山奈酚对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制及诱导凋亡作用

目的:探讨山奈酚(kaempferol)对人胃癌MGC-803细胞的生长抑制作用,以及诱导细胞凋亡和对细胞周期的影响. 方法:采用MTT法检测细胞存活率;DAPI染色法观察细胞的凋亡形态;彗星电泳技术和FCM检测不同浓度山奈酚对细胞中DNA的影响. 结果:山奈酚体外能明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖.用不同浓度(6.25、12.5、25、50和100 μmol/L)的山奈酚处理MGC-803细胞72 h后,细胞的生长抑制率分别为10.32%、13.95%、21.58%、35.18% 和58.13%,各药物处理组与对照组比较,P值均<0.01,呈剂量效应关系.50和100 μmol/L山奈酚分别作用细胞24、48、72和96 h后,结果显示药物作用的时间越长,对细胞的抑制作用越强,呈时间效应关系.DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征.30、60和120 μmol/L山奈酚作用于细胞72 h后,彗星电泳检测结果显示细胞后面均呈现拖尾现象,细胞头部平均光密度值较阴性对照组降低,彗星尾距较阴性对照组增加,各药物组与对照组比较,P值均<0.01,且与药物浓度呈相关性.FCM检测结果显示,浓度为30、60和120 μmol/L的山奈酚作用于细胞72 h后,出现亚二倍体凋亡峰,细胞周期被阻滞于S期和G2/M期,各药物组凋亡率较阴性对照组均明显升高. 结论:山奈酚能抑制人胃癌细胞MGC-803的增殖并诱导其凋亡.     

单克隆抗体PD4诱导人胃癌细胞系MGC-803的凋亡

目的凋亡（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）是一种区别于坏死的细胞生理性死亡方式。肿瘤发生与凋亡的异常有十分密切的关系。单克隆抗体ＰＤ４能识别胃癌细胞表面的分子量为４００００的分子（Ｐ４０）。本研究是为了观察单抗ＰＤ４是否具有诱导胃癌细胞凋亡的作用。方法我们应用流式细胞术和末端脱氧核苷酸标记及ＤＮＡ电泳法观察单抗ＰＤ４对胃癌细胞ＭＧＣ－８０３增殖周期的影响以及对细胞杀伤作用的方式,并检测了ＭＧＣ－８０３细胞表面Ｆａｓ抗原的表达情况。结果ＰＤ４有阻滞细胞周期、通过诱发凋亡而抑制肿瘤细胞生长的作用,且ＭＧＣ－８０３细胞Ｆａｓ抗原表达为阴性。结论Ｐ４０是一个与细胞凋亡或增殖有关、且不同于Ｆａｓ的肿瘤相关抗原,他的分子克隆有助于抗体诱导细胞凋亡机制的阐明。     

维甲酸对胃癌细胞生长抑制及凋亡的诱导作用

目的:研究9-顺-维甲酸(9-cis-RA)对人胃低分化黏液腺癌细胞(MGC80-3)的作用。方法:MTT比色法观察9-cis-RA对MGC80-3细胞株的生长抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,Hoechst33342/PI双荧光染色和DNA凝胶电泳技术分析细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期的改变。结果:9-cis-RA可抑制MGC80-3细胞生长,半数抑制浓度(IC50)为8·07×10-6mol/L;显微镜观察可见细胞凋亡特征性改变;10-5mol/L浓度的9-cis-RA药物作用后96h可明显诱导MGC80-3细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳检测到DNA梯带;流式细胞仪检测肿瘤细胞出现典型亚二倍体凋亡小峰,G0/G1期细胞百分率明显升高,由对照组的(61·5±2·2)%增加到(74·3±4·7)%,F=149·795,P=0·000;同时处于S期的细胞数减少,由对照组的(26·3±1·3)%减少到(17·2±1·4)%,F=143·936,P=0·000。细胞周期出现G1期阻滞。结论:9-cis-RA对MGC80-3细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用。     

高浓度芦荟大黄素诱导胃癌细胞凋亡的作用

目的:观察芦荟大黄素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡作用.方法:用50、100、500和1 000 mmol/L浓度芦荟大黄素作用胃癌细胞株48 h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;1 000 mmol/L浓度芦荟大黄素对正常雪旺细胞的作用;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡.结果:倒置显微镜下,随着芦荟大黄素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;高浓度的芦荟大黄素对雪旺细胞的增殖没有影响;当芦荟大黄素作用浓度是1 000 mmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞.结论:高浓度的芦荟大黄素可诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡,对正常雪旺细胞的增殖没有影响.     

CIK细胞对 MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(CYtokine-induced kill cells,CIK)对MGC-803胃癌细胞株的诱导凋亡作用,并探讨其作用机制.方法应用(TdT-mediated dUTP nick end labeling)TUNEL法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫细胞化学法测定Bcl-2、Bax的阳性表达率,深入研究CIK细胞对MGC-803胃癌细胞株凋亡相关基因蛋白表达的影响.结果TUNEL法检测对照组成不染或均匀淡蓝色,实验组凋亡细胞缩小,核或核周成深蓝色.CIK实验组5～14小时凋亡率上调,14～24小时凋亡率下降.CIK实验组凋亡率与对照组相比有显著性差异(P＜0.01).免疫细胞化学结果表明:Bcl-2蛋白随作用时间延长表达均下降,Bax蛋白表达上调,与对照组相比均有显著性差异(P＜0.01).结论CIK细胞对MGC-803胃癌细胞早期诱导凋亡,晚期诱导肿瘤细胞坏死.其作用机制之一可能是通过上调Bax,下调Bcl-2的蛋白表达实现的.     

罗格列酮诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及其对bax和Bcl-2表达的影响

目的:探讨罗格列酮对人胃癌MGC803细胞凋亡的影响及其分子机制。方法:吖啶橙(AO)荧光染色和流式细胞仪分析检测细胞凋亡。同时行bax和bcl-2细胞免疫化学染色和定量分析。结果:罗格列酮能诱导MGC803细胞凋亡,且随着浓度增加,其凋亡率逐渐增加。罗格列酮(25μmol/L、50μmol/L)作用于人胃癌MGC803细胞48h后bax表达的光密度值由0·10±0·02分别升至0·42±0·03、0·75±0·04,P=0·000;bcl-2表达的光密度值由0·51±0·02分别降至0·25±0·04、0·12±0·01,P=0·001。结论:罗格列酮能诱导人胃癌MGC803凋亡,其机制可能与bax基因表达上调、bcl-2基因表达下调有关。     

细胞外信号调节激酶1/2参与三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞凋亡

目的:探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)信号通路在三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞U251凋亡中的作用,为应用三氧化二砷治疗胶质瘤奠定基础。方法:50μmol/L三氧化二砷作用U251细胞,不同时间检测胶质瘤细胞增殖活性,半定量PCR检测ERK1/2mRNA表达,Western blot检测ERK1/2蛋白表达;Ho-echst33258染色及流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡;转染ERK1/2上游激酶MEK1,应用ERK1/2激酶抑制剂U0126观察ERK1/2通路在肿瘤凋亡及增殖中的作用;比色分析法检测Caspase-3活性的变化。结果:三氧化二砷诱导胶质瘤细胞发生明显凋亡,抑制肿瘤细胞增殖;增加ERK1/2蛋白的表达,呈时间依赖性;阻断ERK1/2信号通路后胶质瘤细胞凋亡受到抑制,Caspase-3活性下降。结论:ERK1/2信号通路在三氧化二砷诱导的胶质瘤细胞凋亡中起重要作用。     

蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡机制的探讨

目的:探讨p38MAPK信号转导通路参与蛋白酶体抑制剂诱导甲状腺癌细胞凋亡的作用机制。方法:选取甲状腺癌细胞系,利用丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的三种抑制剂抑制磷酸化途径,利用微小RNA干扰技术转染细胞,封闭p38MAPK。用蛋白质印迹法检测红系衍生的核因子2相关因子2(Nrf2)及p38MAPK的表达,实时定量PCR检测细胞内GCLC mRNA的表达,测定还原型谷胱甘肽的含量,流式细胞仪法检测甲状腺癌细胞凋亡率。结果:在甲状腺癌细胞系8305C细胞中,与对照组相比,p38MAPK的抑制剂SB203580和sip38MAPK均能够抑制蛋白酶体抑制剂诱导的Nrf2细胞核易位(P<0.01),并使随后的GCLC mRNA表达减少、GSH含量减少(P<0.01),显著提高蛋白酶体抑制剂诱导的甲状腺癌细胞凋亡率(P<0.01),而其他2种抑制剂和随机序列核酸siRNA无上述作用。结论:蛋白酶体抑制剂通过p38MAPK途径激活Nrf2的细胞核易位,进而导致GCLC的诱导作用和谷胱甘肽生成的连锁反应,成为蛋白酶体抑制剂在甲状腺癌细胞中的一种抗凋亡机制。     

二烯丙基三硫通过Caspase-3途径诱导人胃癌MGC803细胞凋亡

背景与目的:大蒜及其烯丙基硫化物具有抗肿瘤作用,但其具体的作用机制尚不十分清楚。本研究探讨二烯丙基三硫(diallyltrisulfide,DATS)诱导人胃癌MGC803细胞凋亡及凋亡过程中Caspase-3的变化及其意义。方法:采用荧光显微镜和电子显微镜观察以及流式细胞术和Westernblot检测等方法,观察DATS诱导MGC803细胞凋亡的作用及对活化的Caspase-3的影响。结果:在荧光显微镜及电子显微镜下,DATS作用的胃癌细胞出现了典型的凋亡形态学改变;流式细胞术检测出现明显的亚G1峰;12mg/L的DATS处理MGC803细胞0、4、8、12、24h后,活化的Caspase-3的表达率分别为1.9%、3.0%、7.3%、14.4%、27.6%,提示DATS呈时间依赖性促进活化的Caspase-3的表达;用特异的Caspase-3抑制剂预处理细胞后,再用12mg/LDATS处理细胞24h,与单用DATS组相比,凋亡率从23.0%降低到5.1%(P<0.01),提示Caspase-3的抑制剂能抑制DATS诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。Westernblot显示酶原形式的Caspase-3被水解活化。结论:DATS诱导人胃癌MGC803细胞凋亡可能与活化Caspase-3有关。     

哈萨克族食管癌患者组织中细胞外信号调节激酶/丝裂原活化蛋白激酶信号通路的表达

目的 探讨细胞外信号调节激酶(ERK)/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在哈萨克族食管鳞癌患者组织中的表达变化及意义.方法 采用Western blot技术检测在血清饥饿条件下、U0126梯度浓度处理下,食管癌细胞系EC9706中磷酸化ERK1(p-ERK1)和磷酸化ERK2(p-ERK2)的表达变化.采用实时荧光定量PCR法检测25例哈萨克族食管癌患者肿瘤组织和癌旁正常组织中总ERK1(t-ERK1)和总ERK2(t-ERK2)mRNA的表达变化.采用Western blot技术检测25例哈萨克族食管癌患者肿瘤组织、癌旁正常组织以及5例哈萨克族非食管癌者正常食管组织中t-ERK1、t-ERK2、p-ERK1和p-ERK2蛋白的表达变化.采用免疫组化染色法,在126例石蜡包埋标本(正常食管黏膜19例,食管原位癌55例,食管浸润癌52例)中验证p-ERK1和p-ERK2蛋白的表达变化.结果 在食管癌EC9706细胞中,ERK/MAPK信号通路呈高度活化状态.血清瞬时刺激10 min后,p-ERK1和p-ERK2的表达达到峰值.EC9706细胞在50 μmol/L的U0126处理下,p-ERK1和p-ERK2的表达几乎完全被抑制.t-ERK1 mRNA在25例哈萨克族食管癌患者肿瘤组织中的表达量为1.92±3.49,明显低于癌旁组织(3.67±7.47,P<0.05);t-ERK2 mRNA在食管癌组织和癌旁组织中的表达量差异无统计学意义(P>0.05).t-ERK1和t-ERK2蛋白在食管癌组织、相应癌旁组织和正常食管黏膜组织中的表达差异无统计学意义(P>0.05);但p-ERK1和p-ERK2蛋白在食管癌组织中的表达量(分别为0.87±0.14和0.79±0.10)均明显低于癌旁组织(分别为1.10±0.13和1.32±0.12,P<0.05)和正常食管黏膜组织(分别为1.50±0.22和1.64±0.18,P<0.05).免疫组化染色验证的结果 显示,p-ERK1和p-ERK2蛋白在浸润性食管癌组织中的阳性表达率均为7.7%(4/52),在癌旁正常食管黏膜组织中的阳性表达率均为31.6%(6/19),在食管原位癌组织中的阳性表达率均为85.5%(47/55),不同组织间的表达差异有统计学意义(P<0.05).结论 在食管癌细胞中,ERK/MAPK信号通路呈活化状态.ERK/MAPK信号通路活化水平的改变可能参与了哈萨克族食管癌患者肿瘤的早期发生.

Abstract：

Objective To investigate the expression variation and significance of ERK1/2 MAPK signaling transduction pathway in the pathogenesis of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) in Kazakh patients. Methods The expression level of p-ERK1/2 after serum starvation and treatment with U0126 inhibitor was detected in esophageal cancer cell line EC9706 by Western blot assay. The mRNA level of total ERK1/2 (t-ERK1/2) and expression level of t-ERK1/2 and p-ERK1/2 proteins of 25 pairs of ESCC and adjacent normal esophageal mucosal tissues of Kazakh patients were examined and identified by real-time quantitative PCR (qRT-PCR) and Western blotting, respectively. The expression of p-ERK1/2 protein was verified by immunohistochemistry in 126 paraffin-embeded specimens, including 19 normal esophageal mucosa, 55 esophageal carcinomas in situ and 52 invasive carcinomas. Results ERK1/2 MAPK signaling transduction pathway was in an active status in the EC9706 cells. The expression level of p-ERK1/2 in Ec9706 cells reached a peak at 10 min after transient serum stimulation, and p-ERK1/2 expression was totally restrained after the treatment with 50 μmol/L U0126. In the 25 pairs of ESCC and adjacent normal mucosa, the t-ERK1 mRNA level was 1.92±3.49 in the ESCC tissues and 3.67±7.47 in the adjacent normal mucosa. The t-ERK1 mRNA level in ESCC tissues was significantly lower than that in adjacent normal mucosa (P<0.05), whereas there was no significant difference of t-ERK2 mRNA level between them(P>0.05). The expression levels of p-ERK1 and p-ERK2 proteins were 0.87±0.14 and 0.79±0.10 in the ESCC tissues, and 1.10±0.13 and 1.32±0.12 in the adjacent normal mucosae. p-ERK1/2 protein in the ESCC tissues was significantly lower than that in the adjacent normal tissue (P<0.01). However, there was no significant difference between their t-ERK1/2 protein levels (P>0.05). In the 126 cases of paraffin-embeded specimens, positive expressions of both p-ERK1 and p-ERK2 in esophageal cancer tissues were 7.7% (4/52), significantly lower than those in adjacent normal mucosa (31.6%, 6/19) and carcinoma in situ (85.5%, 47/55, P<0.05). Conclusions ERK1/2 MAPK signaling pathway is in an active status in esophageal cancer and adjacent normal mucosa. Our results imply that the activation of p-ERK1/2 MAPK signaling transduction pathway plays a role in the early pathogenesis of ESCC in Kazakh patients.     

盐酸罗哌卡因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨盐酸罗哌卡因对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞计数试剂盒（CCK-8）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞增殖能力的影响,并确定盐酸罗哌卡因的用药浓度,流式细胞术检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI法检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果:随着盐酸罗哌卡因用药浓度的升高,MGC-803细胞增殖能力逐渐降低,根据CCK-8实验结果分别筛选出浓度为10、50 μg/ml和100 μg/ml的盐酸罗哌卡因用于后续实验。盐酸罗哌卡因能够明显阻滞细胞周期于G2期,诱导细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:盐酸罗哌卡因能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖,阻碍MGC-803细胞周期进程,诱导细胞凋亡,该过程可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

百里醌对犕犌犆-803细胞增殖和凋亡影响机制探讨

目的：百里醌（thymoquinone,TQ）是具多种生物活性的天然生物单体,参与多种肿瘤细胞增殖、凋亡及转移过程。MGC-803细胞株为常见的低分化胃黏液腺癌细胞。本研究探讨 TQ 对胃癌 MGC-803细胞增殖和凋亡的影响及其可能的信号通路。方法以终浓度分别为0、10、25、50、75、100和125μmol／L TQ 处理 MGC-803细胞12、24和36 h, MTT 法检测其对增殖的影响,Hoechst 染色观察细胞凋亡,蛋白质印迹法分析 Bax、Bcl-2、survivin、Cyclin D1、caspase-3、caspase-9、PTEN、AKT、P-AKT、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶（poly ADP-ribose polymerase,PARP）、cleaved caspase-3及cleaved caspase-9的表达,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡。结果 MTT 结果显示,10～125μmol／L TQ 抑制胃癌MGC-803细胞,呈现明显的剂量-时间依赖性。流式结果显示,0、25、50和75μmol／L TQ 作用 MGC-803细胞24 h,凋亡率分别为（1．59±1．04）％、（4．26±0．35）％、（8．37±0．67）％和（21．73±1．71）％,F ＝209．76,P ＜0．001;G2／M 期细胞分别为（4．18±1．09）％、（6．81±0．28）％、（8．68±0．15）％和（12．26±1．46）％,F＝80．388,P ＜0．001。蛋白质印迹结果显示,PTEN 信号通路相关蛋白 PTEN 及凋亡相关蛋白 Bax、cleaved caspase-3及 cleaved caspase-9表达上调,抑凋亡相关蛋白 Bcl-2、caspase-3、caspase-9、survivin 和 PARP 表达下降。结论PTEN 信号通路参与 TQ 抑制胃癌 MGC-803细胞增殖、诱导其凋亡的过程。     

三氧化二砷诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的线粒体机制

目的探讨三氧化二砷(As2O3)诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡效应及其对线粒体膜电位的影响。方法比色法观察As2O3对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响;AnnexinⅤ荧光探针和流式细胞仪检测早期凋亡细胞;罗丹明123(Rhodamine123)荧光探针染色后,荧光显微镜下观察活细胞线粒体改变,并经流式细胞仪分析线粒体膜电位变化。结果As2O3明显抑制SK-N-SH细胞的增殖;As2O3诱导SK-N-SH细胞早期凋亡时线粒体膜电位降低。结论降低线粒体膜电位可能是As2O3诱导神经母细胞瘤细胞凋亡的机制之一。     

siRNA干扰TWSG1 基因表达对胃癌MGC-803 细胞增殖及凋亡的影响

[摘要] 目的：探讨扭转原肠胚形成同系物1 基因（twisted gastrulation protein homolog 1,TWSG1）对胃癌MGC-803 细胞增殖及凋亡的影响。方法：设计3 条TWSG1 基因相关的siRNA,将对数生长期MGC-803 细胞分为空白对照组、阴性对照组、siRNA1干扰组、siRNA2 干扰组和siRNA3 干扰组,待细胞汇合率达70%～80%时分别转染空载体、连接siRNA1、siRNA2 和siRNA3 的载体。采用qPCR 和Western blotting 检测各组细胞TWSG1 mRNA和TWSG1 蛋白的表达水平,筛选干扰效率最高的稳定细胞株。用CCK-8 法检测各组细胞的增殖情况,用流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。结果：各转染组细胞中siRNA1 干扰效率最高。与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA干扰组细胞TWSG1 表达下调（P<0.05）,其细胞增殖显著增加（P<0.05）,凋亡显著减少（P<0.05）。结论：siRNA干扰MGC-803 细胞中TWSG1基因的表达后,可促进细胞增殖、抑制细胞凋亡。     

蟾蜍灵对胃癌组织MGC-803细胞周期作用机制的研究

目的探讨蟾蜍灵对胃癌MGC803细胞周期及周期蛋白的影响。方法采用台盼蓝拒染法测定细胞增殖活力;瑞士姬姆萨染色观察细胞形态学的变化;流式细胞仪检测细胞周期;免疫组织化学方法检测细胞周期相关蛋白p16、p21、pRb的表达。结果1)蟾蜍灵抑制胃癌MGC803细胞的增殖,24、48、72h的IC50分别为0.086、0.048和0.036μmol/L。2)蟾蜍灵在0.01～0.1μmol/L时作用24～72h,形态学上可见细胞体积增大,出现双核、多核细胞。3)流式细胞仪显示蟾蜍灵浓度为0.01～0.1μmol/L时可明显诱导细胞周期G2/M期阻滞。4)蟾蜍灵作用于胃癌MGC803细胞,观察到p16、p21、pRb蛋白的表达明显上调。结论蟾蜍灵引起胃癌MGC803细胞的周期阻滞可能与p16、p21、pRb蛋白的上调有关。     

熊果酸对胃癌细胞株MGC-803 凋亡和自噬的调控及其作用机制

[摘要] 目的:观察熊果酸(UA)对胃癌细胞株MGC-803 自噬和凋亡的调控作用,并探讨UA基于PI3K/AKT/mTOR信号通路诱发MGC-803 细胞自噬的机制。方法:体外培养人胃癌细胞株MGC-803,分为空白对照组、UA干预组和UA+3-MA组。采用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平,双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染细胞法检测各组细胞自噬发生情况,qPCR实验检测各组细胞LC3B、BAX、Bcl-2 mRNA的表达水平,WB实验检测各组细胞Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR、ULK1、LC3B、BAX、Bcl-2 蛋白的表达水平。结果: 与空白对照组相比,UA干预组细胞凋亡率显著增加（P<0.05）;与UA干预组相比,UA+3-MA组细胞凋亡率显著降低（P<0.05）。双荧光mRFP-eGFP-LC3 质粒转染法显示,与空白对照组相比,UA 干预组绿色和红色荧光亮点数均显著增加（P<0.05）;与UA干预组相比,UA+3-MA组绿色和红色荧光亮点数均显著减少（P<0.05）。qPCR和WB实验结果显示,与空白对照组相比,UA干预组BAX和LC3B mRNA和蛋白以及ULK1 蛋白表达水平均显著上调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平以及Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平均显著下调（均P<0.05）;与UA干预组相比,UA+3-MA组BAX、LC3B mRNA和蛋白表达水平显著下调,Bcl-2 基因和蛋白表达水平显著上调（均P<0.05）,Ⅰ型PI3K、p-AKT、p-mTOR 和ULK1 蛋白表达水平无显著差异（P>0.05）。结论: UA诱导的自噬可以促进胃癌细胞MGC-803 的凋亡,其机制可能与UA参与调控PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白表达有关。     

Cx26基因修饰对人胃癌MGC-803细胞增殖和迁移能力的影响

目的 探讨Cx26基因对人胃癌MGC-803细胞的生长、细胞周期及迁移的影响.方法 将重组表达质粒pBudCE4.1-Cx26转染至人胃癌MGC-803细胞(转染组),另设空白组(未经任何特殊处理)和对照组(空载质粒组).收集40例胃癌组织及对应癌旁正常组织.通过RT-PCR和Western blot法测定细胞及组织中的Cx26 mRNA及蛋白表达水平.划痕染料示踪法检测细胞间通讯功能.采用MTF比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、caspase 3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果 Cx26基因mRNA和蛋白在人胃癌组织中的表达量低于癌旁组织,差异均具有统计学意义(均P＜0.05).Cx26基因修饰人胃癌MGC-803细胞后,转染组与对照组和空白组比较,Cx26 mRNA和蛋白表达升高(均P＜0.05),细胞传递的荧光强度亦升高(P＜0.01).转染后48 h、72 h细胞增殖均受到抑制(均P＜0.01).转染24 h后,转染组MGC-803细胞穿膜数低于对照组和空白组(均P＜0.01),细胞凋亡相关蛋白Bax和caspase 3表达均增加(均P＜0.01),Bel-2表达各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).转染后48 h,转染组MGC-803细胞被阻滞在G2期(P＜0.01).结论 转染Cx26基因对人胃癌MGC-803细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G2期.     

三氧化二砷对膀胱癌细胞耐药性的影响

目的探讨三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3）对膀胱癌细胞株BIU-87耐药性的影响。方法用As2O3与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87后,用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和生存素（survivin）表达的变化。结果三氧化二砷与羟基喜树碱联合处理耐药膀胱移行细胞癌株BIU-87细胞后,细胞生长受到明显的抑制s,urvivin表达明显减少,凋亡细胞百分比较对照组明显增多,且均具有浓度依赖性。结论 As2O3可增强化疗药物作用,部分逆转膀胱癌的耐药性,并促进凋亡,且呈现浓度依赖性。     

蜂胶黄酮PB3A对大肠癌细胞SW480中RGS2和GEM基因表达水平的影响

目的 研究蜂胶黄酮(pinobanksin-3-acetate,PB3A)对体外培养的大肠癌SW480细胞中G蛋白信号转导调节因子2 (regulator of G-protein signaling 2,RGS2)和GTP结合丝裂原诱导蛋白(GTP binding protein overexpressed in skeletal muscle,GEM)基因转录和蛋白质表达水平的影响,探讨PB3A的抗肿瘤作用机制及其相关信号通路.方法 通过实时荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法检测100 mg/L PB3A作用下人大肠癌细胞SW480中RGS2和GEM基因的转录和表达情况.结果 100 mg/L PB3A药物的干预诱导SW480细胞出现悬浮的细胞碎片、细胞体缩小、变圆、皱缩.药物干预之后,SW480细胞中RGS2和GEM基因在mRNA和蛋白水平上调表达.实验组与对照组比较,RGS2和GEM基因的mRNA转录水平差异有统计学意义(P＜0.01),蛋白质表达水平差异有统计学意义(P＜0.05).根据RT-PCR检测结果,利用Spearman相关性分析检测出RGS2和GEM高度正相关(r=0.929,P＜0.01).结论 PB3A干预大肠癌SW480细胞后使RGS2和GEM基因在转录和翻译水平上上调表达.PB3A的抗大肠癌作用机制可能与RGS2和GEM基因的上调表达有关.     

肿瘤相关巨噬细胞对胃癌MGC-803 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）对胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养人单核细胞株THP-1，加入佛波酯（PMA）和IL-4 后，用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12、IL-10 的水平。取对数生长期MGC-803 细胞和M2 型TAM，根据培养方式不同分为单独细胞培养组、非接触共培养组和接触共培养组，用MTT法、Transwell小室法分别检测MGC-803 细胞的增殖、迁移和侵袭能力，用AnnexinV-FITC/PI 双染流式细胞术检测MGC-803 细胞的凋亡和细胞周期变化，用qPCR、Western blotting 分别检测MGC-803 细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与PMA组相比，PMA+IL-4 组细胞上清液中IL-12 水平显著降低、IL-10 水平显著升高（均P<0.05），成功将THP-1细胞诱导分化为M2型TAM。与单独细胞培养组相比，非接触共培养组、接触共培养组（: 1）MGC-803细胞的增殖率显著升高（均P<0.05）；（2）细胞的迁移、侵袭数量升高（均P<0.05）；（3）细胞凋亡率显著降低（均P<0.05）；（4）S、G2 期细胞的数量升高、G1 期数量降低（均P<0.05）；（5）细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（均P<0.05）。结论：TAM可促进胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移和侵袭，解除细胞G1期阻滞，减少细胞凋亡，其机制可能与上调胃癌细胞MMP-9、MMP-2表达有关。