不同人群抗SARS冠状病毒特异性抗体血清学检测与分析

目的 :探索不同人群中抗SARS冠状病毒特异性抗体的发生、发展及分布规律 ;评价间接ELISA方法检测SARS冠状病毒IgG、IgM特异性抗体试剂盒及改进方法。 方法 :分别获取SARS流行前无偿献血者标本 3990份 ,一线抗SARS医务人员标本 397份和临床确诊的SARS患者标本 15 7份 ,采用ELISA方法进行SARS冠状病毒特异性抗体检测。结果 :SARS流行前无偿献血者标本 3990份共检出IgG抗体阳性标本 16份 ,阳性率为 0 .4 0 % ;IgM抗体阳性标本 0份 ,阳性率为 0 %。一线抗SARS医务人员标本 397份 ,共检出IgG抗体阳性标本 2份 ,阳性率为 0 .5 0 % ;IgM抗体均为阴性。临床确诊的SARS患者标本 15 7份 ,共检出IgG抗体阳性标本 119份 ,阳性率为 75 .79% ;IgM阳性标本 6 8份 ,阳性率为 4 3.31%。结论 :一线抗SARS医务人员与SARS流行前无偿献血者IgG、IgM抗体阳性率无显著差异 (P =0 .76 >0 .0 5 ) ;采用该SARS冠状病毒 (变异株 )IgG抗体试剂盒检测SARS流行前无偿献血者人群存在一定的阳性率 ,说明该试剂盒包被的抗原与其它免疫球蛋白 (IgG)有交叉反应 ,有待进一步改进     

儿童SARS血清流行病学调查及其依从性初步分析

目的①了解儿童严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome , SARS)患者SARS相关冠状病毒(SARS-CoV)特异抗体水平;初步调查与成人SARS患者密切接触的儿童及与SARS患儿密切接触的家长中隐性感染情况.②了解本次血清流行病调查的依从性.方法①对开展本研究中的电话联系过程及结果予以记录和分析.②入户收集流行病学资料和采集标本.③采用间接免疫荧光(IFA)方法对北京市24例恢复期儿童SARS患者;与SARS成人患者密切接触的30名儿童和与上述SARS患儿密切接触的29位家长进行血清SARS-CoV 特异IgG检测.结果①在试图联系的527户家庭中,共与431个家庭进行了有效通话,其中191户因不符合条件被排除研究;176户拒绝参加本项研究; 在193个符合条件的家庭中,最终64户同意纳入研究(33.2%).②儿童SARS患儿血清SARS-CoV-IgG阳性者10例(42%).③儿童患者抗体阳性组中有明确SARS接触史的患儿所占比例为8/10,而在抗体阴性组的比例为1/14(P<0.05).④与成人SARS患者接触的儿童标本中1份SARS-CoV-IgG阳性(1/30,3%); SARS患儿的家长中一位(患儿的祖母) SARS-CoV-IgG为阳性(1/29,3%),该患儿的祖父为SARS患者.结论①本次儿童SARS血清流行病调查依从性较低.②临床诊断为SARS的患儿中有42%经血清学证实为SARS-CoV感染.③有SARS接触史的患儿在抗体阳性组的比例较之在抗体阴性组的比例明显增高.④在与成人SARS患者密切接触的儿童和成人中可能存在隐性感染.未能证实与儿童SARS患儿接触的成人中存在隐性感染.     

湖南省不同人群SARS冠状病毒抗体血清流行病学研究

目的通过开展高暴露人群、本地健康人群及从SARS流行地区返湘的流动人群的SARS血清流行病学调查，了解他们感染SARS冠状病毒的状况，阐明我省SARS流行和波及的范围，为今后的科学防治提供依据。方法于2003年5—8月选择病例的家庭密切接触者、接诊SARS确诊病例的医务人员、各级疾病预防控制机构现场处置工作人员、果子狸等野生动物接触人员、5个县健康人群及SARS流行期间从流行地区返湘的流动人群为调查对象，采集调查对象的血清标本，用ELISA法检测SARS冠状病毒IgG抗体。结果共检测血清标本805份，SARS冠状病毒抗体阳性率为0．50％，其中以家庭密切接触者的阳性率最高，为8．70％，其次流动人群的阳性率为0．65％，其他人群的阳性率均为0。结论家庭密切接触者的SARS冠状病毒抗体阳性率显著高于其他人群，支持近距离飞沫传播和密切接触是SARS的主要传播途径；我省不同人群SARS冠状病毒抗体阳性率均低于广东的报道，且医务人员、疾控人员及健康人群的SARS冠状病毒抗体阳性率均为0，证实SARS在传人我省后，及时得到有效控制，未造成流行和波及其他人群；野生动物接触人员的SARS冠状病毒抗体阳性率为0，说明目前还没有证据显示我省野生动物携带SARS冠状病毒。     

儿童SARS病毒抗体回顾检测及其意义

目的 探索儿童非典型肺炎(SARS)发病率低，症状轻的原因。方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)，对2001年及2000年4—5月间在首都儿科研究所就诊的儿童血清标本进行SAILS病毒抗体检测。结果 77份2001年儿童血清标本SARS抗体阳性率为41．56％；92份2000年4—5月儿童血清标本SAILS抗体阳性率为40．22％；结论 在非SAK5儿童中存在SARS抗体，且随年龄的增长抗体阳性率呈下降趋势。     

SPA-ELISA检测棕果蝠血清冠状病毒抗体的研究

目的 建立一种敏感、简便的检测蝙蝠血清冠状病毒抗体的方法.方法 利用葡萄球菌A蛋白(SPA)能够与某些哺乳动物IgG抗体Fc段非特异性结合的特点,对市售人冠状病毒抗体ELISA试剂盒进行改造,建立SPA-ELISA法,使其适用于蝙蝠血清冠状病毒抗体的检测,并对采集到的55份棕果蝠血清冠状病毒抗体进行检测.结果 用SPA-ELISA方法对人冠状病毒试剂盒中阳性与阴性对照、SARS病人恢复期血清、空白对照的检测都得到理想的结果,并从55份棕果蝠血清中检测出2例阳性,阳性率为3.64％(2/55),中和试验进一步证实了结果的真实性.结论 所建立的方式适用于检测棕果蝠血清冠状病毒抗体.     

严重急性呼吸综合征病毒基因检测和特异性抗体检测的诊断意义分析

目的探讨严重急性呼吸综合征病毒基因检测和特异性抗体检测的诊断意义和价值。方法采用巢式反转录PCR和ELISA法分别检测健康人、普通发热患者、SARS密切接触医务人员及不同时期SARS患者痰标本中SARS病毒核酸和血清标本中特异性抗体IgG和IgM。结果SARS患者住院1～58d期间,采用巢式RT-PCR检测痰SARS病毒基因,52例患者中33例阳性,阳性率63.5%;而采用间接ELISA检测血清抗SARS病毒抗体,52例患者中30例阳性,阳性率为57.7%。2种方法均阳性的有15例,均阴性的有6例。2种病原学诊断方法检测20例正常人、15例发热非SARS患者和20例SARS密切接触医务人员,结果均为阴性。住院1～13d组(92.9%)巢式RT-PCR基因阳性率明显高于ELISA特异性抗体阳性率(7.1%);住院37～58d组巢式RT-PCR基因阳性率(47.4%)则明显低于ELISA特异性抗体阳性率(94.7%)(P<0.01)。结论痰中SARS病毒基因检测可用于SARS的早期诊断,这对于提前确诊和治疗SARS患者,尽早排除疑似病例具有非常关键和现实的意义。血清特异性抗体检测可用于流行病学调查,但对SARS早期诊断和鉴别没有意义。     

针对SARS患者的特异性抗体检测结果不容乐观

为了探讨SARS患者体内抗SARS冠状病毒抗体的产生和变化规律，北京佑安医院采用经国家食品药品监督管理局（SDA）审批的，由中国医学科学院，军事医学科学院和北京华大基因工程有限公司共同开发研制的抗SARS冠状病毒抗体检测试剂盒（ELISA试剂盒），对75例住院SARS患者的390份血清标本进行了IgM抗体和IgG抗体的检测。     

临床诊断的SARS患者鼻咽拭子采集、SARS冠状病毒分离及鉴定

目的 从临床诊断的严重急性呼吸综合征(severe aeute respiratory syndrome,SARS)患者鼻咽拭子标本分离并鉴定SARS冠状病毒。方法 SARS患者鼻咽拭子标本接种于含Veto及MRC-5单层细胞的24孔培养板中。分离物使用血清学方法、电镜及基因测序进行鉴定。结果 2003年4月-5月北京协和医院共采集79例临床诊断SARS患者的158份鼻咽拭子标本。3例接种Veto细胞孔的鼻拭子标本发现细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)。用分离物感染细胞做为抗原,免疫荧光血清学发现SARS患者急性期和恢复期血清标本存在SARS冠状病毒抗体(IgG和IgM)阳转和／或4倍及以上升高。分离物上清液负染电镜观察到冠状病毒。基因测序证实3株分离物是SARS冠状病毒。结论3株自79例SARS患者鼻咽拭子标本的病毒分离物是SARS冠状病毒。     

SARS病毒抗体效价测定方法的建立及应用

目的 :建立抗SARSIgG和IgM抗体效价定量测定方法。方法 :①在SARS冠状病毒抗体IgG诊断试剂盒和IgM诊断试剂盒的基础上 ,通过选择IgG、IgM标准血清样本 ,作系列稀释 ,建立效价和吸光度标准曲线 ,采用电子表格获得最佳拟合方程式 ,应用于标本血清效价计算。②应用该方法测定 80例康复期SARS患者血清SARSIgG、IgM抗体及其效价。 结果 :①取得了良好的拟合方程式 ,R2 均可大于 0 .99。② 80名康复期SARS住院患者血清中SARS病毒IgG抗体 6 1名阳性 ,效价为 31.9± 4 0 .0 (1.1～ 2 6 4 .0 ) ,偏度系数为 3.6 77;19例阴性。 80名康复期SARS住院患者血清SARS病毒IgM抗体 19名阳性 ,效价为 2 .5 9± 1.35 (1.1～ 5 .5 ) ,偏度系数为 0 .92 7。结论 :①SARS冠状病毒抗体定性诊断试剂盒具有良好的敏感性和特异性 ,在选择IgG、IgM标准血清和采用电子表格得出相应的最佳拟合方程式后 ,可计算出患者血清SARS病毒抗体效价。②SARS病毒抗体阳性的康复期SARS患者血清中的SARSIgG抗体呈偏态分散分布 ,无明显规律可循     

20名医务人员感染SARS追踪报告

目的了解SARS在医务人员中感染状况、抗体检测、临床和预后等特点.方法对该院2月份感染SARS的20名医务人员的流行病学及临床资料进行回顾性分析及抗体检测、肺功能检查.结果20名医务人员感染者中,男4例,女16例;医生8例,护士12例,平均年龄(26.8±6.0)岁;医务人员感染SARS的潜伏期是1～13 d,常见潜伏期是2～6 d(14例),平均潜伏期(3.6±1.3)d,平均住院时间(26.1±11.5)d;该院一线工作人员231人,医务人员的感染率是8.7%(20/231),治愈率是100%,无一例死亡.由于消毒隔离防护措施得当,最近3个多月以来,该院未再有医务人员感染SARS.跟踪调查显示,20例医护人员预后良好,目前已全部恢复临床一线工作;19/20例(95.0%)肺功能检测完全恢复正常,1例通气功能轻度异常;抗体检测90.0%恢复期SARS抗体阳性,双份血清5/6例恢复期SARS抗体滴度升高,4/60例未感染一线人员抗体阳性.结论医务人员感染SARS的流行病学、临床特点与一般SARS患者基本相同,我院医务人员的SARS感染率较低,临床治愈率高,追踪3个多月大多预后良好.目前的SARS抗体检测可以诊断大部分SARS患者,SARS存在隐性感染的可能.     

三种特殊群体血清中SARS抗体检测分析

目的 了解新生儿、1～10岁儿童以及与SARS患者密切接触的医护人员血清中出现SARS病毒抗体的情况,并加以分析。方法 应用间接ELISA法,对15例新生儿、30例1～10岁儿童以及我院50例在SARS病房工作15天以上的医护人员的血清进行了SARS相关冠状病毒抗体IgM、IgG水平的检测。结果 15例新生儿以及50例医护人员中未检测到SARS抗体IgM、IgG,30例1～10岁儿童中,检测出3例SARS抗体IgG阳性,阳性率为10％,无一例SARS抗体IgM阳性。结论 我院一线医护人员中可能无SARS病者隐性感染者,儿童中SARS抗体IgG阳性率较高,这可能是此次SARS爆发中儿童感染率较低的原因之一。     

部分SARS冠状病毒感染的医护人员临床症状轻微

目的 明确是否存在症状轻微或无症状SARS冠状病毒感染者。方法 以SARS冠状病毒全病毒裂解液作抗原,利用ELISA技术检测血清中SARS冠状病毒抗体,调查具有明显传染特征和呼吸道症状的SARS患者以及无明显临床症状表现的医务人员血清中SARS冠状病毒抗体的存在情况。结果 共调查SARS患者19例,血清中抗SARS冠状病毒抗体全部阳性;因工作需要与SARS患者或患者的血、尿、粪、痰等排泄物有接触的医务人员共200名,发现血清中抗SARS冠状病毒抗体阳性20例。结论 在部分无症状医务人员血清中存在低水平的抗SARS冠状病毒IgG抗体,SARS冠状病毒感染可仅引起轻微的症状,甚至可无临床表现。     

Human LINE1 endonuclease domain as a putative target of SARS- associated autoantibodies involved in the pathogenesis

Background Severe acute respiratory syndrome （SARS） is a disease with a mortality of 9.56%. Although SARS is etiologically linked to a new coronavirus （SARS-CoV） and functional cell receptor has been identified, the pathogenesis of the virus infection is largely unclear. Methods The clinical specimens were processed and analyzed using an indirect enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） in-house. Further investigations of target antigen included reviews of phage display technique, rapid amplification of cDNA ends （RACE） technique, protein expression and purification, Western blotting validation, serological and immunohistochemical staining in postmortem tissue. Results A type of medium or low titer anti-lung tissue antibodies were found in the sera of SARS patients at the early stage of the disease. Human long interspersed nuclear element 1 （LINE1） gene endonuclease （EN） domain protein was one of the target autoantigens and it was aberrantly expressed in the lung tissue of SARS patients. Anti-EN antibody was positive in the sera of 40.9% of SARS patients. Conclusions Human LINE1 endonuclease domain was identified as a putative target of SARS-associated autoantibodies, which were oresented in the serum of SARS oatients and may be involved in the pathogenesis of SARS.     

非SARS患儿体内SARS冠状病毒抗体的检测分析

目的探讨非急性重症呼吸综合征(SARS)患儿体内是否存有SARS冠状病毒相关抗体。方法采用国家药品生物制品检定所正式检定通过的2种SARS抗体诊断试剂(间接免疫荧光检测试剂和双抗原夹心ELISA试剂),对广州地区1 060例非SARS患儿血清样本进行检测。结果1 060例非SARS患儿血清样本,间接免疫荧光法检测IgM、IgG均为阴性。双抗原夹心ELISA法检测也仅有2例出现弱阳性。结论非SARS患儿体内并未存在SARS病毒相关抗体。     

非SARS患儿体内SARS冠状病毒抗体的检测分析

目的 探讨非急性重症呼吸综合征(SARS)患儿体内是否存有SARS冠状病毒相关抗体。方法采用国家药品生物制品检定所正式检定通过的2种SARS抗体诊断试剂(间接免疫荧光检测试剂和双抗原夹心ELISA试剂)，对广州地区l060例非SARS患儿血清样本进行检测。结果 1060例非SARS患儿血清样本，间接免疫荧光法检测IgM、IgG均为阴性。双抗原夹心ELISA法检测也仅有2例出现弱阳性。结论 非SAILS患儿体内并未存在SAILS病毒相关抗体。     

严重急性呼吸综合征康复期患者血清抗体、肺功能和影像学资料动态分析

目的对北京地区临床诊断的严重急性呼吸综合征(SARS)康复者出院后进行定期临床随访,动态观察SARS冠状病毒特异性IgG抗体、肺功能和肺部影像学的变化。方法383例SARS患者康复后1年内定期进行SARS冠状病毒特异性IgG抗体、肺功能和肺部影像学检查,合并有肺弥散功能异常的康复者定期进行肺功能和胸部影像学复查,动态观察肺功能的恢复情况。部分合并有骨关节疼痛的患者进行股骨头磁共振检查。结果383例中有311例SARS冠状病毒特异性IgG抗体为阳性(812%),1年内动态观察康复者血清特异性抗体有明显下降。特异性IgG抗体为阳性的康复者中有85例(273%)合并有弥散功能(DLCO)异常,67例合并有肺部影像学异常。其中40例DLCO异常的康复者1年内肺功能和肺部影像学动态观察均有不同程度改善。78例进行股骨头磁共振检查的康复者中18例发现股骨头缺血性坏死改变(231%)。结论临床诊断为SARS的康复者中可能有部分为误诊病例,SARSCoVIgG抗体水平在出院后1年内逐渐降低,合并有肺纤维化改变的SARS康复者在一定时期内可明显吸收和好转,部分康复者合并有股骨头缺血性坏死改变。     

The Immunity Induced by Recombinant Spike Proteins of SARS Coronavirus in Balb/c Mice

The immune effect of two recombinant protein fragments of spike protein in severe acute respiratory syndrome coronavirus (SARS CoV) was investigated in Balb/c mice. Two partial spike gene fragments S1 (322-1464 bp) and S2 (2170-2814 bp) of SARS coronavirus were amplified by RT-PCR, and cloned into pET-23a prokaryotic expression vector, then transformed into competent Escherichia E.coli BL21 (DE3)(pLysS) respectively. Recombinant proteins were expressed and puri- fied by Ni2 immobilized metal ion affinity chromatography. The purified proteins mixed with com- plete Freund adjuvant were injected into Balb/c mice three times at a two-week interval. High titer antibody was detected in the serum of immunized Balb/c mice, and mice immunized with S1 protein produced high titer IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3, while those immunized with S2 protein produced high titer IgG1, IgG2a, but lower titer IgG2b and IgG3. Serum IFN-γ concentration was increased significantly but the concentrations of IL-2, IL-4 and IL-10 had no significant change. And a marked increase was observed in the number of spleen CD8 T cells. The results showed that recombinant proteins of SARS coronavirus spike protein induced hormonal and cellular immune response in Balb/c mice.     

SARS病人SARS冠状病毒核壳抗原抗体的变化规律

OBJECTIVE: To assess serum antibody responses of patients with severe acute respiratory syndrome (SARS) to nucleocapsid (N) antigen of SARS-associated coronavirus. METHODS: The serum levels of IgM and IgG antibodies to N antigen were measured in 200 healthy blood donors and 13 SARS patients at different time points of acute and convalescent phases using indirect enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) with N fusion proteins of SARS-associated coronaviruses. RESULTS: The IgM positive critical value of 0.233 and IgG of 0.239 were selected as the threshold value for positive results that equals the product of 2.1 and the mean IgM and IgG levels of 200 healthy blood donors. In 13 patients with SARS, the antibody responses to N antigen were not detectable in the first week after the onset of symptoms. The IgM and IgG seroprotection rates were 83.3% and 66.7% respectively in the second week, both reaching 100% at the third week. IgM seroprotection rates was 61.5% in the second month, and 38.5% at third month. The IgG peaked one month after the onset and remained at high levels in the following 2 months. CONCLUSION: The antibody responses suggest that N protein of SARS is immunodominant and plays an important role in viral pathogenesis. This ELISA-based test for detecting anti- N antigen may be of significant value for SARS diagnosis.     

严重急性呼吸综合征相关抗体与激素应用的相关性及其临床意义

目的：探讨严重急性呼吸综合征(SARS)患者体内SARS相关抗体出现时间、抗体滴度与激素应用的相互关系及其可能的临床意义。方法：采集22例SARS患者(临床诊断)不同发病期及3例SARS密切接触者血清，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其中的SARS相关抗体，并对使用激素治疗的l7例SARS患者进行追踪检测。结果：多数SARS患者在发病后l-3d肺部未出现炎性病变征象前即可检测到SARS相关抗体；3例密切接触者SARS相关抗体也为阳性。l7例患者使用激素后SARS相关抗体滴度均有所下降，其中11例患者激素减至小剂量或停用后。有l0例患者SARS相关抗体滴度较前上升，l例继续下降。结论：SARS相关抗体滴度与激素应用具有相关性，该抗体与SARS患者病情及临床治疗的关系值得深入研究。