灵芝多糖肽对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽对人脐静脉内皮细胞(HU-VECs)氧化损伤的保护作用。方法原代培养人脐静脉内皮细胞,CD31免疫荧光法鉴定细胞。以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(6.125、12.5、25、50、100mg·mL-1),以CCK-8法检测细胞存活率;Hoechst333258检测细胞氧化损伤引起的凋亡;比色法检测Caspase-3活性变化;电镜检测细胞及细胞器形态学改变。结果灵芝多糖(6.125、12.5、25、50、100mg·mL-1)可减轻叔丁基氢过氧化物对HUVECs的氧化损伤,CCK-8检测灵芝多糖给药组,HUVEC细胞存活率增加。Hoechst33258检测给药组细胞凋亡数量较损伤组减少。比色法检测损伤组Caspase-3活性明显增高,给药组较损伤组减少。电镜可见灵芝多糖给药组减轻细胞器的氧化损伤,减少细胞凋亡。结论灵芝多糖肽(GLPP)对人脐静脉内皮细胞氧化损伤具有保护作用。     

狭鳕鱼皮胶原蛋白肽经由水通道蛋白质3信号分子对过氧化氢诱导的HaCaT细胞氧化损伤的保护作用（英文）

目的探讨狭鳕鱼皮胶原蛋白肽对H_2O_2诱导Ha Ca T细胞氧化损伤保护作用及分子作用机制。方法狭鳕鱼皮胶原蛋白肽50,100,200 mg·L~(-1)组预处理12 h后,加入300μmol·L~(-1)的H_2O_2培养12 h。采用酶生化法测定细胞上清液中过氧化氢酶(CAT),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),总超氧化物歧化酶(T-SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)的水平。Western蛋白印迹法检测细胞内水通道蛋白质3(AQP3)表达水平。结果与正常组相比,狭鳕鱼皮胶原蛋白肽浓度小于300 mg·L~(-1)时无细胞毒性。H_2O_2300μmol·L~(-1)组的细胞存活率降低到54.0%(P<0.01)。预先给狭鳕鱼皮胶原蛋白肽50,100,200 mg·L~(-1)组处理12 h使得细胞存活率相应增加到69.4%,79.4%和89.1%(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,狭鳕鱼皮胶原蛋白肽50,100,200 mg·L~(-1)组的CAT,GSH-Px,T-SOD和T-AOC含量提高,其中200 mg·L~(-1)组的CAT,GSH-Px,T-SOD和T-AOC含量相应升高了56.90%,48.68%,48.24%和71.43%(P<0.01)。与模型组相比,狭鳕鱼皮胶原蛋白肽200 mg·L~(-1)组AQP3表达量减少得最多,降低到67.1%(P<0.01)。结论狭鳕鱼皮胶原蛋白肽可保护H_2O_2诱导的氧化损伤,其机制可能与增强抗氧化能力和减少AQP3表达水平有关。     

鳕鱼皮胶原蛋白肽的抗酒精性胃溃疡作用

目的探究鳕鱼皮胶原蛋白及其酶解梯级多肽的抗酒精性胃溃疡作用。方法从鳕鱼皮中提取胶原蛋白并酶解成不同分子量段的胶原肽,采用酒精诱导大鼠急性胃溃疡模型,试验组灌胃给予不同剂量的胶原肽,检测胃溃疡指数、胃溃疡抑制率并对胃溃疡病灶部位进行组织学观察。结果与模型组相比,各受试物均能够降低大鼠胃腺的出血损伤。低分子量胶原肽与高分子量胶原肽都能显著降低胃溃疡指数,胃溃疡抑制率分别为46.98%和46.46%(P<0.05);高剂量的胶原蛋白与中分子量胶原肽能极显著降低胃溃疡指数,胃溃疡抑制率分别为57.16%和65.16%(P<0.01)。结论鱼皮胶原蛋白及其酶解梯级多肽能够明显降低大鼠胃溃疡出血和溃疡指数,具有良好的抗酒精性胃溃疡作用。     

鳕鱼皮胶原蛋白肽的促钙吸收作用

目的探究鳕鱼皮胶原蛋白酶解制得梯级多肽的促钙吸收作用。方法从鳕鱼皮中提取胶原蛋白并酶解制得不同分子量段的胶原多肽,采用低钙饮食建造大鼠缺钙模型,检测大鼠骨钙含量、钙代谢指标和血清钙磷指标,探讨其促钙吸收作用。结果与加钙组相比,各受试物均能提高大鼠骨钙含量;高低剂量的高分子量胶原多肽能显著提高钙吸收率(P<0.05),高低剂量的低中分子量胶原多肽能极显著提高钙吸收率(P<0.01);而高低剂量的中分子量胶原多肽还能显著提高钙储留率(P<0.05),高低剂量的低分子量胶原多肽能极显著提高钙储留率(P<0.01);同时,各受试物也能相应的提高大鼠的血清钙磷含量。结论鳕鱼皮胶原蛋白多肽能明显提高大鼠对钙的吸收率和储留率,分子量越小,其促钙吸收效果越好。     

淫羊藿苷对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制

目的研究淫羊藿苷(Ica)对H_2O_2诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用及其机制。方法 H_2O_2诱导氧化损伤模型。药效学研究分为六组:空白组,模型组(750μmol·L-1 H2O2),Ica-L、M、H组(750μmol·L~(-1) H_2O_2+1×10-8、1×10-7、1×10-6mol·L~(-1)Ica)和溶媒组(0.1%DMSO)。Ica给药12 h后加入H_2O_2,Ica作用时间为24、36和48 h。Ica作用机制研究分为五组:空白组、模型组、Ica-H组、LY组(750μmol·L~(-1) H_2O_2+25μmol·L~(-1)LY294002)、Ica-H+LY组。LY294002为PI3K抑制剂,给予LY294002后2 h加入Ica,12 h后加入H_2O_2,Ica作用时间为48 h。MTT法检测细胞活力,ELISA检测细胞培养液中活性氧(ROS)的含量,显微镜观察细胞形态及存活细胞密度,Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜观察细胞凋亡率,Real time RT-PCR检测Bcl-2、Bax mRNA的表达,Western Blot检测p-Akt和Akt蛋白的表达。结果与空白组相比,模型组细胞活力降低(P<0.01),ROS分泌量和凋亡细胞增加(P<0.01);与模型组相比,Ica-L、M、H组均能提高细胞活力(P<0.01),降低细胞培养液中ROS的含量(P<0.05),其抑制率呈现时间和剂量依赖性。同时,Ica能明显降低细胞凋亡率(P<0.01),上调p-Akt蛋白和Bcl-2 m RNA的表达(P<0.05),下调Bax mRNA的表达(P<0.05);Ica的以上作用被LY294002拮抗。结论 Ica(1×10~(-8)-1×10-6 mol·L~(-1))对H_2O_2诱导的HUVEC氧化损伤有保护作用,能缓解氧化应激诱导的HUVEC凋亡,其机制与PI3K/Akt信号通路有关。     

黄芩茎叶总黄酮对高甘油三酯血清致人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究黄芩茎叶总黄酮(SSTF)对高甘油三酯(HTG)血清致人脐静脉内皮细胞(HUVEC)氧化损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养HUVEC,终浓度为100 mg.L-1、200 mg.L-1、400 mg.L-1的SSTF分别与HTG氧化损伤的HUVEC共同孵育16 h,通过检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞内活性氧(ROS)水平的变化,观察SSTF的保护作用,并通过RT-PCR法检测NADPH氧化酶4(NOX4)mRNA表达,Western blot法检测NOX4蛋白表达。结果各浓度组的SSTF均可明显升高HTG氧化损伤的HUVEC的SOD活性,明显降低MDA含量,减少HUVEC内ROS水平,下调NOX4mRNA表达和蛋白表达(P<0.01)。结论 SSTF对HTG致HUVEC氧化损伤具有保护作用,其可能通过抑制NADPH氧化酶表达进而减少ROS的生成来发挥它的抗氧化作用。     

齐墩果酸对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的保护作用北大核心CSCD

目的复制氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤模型,研究齐墩果酸(OA)经激活剂蛋白-1(AP-1)/对氧磷酶-2(PON2)/活性氧(ROS)信号通路对该模型的保护作用。方法转染前,将HUVECs随机分为5组:对照组,模型组(100μg·m L-1ox-LDL),低、中、高剂量实验组(10,20,40μmol·L-1OA+100μg·m L-1ox-LDL),将AP-1抑制剂加入对照组细胞及高剂量实验组细胞中,分别命名为AP-1抑制剂组和高剂量OA+AP-1抑制剂组。将对照质粒和PON2激活质粒分别转染至HUVECs,分别命名为转染组-1和转染组-2,未经处理的细胞为对照组。蛋白质印迹法(Western Blot)检测c-jun、PON2蛋白表达;2’,7’-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针标记法检测细胞内ROS含量。结果对照组,模型组,低、中、高剂量实验组中c-jun蛋白相对表达量分别为1.03±0.21,1.57±0.34,1.21±0.32,1.17±0.44,0.79±0.35,PON2蛋白相对表达量分别为1.12±0.27,0.62±0.37,0.74±0.33,0.88±0.35,0.94±0.42,ROS在490/525nm处相对荧光强度分别为1.00±0.22,2.22±0.25,1.76±0.32,1.57±0.36,1.49±0.28。低、中、高剂量实验组分别与对照组和模型组比较,差别均有统计学意义(P<0.05)。结论OA能够保护ox-LDL氧化损伤的HUVECs,其保护机制与降低AP-1活性、提高PON2活性、降低ROS含量有关。     

灵芝多糖肽对ECV304细胞氧化损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽对ECV304氧化损伤的保护作用。方法培养ECV304细胞,以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1),以MTT法测细胞存活率;以光镜、电镜检测细胞形态学改变及线粒体损伤;用AnnexinV/PI双标记细胞,流式细胞检测细胞凋亡的百分率。结果灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1)可减少叔丁基氢过氧化物对ECV304的氧化损伤,MTT检测灵芝多糖给药组,ECV304细胞存活率增加。光镜下可见细胞损伤减少,电镜可见灵芝多糖(50mg.L-1,温育24h)减轻细胞器如线粒体氧化损伤,减少细胞凋亡。细胞流式检测表明:对照组、给药组、损伤组总凋亡百分率分别2.24%±0.43%、24%±6.4%(P<0.01)、82.1%±7.9%。结论灵芝多糖肽(GLPP)对ECV304细胞氧化损伤具有保护作用。     

丹酚酸A对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的研究丹酚酸A对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的保护作用。方法采用过氧化氢(H2O2)诱导的HUVECs氧化损伤模型,观察丹酚酸A(10,20和40μg·mL-1)对血管内皮细胞损伤的保护作用,MTT法检测细胞存活率,试剂盒检测细胞上清液中的超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮(NO),比色法测定Caspase-3的活性。结果丹酚酸A可抑制H2O2诱导的血管内皮细胞的凋亡,同时增加SOD的活性,降低MDA的水平,减少LDH的漏出量,增加NO的释放,降低Caspase-3的活性。且丹酚酸A的上述作用均呈质量浓度依赖性。结论丹酚酸A可以有效保护内皮细胞免受氧化损伤。     

同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞氧化损伤的研究

目的探讨同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉血管平滑肌细胞（VSMCs）氧化损伤的作用及机制。方法用含不同剂量Hcy（50～1000μmol/L）的培养基培养VSMCs24h后,以分光光度比色法分别测定细胞内丙二醛（MDA）含量和超氧化物酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力的改变。结果随Hcy浓度增加,VSMCs内MDA的含量明显增加,SOD和CAT的活力也显著升高。Hcy明显促进了VSMCs的氧化。结论Hcy可直接诱导VSMCs的氧化损伤。     

过氧化氢诱导肺微血管内皮损伤的实验研究

目的　探讨H2 O2 诱导培养肺微血管内皮细胞损伤的机制。方法　观察H2 O2 对大鼠肺微血管内皮细胞 (RP MVEC)的形态、单层通透性、F 肌动蛋白和 β AR的影响。结果　H2 O2 浓度大于 1mmol·L-1作用 48h内观察到细胞脱落和破裂。 10mmol·L-1H2 O2 90min内可使RPMVEC单层通透性增高、F 肌动蛋白发生明显解聚和 β AR显著下调 ;FOR、山莨菪碱和CTX可抑制上述变化。结论　H2 O2引起的RPMVEC脱落与破裂呈浓度和时间依赖性。H2 O2引起RPMVEC单层通透性增高的机制与F 肌动蛋白解聚密切相关 ;β AR参与内皮通透性调节。FOR、山莨菪碱和CTX对H2 O2 引起RPMVEC单层通透性增高有一定的保护作用。     

诱导血红素氧化酶表达对乙醇所致人原代肝细胞氧化损伤的保护作用

目的　探讨乙醇暴露与诱导血红素氧化酶(HO 1)表达之间的关系。方法　经体外灌流、分离培养人原代肝细胞 ,观察 10 0mmol·L- 1乙醇暴露 9h后谷胱甘肽 (GSH) ,谷草转氨酶 (GOT) ,乳酸脱氢酶 (LDH)和丙二醛 (MDA)的变化以反应人原代肝细胞的氧化损伤 ,用RT PCR及Western印迹方法检测乙醇对人原代肝细胞HO 1mRNA及蛋白表达的影响。结果 10 0mmol·L- 1乙醇暴露 9h后可导致人原代肝细胞明显的氧化损伤 ,肝细胞中的GSH明显降低 ,而MDA明显升高 ,GOT和LDH ,此外 ,急性乙醇暴露下 ,HO 1表达开始应激升高 ,随后慢慢降低 ,肝细胞经HO 1诱导剂预处理后再与乙醇作用 ,能减轻乙醇对肝细胞的氧化损伤作用 ,并且这种作用可被HO 1抑制剂所抵消。结论　诱导HO 1对乙醇所致人原代肝细胞的氧化损伤有保护作用。     

蜕皮甾酮对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的：研究一种植物成分——蜕皮甾酮（ＥＤＳ）是否能影响人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）增殖。方法：采用血管内皮细胞（ＶＥＣ）体外培养的方法，以ＭＴＴ法及流式细胞术观察细胞增殖的情况。结果：（１）ＤＥＳ能够影响ＨＵＶＥＣ代谢ＭＴＴ；（２）ＤＥＳ的浓度对ＨＵＶＥＣ的ＭＴＴ代谢物—ｆｏｒｍａｚａｎ的生成量有影响：在２５～４００ｍｇ·Ｌ－１，ＥＤＳ促进线粒体代谢ＭＴＴ、形成ｆｏｒｍａｚａｎ，并且在２００ｍｇ·Ｌ－１时可使ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量达到最高值；在８００ｍｇ·Ｌ－１以上浓度时，ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量减少，并低于正常培养的ＨＵＶＥＣ的ｆｏｒｍａｚａｎ的形成量。（３）在２００ｍｇ·Ｌ－１时，流式细胞术显示，ＥＤＳ能够影响ＨＵＶＥＣ的细胞周期：ＥＤＳ可促进ＨＵＶＥＣ由静止期和（或）ＤＮＡ合成前期进入ＤＮＡ合成期、由ＤＮＡ合成期进入ＤＮＡ合成后期和（或）分裂期。结论：ＥＤＳ能够刺激ＶＥＣ分裂、增殖，并且ＶＥＣ的增殖状况与ＥＤＳ的浓度有关。     

3种不同方式提取鳕鱼鱼鳔胶原蛋白与胶原蛋白肽的基本特性研究

目的 研究三种不同提取方式所制备的大西洋鳕鱼（Gadus macrocephalus）鱼鳔胶原蛋白的基本特性。方法 采用低温酸溶提取酸溶性胶原蛋白(acid-soluble collagen, ASC),热水抽提明胶(gelatin, GEL),复合蛋白酶酶解制备鳕鱼鱼鳔肽(swim bladder peptides, SWP)对鳕鱼鱼鳔中胶原蛋白的特性进行研究。对提取的胶原蛋白进行感官评定、SDS-PAGE电泳分析、紫外光谱分析、傅里叶红外光谱分析、氨基酸组成分析与扫描电镜分析。结果 ASC、GEL与SWP三种胶原蛋白的提取率分别为42.15%、72.20%与89.11%,且羟脯氨酸的含量为8.73%、8.97%与7.94%;SDS-PAGE图谱显示ASC至少由两条α链与一条β链组成,GEL中存在少量的α链与β链,SWP种α链与β链被降解。紫外光谱结果显示三种蛋白在230 nm波长处均有最大吸收;扫描电镜结果显示ASC与GEL具有一定的交联结构,SWP中无交联结构存在。结论 三种不同提取方式制备的胶原蛋白具有不同的特性,为鳕鱼鱼鳔胶原蛋白的开发与应用拓宽了领域。     

蟛蜞菊内酯通过PI3K/Akt/mTOR信号通路对人脐静脉内皮细胞氧化损伤的影响

目的 研究蟛蜞菊内酯(WEL)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)炎症损伤的保护作用及其分子机制。方法 建立过氧化氢(H₂O₂)诱导HUVECs氧化应激损伤模型,给予200μmol·L^-1H₂O₂处理24 h。实验分组：正常对照组、二甲亚砜(DMSO)组、H₂O₂组、WEL组(20μmol·L^-1)。通过噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞内活性氧(ROS)水平,荧光显微镜观察各分组细胞p62蛋白表达情况。Western blotting测定细胞中mTOR、p-mTOR、PI3K、p-PI3K、SOD1等蛋白表达水平。结果 与H₂O₂组比较,WEL组HUVECs细胞存活率升高(P<0.01),细胞内ROS减少,SOD1表达增强,自噬体膜上p62蛋白聚集增多;与H₂O₂损伤组相比,WEL能明显增加损伤后H...     

鱿鱼皮胶原蛋白水解肽抗氧化活性研究

目的探讨秘鲁鱿鱼(Dosidicus eschrichitiiSteenstrup)皮胶原蛋白多肽组分对自由基的清除作用以及水解产物的体内抗氧化作用,为鱿鱼加工废弃物的高值化利用探索一条新途径。方法采用化学发光法研究胶原蛋白活性多肽体外对超氧阴离子自由基(O2.-)和羟自由基(.OH)的清除作用,并筛选出体外清除自由基活性最好的组分;灌胃于D-半乳糖致衰老的模型小鼠,测定小鼠血液及皮肤中的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力和丙二醛(MDA)及羟脯氨酸(Hyp)含量。结果与结论鱿鱼皮胶原蛋白多肽分子量小于2000D组分对O2.-和.OH具有较好的清除效果,该活性多肽组分可以提高小鼠血液及皮肤中SOD和GSH-Px的活力,降低MDA含量,并能提高小鼠皮肤组织中Hyp的含量。     

淫羊藿苷对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究淫羊藿苷对过氧化氢所致血管内皮细胞损伤的影响。方法体外培养血管内皮细胞,淫羊藿苷预处理24h后,采用过氧化氢诱导氧化损伤模型,MTT法测定细胞活性,测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的释放、细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）的活力。结果淫羊藿苷能明显提高细胞存活率,增加细胞内SOD活性,降低培养液中LDH释放和细胞内MDA含量。结论淫羊藿苷对过氧化氢诱导的血管内皮细胞损伤有明显的保护作用,可能与其抗氧化有关。     

白藜芦醇对星形胶质细胞氧化损伤的保护作用

目的：探讨白藜芦醇( RES)对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化损伤的保护作用及其机制。方法星形胶质细胞传代培养,随机分为阴性对照组(以正常培养液培养),模型对照组(100μmol·L-1的过氧化氢作用12 h),RES小剂量组(20μmol·L-1 RES孵育24 h后,加入过氧化氢作用12 h)和RES大剂量组(40μmol·L-1 RES孵育24 h后,加入过氧化氢作用12 h),采用MTT比色法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Hochest33258染色观察凋亡细胞形态,比色法检测凋亡相关因子caspses-3及caspase-9的表达。结果 MTT结果显示5,10,20,40μmol·L-1 RES孵育24 h后细胞活性分别为(100.46±3.17)％,(101.33±3.14)％,(101.33±1.30)％,(99.67±2.62)％,与阴性对照组(98.33±2.13)％比较,差异无统计学意义(P>0.05)。表明RES对星形胶质细胞活性无影响。用20及40μmol·L-1 RES处理后,星形胶质细胞在过氧化氢作用12 h后引起损伤,其活性分别提高到(54.67±4.11)％和(70.33±2.61)％,与模型对照组比较,差异有统计学意义(t=3.59,7.13,P<0.01)。 RES可以抑制过氧化氢诱导的细胞活性的下降,流式细胞计数结果显示用20,40μmol·L-1RES处理后,星形胶质细胞凋亡率分别下降到(35.51±3.56)％和(14.12±3.19)％,与模型对照组(46.31±4.16)％比较,差异有统计学意义(t=4.26,6.33 P<0.01)。 Hochest33258染色结果显示RES可以抑制过氧化氢诱导的细胞凋亡。此外,RES还可以减少过氧化氢所致星形胶质细胞内caspses-3及caspase-9的表达,并且伴随RES作用时间的延长其表达量呈下降趋势。结论 RES通过抑制caspses-3及caspase-9的表达有效抑制了过氧化氢对星形胶质细胞的损伤,从而为其用于治疗中枢神经疾病提供实验依据。     

白花丹参对过氧化氢致人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用

目的研究白花丹参对过氧化氢（H2O2）所致人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）损失的保护作用。方法应用酶消化灌注法培养人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定;取对数生长期的细胞分组进行干预,应用形态学观察法和MTT法检测各组血管内皮细胞的活性。结果H2O2损伤模型组细胞损伤明显,经白花丹参高、中、低各剂量组的干预,受损情况均有较明显地改善,使细胞活性（OD值）增高。结论白花丹参对H2O2所致的HUVEC损伤具有保护作用。