜风模型黑素合成的影响

目的：明确槲皮素、原花青素单体对白癜风豚鼠皮肤黑素合成的影响。方法：利用过氧化氢构建38例豚鼠白癜风模型成功后,随机分为5组,分别给予乙醇（A组）、蒸馏水（B组）、0.1%8-甲氧补骨脂素（8-MOP）（C组）、0.5%槲皮素（D组）、0.1%原花青素（E组）以及0.3%原花青素（F组）外涂皮肤,其中C组用药1h后予日光照射10min。治疗期间,每2周拍摄记录豚鼠皮损色素沉着。40天后,处死全部模型并取被试区皮肤。肉眼下及HE染色观察皮肤基本病理改变;黑素颗粒染色法（Fontana-Masson法）检测含黑素颗粒细胞数量。结果：除A、B组外,其余4组在治疗期间均出现不同程度色素沉着。HE染色发现,与A、B组相比,其余4组皮肤厚度更厚,色沉较明显。Fontana-Masson法显示,与A、B组相比,其余4组黑素颗粒明显增多（P均<0.05）,其中,D、F组明显多于E组（P均<0.05）。结论：槲皮素以及原花青素单体对白癜风豚鼠模型的皮肤具有复色作用。     

电针对豚鼠银屑病模型影响的研究

目的运用银屑病豚鼠模型观察电针治疗银屑病的疗效,证实该法有效性。方法将豚鼠随机分为空白对照组、造模后观察组、电针治疗组。给予5%普萘洛尔搽剂外涂耳部皮肤,建立豚鼠银屑病模型。其中,电针治疗组给予电针治疗。空白对照组和造模后观察组均不予任何治疗,观察豚鼠局部皮损及病理变化。结果造模后观察组皮损及组织病理表现符合银屑病组织病理表现,且组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与空白对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P0.01),证明豚鼠银屑病的模型建立成功。而电针治疗组组织学Baker评分和炎症细胞浸润评分与造模后观察组相比明显降低,差异有统计学意义(P0.01),且实验豚鼠各主要脏器未发现组织病理学改变。结论豚鼠银屑病模型造模成功,电针可改善豚鼠耳部银屑病样皮损症状及其病理特征。     

Tempol对紫外线照射下豚鼠皮肤的防护作用

目的:探讨Tempol对紫外线照射下豚鼠皮肤的防护作用。方法:48只豚鼠随机分成4组:对照组、照射组、Tempol高浓度组及低浓度组,除对照组外,其余三组接受紫外线照射共14周。结果:紫外线照射组豚鼠皮肤外观评分、皱纹计数和丙二醛含量明显高于对照组、Tempol高浓度组及低浓度组(P<0.01)。结论:Tempol对紫外线引起的皮肤光老化具有防护作用。     

氧化苦参碱对人黑素细胞增殖与炎症因子自分泌的影响

目的：明确氧化苦参碱(OMT)对黑素细胞增殖、TLR3、NF-κB的mRNA表达及相关细胞因子的影响。方法：人表皮黑素细胞传代培养,分为空白对照组及不同浓度的氧化苦参碱组（10 μmol/L,50 μmol/L和100 μmol/L）,用MTT法测定细胞增殖,RT-qPCR检测TLR3、NF-κB的mRNA表达,ELISA试剂盒检测IL-6、IL-8及IL-17表达。结果：各组黑素细胞的吸光度值均显著高于空白对照组,随OMT浓度上升而升高,当OMT浓度为50 μmol/L时增殖率达到平台期。OMT组TLR3及NF-κB mRNA 及IL-6、IL-8及IL-17蛋白表达较对照组显著降低,差异有统计学意义 (P<0.05)。结论： 氧化苦参碱可促进黑素细胞的增殖,下调TLR3、NF-κB的mRNA表达,减少IL-6、IL-8及IL-17的生成。     

姜黄素对豚鼠银屑病样动物模型的药效评价及对增殖细胞核抗原表达的影响

目的 观察姜黄素对豚鼠银屑病样动物模型皮损以及增殖细胞核抗原（PCNA）的影响,探讨姜黄素对银屑病的治疗作用及其机制。 方法 将实验豚鼠随机分为6组,每组6只;正常对照组,不进行任何处理,观察3周;银屑病模型组,用5%普萘洛尔乳膏外涂豚鼠耳背,造模3周;造模后观察组,造模后观察2周;造模后对照组,造模后给予25%聚乙二醇溶液灌胃2周,每次1 ml,1次/d;低剂量姜黄素组和高剂量姜黄素组,造模后用姜黄素溶液灌胃2周,灌胃量分别为20 mg·kg-1·d-1和40 mg·kg-1·d-1,1次/d。取各组豚鼠耳部标本,HE染色观察豚鼠组织病理学评分的变化,用免疫组化法观察姜黄素对PCNA蛋白表达的影响。 结果 豚鼠的皮肤形态观察显示,姜黄素能够缓解豚鼠银屑病样皮肤表现。各组豚鼠组织病理学评分及PCNA蛋白表达阳性率总体比较差异有统计学意义（F = 296.14,P < 0.01;F = 108.49,P < 0.01）。两两比较发现,银屑病模型组的组织病理学评分（6.42 ± 0.49）及PCNA表达（63.17% ± 5.47%）与正常对照组（0.92 ± 0.20,20.83% ± 2.99%）相比均明显升高（P < 0.01）。姜黄素灌胃治疗2周后,低、高剂量组的组织病理学评分（4.25 ± 0.27,1.75 ± 0.42）及PCNA的表达（43.50% ± 2.90%,25.50% ± 3.74%）与模型组相比均明显下降,差异均有统计学意义（P < 0.01）。 结论 姜黄素对豚鼠银屑病样动物模型皮损的病理表现具有改善作用,并能下调PCNA的表达。     

成纤维细胞生长因子10单克隆抗体对豚鼠银屑病样模型的作用研究

目的 探讨成纤维细胞生长因子（FGF10）单克隆抗体局部外用对银屑病豚鼠模型的治疗作用。方法 应用5%盐酸普萘洛尔搽剂外涂豚鼠耳背部皮肤,诱导银屑病样动物模型。分别设置空白组、模型组、丁酸氢化可的松治疗组、FGF10抗体高（0.188 g/L）、中（0.094 g/L）、低（0.063 g/L）剂量治疗组。治疗2周后观察银屑病样模型的病理变化。采用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,Baker评分比较应用秩和检验,单一核细胞计数及表皮厚度比较应用方差分析（ANOVA）,多个样本均数的两两比较应用最少显著差法（LSD）。 结果 各治疗组上述各项检测指标均低于模型组（均P < 0.05）。FGF10抗体高剂量组炎细胞计数与空白组差异无统计学意义（t = 0.77,P > 0.05）,其余各治疗组炎细胞计数高于空白组及FGF10抗体高剂量组（均P < 0.05）。FGF10抗体各治疗组表皮厚度均高于丁酸氢化可的松治疗组,差异均有统计学意义（均P < 0.05）。FGF10抗体各治疗组组间表皮厚度比较,差异无统计学意义（均P > 0.05）。结论 FGF10单克隆抗体对银屑病样豚鼠模型中异常病理改变有显著调节作用,能影响角质形成细胞增殖分裂,还能显著抑制银屑病模型中炎症反应。     

Melanocyte precursors express elastin binding protein and elastin-derived peptide (VGVAPG) stimulates their melanogenesis and dendrite formation

BACKGROUND: In congenital or acquired dermal melanocytosis, attachment of melanocyte with elastic fiber was shown in electron microscopy of unknown biological meaning. We hypothesize elastin-derived peptide may play a role in activating dermal melanocyte precursors. OBJECTIVES: This study was designed to determine: (i) whether melanocyte precursors express elastin binding protein (EBP); (ii) ontogenic expression of EBP and elastin in murine embryonic skin; (iii) the effects of elastin-derived peptide (VGVAPG) on melanocyte precursors. METHODS: Using immunohistochemistry or Western blot to identify EBP on murine embryonic sections, neural crest cell (NCC) primary culture explants, or two melanocyte precursor cell lines, NCCmelb4 and NCCmelan5. NCC explants or cells were treated with VGVAPG to compare its effect on proliferation, dendrite formation, melanosome maturation and tyrosinase mRNA expression of melanocyte precursors. RESULTS: EBP was immunostained on c-kit+ melanocyte precursors. 67kDa EBP protein was immunoblotted on NCCmelb4 and NCCmelan5 cells. EBP was expressed early at embryonic day (E) 9.5, but elastin appeared later at E12.5 skin. VGVAPG increased DOPA-positive cell number and enhanced their dendrite formation in NCC explants. Electron microscopy showed advanced melanosome maturation in NCC explants or cells treated with VGVAPG. VGVAPG enhanced tyrosinase mRNA expression in NCCmelan5 cells. CONCLUSIONS: Melanocyte precursors expressed EBP. VGVAPG stimulated their melanogenesis and dendrite formation. In the developmental journey interaction between elastin and EBP-expressed melanocyte precursors in embryos happened mainly since the stage of tertiary melanoblasts. These findings first provide biological evidences for the interaction between melanocyte and elastic fiber.     

当归多糖对豚鼠银屑病样皮损中PCNA表达的影响

目的研究当归多糖对豚鼠耳部银屑病样皮损中细胞增殖性核抗原(PCNA)表达水平的影响。方法50g/L普萘洛尔乳剂外涂豚鼠耳背皮肤,制备银屑病样模型,然后随机分成模型对照组(I)、低剂量组(II)、中剂量组(III)、高剂量组(IV),依次给予生理盐水、100mg/kg,200mg/kg,400mg/kg当归多糖腹腔注射。应用免疫组化法分别检测各组治疗前后皮损中PCNA表达水平。结果造模后豚鼠耳部上皮PCNA阳性表达率与涂药前相比明显增加(P<0.05)。II,III,IV组治疗后皮损中PCNA阳性表达率较治疗前均明显降低(P<0.05)。结论当归多糖对普萘洛尔诱发的豚鼠耳背银屑病样模型有治疗作用,可能与其降低皮损中PCNA表达水平有关。