糜酶抑制剂对大鼠肺纤维化的干预作用及对血管紧张肽Ⅱ及其受体的影响

目的:观察糜酶抑制剂(Chy-I)对博莱霉素(BLM)致大鼠肺纤维化模型的干预作用和对血管紧张肽Ⅱ及其受体的影响,探讨糜酶参与肺纤维化的机制。方法:健康SD大鼠60只随机分3组:正常对照组(生理盐水),模型组(博莱霉素),干预组(博莱霉素 糜酶抑制剂)。分别在第7,14,21,28天,每组HE染色5只大鼠,观察支气管肺组织病理改变,免疫组化观察肺组织中血管紧张肽Ⅱ及其受体的表达。结果:(1)肺泡炎程度评价:干预组和模型组与对照组间比较,差异有统计学意义,但干预组和模型组间差异无统计学意义。(2)肺纤维化程度评价:干预组和模型组与对照组间差异有统计学意义,且干预组和模型组之间比较,差异亦有统计学意义。(3)血管紧张肽Ⅱ及其受体的表达分析:模型组肺间质中血管紧张肽Ⅱ及其受体表达均持续增强,干预组均明显减少。结论:糜酶抑制剂能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能是通过下调血管紧张肽Ⅱ及其1型受体(AT1)的表达而起作用。     

肺纤维中过氧化物酶体增殖物激活受体γ的参与机制研究

[摘要] 目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）及其配体在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化中的作用及参与机制。 方法 将24只雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组、罗格列酮对照组、博莱霉素组、罗格列酮干预组。经气管内注射博莱霉素建立肺纤维化模型。HE染色及Masson染色观察肺组织形态学变化;检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中乳酸脱氢酶（LDH）及转化生长因子β1（TGF-β1）浓度;应用荧光定量RT-PCR及Western blot检测肺组织中TGF-β1和PPARγ表达。 结果 博莱霉素气管内注入后肺Ashcroft评分,胶原沉积、TGF-β1表达、PPARγ表达及BALF中LDH、TGF-β1水平增加;给予罗格列酮干预后,除PPARγ表达进一步增加外,上述指标均下降。博莱霉素组PPARγ蛋白水平与TGF-β1mRNA表达、BALF中LDH含量呈负相关。 结论 PPARγ参与了肺纤维化的发生;PPARγ及其配体罗格列酮可能通过调节炎症反应,抑制TGFβ1转录,从而减少胶原沉积,对肺纤维化进行负性调控。     

雾化吸入布地奈德对肺纤维化大鼠的干预效果

目的 研究雾化吸入布地奈德对博莱霉素致大鼠肺纤维化模型的干预作用.方法 45只SD雌性大鼠随机分成3组(每组15只):模型组、对照组和布地奈德吸入组.各组大鼠分别于干预后第7、14、28天用随机数字表法处死5只,HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清和肺泡灌洗液(broncho-alveolar lavage fluid,BALF)中转化生长因子(transforming growth factor-β,TGF-β)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)的含量.结果 ①HE和Masson染色结果证实成功复制经典肺纤维化模型,肺纤维化主要发生在肺组织局部,同时伴有不同程度全身反应.②布地奈德吸入组和模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重(P＜0.05),且布地奈德吸入组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较模型组有明显改善(P＜0.05).③ELISA法显示各组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF表达水平不同,BALF中TGF-β和CTGF表达水平较血清水平高.④与对照组比较,模型组和布地奈德吸入组大鼠血清和BALF中TGF-β和CTGF明显增加(P＜0.05),布地奈德吸入组中TGF-β和CTGF水平较模型组明显降低(P＜0.05).结论 雾化吸入布地奈德能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化,可能与肺泡灌洗液和血清中TGF-β和CTGF表达有关.     

环孢菌素A对大鼠肺纤维化的治疗作用

目的：研究环孢菌素Ａ（ＣsA)对肺纤维化的治疗作用。方法：应用博莱霉素（BLM）复制大鼠肺纤维化模型,观察CsA对支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞成分、肺组织学变化以及应用SABC法检测肺组织中纤维连接蛋白（FN）和血小板衍化生长因子（PDGF）表达的作用。结果：应用博莱霉素后第7天即有严重肺泡炎性改变,晚期有严重的肺纤维化,而CsA组,早期只有轻度炎性改变,BALF中细胞计数较BLM组低（P＜0．001）,FN及PDGF表达显著弱于BLM组（P＜0．01）。结论：CsA通过抑制N及PDGF的表达治疗肺纤维化。     

肺纤维化中过氧化物酶体增殖物激活受体γ的参与机制研究

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及其配体在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化中的作用及参与机制.方法 将24只雄性SD大鼠随机分为生理盐水对照组、罗格列酮对照组、博莱霉素组、罗格列酮干预组.经气管内注射博莱霉素建立肺纤维化模型.HE染色及Masson染色观察肺组织形态学变化,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中...     

用RT—PCR方法动态分析博莱霉素致肺纤维化大鼠TGF—β1的基因表达

目的：探讨转化生长因子β1（TGF－β1）在肺纤维化中的作用。方法：采用博莱霉素（BLM）致肺纤维化大鼠模型,分离纯化肺泡巨噬细胞（alveolar macrophage,AM）,用RT－PCR及图像分析方法,对不同时期AM以及肺组织释放的TGF－β1进行动态观察。结果：BLM组AM和肺组织中TGF－β1 mRNA第3天即明显增加（P＜0.05和P＞0.05）,第7天达到高峰（P＜0.01）,第14－28天逐渐下降,便仍高于对照组（P＞0.05）。结论：TGF－β1 mRNA在正常大鼠及肺纤维化大鼠中均有表达,后者表达明显高于前者,肺纤维化大鼠肺内TGF－β1 mRNA可能主要来源于AM。     

罗格列酮拮抗博莱霉素致大鼠肺纤维化的实验研究

目的探讨罗格列酮抑制肺纤维化的作用及其机制。方法将24只大鼠分为生理盐水对照组、罗格列酮对照组、博莱霉素组、罗格列酮干预组,予博莱霉素诱导大鼠肺纤维化。HE染色和Masson染色行病理学检查;试剂盒检测肺组织中羟脯氨酸含量;应用Westen blot及荧光定量实时逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中TGF-β1浓度。结果博莱霉素气管内注入后,Ashcroft评分,肺组织胶原沉积、羟脯氨酸含量,BALF中TGF-β1水平及肺组织中TGF-β1、PPARγ、MMP-9表达较生理盐水对照组增加;给予罗格列酮干预后,除PPARγ表达进一步增加外,上述指标均下降。博莱霉素组PPARγ蛋白表达水平与TGF-β1mRNA、MMP-9mRNA表达水平分别呈负相关。结论罗格列酮对博莱霉素诱导的肺纤维化进程有拮抗作用,其具体机制可能与上调PPARγ蛋白表达,抑制TGFβ1、MMP-9mRNA转录有关。     

阿司匹林对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的抑制作用及其机制

 目的  观察阿司匹林对博莱霉素所致大鼠肺间质纤维化的抑制作用,并探讨其作用机制。方法  取体质量250 g左右的健康清洁级雄性SD大鼠60只,随机分为生理盐水对照组、博莱霉素模型组、甲基强的松治疗组、阿司匹林治疗组,每组15只。生理盐水对照组经气管插管注入生理盐水0.2 mL,其他各组注入博莱霉素 5 mg/kg制备成模型。甲基强的松治疗组和阿司匹林治疗组每天灌胃给药分别予甲基泼尼松龙6 mg/kg、阿司匹林10 mg/kg,于第7、14、28天每组各处死5只,取其肺组织作以下测试:HE染色病理学观察;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测羟脯氨酸、IL-4、TNF-α、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF β)和角化细胞生长因子(keratinocyte growth factor,KGF)水平;Real Time PCR检测TGF β的mRNA表达。结果  博莱霉素模型组大鼠肺组织在第7天时出现明显的出血渗出性炎症反应,在第28天时出现明显的肺组织纤维化;其肺组织的羟脯氨酸、IL-4和TNF-α水平较生理盐水对照组有明显升高(P<0.05),TGF-β蛋白和TGF β mRNA的表达也明显高于生理盐水对照组(P<0.01)。阿司匹林治疗组肺组织病理与博莱霉素模型组比较,第7天时大鼠肺组织的炎性渗出有明显减轻,第28天时肺组织纤维化程度较轻。阿司匹林治疗组大鼠肺组织的羟脯氨酸、IL-4、TNF-α含量较博莱霉素模型组有明显下降(P<0.01),其肺组织TGF-β蛋白含量和mRNA表达明显低于博莱霉素模型组(P<0.05)。阿司匹林治疗组与甲基强的松治疗组相比较,在第28天时肺组织羟脯氨酸含量低于甲基强的松治疗组(P<0.01),而IL-4、TNF-α、TGF-β、TGF-β mRNA的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论  阿司匹林可抑制炎症细胞分泌TGF-β、IL-4和TNF-α,减轻博莱霉素导致的肺间质纤维化反应,其作用机制可能与下调TGF β mRNA和蛋白的表达有关。     

苦胆草对博来霉素致大鼠肺纤维化的防治作用

［摘要］目的　探讨苦胆草对博莱霉素致大鼠肺纤维化的防治作用．方法　健康成年SD大鼠40只（200±20）g随机分为4组:正常对照组（未做处理）、生理盐水组（气管滴入生理盐水）、模型组（气管滴入博莱霉素5 mg/kg）和苦胆草干预组［灌胃给予苦胆草片混悬液0.705 g/(100 g.d),2次/d、共5次,末次给药1 h,气管滴入博莱霉素5 mg/kg］．分别于气管内滴注后14 d和28 d处死动物,检测各项指标．采用碱水解法测定肺组织中羟脯氨酸（HYP）含量,HE染色和银染观察肺组织病理变化．结果　与正常对照组和生理盐水组比较,模型组大鼠肺组织HYP含量明显升高（P＜0.01）;与模型组比较,苦胆草干预组大鼠肺组织HYP含量明显降低（P＜0.01）;病理检查发现,模型组大鼠肺组织有明显肺纤维化样改变,苦胆草干预组可明显减轻肺纤维化程度．结论　苦胆草能降低博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织羟脯氨酸含量,减轻肺纤维化程度,有望成为防治肺纤维化的候选药物．     

雾化吸入布地奈德干预肺纤维化大鼠及其机制的实验研究

目的：探讨雾化吸入布地奈德对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化的影响及其可能机制。方法：45只SD雌性大鼠随机分为3组（各组15只）：对照组、模型组和干预组,肺纤维化模型行气管内滴入博莱霉素造模。干预组造模后第7天雾化吸入布地奈德,模型组和对照组雾化吸入等量生理盐水,雾化后第7天、第14天、第28天各组随机处死5只动物并分别保存肺组织,HE和Masson染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度;免疫组化染色测定肺组织转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）、结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）的表达水平;RT-PCR检测Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达水平。结果：肺组织病理学观察显示对照组肺泡炎和肺纤维化程度明显轻于模型组和干预组,干预组较模型组有明显改善;模型组和干预组肺组织中TGF-β和CTGF水平较对照组均有明显增高（P<0.05）,但干预组较模型组表达减少（P<0.05）;模型组Ⅰ、Ⅲ型胶原表达明显高于对照组（P<0.05）,而干预组较模型组表达明显减少（P<0.05）。结论：布地奈德具有明显的抗纤维化作用,机制可能为通过抑制细胞因子的表达而减少肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原的生成,最终抑制肺纤维化。     

实验性肺纤维化小鼠IL-1和TNF-α的动态表达及其意义

目的：探讨博莱霉素致肺纤维化小鼠各时期支气管肺泡灌洗液（BALF）及肺组织中白细胞介素1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的mRNA表达规律及其意义。方法：40只雄性昆明种小鼠,随机分为对照组(n=10)和实验组（n=30）。分别于生理盐水和博莱霉素（5 mg•kg^-1）一次性气管内灌注后第3、7、14、28和56天行支气管肺泡灌洗并处死小鼠,取支气管肺泡灌洗液和肺组织,应用RT-PCR法测定其中的IL-1 mRNA和TNF-α mRNA相对转录水平。结果：①BALF中,实验组IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达均高于对照组（P<0.05）,且实验组中两者的表达高峰均在第14天。②肺组织中,实验组IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达水平均高于对照组（P<0.01）,且实验组中两者表达高峰分别在第7和14天,此后逐渐下降,但仍然保持高于正常水平表达。结论：IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达高峰时相均在肺纤维化发病早期,因此推断其在致肺纤维化损伤中发挥重要作用,并依IL-1 mRNA和TNF-α mRNA表达水平可判断病变发展进程和活动性。     

TGF-β1/Smad3在博来霉素肺纤维化大鼠中的作用

目的 通过Smad3特异性抑制剂(specific inhibitor of Smad3,SIS3)干预博来霉素肺纤维化大鼠,观察转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad3蛋白表达情况,探讨TGF-β1/Smad3信号通路在肺纤维化中的作用.方法 选取健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为4组:生理盐水对照组(NS组),博来霉素组(BLM组),SIS3干预组(SIS3组),二甲基亚砜溶媒组(DMSO组),每组15只.BLM组、SIS3组和DMSO组气管内注射博来霉素溶液(5 mg/kg)建立大鼠肺纤维化模型;NS组以同样方法注入等量生理盐水;SIS3组大鼠腹腔内注射SIS3(2.5 μg/g)干预处理,BLM组注射等量生理盐水,DMSO组注射等量DMSO.各组于造模后第7、14、28天分别处死5只大鼠,行Masson染色观察各组肺组织胶原纤维差异.免疫组化检测各组TGF-β1、Smad3表达情况.结果 与NS组比较,BLM组、DMSO组大鼠肺组织出现明显纤维化,TGF-β1、Smad3表达明显增高;与BLM组、DMSO组相比,SIS3组大鼠肺纤维化程度减轻,TGF-β1、Smad3表达减少.结论 SIS3干预肺纤维化大鼠,能够减轻大鼠肺泡炎,降低肺纤维化程度;TGF-β1/Smad3信号通路在肺纤维化中可能起到重要作用.     

麦门冬汤对肺纤维化模型大鼠肺组织转化生长因子β1和基质金属蛋白酶9及基质金属蛋白酶组织抑制剂1表达的影响研究

目的　探讨麦门冬汤对肺纤维化模型大鼠转化生长因子β1（TGF-β1）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）和基质金属蛋白酶组织抑制剂1（TIMP-1）表达和肺组织病理变化的影响。方法　2016年11月—2017年10月,选取80只雄性SD大鼠,采用随机数字表法分为4组,每组各20只。空白组予蒸馏水1.1 ml/100 g灌胃;模型组造模24 h后予蒸馏水1.1 ml/100 g灌胃;麦门冬汤组造模24 h后予麦门冬汤（1.1 g?ml-1?100 g-1）,1次/d灌胃治疗;泼尼松组造模24 h后予泼尼松（5 mg/kg）,1次/d灌胃治疗。每组分别于造模后第7、14天处死10只大鼠取肺组织,HE和Masson染色法评估肺组织肺泡炎症和纤维化程度,免疫组化法检测TGF-β1、MMP-9、TIMP-1表达水平。结果　麦门冬汤组第7天肺实质内表现为细支气管上皮细胞肿胀,出现空泡变化,呈轻、中度肺泡炎改变;第14天可见炎症、纤维化程度增加。模型组肺组织结构紊乱,小血管周围见深蓝色成熟胶原纤维的显著沉积,在第14天尤为明显,其中肺泡间隔和肺泡壁明显增厚,肺间质中胶原纤维增厚。但麦门冬汤组及泼尼松组第7、14天胶原纤维沉积较为缓慢。第7、14天,麦门冬汤组肺泡炎症积分及纤维化程度均低于模型组,TGF-β1、MMP-9和TIMP-1表达水平均低于模型组（P<0.05）,而与泼尼松组无差异（P>0.05）。结论　麦门冬汤在肺纤维化模型大鼠中显示出缓解肺泡炎症和抗纤维化特性,其机制可能是抑制肺组织中TGF-β1、MMP-9与TIMP-1表达水平,从而调整细胞外基质的异常代谢。     

匹伐他汀抑制实验性肺纤维化大鼠MMP-9和TIMP-1表达

目的探讨匹伐他汀对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型中基质金属蛋白酶（MMP）-9及其抑制剂（TIMP）-1表达的影响。方法54只健康雄性SD大鼠随机分为阴性对照组（生理盐水）、模型组（5mg／kg博莱霉素）以及博莱霉素＋匹伐他汀组（5mg／kg）。分别于第2、4、6周获取6只大鼠肺组织及肺泡灌洗液（BALF）,Western blot和ELISA检测其MMP-9和TIMP-1水平的变化。结果对照组中MMP-9和PTIMP-1水平表达低,模型组中两者含量显著增高。5mg／垤匹伐他汀处理后,两者水平显著降低（P〈O05）。结论匹伐他汀能降低肺纤维化模型小鼠肺组织MMP-9和TIMP-1水平．可能是其抗肺纤维化的重要机制之一。     

博莱霉素致小鼠肺纤维化中解整合素-金属蛋白酶17表达水平的研究

目的 观察博莱霉素致小鼠肺间质纤维化中解整合素-金属蛋白酶17（a disintegrin and metalloproteinase-17,ADAM17）表达水平变化与转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）之间的相关性,以阐明肺纤维化的发病机制.方法 60只小白鼠随机分为6组,每组10只.正常对照组经气管内一次性注入0.9％氯化钠注射液（5 mg/kg）.模型组5组分别为注射博莱霉素3d、7d、14 d、21 d、28 d组,经气管内一次性注入博莱霉素（5 mg/kg）,分别在规定的时间点取肺组织,通过Masson胶原染色评价肺纤维化的程度,用免疫组织化学染色和蛋白质印迹（Western blotting）方法检测ADAM17和TGF-β1在肺组织的蛋白水平表达,RT-PCR检测ADAM17和TGF-β1mRNA的表达.结果 博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型成功,模型组病理呈不同程度的胶原沉积和成纤维细胞增生.小鼠纤维化程度自7d组开始均高于正常对照组（P＜0.01）.免疫组化结果示,TGF-β1、ADAM17在对照组呈弱表达,模型组表达量高于对照组（P＜0.01）,且14 d时表达量最高.Western blotting和RT-PCR结果与免疫组化结果一致.相关性分析结果示,TGF-β1、ADAM17在免疫组化、Western blotting和RT-PCR中的相关系数r分别为0.777、0.808、0.906（P＜0.01）,表明二者呈正相关.结论 ADAM17在博莱霉素致小鼠肺间质纤维化过程中表达水平上调,ADAM17可能通过上调TGF-β1发挥致纤维化的作用.     

布地奈德干预肺纤维化JAK-1/STAT1途径的研究

目的观察吸入布地奈德(BUD)对肺纤维化大鼠肺组织细胞黏附因子-1(ICAM-1)、Janus激酶-1(JAK-1)、信号转导子与转录激活子1(STAT1)表达的影响,并探讨其作用机制。方法实验分为博莱霉素(BLM)组、生理盐水(NS)组和BUD组,每组15只。BLM组、BUD组气管内灌注BLM,NS组气管内灌注NS,继之第0~6天每天雾化1次,BUD组雾化吸入BUD,BLM组和NS组雾化吸入NS,第7、14、28天分别处死3组大鼠各5只。用HE、Masson染色观察肺泡炎症和纤维化改变;免疫组化法测定肺组织中ICAM-1、JAK-1及STAT1的表达。结果第7、14天,BLM组肺泡炎程度重于BUD组(P<0.05);第7、14、28天,BLM组肺纤维化程度重于BUD组(P<0.05)。第7、14天,BUD组肺组织中ICAM-1、JAK-1、STAT1表达明显低于BLM组(P<0.05)。结论 JAK-1/STAT1信号途径参与了肺纤维化的发生发展,而吸入型BUD可分别通过抑制肺组织ICAM-1、JAK-1、STAT1的表达加强对肺组织的保护作用。     

替米沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用

目的研究替米沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型的干预作用，并探讨其机制。方法雌性SD大鼠45只随机等分为三组：生理盐水对照组、博来霉素组（气管内注入博来霉素）及替米沙坦组（气管内注入博来霉素，并给予替米沙坦灌胃）。采用HE染色了解肺泡炎和肺纤维化的情况，酸解法测羟脯氨酸含量，ELISA检支气管肺泡灌洗液（BALF）中转化生长因子-β1（TGF—β1）水平的变化，并观察BALF中的细胞总数变化。结果替米沙坦组与博来霉素组比较，灌注后第7和14天肺泡炎轻；第28天肺纤维化减轻。博来霉素组肺羟脯氨酸含量增高，替米沙组减少。替米沙坦组BALF中的细胞总数第7和14天较博来霉素组少。替米沙坦组BALF中TGF—β1水平于各时间点低于博来霉素组。结论替米沙坦对博来霉素诱导的大鼠肺纤维化模型有抑制作用，其机制可能与抑制TGF-β1水平有关。