热毒宁注射液抗甲型H1N1流感病毒作用机制研究

目的 研究热毒宁注射液体内抗甲型H1N1流感病毒的作用及其机制。方法 采用甲型H1N1流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠制备肺炎模型,观察热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠平均存活时间、存活率、肺指数、病毒载量及细胞因子的影响。结果 与模型组比较,热毒宁注射液显著提高病毒感染小鼠的存活率、延长小鼠平均存活时间（P＜0.05、0.01）;显著降低病毒感染小鼠肺指数、肺组织病毒载量（P＜0.05、0.01）;提高肺组织γ干扰素（IFN-γ）水平,降低白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平。结论 热毒宁注射液对甲型H1N1流感病毒感染小鼠具有一定的保护作用,其作用机制可能与提高IFN-γ水平,降低IL-6、TNF-α水平有关。     

滨蒿总黄酮对H1N1流感病毒感染的A549细胞先天免疫信号通路的影响＊

目的 探讨滨蒿总黄酮（Total flavonoids from Artemisia scoparia Waldst. et Kit.，ASTF）对抗流感病毒作用及H1N1流感病毒感染的人肺癌A549细胞先天免疫反应过程中起调控作用。方法 定量检测H1N1流感病毒致犬肾上皮MDCK细胞病变（Cytopathic effect， CPE）作用；用TRIzol提取总RNA，RT-qPCR检测ASTF对流感病毒相关信号通路的抗病毒效果，并用流式微球技术（Cytometric bead array， CBA）和ELISA检测ASTF对H1N1流感病毒感染的A549细胞分泌炎性细胞因子的影响。结果 ASTF在体外对H1N1流感病毒有一定抑制作用，可降低H1N1感染的A549细胞先天免疫通路中的RIG-I、AKT、P38、PI3K、STING、PKR和Viperin mRNA表达水平及炎性细胞因子IL-2、IL-6、IL-17A的分泌。结论 ASTF通过抑制胞内先天免疫信号通路RLRs、PI3K/AKT、P38 MAPK发挥免疫调节和抗炎作用，从而达到抗流感的效果。     

山西道地连翘体外抗甲型流感病毒活性的研究

目的比较分析不同产地连翘药材体外抗甲型流感病毒(H1N1)的活性。方法采用连翘药物对MDCK细胞毒性与抗甲型流感病毒活性实验,比较观察不同产地连翘药材对甲型流感病毒引起细胞病变效应(CPE)的抑制作用。结果山西产地连翘药材的选择指数(SI)范围:5.00~6.51,河南、河北、陕西连翘药材的选择指数(SI)范围:3.50~5.12,不同产地连翘药材在MDCK细胞中对甲型流感病毒均有不同程度的抑制作用。结论山西产地连翘药材抗甲型流感病毒的效果整体优于河南、河北、陕西。     

欧意清热解毒软胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒作用

目的 观察欧意清热解毒软胶囊抗甲型H1N1流感病毒作用,寻求有效的抗甲型H1N1流感病毒作用的中药方剂,为临床治疗甲型H1N1流感病毒感染提供理论依据.方法 观察甲型H1N1流感病毒感染MDCK细胞后引起的细胞病变效应(CPE),并用MTT法检细胞活性,采用治疗指数(TI)作为药物体外抗病毒效果的评价指标.以磷酸奥司他韦胶囊(达菲)作为阳性对照药物,从药物对病毒入侵细胞的阻断作用、直接灭活作用及增殖抑制作用3种方式检测欧意清热解毒软胶囊抗甲型H1N1流感病毒的效果.结果 清热解毒软胶囊可以明显抑制甲型H1N1流感病毒引起的细胞病变效应(CPE),对甲型H1N1流感病毒入侵细胞的阻断作用、直接灭活作用及增殖抑制作用的TI分别为(15.5±0.71),(0.55±0.07),(6.4±1.27);达菲3种作用方式的TI分别为(0.4±0.14),(1.88±0.29),(4.6±0.15).结论 与达菲组比较,清热解毒软胶囊体外具有明显的阻断甲型H1N1流感病毒入侵细胞作用(P＜0.01),其抗流感病毒主要机制可能是阻断病毒入侵细胞,对细胞具有保护作用.进一步的效果需要体内实验证实.     

麻黄汤体外抗甲型H1N1流感病毒作用及机制研究

为探讨麻黄汤体外抗甲型H1N1流感病毒的作用及可能机制,该研究以感染甲型H1N1流感病毒的狗肾(MDCK)细胞为载体,细胞病变(CPE)法测定甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株(A/PR8/34)对MDCK细胞的半数细胞培养物感染剂量(TCID_(50));采用阻断流感病毒侵入宿主细胞和抗流感病毒生物合成2种不同方式给药,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定麻黄汤体外抗甲型H1N1流感病毒的有效率(ER)、半数抑制浓度(EC_(50))和治疗指数(TI);并且通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测技术,分别在给药后24,48 h,考察麻黄汤对感染甲型H1N1流感病毒的MDCK细胞中病毒载量以及TLR4,TLR7,My D88,TRAF6 mRNA表达的影响。实验结果显示,甲型H1N1流感病毒对MDCK细胞的TCID50为1×10~(-4.32)/mL;2种给药方式抗流感病毒的EC50分别为4.92,1.59 g·L~(-1),TI分别为12.53,38.78,并且当质量浓度为5.00 g·L~(-1)时,麻黄汤抗流感病毒的ER分别为50.21%和98.41%,说明麻黄汤可以阻断流感病毒侵入宿主细胞,并可显著抑制流感病毒在细胞内的生物合成;同时,相比于病毒组,给药后24,48 h麻黄汤各剂量组的病毒载量表达均显著降低,高、中剂量组显著下调了细胞中TLR4,TLR7,My D88,TRAF6 mRNA的表达水平,从而表明麻黄汤发挥抗流感病毒的作用机制,可能与其抑制细胞内流感病毒的复制以及TLR4和TLR7信号通路中的相关基因有关。     

金银花、连翘对甲型H1N1流感免疫调节通路影响的生物信息学分析

目的:基于生物信息学方法分析金银花、连翘对甲型H1N1流感免疫调节通路的影响。方法:在台湾中医药资料库,Pub Chem及Gene公众网络平台数据库查找金银花、连翘的靶蛋白及甲型H1N1流感相关基因,运用生物信息软件对检索到的数据集进行分析,解读金银花、连翘单用和连用对甲型H1N1流感相关的免疫调节生物通路的影响。结果:金银花相关靶蛋白共16个,连翘相关靶蛋白共8个,甲型H1N1流感相关基因32个;生物信息分析发现金银花和连翘有各自作用的特异性的免疫调节通路;对于巨噬细胞中白介素-12信号的生成通路和白介素-8信号通路,二者作为药对使用后,代表药物靶蛋白与生物通路相联性的-log P大于单独使用金银花或连翘;金属蛋白酶家族(MMPs)参与了多数金银花特异性作用的通路,蛋白激酶C-α(PRKCA)参与了连翘特异作用的通路。结论:对于甲型H1N1流感相关的免疫通路,金银花和连翘有各自的调节特点,作为药对使用对对巨噬细胞中白介素-12信号的生成通路和白介素-8信号通路调节更有优势,MMPs和PRKCA可能是金银花和连翘分别作用于免疫通路的关键蛋白。     

射干止咳胶囊体内外抗甲型H1N1流感病毒作用初探

目的 初步探讨射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内外抗病毒作用。方法 通过细胞病变效应(cytopathic effect, CPE)结合MTT法考察射干止咳胶囊体外抑制甲型H1N1流感病毒活性的作用;采用小鼠滴鼻法感染甲型H1N1流感病毒为模型,观察射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的体内抗病毒作用。结果 体外抗病毒试验结果显示,射干止咳胶囊对甲型H1N1流感病毒的最高抑制率为11.86%,提示在攻毒剂量为100TCID₅₀的条件下,射干止咳胶囊在体外对甲型H1N1流感病毒的抑制作用不明显。小鼠滴鼻感染5LD₅₀的甲型H1N1流感病毒,射干止咳胶囊低、中、高剂量组小鼠的死亡率分别为30%、10%、30%,死亡保护率达50%、70%、50%,平均生存天数分别为13 d、14 d、13 d,说明各给药组对攻毒小鼠具有较好的死亡保护作用。结论 射干止咳胶囊体外抗甲型H1N1流感病毒的作用不显著,但射干止咳胶囊各剂量组对甲型H1N1流感病毒攻毒致小鼠死亡却具有明显的保护作用。     

抗病毒口服液防治甲型流感病毒感染的药效学研究

目的:观察抗病毒口服液对体内外感染甲型H1N1流感病毒模型的防治作用.方法:体内实验采用甲型H1N1流感病毒FM1及PR8株经滴鼻感染的70只ICR小鼠来制备肺炎模型,随机分为正常组,模型组,利巴韦林组,双黄连组,抗病毒口服液2倍量、1倍量、1/2倍量组,每组10只.经预防给药后,计算各组小鼠肺指数;经治疗给药后计算各组小鼠死亡率和平均存活时间.体外采用甲型H1N1流感病毒及H3N2病毒感染MDCK细胞致细胞病变CPE模型,经治疗给药后,计算半数抑制浓度(median inhibition concentration,IC50)及治疗指数(therapeutic index,TI).结果:体内实验中,抗病毒口服液各剂量组与模型组、正常组比较,能明显降低流感病毒感染后小鼠肺指数,降低死亡率,延长平均存活时间(P<0.05).体外感染实验中,抗病毒口服液给药后可明显降低病毒感染后细胞的病变情况.结论:抗病毒口服液对甲型H1N1流感病毒体内外感染有较好的治疗和预防作用.     

银花平感颗粒体内抗甲型H1N1流感病毒作用

为探讨银花平感颗粒(YHPG)体内抗甲型流感病毒A/PR/8/34(H1N1)作用及其对流感病毒感染小鼠免疫功能的影响,采用滴鼻感染ICR小鼠建立流感病毒肺炎模型,感染后第3天和第7天测定各组动物肺指数并观察肺组织病理变化;采用实时荧光定量RT-PCR和流式细胞技术,观察各组肺组织病毒载量以及外周血T细胞亚群(CD4⁺,CD8⁺,CD4⁺/CD8⁺)的变化。结果表明,YHPG(15,30 g·kg^-1)剂量组在感染后第3天和第7天均能显著降低流感病毒感染小鼠肺指数和肺组织病毒载量,减轻肺组织病理变化,同时还可显著提高外周血CD4⁺ T细胞水平和CD4⁺/CD8⁺比值,降低CD8⁺ T细胞水平。说明YHPG可抑制流感病毒复制、减轻流感病毒感染小鼠肺部损伤以及调节流感病毒小鼠免疫功能下降,对甲型H1N1流感病毒感染小鼠有一定的治疗作用。     

盐酸阿比朵尔胶囊抗甲型H1N1流感病毒的体外实验研究

 目的 评价盐酸阿比朵尔原料药、盐酸阿比朵尔胶囊（恩尔欣、奥司他韦胶囊（达菲对甲型流感病毒（H1N1的抑制效率,检验盐酸阿比朵尔胶囊替代奥司他韦胶囊用于流感治疗的可能性。方法 本实验以奥司他韦胶囊为阳性对照药物,采用细胞病变效应（CPE抑制法、噻唑蓝（MTT比色法和血凝滴度法对其抗甲型H1N1流感病毒的作用进行了观察。结果 盐酸阿比朵尔原料药、盐酸阿比朵尔胶囊、奥司他韦胶囊在安全浓度范围内,对100 TCID₅₀（病毒半数组织感染量的甲型H1N1流感病毒均有一定抑制作用,且呈明显量-效关系。其中盐酸阿比朵尔原料药抗病毒生物合成作用、对病毒直接杀伤作用和抗病毒吸附、穿入作用三种方式的治疗指数（TI分别为（3.08±0.34、（3.55±0.54、（3.26±0.32;盐酸阿比朵尔胶囊的分别为（3.12±0.40、（3.41±0.23、（4.20±0.43;奥司他韦胶囊的依次为（5.34±0.26、（1.19±0.16、（1.01±0.38。结论 盐酸阿比朵尔原料药、盐酸阿比朵尔胶囊在阻断流感病毒吸附、穿入作用和直接杀伤作用方面较奥司他韦胶囊效果好(P<0.01。奥司他韦胶囊的抗病毒生物合成作用较盐酸阿比朵尔和盐酸阿比朵尔胶囊强（P<0.01,因此盐酸阿比朵尔胶囊可以替代奥司他韦胶囊用于预防甲型H1N1流感病毒感染。     

银翘药对的药效学研究进展

目的:总结近年来银翘药对的药效学研究进展。方法:对金银花、连翘以及银翘药对的国内外相关文献进行归纳。结果:金银花和连翘作用相似,组成药对配伍后在抗炎、解热、抗病毒方面都具有协同作用。结论:以方剂的最小单位——药对为对象开展研究,对于揭示中医药的科学性是一条可取的研究捷径。     

双黄连冻干粉针剂不良反应的研究进展

双黄连冻干粉针剂由金银花、连翘、黄芩3味中药按一定比例提取精制而成,有较强的抗菌、抗病毒作用,临床应用取得良好的疗效,但同时双黄连注射剂引起的临床不良反应病例也日趋增多.作者总结了近年来双黄连冻干粉针不良反应物质基础的研究成果,为研究双黄连冻干粉针过敏反应机制、临床预防其过敏反应提供参考.     

基于偏最小二乘法对金银花抗流感病毒谱-效相关性模型的探讨

以金银花药材为研究对象,收集40批有代表性的金银花药材,分别测定其色谱指纹图谱和抗流感病毒的IC₅₀,再基于The Unscrambler 软件,运用偏最小二乘法对色谱指纹图谱数据和IC₅₀进行谱-效相关性分析,建立金银花药材抗流感病毒谱-效相关性评价模型,另取10批金银花药材对该模型进行适应性验证,以探讨基于偏最小二乘法建立金银花抗流感病毒谱-效相关性模型的适应性。研究结果得到,所建模型的校正集及交叉验证集的相关系数(R²) 分别为0.969 489,0.959 042,校正集及交叉验证集的均方根误差(RMSEC, RMSECV)分别为0.070 691,0.084 005;10批金银花药材的验证结果表明模型预测值和实测值的相对误差均在10%以内,其中80%相对误差在5%以内。结果表明,运用所建立的谱-效相关性模型可较好地通过金银花的指纹图谱数据评价其抗甲型流感病毒的生物活性。     

金银花、连翘对成纤维上皮细胞炎症反应模型的作用

目的研究金银花和连翘抗炎症反应作用。方法将金银花和连翘水煎液过滤除菌,与金黄色葡萄球菌滤过液混合添加到培养的上皮细胞培养基中复合培养,观察细胞的形态变化。结果加有金银花的炎性反应细胞模型细胞形态规整,生长旺盛,与对照组基本相同;加有连翘的炎症反应细胞模型细胞表现出炎症反应,随后出现大量的炎性细胞;加有金银花和连翘的炎症组细胞形态也规整,但较金银花组形态较差。结论金银花在体外具有很强的抗炎性反应作用,连翘在体外的抗炎性反应作用很弱。利用上皮细胞炎症模型研究中药的抗炎症反应是可行的,并为中药作用原理的研究奠定了基础。     

多指标综合评分法考察金银花连翘药对最佳提取工艺

目的:确定金银花连翘药对的最佳提取工艺。方法:以绿原酸、木犀草苷、槲皮素和连翘脂素为考察指标,采用综合评分法,对采用乙醇回流的提取时间、提取次数、溶剂浓度和用量进行考察。结果:金银花连翘药对的最佳提取工艺为8倍量60%乙醇提取3次,每次提取2 h。结论:本结果可为金银花连翘药对的提取工艺研究提供参考。     

银翘散及其拆方对流感病毒感染自然杀伤细胞活性的影响及转录组的比较分析

目的研究银翘散及其拆方(君药、臣药、佐药、使药)对流感病毒感染自然杀伤细胞活性及转录组的影响。方法以小鼠流感病毒PR8(A/Puerto Rico/8/1934,H1N1型)感染ICR小鼠制备肺炎模型,分为对照组、模型组和给药组,每组10只;银翘散、君药(金银花、连翘)、臣药(薄荷、牛蒡子、淡豆豉、荆芥穗)、佐药(桔梗、芦苇根、淡竹叶)和使药(甘草)、阳性药物利巴韦林分别ig模型小鼠5 d;第5天检测小鼠体质量、肺质量,计算肺质量抑制率;固定肺脏,观察病理学变化(HE染色)。以PR8病毒感染C57BL/6J小鼠制备肺炎模型,分为对照组、模型组和给药组,每组3只,上述药物分别ig5d,第5天摘取肺脏,制备白细胞悬液,采用流式细胞术检测自然杀伤(naturekiller,NK)细胞表面激活性受体Ly-49D和Ly-49H的含量,以及细胞毒性受体NKp46的含量。为了进一步探究药物与病毒感染NK细胞之间的互作关系,建立人流感病毒HK8(A/HongKong/8/68,H3N2型)感染人自然杀伤细胞系NK-92MI模型,比较银翘散及臣药对病毒感染NK细胞转录组作用的异同。结果银翘散及其拆方对PR8病毒感染引起的小鼠肺炎均有一定的抑制作用,抑制作用由强到弱为臣药>银翘散>使药>君药>佐药,其中臣药和银翘散组具有统计学差异(P<0.05)。银翘散及其拆方均能增加肺脏NK细胞激活性受体Ly-49D和Ly-49H的含量,其促进作用由强到弱为臣药>使药>银翘散>君药>佐药,其中银翘散、君药、臣药和使药组均具有统计学差异(P<0.05、0.01)。结合上述2个指标,臣药表现出与银翘散相似的药效特征,且略优于银翘散。对于PR8病毒感染小鼠肺脏NK细胞毒性受体NKp46的含量,臣药也表现出良好的诱导表达作用。HE染色显示,经臣药治疗的PR8病毒感染小鼠,其肺脏结构完好,肺泡和支气管腔内未出现炎症细胞和红细胞浸润。NK细胞转录组分析显示,臣药对于HK8病毒感染的NK细胞的作用位点,不仅囊括了银翘散的作用位点,而且比银翘散更为广泛。结论对于流感病毒感染小鼠,银翘散的拆方臣药表现出与银翘散全方相似的药效,且略优于银翘散,这可能与臣药对NK细胞活性的调节作用比银翘散更广泛有关。     

金银花、连翘药对配伍挥发油成分的GC-MS分析

目的 考察金银花、连翘药对配伍对挥发油化学成分的影响.方法 采用气-质联用系统对金银花、连翘药材以及药对配伍中的挥发油进行分析,评价配伍对挥发油成分及含量的影响.结果 采用GC-MS对金银花、连翘药材和药对挥发油的成分进行分析比较,发现金银花挥发油中检出的香叶醇、十四烷酸甲基酯、十六烷酸乙基酯、荧蒽、9,12,15-十八碳三烯酸甲基酯、亚油酸等成分和连翘挥发油中检出的樟脑烯、α-松油烯、紫苏醇、蒎烯、棕榈醛、β-水茴香萜等成分在药对挥发油中未检出,而相对于单煎所得的挥发油,药对挥发油中新增成分有柠檬烯、异长松叶烯、十九烷等.结论 金银花、连翘药对配伍对所提挥发油的成分和含量都有较大的影响.     

双黄连粉针剂指纹图谱中特征色谱峰的组成药味归属及定性

目的:进行双黄连粉针剂(金银花、黄芩、连翘)HPLC-PDA/ELSD指纹图谱中主要色谱峰的组成药味归属及部分特征峰的定性.方法:将双黄连粉针剂的HPLC-PDA/ELSD指纹图谱与各组成单味药的HPLC-PDA/ELSD指纹图谱进行比较分析,利用各峰的相对保留时间、PDA提供的各峰紫外光谱图(UV),以及部分对照品进行各峰的药味归属及定性.结果:将HPLC-PDA及HPLC-ELSD指纹图谱中的13个特征共有峰均进行了明确的药味来源归属,并确定了指纹图谱中的绿原酸、咖啡酸、黄芩苷和连翘苷等色谱峰.结论:可以利用指纹图谱技术进行中成药中主要成分的药味来源归属及部分特征峰的定性.     

单味中药抗流感病毒研究进展

流行性病毒感冒是由流感病毒感染引起的急性呼吸道传染病。我国有着丰富的中草药资源,中医药防治流行性感冒,价格低廉,效果明显,易于普及,有着广阔的发展前景。从古至今用中药治疗普通感冒、病毒性感冒或流行性感冒及退热疗效十分显著。许多中医药学者利用现代科学技术手段,结合传统的中医药基础理论,对具有抗流感病毒的单味中药作了较为深入的研究,提供了抗流行性感冒病毒的平台,取得了丰硕的成果,已筛选出了大批对流感病毒有效的中草药及其复方制剂。鉴于中药在抗流感病毒方面的优势,本研究以查阅文献方法为主,就目前单味中药的研究状况给予总结,主要包括具有直接抗流感病毒作用和间接抗流感病毒作用的中草药;直接抗流感病毒作用的中药以板蓝根、大青叶、金银花、连翘、鱼腥草等为代表药,间接抗流感病毒作用的中药以儿茶、栀子、柴胡、甘草等为代表,总结了其抗流感病毒活性成分及相应中药部位的研究及作用机制,借鉴目前的研究成果,希望对进一步深入研究有一定的指导意义。