磷脂酰肌醇3-激酶通路对脂多糖预激动小胶质细胞高迁移率族蛋白1表达的影响

目的 探讨磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinaseB,P13K/Akt)通路对脂多糖 (lipopolyssacride,LPS)预处理体外培养大脑皮质小胶质细胞高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1protein 1,HMGB-1)表达的影响.方法 体外分离纯化小鼠大脑皮质小胶质细胞,纯度鉴定后按未刺激对照组、0.01μg/mL LPS单次刺激组(18 h)、1μg/mL LPS刺激组(24 h)、预处理组、PI3K/AKT通路抑制组(2 h)分别进行处理.收获各组细胞与培养上清,采用酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)分泌水平,免疫荧光法检测HMGB-1在细胞中的定位情况,Western blot 检测 HMGB-1和磷酸化Akt的表达水平.结果 PI3K/Akt通路抑制后,LPS预刺激小胶质细胞产生的TNF-α水平较1μg/mL单次刺激组、预刺激组水平降低(P=0.043;P=0.046);磷酸化Akt表达降低,小胶质细胞HMGB-1表达以及向胞浆中转位呈现降低趋势.结论 PI3K/Akt通路在LPS预激诱导的HMGB-1活化中起正性调节作用,这些分子及调节通路的变化参与LPS耐受诱导的重新调配过程,从而共同影响小胶质细胞的最终效应.     

冠心病患者高迁移率族蛋白B1水平变化的临床研究

目的:探讨冠心病(CHD)患者血清高迁移率族蛋白B1(HMGB1)水平变化及其临床意义。方法:CHD患者158例,分为急性冠脉综合征组(ACS组,87例)和稳定型心绞痛组(SA组,71例),选择30例年龄和性别匹配的健康体检者作为对照组,采用ELISA检测各组人群血清HMGB1水平,并同时检测超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、白细胞计数(WBC)和血脂水平。结果:CHD患者血清HMGB1和hs-CRP水平较对照组明显增高(6.47±1.39ng/ml vs 2.19±0.43ng/ml,P<0.01;3.42±0.87g/ml vs 1.15±0.22g/ml,P<0.01)。ACS组患者血清HMGB1水平显著高于SA组(8.52±2.08ng/ml vs 5.38±1.26ng/ml,P<0.01)。ACS组患者血清hs-CRP水平较SA组和对照组也明显升高。CHD患者血清HMGB1水平与hs-CRP水平呈显著正相关(r=0.685,P<0.01)。结论:血清HMGB1水平的变化在CHD的发病过程中有重要意义,可作为CHD的监测指标之一。     

高迁移率族蛋白B1在脂多糖致幼年大鼠脑损伤中的表达

目的 探讨高迁移率族蛋白B1(high mobility gnmp box 1,HMGB1)在脂多糖(LPS)致幼年大鼠脑损伤中的表达变化.方法 SD大鼠随机分为对照组(NS组,n=80),颈外动脉注射生理盐水;脂多糖组(LPS组,n=80),颈外动脉注射LPS,于注射药物后6、12、24、48、72 h处死,甲酰胺法测脑组织伊文思蓝(EB)含量;免疫组织化学技术检测脑组织HMGBI、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;RT-PCR技术检测HMGB1 mRNA的表达变化.结果 LPS组脑组织的EB含量、NSE、GFAP蛋白表达均为6 h开始增加,24 h达高峰;HMGB1蛋白及HMGB1 mRNA于6 h开始增加,24 h达高峰,与EB含量、NSE、GFAP蛋白含量呈正相关.各时间点与NS组比较,差异显著.结论 HMGB1可能作为晚期炎症因子参与LPS致脑损伤的发生发展过程.     

高迁移率族蛋白B1在肿瘤中的双重作用

高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)是广泛存在于真核细胞核染色质中的一种非组蛋白,在机体炎症性疾病、自身免疫病以及癌症中发挥重要作用。在肿瘤的发生发展中,不同亚细胞定位的HMGB1发挥不同的功能。一方面,HMGB1能够促进肿瘤细胞的生长、增殖、侵袭和转移,介导免疫逃逸与免...     

高迁移率族蛋白1在类风湿性关节炎发生中的作用

高迁移率族蛋白1（HMGB1）是一种非组蛋白核蛋白,是一个具有双重功能的警报素,其免疫活性取决于细胞定位。在细胞内,HMGB1结合DNA调节转录;在细胞外,HMGB1具有和TNF相似的细胞因子活性。HMGB1参与许多免疫介导疾病的发病过程包括类风湿性关节炎（RA）。因而,研究炎症性关节炎新的发病机制可以提供新的治疗靶点。     

高迁移率族蛋白B1(HMGB-1)与器官纤维化研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为一种重要的晚期炎症因子和促炎因子,可以通过损伤/坏死细胞被动释放,也可由活化状态的细胞主动分泌至胞外介导炎症反应.一直以来,HMGB1在各种急慢性炎症中的作用研究备受关注.器官组织纤维化为持续慢性炎症的后期病理变化,近年来,HMGB1在各种器官纤维化中的作用研究越来越多.许多研究结果显示,HMGB1在肝、肺、肾、心脏等器官纤维化的发生发展中发挥重要作用.     

ACI患者血浆高迁移率族蛋白B1的检测及临床意义

目的:检测急性脑梗死(ACI)患者血浆高迁移率族蛋白B1(HMGB1)浓度,分析其与预后的相关性。方法:50例体检健康人静脉血在体检时获得,90例ACI患者静脉血在入院时获得。ELISA测定血浆高迁移率族蛋白B1浓度,统计分析其与预后的相关性。结果:ACI患者血浆HMGB1浓度(8.4±3.8)ng/ml显著高于体检健康者(1.2±0.4)ng/ml(P<0.01),与美国国立卫生院神经功能缺损评分显著正相关(r=0.591,P<0.01),是ACI患者3个月内死亡的独立危险因素(OR=1.892,95%CI=1.145～5.439,P<0.01),可显著预测ACI患者3个月内死亡(曲线下面积=0.842,95%CI=0.772～0.917,P<0.01),其浓度>8.6 ng/ml,对预测ACI患者3个月内死亡有84.2%的灵敏度和77.4%的特异度。结论:ACI后血浆HMGB1浓度升高,与ACI患者不利的临床预后相关。     

高迁移率族蛋白B1:从核蛋白到新的细胞因子

对高迁移率族蛋白B1（HMGB1）的认识曾长期局限于其调节基因转录的核蛋白功能。由于其作为细菌内毒素致死性的晚期介质这一重要功能不久前被发现,HMGB1新的生物学活性及其作用机制引起广泛兴趣和深入研究。HMGB1具有细胞因子的各种共同特性,包括其自分泌和旁分泌的特征、其受体依赖性以及它与其他炎症细胞因子相互诱生与协同作用的网络性。在感染性和非感染性的炎症、损伤和细胞坏死中,HMGB1介导了以巨噬细胞为主的固有免疫应答,发挥了至关重要的前炎症细胞因子和趋化因子的作用,同时还发现其对神经突触和肿瘤细胞的生长的促进作用。以HMGB1为靶子的治疗策略,包括对其产生和释放的抑制以及对其与受体（已知RAGE、TLR2和TLR4）结合的拮抗措施,在实验动物获得了可喜的成功并给临床应用带来了希望。     

机械牵张诱导THP-1细胞高迁移率族蛋白B1移位出核

目的: 探讨机械牵张对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在THP-1细胞内移位的影响。方法: 构建HMGB1－增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合蛋白的真核表达载体。通过两步亚克隆的方法,将HMGB1和EGFP的编码序列以融合蛋白的形式克隆到pcDNA3-HA载体上,随后转染THP-1细胞并施加机械牵张应变,荧光显微镜观察HMGB1在细胞内的表达及移位情况。 结果: 重组质粒经酶切鉴定证明构建正确,并在THP-1细胞中大量表达。荧光显微镜观察发现,HMGB1-EGFP融合蛋白主要分布于细胞核,经机械牵张18 h,可见细胞中融合蛋白从细胞核移位到细胞质,在细胞浆中观察到明显的绿色荧光。 结论: 成功构建了HMGB1-EGFP融合蛋白,在THP-1细胞中观察到机械牵张可诱导HMGB1移位出核。     

血浆高迁移率族蛋白B1浓度与脑外伤预后的相关性分析

目的：揭示脑外伤患者血浆高迁移率族蛋白B1（HMGBl）浓度,分析其与预后的相关性。方法：收集重型脑外伤患者118例和同期健康体检正常者50例。健康体检正常者静脉血体检时获得,脑外伤患者静脉血在入院时获得。ELISA测定血浆HMGBl浓度,统计分析其与预后的相关性。结果：￡检验显示,脑外伤患者血浆HMGBl浓度（9．4±2．3）ng／ml显著高于健康体检正常者（1．6±0．3）ng／ml（t=9．583,P〈0．01）。多因素分析显示,血浆HMGBI浓度是脑外伤1周内死亡（OR=1．309,95％CI=1．197-1．743,P〈0．01）、1年内死亡（OR=1．476,95％CI=1．208-1．796,P〈0．01）和1年内神经功能预后不良（格拉斯哥预后评分1-3分）（OR=1．419,95％CI=1．218-1．697,P〈0．01）的独立危险因素,ROC曲线分析显示,血浆HMGBl浓度可预测脑外伤1周内死亡（曲线下面积=0．865,95％CI=0．824-0．901,P〈0．01）、1年内死亡（曲线下面积=0．891,95％CI=0．835-0．934,P〈0．01）和1年内神经功能预后不良（曲线下面积=0．876,95％CI=0.832-0．925,P〈0．01）。结论：脑外伤后血浆HMGBl浓度显著升高,临床检测这些指标有助于早期判断脑外伤预后。     

缺氧条件下HMGB1对HepG2细胞线粒体功能的影响

目的:探讨缺氧条件下高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对人肝癌细胞系HepG2线粒体功能的影响及其机制。方法:将HMGB1小干扰RNA (HMGB1-siRNA)和阴性对照si RNA (si RNA-NC)分别转染入HepG2细胞,实验分为:缺氧(hypoxia)组、hypoxia+HMGB1-siRNA组和hypoxia+si RNA-NC组。流式细胞术检测各组细胞线粒体活性氧簇(mt ROS)含量和线粒体膜电位水平,RT-qPCR检测各组细胞线粒体DNA(mt DNA)拷贝数,ATP检测试剂盒检测各组细胞内ATP产生量,Western blot检测各组细胞线粒体生物合成相关分子表达的变化。结果:与hypoxia组和hypoxia+si RNA-NC组相比,当HMGB1表达被抑制后,细胞线粒体活性氧簇含量明显升高,线粒体膜电位水平、mt DNA拷贝数和ATP产生量明显下降(P 0. 05); Western blot结果显示,hypoxia+HMGB1-siRNA组的线粒体生物合成相关分子表达量下降(P 0. 05)。结论:缺氧环境下,HMGB1通过调控线粒体生物合成,诱导新生线粒体形成并维持细胞线粒体的正常功能。     

LPS通过p38MAPK-CBP诱导巨噬细胞RAW264.7表达和释放HMGB1

 目的 检测LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1和相关信号分子p38MAPK、NF-κB、CBP的表达,探讨脓毒症时巨噬细胞表达和释放HMGB1的信号传导机制。 方法 采用LPS刺激RAW264.7细胞,在不同的时间点用免疫细胞化学、激光共聚焦显微镜观察细胞内相关信号分子p38MAPK、NF-κB、CBP的变化,ELISA检测培养上清HMGB1的含量,Real-time PCR检测培养细胞HMGB1的mRNA水平,Western blot检测胞浆和胞核内HMGB1的含量。 结果 随着LPS的刺激,细胞浆内p38MAPK的绿色荧光逐渐增强,NF-κB的绿色荧逐渐减弱,而细胞核内NF-κB绿色荧光逐渐增强,CBP的绿色荧光逐渐增强,三者均于刺激后6 h达高峰。LPS刺激后12-48 h培养细胞胞浆和上清中HMGB1蛋白含量逐渐增加,而12-24 h胞核内HMGB1含量逐渐减少,36 h后又逐渐增多,各不同时间点差异具有显著性(P<0.01);而细胞内HMGB1 mRNA表达在LPS刺激后0-12 h无明显变化, 24 h、36 h和48 h明显增高,与0h相比差异有显著性(P<0.01)。 结论 LPS通过依次激活巨噬细胞内信号分子p38MAPK、NF-κB及CBP来诱导HMGB1的合成、转位和释放表达的。     

HMGB1在高温致金黄地鼠神经管畸形神经上皮细胞中的表达变化

为了探讨高温致神经管畸形(NTDs)作用的分子机制,为预防人类NTDs的发生提供理论依据,本研究在高温致金黄地鼠NTDs模型的基础上,研究HMGB1在高温致金黄地鼠NTDs神经上皮细胞中的表达变化。将孕鼠随机分为实验组和对照组,分别于水浴处理后8、16、24、40、64 h(相当于胚龄第8、8.5、9、9.5、10.5 d)处死孕鼠,剖腹取鼠胚,制备石蜡切片,应用免疫荧光染色技术检测NTDs发生过程中HMGB1在神经上皮细胞中的表达变化。结果显示:对照组和模型组孕鼠在水浴处理后8、16、24h,HMGB1免疫阳性产物分布于鼠胚神经上皮细胞和周围间充质细胞的胞浆中;水浴后40、64 h,HMGB1表达部位出现了由胞浆向胞核的转移;高温处理后,HMGB1在实验组各期胚胎神经上皮细胞内的表达均比对照组减弱。上述结果提示,HMGB1的表达变化与神经管发育密切相关,其表达降低是高温致神经管畸形发生的重要途径之一。     

敲减HMGB1表达对TNF-α诱导的乳腺癌细胞侵袭能力的影响

 目的：探讨敲减高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达对肿瘤坏死因子α（TNF-α）诱导的乳腺癌细胞侵袭能力的影响及机制。方法：采用HMGB1小干扰RNA（siRNA）转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,实时荧光定量PCR和Western blot分别测定细胞中HMGB1的mRNA和蛋白表达情况。用TNF-α处理敲减HMGB1表达的MDA-MB-231细胞,流式细胞术测定各组细胞凋亡,Transwell小室法测定各组细胞侵袭能力,细胞划痕实验测定各组细胞的迁移能力,Western blot法测定细胞中上皮钙黏素（E-cadherin）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）、神经钙黏素（N-cadherin）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和Bax的表达情况。结果：HMGB1 siRNA转染后MDA-MB-231细胞中HMGB1的mRNA和蛋白表达水平明显低于没有转染的细胞（P<0.05）。与对照组相比,TNF-α处理后的乳腺癌细胞的凋亡水平升高,细胞侵袭和迁移能力也升高,细胞中E-cadherin蛋白水平降低,N-cadherin蛋白水平升高,MMP-2、MMP-9和Bax蛋白水平也升高（P<0.05）。敲减HMGB1表达的MDA-MB-231细胞经TNF-α诱导以后,细胞凋亡率增加,侵袭及迁移能力下调,细胞中E-cadherin蛋白水平升高,N-cadherin蛋白水平下降,MMP-2和MMP-9蛋白水平也下降,Bax蛋白水平升高（P<0.05）。结论：敲减HMGB1表达可以增强TNF-α诱导的乳腺癌细胞凋亡,抑制TNF-α诱导的乳腺癌细胞侵袭、迁移和上皮-间充质转化,其作用机制与MMP-2、MMP-9和Bax蛋白表达有关。     

外源性HMGB1的研究进展

胞内HMGB1可以主动或被动释放到胞外,外源性HMGB1被认为是重要的晚期炎症因子,在炎症的发生发展中起重要作用.胞外HMGB1能与很多因子形成复合物,通过不同的受体通路影响转录因子NF-κB的活性,发挥不同的生物学效应.除发挥炎症因子的作用外,HMGB1在组织的修复和重建中的作用也不容小觑.另外,HMGB1预处理可以诱导产生免疫耐受,可能与脓毒症末期免疫功能低下有一定关系.     

丙酮酸乙酯抑制LPS诱导RAW264.7巨噬细胞HMGB1的表达

目的:探讨丙酮酸乙酯(EP)抑制脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞高迁移族率蛋白B1 (HMGB1)的表达及分子机制.方法:培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,分为LPS( 100 ng/mL)组及LPS( 100 ng/mL)+EP(5 mmol/L)组,刺激后0、6、12、18、24、30、36 h提取总RNA及胞质胞核蛋白,用RT-PCR法测细胞培养液中HMGB1 mRNA 表达;用Western blot测胞质和胞核HMGB1蛋白含量;用ELISA法测培养上清中HMGB1、TNF-α和IL-6的含量;用免疫细胞化学共聚焦显微镜观察细胞内HMGB1的转位分布.结果:LPS+EP组HMGB1 mRNA基因表达于24、36、48 h比LPS组明显减少;Western blot结果示,LPS+ EP组HMGB1蛋白含量胞质明显低于LPS组,而胞核明显高于LPS组;ELISA结果示,LPS+EP组细胞培养上清中HMGB1、TNF-α和IL-6的含量明显低于LPS组;免疫荧光、激光共聚焦显微镜结果示,LPS+ EP组细胞质内绿色荧光染色明显弱于LPS组,细胞核内绿色荧光染色明显强于LPS组.结论:EP能有效抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1的表达和释放.     

Diagnostic value of HMGB1 immunostaining on cell blocks from residual liquid‐based gynecologic cytology specimens

Aberrant expression of high mobility group box 1 (HMGB1) is associated with tumor development and progression. The current study was conducted to evaluate the significance of HMGB1 immunostaining on cell block (CB) preparations in the diagnosis of neoplastic and preneoplastic lesions of the cervix. The CBs were prepared from 157 residual liquid‐based gynecologic cytology specimens which were collected from women whose cervical lesions had been confirmed by histopathology. The expression of HMGB1 and p16INK4A (p16) was visualized by immunocytochemistry on the CB preparations, and the association of their expression patterns was correlated with the severity of cervical lesions. HeLa cells were used as positive control. HMGB1 expression was observed in dysplastic and neoplastic cells and increased along with the progression of cervical neoplasia. The rates of positive staining for HMGB1 in cervical intraepithelial neoplasia 1 (CIN‐1), CIN‐2, CIN‐3, and invasive squamous cell carcinomas (ISCCs) were 69.4, 96.9, 100.0, and 100.0%, respectively. The differences between positive rates of patients with chronic cervicitis and various CINs as well as ISCCs were significant (P < 0.005). The differences in positive staining rates between each two CIN groups, and differences between CIN‐1/2 and ISCCs, were also significant (P < 0.005). The expression pattern of HMGB1 was generally correlated with that of p16 (P < 0.001). HMGB1 staining was observed in some p16‐negative specimens. HMGB1 immunostaining on a CB from gynecologic cytology specimens is potentially valuable for the screening of cervical lesions in cases with questionable cytology. Diagn. Cytopathol. 2014;42:802–808. © 2014 Wiley Periodicals, Inc.