同种异体骨髓基质干细胞治疗骨缺损的实验研究

目的通过移植大鼠同种异体骨髓基质干细胞,配合免疫抑制剂治疗大鼠颅骨缺损,与对照组进行比较,探索一种治疗骨缺损的新方法。方法选取SD大鼠40只,随机分为四组：同种异体骨髓基质干细胞移植组,同时给以免疫抑制剂治疗;自体骨髓基质干细胞移植组;单纯同种异体骨髓基质干细胞移植组,单纯支架组。四组分别在脑颅骨上造成骨缺损模型后取供体组和自体组骨髓,移植到同步预制骨缺损大鼠模型缺损处,分别于术后8、10、12、13周对骨缺损处进行大体观察,X线摄片,病理取材。结果同种异体骨髓基质干细胞移植组,术后8周观察,骨样组织铺满支架,骨缺损治愈率85%;自体骨髓基质干细胞移植组,术后10周观察,骨样组织铺满支架,骨缺损治愈率82%;未用免疫抑制剂同种异体骨髓基质干细胞移植组,术后12周,只有少量骨样组织形成,骨缺损治愈率0%;单纯支架组骨样组织生长缓慢,术后13周仍未铺满支架。骨缺损治愈率10%。骨缺损治愈率85%。结论应用免疫抑制剂防止移植排斥反应的同种异体骨髓基质干细胞移植效果与自体骨髓基质干细胞移植效果差别很小,具有实用价值。     

胎兔骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究

为了证实体外培养的胎免骨髓基质细胞可以修复骨缺损,将培养的基质细胞吸附于明胶海绵,植入兔骨缺损处,1、2、4、6、8周作99mTc-MDP骨显像、x片、组织切片观察骨痂生长情况。结果显示,平均4周左右实验组骨缺损得到修复,提示胎儿骨髓基质细胞可以作为种子细胞来修复骨缺损。     

胎兔骨髓基质细胞修复骨缺损的实验研究

为了证实体外培养的胎兔骨髓基质细胞可以修复骨缺损,将培养的基质细胞吸附于明胶海绵,植入兔骨缺损处,１、２、４、６、８周作＾９９ｍＴｃ－ＭＤＰ骨显像、Ｘ片、组织切片观察骨痂生长情况。结果显示,平均４周左右实验组骨缺损得到修复,提示胎儿骨髓基质细胞可以作为种子细胞来修复骨缺损。     

同种异体骨髓基质细胞移植修复兔膝关节骨软骨缺损

目的 探讨同种异体骨髓基质细胞(BMSCs)作为种子细胞在软骨组织工程中的应用.方法 同种异体BMSCs与丝素蛋白-异体松质骨共培养构建组织工程化骨软骨复合体,移植修复兔膝关节骨软骨缺损,术后2、4、12周取材,行组织学观察及Ⅱ型胶原、Brdu免疫组化染色.结果 BMSCs能在丝素蛋白和松质骨支架上较好的黏附、生长,共培养后成功地构建了组织工程化骨软骨复合体;体内移植后生成透明软骨样组织并修复了骨软骨缺损.结论 同种异体BMSCs可作为软骨组织工程的种子细胞,丝素蛋白-松质骨双相支架负载同种异体BMSCs可用于骨软骨缺损的修复.     

异体骨髓基质细胞的免疫性研究

目的研究异体骨髓基质细胞（BMSCs）的免疫原性,同时探讨异体骨髓基质细胞作为组织工程种子细胞的可行性。方法抽取大耳白兔胫骨结节及股骨转子处骨髓,经密度梯度离心,贴壁筛选,获取BMSCs并培养、扩增。24只成年新西兰兔随机分成两组,每组12只,造成双侧12mm桡骨缺损,A组缺损区移植吸附异体BMSCs的明胶海绵,B组缺损区移植吸附自体BMSCs的明胶海绵。分别于术后2、4、8周抽取外周静脉血,样本用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群CD^＋4、CD^＋8的阳性率及CD^＋4／CD^＋8比值;于术后第2、4、8、10周拍摄X线片动态观察新生骨痂生长及骨组织愈合情况,于术后第2、4、8、10周取材进行组织学染色,观察骨缺损修复过程中的组织形态学变化。结果术后第2、4、8周A组、B组外周血T淋巴细胞亚群CD^＋4、CD^＋8的阳性率和CD^＋4／CD^＋8比值三者差异均无显著性（P〉0．05）;组织形态学显示A组无明显淋巴细胞浸润,A组与B组新骨形成方式及骨愈合时间两者无明显差异（P〉0．05）。结论异体骨髓基质细胞移植免疫性低,可作为组织工程理想的种子细胞。     

常温储骨的实验研究

目的 通过常温保存的兔同种异体新鲜骨移植实验研究探讨常温骨库保存骨的可行性和合理性。方法 日本大耳白兔28只，平均兔龄5．6个月，平均体重2430g(2000—3000g)。随机选择一侧桡骨截除1．0cm造成骨缺损模型，再用保存1年的库存新鲜兔骨修复骨缺损，同时将该侧肢体截除之桡骨移植于对侧肢体作为对照组。把28只实验兔随机分为4组，分别于术后4、8、12、16周处死，观察放射线、组织学及光、电镜结果。结果 实验组术后4周，无明显骨痴形成；术后8周，植骨两端均有骨痂形成，但移植骨密度高、塑形差；术后12周移植骨与宿主骨已骨性愈合，骨髓腔通畅。结论 常温骨库保存的同种异体骨的成骨效果经动物实验观察，植骨后无明显排斥反应，成骨生物效应良好，对于大段骨缺损的治疗有重要的临床意义。     

供体骨髓来源的未成熟树突状细胞抑制小鼠同种异体牙移植后排斥反应的效果研究

目的:研究供体小鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞(Immature dendritic cell, imDC)对小鼠同种异体牙移植后排斥反应的抑制效果.方法:运用50 U/ml粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor, GM-CSF)诱导出小鼠骨髓来源imDC,流式细胞术鉴定细胞表型,并于同种异体牙移植前1周以2×106个/只回输入受者体内,组织病理切片观察imDC对小鼠同种异体牙移植后排斥反应的抑制效果.结果:imDC回输组与未回输imDC的同种异体牙移植组相比,淋巴细胞浸润减少、炎症反应减轻.结论:imDC可以减轻同种异体牙移植后的排斥反应.     

自体骨髓基质细胞与异体松质骨基质复合修复兔桡骨缺损的实验研究

目的：探讨自体骨髓基质细胞（MSCs）复合异体松质基质复合修复节段性骨缺损的效果。方法：将兔自体骨髓基质细胞于体外分离，培养，增殖，与异体松质骨基质复合，选用大白兔28只，造成桡骨干缺损12mm的动物模型，分别行自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物和单纯异体松质骨基质移植，术后3、6、9、12周取材，通过X线、大体和形态学观察，术线摄片进行计算机图像分析，计算骨缺损处的骨痂灰度。结果：自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物在骨缺损的愈合过程中其成骨量，成骨速度及时间均优于单纯异体松质骨基质，约在9周使骨缺损基本得到修复，结论：自体骨髓基质细胞－异体松质骨基质复合物经异体松质骨更能有效修复节段性骨缺损。     

异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损

目的 :研究采用同种异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损的效果。方法 :将体外培养的同种异体第二代软骨细胞与透明质酸苄基酯凝胶复合注入兔关节软骨缺损区作为实验组 ,以软骨细胞悬液组和不作任何处理组作为对照 ,于第 4、8、1 2周取材 ,进行大体、组织学、电镜检查 ,观察其修复效果。结果 :实验组术后 1 2周时 ,缺损区可见新生透明样软骨组织 ,表面光滑 ,与周围软骨界面难以辨认。软骨细胞悬液组和空白对照组组均未见明显修复。结论 :同种异体软骨细胞复合透明质酸苄基酯凝胶修复关节软骨缺损效果明显 ,将透明质酸苄基酯凝胶作为移植载体是可行的。     

自体与新鲜同种异体骨软骨移植的实验研究

目的:评价自体与新鲜异体骨软骨镶嵌移植两种方法修复全层关节软骨缺损的生物学特性和修复效果。方法:采用完全随机设计,将16只新西兰大白兔的左右后肢制成全层软骨缺损模型,分别进行自体骨软骨镶嵌移植、同种异体骨软骨镶嵌移植修复。术后第12周处死动物取材,分别进行膝关节活动度测定、大体观察、光镜观察及Wakitani组织学评分法,数据行统计学分析。结果:膝关节伸屈活动度、大体观察、组织学光镜及组织修复评分显示自体骨软骨移植在第12周时能以类透明软骨组织修复缺损,而新鲜同种异体骨软骨移植为纤维肉芽组织。结论:自体骨软骨镶嵌移植可以修复兔关节软骨的缺损。新鲜无处理的同种异体骨软骨镶嵌移植修复关节软骨缺损不可行,其排斥反应及吸收破坏严重。     

异体骨髓基质细胞促进引导性骨再生的实验研究

目的:利用膜引导组织再生技术,将复合异体骨髓基质细胞(BMSCs)的明胶海棉移植于硅胶膜管内,旨在观察异体BMSCs促进膜引导骨组织再生的能力.方法:抽取大耳白兔胫骨结节及股骨转子处骨髓,经密度梯度离心,贴壁筛选,获取BMSCs并培养、扩增.36只成年新两兰兔随机分成3组,每组12只,造成双侧12 mm桡骨缺损,A组缺...     

富血小板血浆诱导骨髓基质干细胞联合软骨支架治疗兔激素性股骨头坏死

目的 观察自体富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)诱导骨髓基质干细胞联合同种骨软骨支架治疗早期兔激素性股骨头坏死的疗效,探索早期股骨头坏死治疗的新方法.方法 采用含有抗凝剂的真空采血管从实验兔的耳中央动脉采取动脉血5 mL,再通过离心方法获取PRP,用16号骨髓穿刺针从实验兔自体股骨髓腔抽取骨髓5 mL,把抽取的骨髓进行密度梯度离心,获取兔骨髓基质干细胞,并进行细胞原代培养和成骨诱导.对已获取PRP和骨髓基质干细胞的实验兔进行激素性股骨头坏死造模,取同种股骨髁部骨软骨制作软骨支架,最后以制备的软骨支架为载体,将经过成骨诱导的骨髓基质干细胞移植到软骨支架上,形成细胞-支架复合物,用16号骨髓穿刺针对坏死的股骨头进行髓芯减压术,术中将细胞-支架复合物植入坏死的股骨头下.实验动物共分为4组,每组20只,A组为空白对照;B组仅进行髓芯减压;C组髓芯减压后植入经过成骨诱导培养的细胞;D组髓芯减压后植入细胞-支架复合物.实验后在第2、4、8周各组分别处死6、6、8只,每只实验兔的股骨头行大体标本及组织学检查.结果 D组治疗效果最显著,通过空骨陷窝计数发现D组与其他各组的差异有统计学意义(P<0.05).结论 骨髓基质干细胞通过PRP的诱导向成骨细胞分化;软骨支架材料为骨髓基质干细胞向成骨细胞分化提供良好的空间结构,有利于其向成骨细胞分化;PRP和软骨支架材料联合应用可促进早期兔激素性股骨头坏死的修复.     

自体骨髓单个核细胞心肌内移植的实验研究

目的：观察自体骨髓单个核细胞（BMMNC）在动物模型心肌微环境中的存活和分化情况，探索该方法应用至临床的可行性。方法：选取成年新西兰兔共20只，随机分为四组。无菌状态下取胫骨骨髓15ml，采用改进后的密度梯度离心法分离出BMMNC，荧光染料CFSE作细胞标记后备用。正中切口进胸，心肌内注入上述备用细胞悬液。于术后1、2、4、8周先后处死四组动物，取心脏标本冰冻切片在共聚焦显微镜下观察局部含荧光细胞的存活发育情况。结果：移植后4周可观察到与心肌纤维平行的荧光带，部分标本血管内壁中观察到了荧光细胞。结论：自体BMMNC心肌内移植可在心肌微环境的诱导下分化为心肌样细胞及血管内皮细胞。改进后的BMMNC分离纯化方法过程简便、可靠，处理过程无毒性，获得的细胞纯度和活性较高，该方法可应用于临床研究。     

碱性成纤维细胞生长因子和异体下颌骨复合移植的实验研究

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)对异体下颌骨移植后再血管化及骨改建的影响，评价b-FGF和异体骨复合移植修复下颌骨缺损的临床价值。方法：在20例双侧下颌骨缺损的兔模型中，左侧植入b-FGF和异体骨修复作为实验组，右侧单纯异体骨修复作为对照组。植入后1个月、3个月分别行墨汁明胶血管灌注透明法及组织学观察再血管化及骨改建的情况。结果：b-FGF 异体骨组血管化较异体骨组完全，骨形成也较异体骨组早且充分。结论；b-FGF可促进异体下颌骨移植后再血管化，在骨改建过程中有骨诱导作用，b-FGF和异体骨复合移植是一种有临床应用前景的骨缺损修复方法。     

脱细胞松质骨/骨形态发生蛋白-2/胶原海绵重建兔上颌窦外侧骨壁伴黏膜缺损实验研究

目的利用胶原海绵及复合骨形态发生蛋白-2（BMP-2）的脱细胞松质骨,原位修复兔上颌窦外侧骨壁伴黏膜缺损,观察BMP-2原位诱导成骨及上颌窦外侧骨壁、黏膜修复状况。方法制备复合BMP-2的片状脱细胞松质骨,单侧以生物蛋白胶固定薄层胶原海绵作为修复材料,未加BMP-2材料用做对照。手术去除兔上颌窦外侧骨壁及附着黏膜,胶原海绵侧面向窦腔,原位修复缺损,术后3个月进行大体标本及病理切片观察,了解其修复效果及成骨情况。结果兔术后健康状况良好,术后3个月大体观察兔上颌窦外侧壁缺损修复良好,窦腔内侧面有新生黏膜覆盖。病理学检查发现实验组脱细胞松质骨内有新骨形成,对照组仅有纤维结缔组织长人。结论BMP-2具有诱导成骨能力,胶原海绵可用作黏膜再生支架,脱细胞松质骨／BMP-2／胶原海绵,可用于修复上颌窦局部骨壁伴黏膜缺损。     

酒精胎骨混悬液注射移植促进骨愈合实验研究

用酒精兔胎骨混悬液为植骨材料，以兔双侧桡骨中段３ｍｍ宽骨缺损横断骨折及肱三头肌为动物模型，通过注射将骨植入实验侧骨折端及肌肉内，对侧注入等量生理盐水作自身对照。术后进行免疫学、放射学、组织学及生物力学检查，结果表明：植骨不引起明显免疫排斥反应；植骨侧新骨形成多，骨折愈合快，抗弯应力强度大；肌内诱导成骨明显。酒精胎骨混悬液注射移植是一种简而有效的植骨材料和方法。     

酒精胎骨移植促进骨愈合的实验研究

目的：通过酒精胎骨移植观察骨愈合情况。方法：用酒精棒状兔胎骨为材料,手术将骨植入兔实验侧骨折端内,对侧不植骨作自身对照,术后进行免疫学、放射学、组织学及生物力学检查。结果：表明植骨不引起明显排斥反应,植骨侧新骨形成多、骨折愈合快、抗弯应力强度大。结论：酒精胎骨移植是一种简便而有效的植骨材料和方法。     

浓缩自体骨髓移植在骨缺损瘢痕组织内成骨作用的实验研究

目的:探讨自体骨髓移植修复骨缺损过程中,离心浓缩后的骨髓基质干细胞在骨缺损瘢痕组织内成骨效应。方法:制备健康新西兰白兔双侧桡骨中段10mm骨缺损实验模型。A组于桡骨骨缺损瘢痕组织内注射入经过梯度离心浓缩处理骨髓抽吸液;B组于桡骨骨缺损瘢痕组织内注射入未经离心浓缩处理的骨髓抽吸液;C组不作骨髓抽吸液注射。分别于术后30天,60天和90天时行X线和组织学观察。结果:A组在新骨形成、骨改建及骨髓成熟度指标均优于B组、C组2组差异有显著性意义(P=0.0000,P0.01)。结论:经皮自体浓缩骨髓注射在缺损区的瘢痕组织内有明显成骨作用,其有效性与移植的骨髓基质干细胞的浓度有关。