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1.
摘 要 目的:探讨青蒿琥酯(Art)对Akt/GSK 3β/β catenin信号通路的影响。方法: 不同浓度(0,12.5,25,50 μg·mL-1)Art作用于人源肝星状细胞(LX 2),采用CCK 8法检测细胞增殖情况,并确定给药浓度;给予不同浓度Akt抑制药MK 2206 0~8 μmol·L-1,Western blot法确定其最佳抑制浓度;给予Art、MK 2206、MK 2206+Art,采用Western blot法检测各组Akt、p Akt、GSK 3β、p GSK 3β、β catenin蛋白表达情况。结果: CCK 8法检测细胞存活率,当选用25 μg·mL-1Art作用于LX 2细胞24h时细胞存活率约80%,Western blot法确定当MK 2206浓度为6 μmol·L-1时,可有效抑制p Akt的表达;Art组(25 μg·mL-1)、MK 2206组(6 μmol·L-1)、MK 2206(6 μmol·L-1)+Art(25 μg·mL-1)组与对照组相比,Akt、p Akt、p GSK 3β、β catenin蛋白表达均有显著差异(P<0.05),MK 2206(6 μmol·L-1)+Art(25 μg·mL-1)组分别与Art(25 μg·mL-1)组、MK 2206(6 μmol·L-1)组比较,GSK 3β、Akt蛋白表达无显著差异(P>0.05),p Akt、p GSK 3β、β catenin蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论: Art可通过Akt因子对Wnt/β catenin信号通路中相关因子产生影响,进而抑制细胞增殖,缓解肝纤维发展进程。  相似文献   

2.
洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制。方法MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,VCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用。结果Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30 μmol·L-1 Lom使K562/ADM对ADM的IC50值由79.03 μmol·L-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L-1。Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响。结论Lom通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性。  相似文献   

3.
摘 要 目的:探讨吴茱萸碱对心肌细胞缺血损伤的保护作用。方法: 培养H9c2心肌细胞,缺氧24 h造成心肌细胞损伤模型,给予不同浓度(0.1,1,5,10 μmol·L-1 )吴茱萸预处理细胞12 h,CCK 8检测心肌细胞的活性,RT PCR检测心肌细胞炎症因子的转录,Tunel染色检测心肌细胞凋亡,免疫印迹检测信号通路的改变。结果:4种浓度的吴茱萸碱在基础状态下并未影响心肌细胞活性(P>0.05);缺氧24 h后,心肌细胞活性显著降低,给予1,5,10 μmol·L-1 的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05),且其效果呈现剂量依耐性;细胞促炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF α)、白细胞介素 1(IL 1)和白细胞介素 6(IL 6)的转录明显增加,心肌细胞凋亡增多,吴茱萸碱可以增加缺氧损伤的细胞活性,减少细胞炎症因子的转录,减少细胞凋亡数量,给予1 μmol·L-1 和10 μmol·L-1 的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。免疫印迹结果显示,吴茱萸碱通过增加蛋白激酶B(AKT)和AMP依赖蛋白激酶α(AMPKα)的活性,抑制核因子 κB(NF κB)的活性发挥其心肌保护作用,给予1 μmol·L-1 和10 μmol·L-1 的吴茱萸与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:吴茱萸碱能保护心肌细胞缺血损伤,可能成为新的抗心肌缺血药物。  相似文献   

4.
摘 要 目的: 探讨联苯双酯(dimethyl dicarboxylate biphenyl,DDB)对大鼠肝星状细胞HSC-T6增殖和凋亡及过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma, PPARγ)表达的影响。方法: 接种HSC T6细胞于96孔板和6孔板中,分别用CCK 8法和流式细胞术测定不同浓度联苯双酯作用于细胞24 h后对细胞增殖和凋亡的影响;实时荧光定量PCR(Quantitative Real time PCR,Q-PCR)和Western blotting分别检测药物对HSC-T6细胞PPARγ mRNA和蛋白的表达的影响。结果: 相比于对照组(0 μmol·L-1),DDB在实验浓度(8~64 μmol·L-1)能明显抑制HSC T6的增殖(P<0.05),促进HSC T6的凋亡(P<0.05);药物处理过的HSC T6细胞PPARγ mRNA及其蛋白表达均有显著提高。结论:DDB可通过上调HSC T6细胞中PPARγ的表达抑制细胞的增殖,促进细胞的凋亡。  相似文献   

5.
摘 要 目的: 建立追风舒筋活血片中马钱子碱、士的宁的含量测定方法。方法: 应用高效液相色谱法测定,色谱柱为Agilent SB C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈 0.01 mol·L-1庚烷磺酸钠与0.02 mol·L-1磷酸二氢钾等量混合溶液(用10%磷酸调节pH至2.8)(21∶79)为流动相,检测波长为260 nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为35℃,进样量为10 μl。结果: 马钱子碱和士的宁的线性范围分别为0. 011 0~0.219 6 mg·ml-1 (r=0.999 4)、0.010 1~0.202 8 mg·ml-1 (r=0.999 7);平均加样回收率分别为98.24%(RSD=1.54%)、97.92%(RSD=1.49%)(n=6) 。结论:该方法简便易行、准确、重复性好,可用于追风舒筋活血片的质量控制。  相似文献   

6.
目的 比较4-[4″-(2″, 2″, 6″, 6″-四甲基-1″-哌啶氮氧自由基)氨基]-4′-去甲表鬼臼毒素(GP-7)对多药耐药人慢性粒细胞白血病K562的多柔比星耐药株细胞(K562/ADM细胞)的抑制作用是否优于依托泊苷。方法 以依托泊苷和K562细胞为对照,用不同浓度GP-7处理K562/ADM细胞不同时间,MTT比色法测定细胞增殖,流式细胞仪测定细胞周期和细胞凋亡率,普通光学显微镜观察细胞凋亡形态,琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA凋亡性降解。结果 8~128 mol·L-1 GP-7处理48 h或64 μmol·L-1 GP-7处理24~72 h,GP-7对K562/ADM细胞的增殖抑制呈剂量依赖性(r=0.947,P<0.05)和时间依赖性(r=0.999,P<0.01)。GP-7及依托泊苷对K562/ADM的IC50分别为(45.9±1.8)及(68.7±4.6)μmol·L-1;64 μmol·L-1 GP-7作用48 h可使G2/M期细胞明显增多,相同情况下依托泊苷则使S期细胞明显增多;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞凋亡,但其引起的K562/ADM和K562细胞凋亡率与依托泊苷无明显差异;GP-7可引起K562/ADM和K562细胞典型的凋亡形态学变化和DNA凋亡性降解,但GP-7引起的K562/ADM细胞DNA凋亡性降解弱于K562细胞;128及256 μmol·L-1 GP-7或依托泊苷处理K562/ADM和K562细胞48 h,GP-7诱导DNA凋亡性降解的作用强于依托泊苷,但32和64 μmol·L-1时作用则相反。结论 GP-7可抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的增殖,诱导细胞凋亡。GP-7抑制多药耐药白血病细胞株K562/ADM的作用优于依托泊苷。  相似文献   

7.
摘 要 目的:建立离子色谱法测定枸橼酸氢钾钠颗粒中钠、钾和枸橼酸含量的方法。方法: 钾和钠的色谱条件:采用Dionex IonPac CS12A色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为0.02 mol·L-1甲烷磺酸溶液,流速为1.0 ml·min-1,抑制器为CSRS 300,抑制电流为59 mA,采用抑制型电导检测器,进样量为25 μl。枸橼酸的色谱条件:采用Dionex HPICE AS1离子排斥色谱柱(250 mm×9.0 mm,7.5 μm),流动相为0.015 mol·L-1硫酸溶液,流速为0.6 ml·min-1,检测波长为220 nm,进样量为10 μl。结果: 钠的线性范围为0.82~82.49 μg·ml-1(r=0.999 9),平均回收率为98.9%,RSD为0.55% (n=9);钾的线性范围为1.38~137.89 μg·ml-1(r=1.000 0),平均回收率为100.5%,RSD为0.53%(n=9);枸橼酸的线性范围为0.021~10.600 mg·ml-1(r=1.000 0),平均回收率为99.1%,RSD为0.54%(n=9)。结论:本方法简便、快速、准确,可用于枸橼酸氢钾钠颗粒的质量控制。  相似文献   

8.
刘志辉 《中国药师》2015,(9):1516-1518
摘 要 目的: 用磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD)为手性选择剂,建立测定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及其右旋杂质的高效液相色谱法。方法: 采用Agilent Eclipse XDB C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm) , 流动相为含0.02 mol·L-1 SBE-β-CD的0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液-甲醇(60∶40), 流速0.8 ml·min-1, 检测波长360 nm, 柱温30℃ ,进样量10 μl。结果: 苯磺酸左旋氨氯地平在5.0~251.0 μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.999 7) , 平均回收率为100.31%(RSD=0.9%,n=9),检测限为16 ng,苯磺酸左旋氨氯地平与其右旋杂质分离度良好。结论: 本方法简便、快速、准确, 专属性好, 可用于测定苯磺酸左旋氨氯地平片的含量及其右旋杂质。  相似文献   

9.
摘 要 目的:探讨二氢杨梅素(DMY)对胶质瘤细胞株U87增殖、凋亡、自噬及磷脂酰肌醇 3激酶/丝 苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路的影响。 方法: 体外培养胶质瘤U87细胞,U87细胞分为4组:空白对照组、DMY低(25 μmol·L-1)、中(50 μmol·L-1)、高(100 μmol·L-1)剂量组。采用MTT法检测U87细胞增殖情况,Hoechst染色法检测U87细胞凋亡,透射电镜下观察自噬体形成,蛋白印迹(WB)法检测凋亡蛋白B细胞淋巴瘤 2(Bcl 2)及其相关蛋白(Bax)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(cleaved caspase 3)、自噬相关蛋白Beclin 1、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、P62及PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K及其磷酸化激酶(p PI3K)、Akt及其磷酸化蛋白(p Akt)表达。 结果: 与空白对照组相比,DMY处理后U87细胞存活率、P62、Bcl 2、p PI3K及p Akt蛋白表达量均显著降低(P<0.05),且高剂量组显著低于低、中剂量组(P<0.05);与空白对照组相比,DMY处理后U87细胞凋亡率、自噬体数量、自噬泡/胞质总面积、LC3 Ⅱ/LC3 Ⅰ比值、LC3 Ⅱ、Beclin 1、Bax及cleaved caspase 3蛋白表达量均显著升高(P<0.05),且高剂量组显著高于低、中剂量组(P<0.05)。 结论: 二氢杨梅素可有效抑制胶质瘤U87细胞增殖,并可诱导自噬发生促使细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。  相似文献   

10.
摘 要 目的:建立同时测定美辛唑酮红古豆醇酯栓中呋喃唑酮和吲哚美辛含量的高效液相色谱双波长分析方法。方法: 采用ZORBAX Extend C18 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈和0.035 mol·L-1的磷酸二氢钾水溶液(冰醋酸调节pH至3.0)为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 ml·min-1,检测波长分别为364 nm和318 nm,柱温30℃,进样量20 μl。结果: 在选定的色谱条件下,呋喃唑酮和吲哚美辛在0.005~0.05 mg·mL-1范围内线性关系良好,r=0.999 9,检测限分别为20 ng·mL-1和26 ng·mL-1,定量限分别为70 ng·mL-1和90 ng·mL-1,平均回收率分别为99.4%(RSD=0.6%,n=9)和99.4%(RSD=0.3%,n=9)。结论: 所建立的方法简便快速,专属性强,结果准确可靠,可用于美辛唑酮红古豆醇酯栓中呋喃唑酮及吲哚美辛的检测分析。  相似文献   

11.
摘 要 目的:对注射用达托霉素有关物质测定方法进行优化。 方法: 采用IB-SIL C-8(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以0.039 mol·L-1磷酸二氢铵(用1 mol·L-1磷酸溶液调节pH至3.25)-乙腈(80∶∶50)为流动相B;柱温:20℃;流速:1.5 ml·min-1;检测波长:214 nm。结果: 注射用达托霉素在0.39~77.25μg·mL-1线性范围内浓度与峰面积呈良好线性关系,r=1.000 0,最低检测限为2.4 ng,达托霉素与已知和未知杂质分离度良好。结论:本法可用于注射用达托霉素的有关物质的测定。  相似文献   

12.
摘 要 目的: 研究羽扇豆醇(Lupeol)在人高转移肝癌细胞系HCCLM3中的抗增殖作用机制。方法: 运用CCK 8法检测不同浓度Lupeol在12-48 h对HCCLM3细胞活力的影响及相关Caspase参与Lupeol(20~100 μmol·L-1)诱导的细胞凋亡类型;运用Realtime PCR评价Lupeol对细胞内Caspase家族及Bcl 2相关基因的mRNA表达的影响;同时运用流式细胞术检测Lupeol对细胞周期分布的影响。结果:Lupeol在24~48 h能够抑制HCCLM3的细胞增殖,并呈现浓度依赖性,在24 h处理细胞的IC50为93 μmol·L-1;运用60~100 μmol·L-1的Lupeol能够使HCCLM3细胞在G2/M期细胞数增加1倍;Lupeol能够活化Caspase通路,与对照组相比Lupeol处理后细胞内Caspase 3的mRNA表达量增加50%~150%,同时100 μmol·L-1的Lupeol处理细胞后使胞内p53及Bax的mRNA表达量分别上调1倍以上,并显著降低Bcl 2及PARP的mRNA水平(P<0.05或P<0.01)。结论: Lupeol具有抑制肝癌细胞增殖能力,对肝癌预防及治疗可能具有一定的协同作用。  相似文献   

13.
摘 要 目的:建立同时测定酮康他索乳膏中酮康唑和丙酸氯倍他索含量的方法。方法: 采用HPLC法,色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)柱,流动相为甲醇 0.05 mol·L-1醋酸钠溶液(用冰醋酸调pH至5.5),采用梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为239 nm,柱温为25℃,进样量为10 μl。结果:酮康唑和丙酸氯倍他索分别在160.30 ~1 282.40 μg· mL-1和4.03~32.24 μg· mL-1范围内呈良好的线性关系(r均为1.000 0)。平均回收率分别为100.9%(RSD=0.52%,n=9)和100.2%(RSD=0.56%,n=9)。结论:该方法专属性好、灵敏度高、定量准确,可用于酮康他索乳膏中酮康唑和丙酸氯倍他索的含量检测。  相似文献   

14.
摘 要 目的: 建立以HPLC荧光检测法测定人血浆中霉酚酸浓度的方法。 方法: 霉酚酸血浆样品经乙腈沉淀后取20 μl直接进样,色谱柱为Hypersil BDS C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm),流动相为乙腈-甲醇 0.2 mol·L-1磷酸氢二钾缓冲溶液(pH=9.0)(18∶2∶80),柱温25℃,流速为1.0 ml·min-1,激发波长(Ex)为342 nm,发射波长(Em)为425 nm。结果:血浆内源性杂质和合并用药对测定无干扰,霉酚酸检测浓度在0.25~50.00mg·L-1范围内线性关系良好(r=0.999 7),定量下限为0.25 mg·L-1;平均方法回收率为99.12%,平均提取回收率为93.27%;日内RSD小于2%,日间RSD小于6%。10例肾移植患者服用霉酚酸酯的剂量为0.5~1.75 g·d-1,血浆中霉酚酸浓度范围为0.43~21.58 mg·L-1。结论: 本法快速、灵敏、准确、方便,可用于体内霉酚酸血药浓度分析及常规血药浓度监测。~  相似文献   

15.
摘 要 目的:探讨甲基莲心碱对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护机制。方法: 通过预实验筛选出LPS最佳的诱导浓度;再采用最适浓度的LPS模拟人脐静脉内皮细胞炎性损伤模型,通过CCK8测定不同浓度的甲基莲心碱(0.3,1,3,5,10 μmol·L-1)对损伤细胞的凋亡率的影响;Griess Reagent法用于检测一氧化氮(NO)的含量; 比色法测定一氧化氮合酶( NOS)分型的活力;倒置显微镜观察细胞形态变化。结果: CCK8检测到LPS的浓度为100μg·mL-1时,细胞抑制率为54.50%,此时细胞的损伤适中,确定为诱导浓度(P<0.01)。在0.3~5.0 μmol·L-1内,不同浓度的甲基莲心碱能明显提高损伤后的HUVECs的细胞活性,但在10 μmol·L-1时,HUVECs细胞的增殖明显减少(P<0.05)。甲基莲心碱能显著性逆转LPS诱导的人脐血管内皮细胞中NO含量的增加和总NOS(tNOS)和iNOS的活性的升高(P<0.05)。倒置显微镜结果显示,甲基莲心碱在0.3~5.0 μmol·L-1的浓度范围内,随着浓度增加,漂浮的死细胞变少,细胞形态基本良好,细胞间排列紧密。结论:甲基莲心碱能够逆转LPS诱导的人脐静脉内皮细胞的损伤,其机制可能与调节内皮细胞中NO的释放和NOS的活力有关。  相似文献   

16.
摘 要 目的:建立HPLC法测定小儿咳喘灵口服液中防腐剂山梨酸钾的含量。方法: 采用Phenomenex Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以0.02 mol·L-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH至4.0) 乙腈(80∶20)为流动相,流速为1.0 ml·min-1,检测波长为262 nm,柱温为30℃,进样体积为20 μl。结果:山梨酸钾浓度在8.584~85.840 μg · mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为100.0%,RSD为0.47%(n=9),山梨酸钾检测限为0.43 ng,定量限为1.29 ng。结论:经过方法学验证,本法可用于小儿咳喘灵口服液中防腐剂山梨酸钾的含量测定。  相似文献   

17.
摘 要 目的: 建立高效液相色谱法同时测定复方盐酸二甲双胍/沙格列汀渗透泵控释片的含量。方法: 采用UltimateXB-CN色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为0.01 mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH=4.7) 乙腈(15∶85),检测波长为208 nm,流速为1.0 ml·min-1,柱温为30℃,进样量20 μl。结果: 盐酸二甲双胍和沙格列汀分别在50.0~150.0 μg·ml-1和0.5~1.5 μg·ml-1浓度范围内与峰面积线性关系良好(r = 0.999 9和r=0.999 1)。平均回收率分别为99.5%和100.3%,RSD分别为0.56%和1.20%(n =9)。结论:该法专属性强,结果准确可靠,可用于复方盐酸二甲双胍/沙格列汀渗透控释片的质量控制。  相似文献   

18.
摘 要 目的: 建立布洛芬混悬液中苯甲酸的HPLC检测方法。方法: 采用Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以0.05 mol·L-1磷酸二氢钾-乙腈(72∶28)为流动相,检测波长为235 nm,柱温为30℃,进样量为10 μl。结果: 苯甲酸检出限为3.57 ng,在12.5~200.0 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好(r=0.999 9),供试品溶液在24 h内稳定,平均回收率为98.42%,RSD为0.98%(n=9)。结论:该方法操作简便,重复性好,检测结果准确,能更好地检测布洛芬混悬液中防腐剂的含量。  相似文献   

19.
摘 要 目的: 建立高效液相色谱法测定醋甲唑胺片的含量和有关物质。方法: 色谱柱为Symmetry C18(150 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.1 mol·L-1醋酸钠(pH4.5)(20∶80);流速:1.0 ml·min-1;检测波长:252 nm;柱温:30℃;进样量:20 μl。结果: 醋甲唑胺浓度在10.0~80.0 μg·mL-1范围内峰面积值呈良好的线性关系(r=0.999 7),平均加样回收率为99.56%,RSD=0.95%(n=9)。测得3批样品杂质含量分别为0.25%,0.21%,0.23%。结论: 本法简便、准确,专属性好,精密度高,专属性好,可用于醋甲唑胺片的含量和有关物质测定。  相似文献   

20.
摘 要 目的:探究多巴胺(DA)通过下调X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)对胶质瘤U251细胞凋亡的影响。 方法: DA处理胶质瘤U251细胞,Cell Counting Kit 8(CCK 8)法检测细胞增殖情况;线粒体膜电位(MMP)检测细胞凋亡情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;实时荧光定量多聚酶链式反应(qRT PCR)和蛋白免疫印迹检测XIAP、B淋巴细胞瘤 2基因(BCL2)、Bcl 2相关X蛋白(BAX)、生存素(survivin)、活化的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cleaved caspase3)表达情况。 结果: 与U251组相比,U251+100 μmol·L-1DA组、U251+50 μmol·L-1DA组、U251+100 μmol·L-1DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05),红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均降低(P<0.05)。与U251+25 μmol·L-1DA组相比,U251+50 μmol·L-1DA组、U251+100 μmol·L-1DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05),红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均降低(P<0.05)。与U251+50 μmol·L-1DA组相比, U251+100 μmol·L-1 DA组的细胞增殖抑制率、凋亡率、BAX、cleaved caspase3 mRNA和蛋白表达量均显著升高(P<0.05),红绿荧光相对比例、XIAP、BCL2、survivin mRNA和蛋白表达量、BCL2/BAX比值均显著降低(P<0.05)。 结论: DA可能通过下调XIAP表达,从而促进胶质瘤U251细胞凋亡。  相似文献   

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