TGF-β1对大鼠角膜移植后免疫排斥和白介素的影响

目的 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对IL-1,2,6,8表达的影响及TGF-β1的免疫抑制作用.方法 采用建立大鼠穿透性角膜移植模型,分为实验组(同种异体角膜移植,使用TGF-β1眼液),实验对照组(同种异体角膜移植,使用氯霉素眼液)及空白对照组(自体角膜移植,使用氯霉素眼液)3组,分不同时间点用免疫组化法、ELISA法及RT-PCR法检测角膜植片中TGF-β1、IL-1β及IL-2mRNA的含量变化,以及大鼠外周血中IL-6,IL-8含量的变化,并进行显微镜观察,根据角膜移植植片水肿,混浊,新生血管3项指标进行排斥指数评分(RI).结果 实验组大鼠植片存活时间较实验对照组明显延长(19.3±1.4)dvs(13.7±2.6)d,P＜0.01;实验组各个时间点IL-1β,IL-6,IL-8及IL-2mRNA的表达较实验对照组均有明显降低(P＜0.01).结论 TGF-β1对大鼠穿透性移植术后的免疫排斥反应有明显抑制作用,并能下调植片中多种白介素的表达.     

TGF-β1对大鼠角膜移植后免疫排斥和IL-2的影响

目的:探讨IL-2在角膜移植免疫排斥反应过程中表达的动态变化规律,转化生长因子β1(TGF-β1)对IL-2表达的影响及TGF-β1的免疫抑制作用。方法:建立大鼠穿透性角膜移植模型,分为实验组(同种异体角膜移植,使用TGF-β1眼液),实验对照组(同种异体角膜移植,使用氯霉素眼液)及空白对照组(自体角膜移植,使用氯霉素眼液)3组,分不同时间点用RT-PCR法检测角膜植片中IL-2 mRNA的含量变化,并进行显微镜观察,根据角膜移植植片水肿,混浊,新生血管3项指标进行排斥指数评分(RI)。结果:实验组大鼠植片存活时间较实验对照组明显延长(19.3±1.4dvs13.7±2.6d,P<0.01);实验组各个时间点IL-2 mRNA的含量较实验对照组均有明显降低(P<0.01)。结论:TGF-β1对大鼠穿透性移植术后的免疫排斥反应有明显抑制作用,并能下调植片中IL-2的表达。     

TGF-β1对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中植片IL-10表达的影响

目的 研究重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associated virus mediated transforming growth factor-β1,rAAV-TGF-β1)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用以及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达的影响.方法 构建rAAV-TGF-β1真核表达质粒载体.40只角膜新生血管化的SD大鼠行穿透性角膜移植术.实验组(20只):角膜植片预浸泡在rAAV-TGF-β1(10×1012v.g·L-1)的达尔伯克必需基本培养液F12混合培养液中37℃孵育30 min;对照组(20只):角膜植片预浸泡在0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲液中37 ℃孵育30 min.裂隙灯观察TGF-β1对大鼠角膜植片存活时间、排斥反应指数的影响.术后第1周、第2周、第4周、第2个月对角膜植片行组织病理学检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IL-10的表达.结果 对照组角膜植片平均存活时间为(10.40±2.45)d,实验组为(18.70±1.51)d,比对照组显著延长,差异具有显著统计学意义(P＜0.01);术后第2周实验组角膜植片排斥反应指数(3.48±0.86)明显低于对照组(7.65±0.42),差异具有显著统计学意义(P＜0.01).IL-10在术后主要表达于角膜的上皮层与内皮层.术后各时期实验组IL-10的表达明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,其机制与提高角膜组织中IL-10的表达有关.重组腺相关病毒是眼科基因治疗的有效载体.     

TGF-β1对大鼠高危角膜移植排斥反应及超微结构的影响

目的 探讨重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associated virus mediated transforming growth factor-β1,rAAV-TGF-β1)抑制大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应的作用及对植片超微结构的影响.方法 构建rAAV-TGF-β1真核表达质粒栽体.碱烧伤的方法建立角膜新生血管化动物模型,52只角膜新生血管化的SD大鼠接受穿透性角膜移植手术,分为2组,实验组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在含rAAV-TGF-β1(10 × 1012v.g.·L-1)的DMEM/F12培养液中,37℃孵育30 min,移植到SD大鼠角膜植床上;对照组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在DMEM/F12培养液中,37℃孵育30 min,移植到SD大鼠角膜植床上.术后裂隙灯显微镜观察植片排斥情况,比较2组角膜植片的平均存活时间和各时间点排斥反应指数.术后9 d、14 d角膜植片行超微结构检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IFN-γ、TGF-β1的表达.结果 对照组角膜植片平均存活时间为(10.75±1.91)d,实验组为(22.85±3.48)d,2组比较差异有显著统计学意义(P＜0.01);实验组术后各时间点角膜植片排斥反应指数均明显低于对照组,差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01).术后9 d、14 d角膜植片超微结构检查显示,实验组角膜植片基质层成纤维细胞凋亡与坏死明显减轻;免疫组织化学分析显示,实验组植片内IFN-γ表达低于对照组,TGF-β1表达高于时照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,改变植片的超微结构.     

IL-12及Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用

目的探讨白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)、Th1/Th2细胞因子在IL-10修饰的树突状细胞(dendriticcell,DC)诱导大鼠角膜移植免疫耐受中的作用。方法将雄性SD受体大鼠随机分为3组,每组14只,分别为对照组(术前3d尾静脉注射PBS0.1mL)、6-DC组(术前3d尾静脉注射第6天的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)及IL-10-DC组(术前3d尾静脉注射IL-10修饰的imDC,每只鼠0.1mL共2×106个细胞)。以雌性Wistar大鼠为供体建立穿透性角膜移植模型。术后对受体大鼠角膜植片进行临床观察,记录角膜植片存活时间;移植术后第14天检测术眼角膜中细胞因子IL-12、Th1细胞因子IL-2、IFN-γ及Th2细胞因子IL-4、IL-10mRNA的表达。结果对照组、6-DC组及IL-10-DC组角膜植片的存活时间分别为(10.63±2.00)d、(18.88±1.36)d及(24.50±2.07)d。6-DC组、IL-10-DC组与对照组比较,角膜植片存活时间明显延长(均为P<0.01);IL-10-DC组角膜植片存活时间显著长于6-DC组(P<0.01)。术后第14天,对照组角膜组织IL-12(0.80±0.00)及Th1细胞因子IL-2(1.03±0.06)、IFN-γ(0.97±0.03)的mRNA表达水平最高,而Th2细胞因子IL-4(0.13±0.00)、IL-10(0.34±0.02)的mRNA表达最低;IL-10-DC组IL-12(0.39±0.01)及Th1细胞因子IL-2(0.61±0.01)、IFN-γ(0.43±0.02)的mRNA表达水平最低,Th2细胞因子IL-4(0.19±0.00)、IL-10(0.88±0.01)的mRNA表达最高,三组比较差异具有统计学意义。结论 IL-10修饰的树突状细胞能诱导大鼠角膜移植免疫耐受;IL-12、Th1/Th2细胞因子在角膜移植免疫中起重要作用,IL-12mRNA低表达及Th1/Th2细胞因子偏离是IL-10修饰的树突状细胞诱导角膜移植免疫耐受机制之一。     

羟基喜树碱对大鼠角膜移植后CD4、CD8、CD25表达的影响

目的 研究羟基喜树碱(10-hydroxycamptothecin,HCPT)对大鼠角膜移植术后CD4、CD8、CD25表达的影响.方法 以成年雌性Wistar大鼠为供体,雄性SD大鼠为受体建立穿透性角膜移植模型,受体大鼠随机分为3组,每组6只,分别为对照组、环孢霉素A(CsA)组和HCPT组,3组在移植术后第1天开始每天腹腔分别注射生理盐水2mL·kg-1、5 g·L-1CsA溶液10 mg·kg-1和1g·L-1HCPT溶液2.0 mg·kg-1,至术后第12天.在术后第14天,应用免疫组织化学方法检测各组角膜植片中CD4、CD8、CD25的表达.结果 术后第14天,CD4、CD8、CD25阳性细胞计数对照组分别为22.170±2.639、16.500±1.517、21.670±3.204,CSA组分别为7.330±1.033、5.170±1.329、6.670±0.816,HCPT组分别为4.770±1.577、3.830±0.983、3.670±1.033,两用药组角膜植片中表达CD4、CD8、CD25阳性细胞计数均较对照组明显减少(均为P＜0.01),HCPT组CD4、CD25表达少于CsA组(P＜0.05).结论 HCPT能够抑制大鼠角膜植片CD4、CD8及CD25的表达.     

TGF—β1基因在高危角膜移植术后对移植排斥反应的作用

目的研究高危角膜移植术后,重组腺相关病毒（rAAV）携载的TGF—β1基因（rAAV—TGF—β1）在角膜中的表达及对免疫排斥反应的影响。方法用碱烧伤的方法建立受体角膜新生血管（CNV）化模型。20只Wistar大鼠角膜为供体,40只SD大鼠为受体进行大鼠穿透角膜移植。治疗组术前将20只供体植片置于含rAAV—TGF-β1的DMEM／F12混合培养液中常温培养30min,对照组术前将20只供体植片置于DMEM／F12培养液中常温培养30min,术后裂隙灯下观察植片排斥反应及存活情况。免疫组织化学染色观察2组术后1、2、4周TGF—β1在角膜中的表达。Western blot检测2组术后1、2、4、8周TGF—β1的表达量。结果治疗组角膜平均存活时间为（17．60±2．31）d,对照组为（9．27±1．50）d,治疗组角膜植片混浊及血管化程度明显低于对照组（P〈0．01）。免疫组织化学染色显示治疗组术后1周TGF-v在角膜上皮呈弱阳性表达,术后2～4周角膜上皮及内皮细胞层呈阳性表达并高于对照组。对照组术后1～4周TGF—β1在角膜上皮及基底膜呈弱阳性表达。Western blot检测显示术后1周2组角膜TGF—β1含量差异无统计学意义（P〉0．05）,术后2、4、8周治疗组角膜TGF—β1的表达较对照组增高（P〉0．05）。结论rAAV-TGF—β1能减轻高危角膜移植的排斥反应。     

大鼠穿透性角膜移植术后上皮愈合的扫描电镜观察

目的　观察大鼠穿透性角膜移植术后角膜上皮表面的超微结构变化。方法　成年Wistar大鼠 18只 ,右眼行穿透性角膜移植手术 ,左眼为正常对照。术后 1、3、7d及 2、4及 6周分别摘除眼球行角膜上皮扫描电子显微镜检查 ,观察植片、植床及植片 植床交界处上皮形态及上皮细胞表面微绒毛结构的变化。结果　穿透性角膜移植术后角膜上皮表层细胞出现形态异常 ,植片上皮表面粗糙 ,表层细胞失去平整性 ,卷边、脱落明显增多 ,细胞间出现裂隙 ,术后 4周恢复正常 ;植床上皮出现相似改变 ,术后 1周基本恢复正常 ;植片 植床交界处术后 1周完成上皮覆盖 ,术后 4周表面形态接近正常。术后角膜上皮细胞表面微绒毛密度明显减少 ,术后 4周恢复正常。结论　穿透性角膜移植术后角膜上皮表面形态出现异常 ,术后 4周基本恢复正常     

IL-1ra对大鼠高危角膜植片IL-1β影响的实验研究

目的 探讨炎性细胞因子白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)β在高危角膜移植免疫排斥反应中的作用及IL-1受体拮抗剂(IL-1 receptor antagonist,IL-1ra)抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的作用机制.方法 诱导新生血管后的大鼠行穿透性角膜移植术,受体鼠随机分为3组:生理盐水对照组、10 g·L-1 环孢霉素A(cyclosporin A,CsA)滴眼液治疗组、50 mg·L-1的IL-1ra滴眼液治疗组,每组15只.分别采用原位杂交和免疫组织化学方法 检测术后不同时间点各组大鼠角膜移植物IL-1β mRNA及蛋白表达情况.结果 正常大鼠角膜IL-1β mRNA在上皮细胞基底层微量表达,IL-1β蛋白无表达;术后不同时间点各移植组角膜植片上皮层、基质层均可检测到IL-1β mRNA及蛋白的阳性表达.术后同一时间点不同移植组相比: IL-1β mRNA及蛋白的表达依次减低顺序为生理盐水对照组、10 g·L-1 CsA组、50 mg·L-1 IL-1ra 组,差异有显著统计学意义(P＜0.01);在急性排斥期,与10 g·L-1 CsA滴眼液组相比,IL-1ra组降低更明显,两治疗组间比较差异有显著统计学意义(P＜0.01).结论 IL-1ra可通过影响IL-1β的表达抑制高危角膜移植免疫排斥反应,减少新生血管生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间.     

白细胞介素-33在大鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用

目的 探讨白细胞介素(interleukin,IL)-33在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后免疫排斥反应中的作用.方法 以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体建立同种异体大鼠穿透性角膜移植模型,随机分为4组,取Wistar鼠4只(8眼)为正常对照组(A组),另取24只Wistar鼠作为自体角膜移植组(B组),最后取24只SD鼠和48只Wistar鼠行SD-Wistar鼠之间同种异体角膜移植(C组、D组),术后D组每日滴典必殊眼液(每日2次),共2周.参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评估;分别于术后第5天、第14天取材,行实时荧光定量PCR、组织病理学观察,检测各组角膜组织内IL-33 mRNA的表达水平.结果 C组角膜植片的存活时间为(10.13±0.44)d,D组为(18.00±0.66)d,两组间差异有统计学意义(P=0.000).IL-33 mRNA在A组和B组角膜组织中均有表达,C组角膜组织中IL-33 mRNA表达水平明显升高,而在D组中表达显著降低(P＜0.05).结论 IL-33可能参与大鼠角膜移植术后免疫排斥反应.     

共刺激分子Tim-1在角膜移植排斥反应中的作用

背景 角膜移植是目前临床上治疗角膜盲可靠且有效的复明手段,角膜移植术后的免疫排斥反应是角膜移植失败的主要原因. 目的 研究共刺激分子Tim-1在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植排斥反应发生和发展过程中的作用.方法 40只清洁级成年雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组、自体角膜移植组和同种异体角膜移植组.正常对照组大鼠未行任何手术,自体角膜移植组分别以Wistar大鼠作为供体和受体施行穿透角膜移植术,而同种异体角膜移植组以SD大鼠角膜作为供体,Wistar大鼠作为受体行穿透角膜移植术,各组供体角膜植片均为3.5mm,植床直径为3.0 mm.分别于术后7d、14d在裂隙灯显微镜下观察术眼角膜炎症反应情况,按照Larkin的标准进行排斥反应评分,计算排斥反应指数（RI）,观察各组角膜植片的平均存活时间和植片存活率.术后7d、14d,3个组各取3只大鼠眼球制备角膜组织切片,分别行组织病理学检查和免疫组织化学检测,观察角膜组织的炎症反应和共刺激分子Tim-1蛋白在角膜组织中的表达;此外分别于术后7d、14d各组取5只大鼠角膜制备组织匀浆,采用实时荧光定量PCR法检测共刺激分子Tim-1 mRNA在大鼠角膜植片中表达量（吸光度,A）的变化.结果 术后7d,自体角膜移植组和同种异体角膜移植组大鼠角膜植片均出现轻度水肿;术后14 d,自体角膜移植组角膜植片水肿消失,植片透明,而同种异体角膜移植组大鼠角膜植片水肿增厚,呈灰白色混浊,可见新生血管形成.自体角膜移植组植片的存活率为100％,同种异体角膜移植组植片存活率为0,平均生存时间为（9.8±1.2）d.组织病理学检查表明,术后7d自体角膜移植组植片基质层可见炎性细胞浸润,但术后14d炎性细胞明显减少;同种异体角膜移植组术后7d植片水肿,基质层可见炎性细胞浸润,术后14 d阳性细胞大量增加,可见新生血管.免疫?     

白细胞介素-1受体拮抗剂防治角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠正位穿透性角膜移植术后免疫排斥反应、促进植片存活的作用.方法将主要组织相容性系统完全不同的近交系F344大鼠的角膜植片移植到另一近交系LOU大鼠的角膜上,将手术成功大鼠分为实验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及对照Ⅳ组,均于术后第1d起结膜下分别注射50、100、200μg的IL-1ra,对照组(Ⅳ组)结膜下注射等量生理盐水,连续2周.对角膜植片存活情况进行评分,观察其临床效果.结果各实验组角膜植片平均存活天数(meansurvivaltime,MST)分别为(11.13±1.46)d、(12.00±1.60)d及(13.44±1.13)d,明显高于对照组(8.00±1.25)d,差异有显著性(t=0.00,P＜0.01).IL-1ra200μg组与50μg组间比较,差异有显著性(t=0.00,P＜0.01).结论结膜下注射IL-1ra可抑制角膜移植术后免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间.IL-1ra的剂量越大,效果越好.     

角膜移植排斥反应中ICAM-1含量的变化

目的:探讨细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion mole-cule-1,ICAM-1)在血液和房水中的含量变化与角膜移植排斥反应的关系。方法:缝线法诱发兔角膜新生血管化(corneal neovascular-ization,CNV)后,制作穿透性角膜移植(penetrating kerato-plasty,PKP)模型4组,A组:正常对照组;B组:自体穿透性角膜移植组;C组:同种异体穿透性角膜移植组;D组:新生血管化穿透性角膜移植组。术后记录植片存活时间和移植排斥指数(rejection index,RI);ELISA法检测房水及外周血中可溶性ICAM-1(sICAM-1)的含量,免疫组化法观察ICAM-1的表达。结果:B、C组在观察期内未见排斥反应发生。D组发生排斥反应,角膜植片平均存活12.4±1.3d,术后房水及外周血中sICAM-1含量即升高,至排斥反应前达最高水平分别为53.9±19.3ng/L,378.8±30.6ng/L,在排斥反应发生时,免疫组化染色发现角膜组织中ICAM-1呈强阳性表达。结论:血液和房水中的ICAM-1含量可以是角膜移植免疫排斥反应发生的指标,术后监测ICAM-1浓度变化对排斥反应的发生有一定预测和早期诊断作用。     

绿色荧光蛋白在大鼠角膜移植术后植片中的表达

目的研究穿透角膜移植术（PKP）后重组腺相关病毒（rAAV）载体介导的绿色荧光蛋白（GFP）在大鼠植片中的转染及表达情况。方法建立32只大鼠穿透角膜移植的动物模型,SD大鼠作为受体,Wistar大鼠作为供体,供体植片置于含1010μg/mL（病毒基因组数/mL）rAAV-GFP的DMEM/F121：1混合培养液中培养30min。按照不同的观察时间点用抽签法将角膜移植术后的大鼠随机分成4组,每组8只。手术后隔日在裂隙灯显微镜下观察角膜植片的存活情况。于角膜移植术后1、2、4、12周取各组眼球在共焦显微镜下观察角膜组织中GFP的表达情况,Infinity-capt软件测量角膜植片内皮层中荧光的表达强度。结果各组中选取的受体角膜植片无水肿、混浊、新生血管及其他并发症发生。GFP基因表达阳性的角膜内皮细胞呈绿色荧光。各组角膜内皮细胞绿色荧光强度与背景亮度比值,A组：91.83±10.83;B组：128.67±4.32;C组：117.33±3.01;D组：118.50±3.02,转染后1周即有明显表达,4周及12周组较1周组强（P〈0.01）,2周组强度最高（P〈0.01）。结论通过共培养的方法,rAAV-GFP能够有效地转染到角膜内皮细胞中。PKP后GFP基因能够持续、高效、稳定地在移植片的角膜内皮细胞中表达。     

大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中Fas/FasL表达

目的：研究大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的病理变化和Fas／FasL的表达及IL-lra对Fas／FasL表达的影响。方法：用40只Wistar大鼠作为受体，20只SD大鼠作为供体，用缝线法诱导受体大鼠角膜新生血管，建立高危角膜移植动物模型。将实验大鼠随机分为实验组和对照组，每组10只。实验组从术后第一天起用IL-lra 5mg／ml点眼治疗，4次／天，共30天。对照组用相同的方法生理盐水点眼治疗。应用免疫组织化学染色方法检测IL—1ra治疗组和生理盐水对照组术后不同时期角膜植片中Fas和FasL的表达。结果：角膜移植术后Fas／FasL的表达明显升高，IL-1ra可对此产生明显的抑制作用。结论：Fas／FasL与角膜移植免疫排斥反应密切相关，IL—1ra可以抑制角膜移植免疫排斥反应中Fas／FasL的表达。     

小鼠角膜移植排斥反应中植片内细胞因子表达水平的变化

背景研究表明细胞因子在角膜移植免疫调节中起重要的作用,但关于角膜移植术后角膜植片内细胞因子表达的变化报道较少。目的探讨角膜移植术后不同时间点细胞因子的表达变化。方法采用雌性6～8周龄BALB／c小鼠及C57BL／6小鼠分别建立小鼠自体角膜移植和同种异体角膜移植模型,每组各10只,自体角膜移植术组供体和受体同为BALB／c小鼠,同种异体角膜移植术组供体为C57BL／6小鼠,受体为BALB／c小鼠。于术后1d开始临床观察角膜植片并对炎症程度进行评分,当植片评分总和≥5分或植片混浊≥2分时为发生植片排斥反应。将BALB／c小鼠随机分为正常对照组3只和同种异体角膜移植术组15只,后者分别于术后6h及1、3、7、14d对角膜植片行逆转录PCR（RT—PCR）检测植片中细胞因子白细胞介素4（IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF—α）表达的变化。结果在60d的观察期中,自体角膜移植术后小鼠角膜植片混浊评分均〈2分,植片的炎症评分之和均〈5分,植片存活率为100％,但同种异体角膜移植术后角膜植片水肿、混浊,伴有角膜新生血管形成,至术后24d角膜植片排斥反应评分之和均≥5分,植片混浊评分≥2分,全部发生排斥反应,角膜植片平均存活时间为（17．80±4．66）d。RT—PCR检测结果表明,正常角膜中IL-4和IFN-γ呈阳性表达,IL-10和TNF-α表达阴性。同种异体角膜移植术后6h可检测到IL-4呈阳性表达,IFN-γ和IL-10表达呈强阳性,而未检测到TNF—α的表达。术后1～3d角膜植片中IL-4呈强阳性表达,IFN-γ阳性表达,TNF—α表达增强,IL-10表达逐渐消失。角膜移植术后7d,可见IL-4表达阴性,而IFN-γ、IL-10和TNF—α仍呈强阳性表达。至术后14d,角膜植片中IL-4、IFN-γ和TNF—α．均未见表达,仅检测到IL-10呈阳性表达。结论TNF-α是角膜移植术后局部参与调控的主要因子。     

椭圆形植片穿透性角膜移植术的实验研究

目的确定穿透性角膜移植术椭圆形植片在新西兰白兔角膜白斑模型上降低散光的作用.方法 24只新西兰成年白兔随机取一眼制作角膜灼伤横椭圆白斑模型.稳定一月后,测白斑直径、行角膜地形图检查.随机取12只作为对照组,行圆形穿透性角膜移植术,余下作为实验组,行椭圆形植片穿透性角膜移植术.术后3月,透明植片测角膜地形图.结果角膜白斑模型的直径测量与预设计值的差异无统计学意义(P＞O.05).术后角膜地形图分析:二组的表面规则性指数(Surface Regularity Index,SRI)值和表面非对称性指数(Surface Asymmetry Index,SAI)值相比差别无统计学意义(P＞0.05);实验组的散光度数为4.75±0.47D,对照组的散光度数为8.45±0.59D,二者相比差别有极显著的统计学意义(P＜0.001),且实验组低于对照组2.70±0.76D.结论对于横椭圆形角膜白斑的穿透性角膜移植术,椭圆形植片较圆形植片有效地降低术后的散光.     

穿透性角膜移植术后慢性失功移植片的免疫学研究

目的检测穿透性角膜移植术后慢性失功移植片的免疫与非免疫相关细胞因子表达的变化,探讨免疫与非免疫因素在角膜植片慢性失功中的作用机制。设计临床实验研究。研究对象分为两组,角膜植片慢性失功（CCAD）组：穿透性角膜移植（PK）术后因CCAD导致移植失败的8例患者的角膜植片;正常对照组：由山东跟库提供的正常角膜供体3只。方法免疫组化法检测两组角膜片免疫相关细胞因子表达,结合患者的临床资料进行综合分析。主要指标角膜中CD4^＋、CD8^＋、F4／80、TGF-β、bFGF、α-SMA的表达。结果免疫组化检测显示正常对照组：角膜各层组织 、α-SMA、bFGF表达阴性,F4／80角膜基质偶见表达,TGF-β在角膜上皮层有表达。CCAD组：所有角膜植片全层均术见CD4^＋及CD8^＋T淋巴细胞浸润;5例失功植片基质层F4／80阳性表达,其余3例角膜植片全层表达阴性;所有角膜植片上皮层可见TGF-β阳性表达,基质层内可见TGF-β表达。所有失功角膜片基质层bFGF表达呈弱阳性;所有患者角膜基质内α-SMA表达阳性,后弹力层附近可见较强表达。结论穿透性角膜移植术后慢性失功移植片免疫组化检查未发现支持临床急性免疫排斥反应的证据,抗原递呈细胞及非免疫特异相关细胞因子的异常表达提示免疫与非免疫因素参与了CCAD的发生和发展。     

白细胞介素-10修饰的未成熟树突状细胞对角膜移植术后的影响

目的:研究白细胞介素-10(IL-10)修饰的未成熟树突状细胞(immature dendritic cells,imDC)对大鼠同种异体角膜移植术后免疫耐受的影响。方法:用培养的供体来源的imDC及IL-10-imDC预处理受体,建立Wistar-SD大鼠穿透性角膜移植模型。供体Wistar大鼠18只;受体SD大鼠36只,受体鼠随机分为3组,每组均为12只。A组(对照组):受体鼠不经任何预处理即行角膜移植术;B组:角膜移植前3d,每只受体鼠经尾静脉注射供体的imDC,细胞数为2×106个;C组:角膜移植前3d,每只受体鼠经尾静脉注射用IL-10修饰的供体imDC,细胞数为2×106个。观察术后各组受体角膜植片的存活时间;术后第14d各组随机抽取4只鼠取术眼角膜行组织病理学检查及免疫组化法检测NF-κB的表达。结果:三组植片存活时间分别为10.17±2.16,19.83±2.25,27.57±1.72d;三组组间比较,差异均有显著性(P<0.01)。A组角膜植片显著水肿、增厚,出现大量的淋巴细胞和单核细胞浸润,角膜基质排列紊乱。B,C两组植片炎性细胞浸润均显著减少,角膜厚度及结构基本正常。NF-κB在A组即对照组中呈高表达(P<0.05),B,C组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论:IL-10可有效抑制树突状细胞(dendritic cells,DC)成熟。摄取供体的imDC能显著延长角膜植片的存活时间。IL-10-imDC可抑制NF-κB的表达水平,从而抑制角膜排斥反应的发生。     

FTY720对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用

目的研究FTY720对大鼠角膜移植免疫排斥反应的抑制作用。方法 建立同种异体大鼠穿透性角膜移植动物模型,以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,随机分成4组,对照组每天4mg·kg-1生理盐水灌胃,CsA组为每天10mg·kg-1CsA(5g.L-1)灌胃,FTY720组为每天0.2mg·kg-1FTY720(0.1g.L-1)灌胃,联合用药组为每天5mg·kg-1CsA(5g.L-1)和0.1mg·kg-1FTY720(0.1g.L-1)灌胃,术后第1天开始灌胃给药,连续用药14d后停药。对各组大鼠术眼角膜植片进行临床观察,对植片的临床指数:混浊度、水肿、新生血管及排斥反应指数进行评分,并记录角膜植片的存活时间。结果 对照组、CsA组、FTY720组和联合用药组角膜植片的存活时间分别为(10.38±1.92)d、(20.13±2.17)d、(21.38±2.72)d、(29.88±3.04)d,各用药组角膜植片的存活时间与对照组比较显著延长(均为P=0.000);联合用药组优于单独用药组(均为P=0.000);FTY720组与CsA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后14d各用药组角膜植片的混浊度、水肿、角膜新生血管、排斥反应指数均低于对照组(均为P<0.01);联合用药组均优于单独用药组;FTY720组与CsA组比较差异无统计学意义(均为P>0.05)。结论 口服FTY720能显著延长大鼠角膜植片的存活时间,抑制角膜移植免疫排斥反应。CsA与FTY720联合用药具有协同作用,优于单独用药组。