EGCG对糖尿病大鼠肾氧化应激的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对糖尿病大鼠肾脏损害的治疗作用及糖尿病大鼠肾氧化应激的影响。方法采用链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠糖尿病模型，观察12周时肾脏损害和氧化应激改变，以及给予EGCG（2．5mg／kg和5mg／kg）治疗后的变化。结果12周时糖尿病大鼠与正常对照组比较：肾质量指数显著增加，肾脏的抗氧化能力显著降低且氧化应激增强；EGCG治疗组与糖尿病组比较：肾指数显著降低，总抗氧化能力和肾脏超氧化物岐化酶活性显著提高，脂质过氧化产物丙二醛（MDA）显著降低。结论糖尿病大鼠与正常大鼠相比抗氧化能力降低且氧化应激增强，EGCG可显著提高糖尿病大鼠肾脏的抗氧化能力和降低氧化应激。对糖尿病大鼠肾脏具有保护作用。     

L—EGCG对Lp（a）诱导大鼠系膜细胞增生及ICAM-1表达的影响

目的探讨儿茶素的主要成分L-表没食子基儿茶素没食子酸酯（L—EGCG）对脂蛋白（a）[Lp（a）]诱导的大鼠肾小球系膜细胞（GMCs）增生影响及可能机制。方法选定最佳剂量与最佳时间将GMCs分为对照组、Lp（a）组[Lp（a）（5．0pg／ml）]、L—EGCG组[Lp（a）（5．0μg／ml）＋L—EGCG（200mg／L）处理]共三组分瓶培养。观察L—EGCG对GMCs增生率（MTT）、增生细胞核抗原（PCNA）阳性表达率及培养液上清的细胞间粘附因子-1（ICAM-1）浓度的影响，并与对照组相比较。结果在对照组、Lp（a）组及L—EGCG组，随着处理时间的延长，GMCs的MTT、PCNA、上清ICAM-1浓度呈增加趋势，经F检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。与对照组比较，应用Lp（a）5．0g／ml处理后，在不同的处理时间，Lp（a）组MTT计数、PCNA阳性率、ICAM-1均明显增高，经两两之间的q检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。与Lp（a）组比较，应用L—EGCG处理Lp（a）诱导的大鼠GMCs，在不同的处理时间，L—EGCG组MTT计数、PCNA阳性率、ICAM-1均明显降低，经两两之间的q检验，差异有统计学意义（P〈0．01）。在Lp（a）组、L—EGCG组，培养上清ICAM-1浓度与PCNA阳性率及与反映系膜细胞增生指标的MTT呈正相关。结论Lp（a）能明显促进肾脏GMCs的增生，L—EGCG可明显抑制Lp（a）诱导的大鼠GMCs增生，此可能与影响ICAM-1表达有关。     

L-EGCG对脂多糖诱导的大鼠系膜细胞增生影响

目的 :探讨L ( ) 表没食子基儿茶素没食子酸酯 (L epigallocatechinsgallicacidester,L EGCG)对大鼠肾小球系膜细胞 (glomerularmesangialcells ,GMCs)增生影响及可能的机制。方法 :首先应用不同剂量 (1 0 0 ,2 0 0 ,5 0 0mg/L)EGCG观察其在不同时间 (2 4 ,4 8,72h)对GMCs增生的影响 ,筛选出EGCG对GMCs增生影响的最佳剂量与最佳时间 ;在此基础上 ,将GMCs分为LPS组、对照组、EGCG组、激素组与激素 +EGCG组分瓶培养 ,实验末收集培养细胞 ,涂片 ,应用免疫组化法检测GMCs的增生细胞核抗原 (proliferatingcellnuclearantigen ,PCNA)阳性表达率 ,TUNEL(terminaldeoxynucleotidyltransferasemediateddUTPnickendlabeling,TUNEL)法检测GMCs有效凋亡率 ;应用生化法对培养上清进行 OH ,MDA(malonydialdehyde ,MDA)及SOD (superoxideDismutase ,SOD)活性测定。结果 :2 0 0mg/LEGCG对GMCs增生的抑制效果在 4 8h最佳 ;EGCG组细胞上清中 OH ,MDA较LPS组降低 (P <0 .0 1 ) ,SOD活性较LPS组增高 (均P <0 .0 1 ) ;EGCG组培养细胞PCNA阳性率低于脂多糖组 ,有效凋亡率高于脂多糖组 (P <0 .0 1 )。PCNA阳性率与 OH ,MDA呈正相关 ,与SOD活性呈负相关 (P <0 .0 1 )。结论 :EGCG可能通过减轻 OH对SOD的活性抑制 ,降低MDA的过     

EGCG对大肠癌细胞系LoVo细胞增殖的影响及其机制

目的:探讨EGCG对大肠癌细胞系LoVo细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法:体外培养的LoVo细胞,用不同浓度EGCG处理24、48、72 h,MTT法测定其对LoVo细胞增殖的影响;倒置显微镜下观察细胞的形态学变化;EGCG(浓度分别为10、40、80μg/m L)处理LoVo细胞48 h后,分别采用流式细胞仪检测细胞凋亡、分光光度计检测Casepase-3相对活性、RT-PCR和western blot法检测环氧合酶2(COX-2)基因表达情况。结果:EGCG(浓度10~80μg/m L)能显著抑制LoVo细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;倒置显微镜下可观察到典型的细胞凋亡形态;EGCG(浓度分别为10、40、80μg/m L)作用LoVo细胞48 h后,细胞凋亡率分别为12.5%、23.3%、35.4%,对照组凋亡率为3.4%;Casepase-3相对活性显著增加;COX-2的表达降低,呈剂量依赖性。结论:EGCG能抑制LoVo细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加细胞Casepase-3活性及下调COX-2基因的表达有关。EGCG有望成为代替NSAIDs或COX-2特异性抑制剂用于大肠癌防治。     

EGCG抑制口腔鳞癌Tca8113细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的：研究绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对人口腔鳞癌Tca8113细胞生长抑制及促凋亡的作用。方法：应用MTT法检测不同浓度的EGCG对Tca8113细胞体外增值抑制作用;采用HE染色、Hochest33258染色法检测EGCG对Tca8113细胞凋亡的影响。结果：MTT法检测显示EGCG对Tca8113细胞有明显增殖抑制作用并呈现时间及浓度依赖性（P〈0.05）;HE、Hochest33258染色显示,EGCG处理Tca8113细胞中出现了典型的凋亡形态学改变如核碎裂、核浓缩。结论：EGCG对Tca8113细胞的生长具有显著的抑制及促凋亡作用,且呈现时间及浓度的依赖性。     

EGCG对肾小球系膜细胞MMP-9和细胞外基质合成的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对脂多糖（LPS）诱导的肾小球系膜细胞（GMCs）基质金属蛋白酶系统和细胞外基质合成的影响。方法以大鼠GMCs为实验对象,分为正常对照组、LPS组、LPS＋EGCG组。CCK细胞计数法检测EGCG作用下大鼠GMCs的OD值,酶联免疫吸附实验（ELISA）检测基质金属蛋白酶-9（MMP-9）及抑制物金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）蛋白表达,并检测细胞外基质成分纤维连接蛋白（FN）、Ⅳ型胶原（ColⅣ）及层粘连蛋白（LN）的含量。结果LPS诱导TIMP-1蛋白和细胞外基质合成增加,与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）,EGCG能抑制升高TIMP-1蛋白表达和细胞外基质合成。而各组MMP-9蛋白表达变化不明显。结论EGCG可抑制LPS诱导的大鼠GMCs增殖和细胞外基质的合成,为EGCG的肾脏保护作用提供理论依据。     

EGCG恢复Sirt-1拮抗高糖诱导的PC12细胞凋亡

目的:探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对高糖诱导的PC12细胞损伤的保护作用及Sirt-1的介导机制。方法:CCK-8法检测PC12细胞活力; ELISA法检测Bcl-2的活性;免疫荧光法检测Caspase-3在胞质的活性及胞核内DAPI的表达; WB检测Sirt-1的表达。结果:高浓度的葡萄糖(15、30、45 mmol/L)诱导了PC12细胞的损伤,细胞活性较对照组分别下降了14%、32%及57%,凋亡保护蛋白Bcl-2的表达较对照组下降了8%、30%及35%; EGCG(10、20、40μmol/L)对高糖诱导的PC12细胞凋亡提供了保护作用,细胞活性较高糖损伤组分别提升了2%、20%及24%,Bcl-2的表达提升了10%、22%和25%;阻断Sirt-1通路逆转了EGCG提供的保护作用,同时加入阻断剂组的细胞活性较EGCG保护组下降了8%,Bcl-2的表达下降了16%。结论:EGCG通过恢复Sirt-1活性拮抗高糖诱导的PC12细胞的凋亡。     

EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Survivin蛋白表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度EGCG处理PC-3细胞48h后对细胞周期及凋亡的影响;用RT-PCR法检测各浓度EGCG作用48h后PC-3细胞中Survivin基因的表达差异,使用Western blot进行确认。结果 EGCG可以抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用随EGCG浓度的增加而增强(P<0.05);Sur-vivin在PC-3细胞中高表达,EGCG促使PC-3细胞的Survivin表达下调,其表达水平随EGCG浓度的增加而减少(P<0.01)。结论 EGCG能下调PC-3细胞中Survivin蛋白的表达,这可能是EGCG抑制PC-3细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制。     

EGCG 对Ro52 介导的THP-1 细胞凋亡 及炎症因子的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对SSA/Ro52（Ro52）介导的人单核- 巨噬 细胞株THP-1 凋亡及炎症因子分泌的影响。方法 构建稳定Ro52 过表达质粒（pCMV-Ro52）,pCMVRo52 转染THP-1 细胞48 h,检测Ro52 mRNA 和蛋白表达水平的变化,采用膜联蛋白- 荧光素异硫氰酸酯 和碘化丙锭双染检测THP-1 细胞凋亡率,酶联免疫吸附法检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β （IL-1β）、IL-13 水平。pCMV-Ro52 质粒转染48 h 后, 分别使用0、5、10、20 和50 mg/L EGCG 处理细 胞24 h,检测Ro52 表达的变化、THP-1 细胞的凋亡,以及TNF-α、IL-1β、IL-13 水平。结果 pCMVRo52 促进Ro52 表达（P <0.05）,上调THP-1 细胞凋亡率及TNF-α、IL-1β、IL-13 水平（P <0.05）; 在Ro52 过表达的THP-1 细胞中,与0 mg/L EGCG 组相比,10、20 和50 mg/L EGCG 组Ro52 蛋白表达水 平、凋亡率及TNF-α、IL-1β、IL-13 水平降低（P <0.05）。结论 Ro52 过表达可促进人单核- 巨噬细胞 THP-1 凋亡及炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-13 分泌;EGCG 可减弱Ro52 介导的THP-1 细胞凋亡,减 少炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-13 的分泌。     

霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎症反应和增殖的影响

目的:观察霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞炎症反应及增殖的影响。方法:大鼠肾小球系膜细胞分为低糖组、高糖组、高糖加不同浓度霉酚酸组培养,测定细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及神经生长因子(NGF)的表达,及细胞增殖的情况。结果:①低浓度(0.1μmol/L)霉酚酸对高糖诱导的肾小球系膜细胞ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达有显著的抑制作用,但霉酚酸浓度的成倍增加(0.1-10μmol/L)对于以上效果并无明显的加强作用。②霉酚酸有浓度依赖性抑制高糖所致的系膜细胞增殖的作用。结论:体外霉酚酸对高糖环境下肾小球系膜细胞炎性因子ICAM-1、MCP-1和NGF的高表达和高增殖有显著的抑制作用。     

罗格列酮对同型半胱氨酸诱导大鼠肾脏微血管内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响

目的了解同型半胱氨酸(Hcy)对肾脏微血管内皮细胞(RMECs)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响及罗格列酮的干预作用。方法将原代培养的大鼠RMECs分为空白对照组、Hcy刺激组和罗格列酮干预组。分别采用免疫荧光法和酶联免疫吸附试验检测RMECs表达MCP-1、ICAM-1的能力。结果不同浓度的Hcy刺激后,ICAM-1的水平显著增加(P<0.05),且呈时间和剂量依赖性,尤其在0.1 mmol/L Hcy刺激24～48 h时达高峰。罗格列酮干预后ICAM-1含量显著降低,且随罗格列酮浓度的增加其抑制作用更加明显;0.1 mmol/L的罗格列酮干预24h后,ICAM-1的水平与空白对照组比较,差异无统计学意义(P(0.05);MCP-1荧光强度在罗格列酮干预后也减弱。结论罗格列酮能抑制Hcy诱导的RMECs表达MCP-1和ICAM-1。     

厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠ICAM-1表达的影响

目的从影响细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的角度,探讨厄贝沙坦对实验性糖尿病大鼠肾脏的保护作用及其可能机制。方法SD健康大鼠24只,随机分为对照组、模型组、药物组,每组8只。链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病大鼠模型,药物组大鼠每日给予厄贝沙坦150mg/kg体重灌胃,持续6周。6周后抽血测血糖（BG）,糖化血红蛋白（HbA1c）,尿素氮（BUN）,肌酐（Scr） 测定24h尿微量白蛋白（mAlb）,计算尿白蛋白排泄率（UAER）。处死SD大鼠,取其肾脏,用免疫组化方法检测ICAM-1。结果模型组与药物组的BG、HbA1c、BUN、Scr都高于对照组,上述指标在模型组与药物组之间差异无统计学意义。模型组UAER高于对照组,而药物组则低于模型组。药物组ICAM-1蛋白表达量低于模型组。结论厄贝沙坦对实验性糖尿病大鼠的肾脏有保护作用,其机制可能与抑制ICAM-1在肾脏的表达有关。     

来氟米特对2型糖尿病大鼠肾脏单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的研究来氟米特(LEF)对2型糖尿病肾病大鼠的肾脏单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达的影响及肾脏保护作用。方法将30只建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠动物模型的8周龄的雄性Wistar大鼠分为正常对照组、LEF给药组(4 mg.kg-1.d-1)和0.9%氯化钠注射液给药组,各10只。每天给药1次,共7周。比较实验室指标、病理组织学和MCP-1、单核/巨噬细胞表面特异性标志抗原(ED-1)的表达。结果 LEF给药组大鼠尿蛋白排泄率较0.9%氯化钠注射液给药组明显减少,肾小球硬化、肾间质纤维化也明显减轻,MCP-1、ED-1的表达也显著减少。结论 LEF抑制了糖尿病大鼠MCP-1的表达,延缓了肾小球硬化、肾间质纤维化的进展。     

单核细胞趋化蛋白-1在糖尿病大鼠心肌中的表达及意义

目的：研究单核细胞趋化蛋白－1（MCP－1）在糖尿病大鼠心肌中的表达，探讨MCP－1和糖尿病心肌病变的关系。方法：将Wistar大鼠随机分为正常对照组（NC组）和糖尿病模型组（DM组），于8周时用免疫组织化学的方法检测两组大鼠心肌中MCP－1的表达。结果：8周时大鼠心肌中MCP－1的表达DM组明显高于NC组（P＜0．01），甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL－C）DM组明显高于NC组（P＜0．01）。结论：MCP－1的表达和糖尿病心肌病变密切相关。     

肾小球系膜细胞的JNK/SAPK活性及其对ICAM-1表达的调控研究

目的　检测体外培养的系膜增生性肾小球肾炎 (MSPGN)肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,并探讨其对细胞间粘附分子 1(ICAM- 1)的调控作用。方法　选取 6例正常人和 7例 MSPGN患者的肾组织 ,分别采用免疫沉淀和免疫印迹法检测体外培养的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性 ,RT- PCR检测 ICAM- 1m RNA表达 ,流式细胞仪检测细胞表面 ICAM- 1平均荧光强度。结果　在自发培养条件下 ,与正常对照组相比 ,MSPGN组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK明显增高 (P<0 .0 5 )。在 TNFα诱导下 ,两组肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK活性均有增加 ,但 MSPGN组仍高于正常对照组 (P<0 .0 5 )。经 TNFα诱导后 ,随着 JNK/ SAPK活性增强 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度也均增加 (P<0 .0 5 )。经蛋白激酶抑制剂 DMAP阻断后 ,随着 JNK/ SAPK活性下降 ,ICAM- 1m RNA及其平均荧光强度亦下降 (P<0 .0 1)。 MSPGN的 JNK/ SAPK活性与 ICAM- 1m RNA表达和ICAM- 1平均荧光强度呈正相关关系 (r=0 .6 94,P<0 .0 1)。结论　 MSPGN的肾小球系膜细胞的 JNK/ SAPK存在异常活化 ,这种异常活化可能介导了 ICAM- 1的过度表达。     

系膜细胞与糖尿病肾病及其微血管病理改变的研究进展

糖尿病肾病(DN)是糖尿病最主要的微血管并发症,也是导致慢性肾衰竭的主要原因之一,患病人数逐年上升。高血糖被认为是DN发病的始动因素,微循环障碍是DN典型的微血管病理改变。肾小球系膜细胞是肾小球内非常活跃的固有细胞,在其发病过程中具有重要的作用,若对其与DN微血管病理改变之间的关系进一步深入的研究,必将为DN发病机制的研究提供新的思路,为其新药的研制与开发提供新的动力。     

糖尿病大鼠肾内小动脉早期动脉粥样硬化的实验研究

目的:探讨糖尿病大鼠大血管发生动脉粥样硬化(AS)时,肾内小动脉上有无MCP-1、ICAM-1等早期促AS形成的细胞因子的表达。方法:建立链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠模型加高脂、高糖饲养,12周时处死大鼠,HE染色行大鼠主动脉、肾组织病理组织形态检查,免疫组化方法检测MCP-1、ICAM-1表达。结果:DM组血脂、血肌酐及尿蛋白较对照组明显增高。DM大鼠主动脉出现明显动脉粥样硬化改变,同时肾内小动脉上出现MCP-1、ICAM-1的表达,且与血肌酐、尿蛋白水平呈正相关。结论:糖尿病大鼠主动脉发生AS时,肾内小动脉上已有MCP-1、ICAM-1等早期促AS形成的细胞因子的表达,可能参与了糖尿病肾病的发生、发展。     

高糖浓度对人肾小球系膜细胞的作用

目的 模拟相血糖控制不佳出现的糖浓度波动,研究波动性细胞外高糖浓度（ＦＥＨＧ）对肾小球系膜细胞（ＭｓＣ）增殖及其纤维连接蛋白合成的影响。方法 利用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法和竞争抑制ＥＬＩＳＡ法动态观察不同葡萄糖浓度及波动性高糖浓度对ＭｓＣ增殖和ＦＮ合成的作用。结果 高糖浓度抑制ＭｓＣ增殖,此抑制作用和糖浓度成正相关,同时刺激ＭｓＣ的ＦＮ合成增加;