微小RNA 761对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究微小RNA 761(miR-761)对人卵巢颗粒细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法取多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵巢颗粒细胞培养,随机分为3组,分别为miR-761 inhibitor组(转染miR-761抑制剂),miR-761 mimic组(转染miR-761模拟物),miR-NC组(转染阴性对照寡核苷酸)。用细胞计数法-8(CCK-8)实验检测转染细胞的增殖能力;用TUNEL实验检测转染细胞的凋亡能力;用蛋白质印迹(Western blot)法检测雌激素受体2(estrogen receptor 2,ESR2)的表达。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-761与ESR2之间的结合关系。结果miR-NC组、miR-761 mimic组和miR-761 inhibitor组的细胞存活率分别为(98.33±1.53)%,(121.23±3.74)%,(79.86±3.66)%;细胞凋亡率分别为(6.51±0.26)%,(4.41±0.24)%和(10.48±0.33)%;ESR2蛋白表达水平分别为1.05±0.03,0.74±0.08和3.90±0.28。以上指标,miR-NC组和miR-761 mimic组相比,miR-NC组和miR-761 inhibitor组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-761可与ESR2靶向结合。结论miR-761通过下调ESR2促进PCOS患者卵巢颗粒细胞增殖并抑制细胞凋亡。     

红车轴草总黄酮通过调控miR-99a-3p/CD36表达对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞的保护作用北大核心CSCD

目的研究红车轴草总黄酮对高糖诱导的大鼠胰岛β细胞损伤的影响,及其潜在的分子机制。方法本实验分为对照组,模型组,低、中、高剂量实验组,miR-NC组,miR-99a-3p组,anti-miR-NC,anti-miR-99a-3p组,模型+miR-NC组,模型+miR-99a-3p组,模型+si-NC组,模型+si-CD36组,高剂量实验+anti-miR-NC组和高剂量实验+anti-miR-99a-3p组。对照组给予5.5 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;模型组给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;低、中、高剂量实验组分别给予12.5,25.0和50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮和25 mmol·L^(-1)葡萄糖处置;miR-NC组、miR-99a-3p组、anti-miR-NC组、anti-miR-99a-3p组分别转染miR-NC、miR-99a-3p、anti-miR-NC、anti-miR-99a-3p;模型+miR-NC组、模型+miR-99a-3p组、模型+si-NC组、模型+si-CD36组均给予25 mmol·L^(-1)葡萄糖处理,并分别转染miR-NC、miR-99a-3p、si-NC、si-CD36;高剂量实验+anti-miR-NC组、高剂量实验+anti-miR-99a-3p组均给予50.0 mg·L^(-1)红车轴草总黄酮+25 mmol·L^(-1)葡萄糖,并分别转染anti-miR-NC或anti-miR-99a-3p。用流式细胞术测定细胞凋亡率,用定量实时聚合酶链反应检测细胞中miR-99a-3p和CD36 mRNA的表达水平。结果模型组INS-1细胞中CD36 mRNA(2.74±0.27 vs 1.01±0.08)和细胞凋亡率[(27.63±2.71)%vs(5.69±0.58)%]均较对照组显著升高,miR-99a-3p(0.38±0.03 vs 1.00±0.09)较对照组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型组比较,低、中、高剂量实验组的上述结果相反。模型+miR-99a-3p组的细胞凋亡率[(12.48±1.19)%vs(26.84±2.41)%]较模型+miR-NC组显著降低,miR-99a-3p表达量(0.79±0.07 vs 0.34±0.03)较模型+miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型+si-CD36组INS-1细胞中CD36 mRNA(1.35±0.12 vs 2.81±0.26)及细胞凋亡率[(13.54±1.32)%vs(25.87±2.52)%]均较模型+si-NC组显著降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高剂量实验+anti-miR-99a-3p组INS-1细胞中miR-99a-3p(0.43±0.14 vs 0.88±0.06)较高剂量实验+anti-miR-NC组显著降低,CD36 mRNA(2.51±0.22 vs 1.41±0.13)及细胞凋亡率[(20.45±2.03)%vs(10.56±1.02)%]均较高剂量实验+anti-miR-NC组显著升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论红车轴草总黄酮可能通过调控miR-99a-3p/CD36以减轻高糖对大鼠胰岛β细胞INS-1的损伤,进而抑制细胞的凋亡。     

长非编码RNA LINC00671对胰腺癌细胞Panc-1增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究长非编码RNA LINC00671(long non-coding RNA LINC00671)对胰腺癌细胞增殖与侵袭的调节作用及其可能的下游调控机制。方法取胰腺癌Panc-1细胞系随机分为pc-NC组、pc-LINC00671组、miR-NC组以及miR-221-5p mimic组。pc-NC组转染过表达空载质粒(pcDNA3.0-NC),pc-LINC00671组转染LINC00671过表达质粒(pcDNA-LINC00671),miR-NC组转染阴性对照寡核苷酸,miR-221-5p mimic组转染miR-221-5p模拟物。以实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)法检测组织或细胞中LINC00671以及miR-221-5p的表达。以细胞计数法(cell counting kit-8,CCK-8)检测各组细胞的细胞存活率,用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。结果LINC00671在胰腺癌组织及其相匹配的癌旁组织中的表达量分别为1.01±0.19和0.71±0.18,在人正常胰腺导管上皮细胞系(HPDE6-C7)和胰腺癌细胞系(Panc-1)中的表达量分别1.00±0.11和0.45±0.04,差异有统计学意义(P<0.05)。48 h时,pc-NC组和pc-LINC00671组的细胞存活率分别为(92.72±4.97)%和(78.09±6.08)%,miR-NC组和miR-211-5p mimic组的细胞存活率分别为(104.66±4.85)%和(126.01±11.24)%;72 h时,pc-NC组和pc-LINC00671组的细胞存活率分别为(92.29±6.53)%和(68.03±6.17)%,miR-NC组和miR-211-5p mimic组的细胞存活率分别为(102.68±3.09)%和(120.48±9.10)%;pc-NC组和pc-LINC00671组中侵袭细胞数目分别为61.67±3.40和36.67±4.50,miR-NC组和miR-221-5p mimic组中侵袭细胞数目分别为40.67±4.78和60.33±4.50;pc-NC组与pc-LINC00671组相比,miR-211-5p mimic组与miR-NC组相比,pc-LINC00671+miR-211-5p mimic组与pc-LINC00671组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在胰腺癌中,LINC00671可抑制胰腺癌细胞的增殖与侵袭,而miR-221-5p可促进胰腺癌细胞的增殖与侵袭,LINC00671可靶向miR-221-5p促进SOCS1的表达。     

微小RNA-143-3p对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究微小RNA-143-3p(microRNA-143-3p,miR-143-3p)通过调节基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP2)对胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭的影响。方法体外培养胶质瘤U87 MG细胞,并随机分为miR-NC组和miR-143-3p mimic组;miR-NC组为转染阴性对照寡核苷酸的U87 MG细胞,miR-143-3p mimic组为转染miR-143-3p模拟物的U87 MG细胞。以细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测胶质瘤U87 MG细胞存活率,以划痕实验检测胶质瘤U87 MG细胞迁移能力,以Transwell实验检测胶质瘤U87 MG细胞侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测胶质瘤U87 MG细胞中MMP2表达水平。结果48 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(94.33±7.59)%和(71.43±7.01)%;72 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(93.45±8.11)%和(68.31±6.51)%;miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞迁移率分别为(42.03±5.72)%和(21.33±1.98)%;细胞侵袭数目为62.09±8.35和41.46±6.27;MMP2的表达量分别为1.01±0.10和0.68±0.07;以上指标,miR-143-3p mimic组与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-143-3p通过MMP2抑制胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭。     

橄榄苦苷通过下调miR-720抑制卵巢癌细胞增殖并诱导其凋亡的研究

目的 探讨不同浓度的橄榄苦苷通过下调miR-720抑制卵巢癌细胞增殖并诱导其凋亡的作用。方法 将人卵巢癌细胞SKOV3分为对照组、实验组、实验+miR-NC组和实验+miR-720组。实验组用800μg·mL^-1橄榄苦苷培养液进行培养,对照组加入等量的培养液进行培养,实验+miR-NC组在实验组的基础上转染miR-NC,实验+miR-720组在实验组的基础上转染miR-720。通过细胞计数法-8(CCK-8)法测定SKOV3细胞活性;用流式细胞术检测SKOV3细胞的凋亡情况;用GEO2R分析GSE131790数据库中miRNA的排名情况;用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测SKOV3细胞中miR-720的表达情况。结果 对照组、实验组、实验+miR-NC组和实验+miR-720组的miR-720相对表达量分别为1.00±0.09,0.36±0.06,0.37±0.07和0.78±0.10,细胞存活率分别为(100.00±9.28)%,(51.72±9.15)%,(49.76±11.89)%和(79.32±12.09)%,凋亡率分别为(6.33±...     

miR-26a-1-3p调控XIAP促进滋养层细胞凋亡而引起复发性流产的研究

目的 探讨miR-26a-1-3p通过调节滋养层细胞凋亡引发复发性流产的分子调控机制。方法 体外培养人正常绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo,并将细胞随机分为miR-NC mimic组(转染miR-NC mimic)、miR-26a-1-3p mimic组(转染miR-26a-1-3p mimic)、miR-26a-1-3p mimic+pcDNA-NC组(转染miR-26a-1-3p mimic、pcDNA-NC)、miR-26a-1-3p mimic+pcDNA-XIAP组(转染miR-26a-1-3p mimic、pcDNA-XIAP)。用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、裂解的胱天蛋白酶-3(Cl-caspaes-3)、裂解的胱天蛋白酶-9(Cl-caspaes-9)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP);用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-26a-1-3p表达水平;用Transwell小室实验检测各组细胞侵袭能力;用双荧光素酶报告基因实验检测miR-2...     

microRNA-129-5p对脂多糖致小鼠肺上皮细胞损伤的影响北大核心CSCD

目的研究microRNA-129-5p(miR-129-5p)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺上皮细胞凋亡和自噬的影响。方法取小鼠肺上皮细胞MLE-12,分别转染miR-129-5p模拟物(设为miR-129-5p mi组)和阴性对照寡核苷酸(设为miR-NC组),随后用500 ng·mL^(-1)LPS处理MLE-12细胞。用细胞计数法-8(CCK-8)检测各组细胞的增殖能力;用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;用蛋白质印迹(Western blot)法检测各组细胞中自噬相关蛋白P62和Bec-lin-1的表达水平。结果miR-NC组和miR-129-5p mi组细胞在24 h的细胞存活率分别为(52.73±1.41)%,(68.70±3.55)%,在48 h的细胞存活率分别为(48.75±7.22)%,(69.24±3.05)%,在72 h的细胞存活率分别为(48.22±4.28)%,(65.61±2.53)%;细胞凋亡率分别为(28.46±2.51)%,(17.24±2.06)%;P62蛋白的表达水平分别为1.01±0.03和1.54±0.07,Beclin-1蛋白的表达水平分别为0.98±0.09和0.52±0.05,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论过表达miR-129-5p可显著促进LPS诱导小鼠肺上皮细胞MLE-12增殖,并抑制细胞凋亡和自噬,从而改善LPS诱导的急性肺损伤。     

lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制研究

目的：探讨lncRNA HOTAIR调控miR-206影响类风湿关节炎滑膜细胞增殖和凋亡的分子机制。方法：收集30例类风湿关节炎的滑膜组织；培养类风湿关节炎滑膜细胞MH7A，实验分为siNC组、si-HOTAIR组、miR-NC组、miR-206 mimic组、si-HOTAIR+NC inhibitor组、si-HOTAIR+miR-206 inhibitor组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测HOTAIR、miR-206表达水平。CCK-8法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测细胞CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达；双荧光素酶报告实验检测HOTAIR与miR-206靶向结合关系。结果：与健康对照组比较，类风湿关节炎患者HOTAIR表达水平明显上调，miR-206表达水平明显下调（P<0.05）。与si-NC组比较，si-HOTAIR组HOTAIR表达水平明显下调，细胞存活率明显下调，细胞凋亡率明显上调（P<0.05）。与miR-NC组比较，miR-206 mimic组miR-206表达水平明显上调，细胞存活率明显下...     

miR-146b-5p对脑缺血再灌注损伤细胞的影响北大核心CSCD

目的研究miR-146b-5p在脑缺血再灌注损伤(CIRI)中的作用和调控机制。方法建立神经元细胞PC12的糖-氧剥夺/再氧合(OGD/R)体外模型,并将细胞随机分为NC mimic组和miR-146b-5p mimic组。以细胞计数法检测细胞存活率;以酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-β(IL-β)含量;以试剂盒法检测活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;以双荧光素酶报告实验验证miR-146b-5p和硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)的结合关系;以蛋白质印迹法检测TXNIP蛋白表达。结果72 h时,NC mimic组和miR-146b-5p mimic组细胞存活率分别为(61.32±8.11)%和(81.45±9.34)%,TNF-α含量分别为(125.17±11.03)和(81.14±9.83)pg·m L^(-1),IL^(-1)β含量分别为(98.33±8.17)和(63.22±7.91)pg·m L^(-1),ROS含量分别为(45.67±3.98)和(35.20±3.01)U·m L^(-1),SOD含量分别为(30.11±2.99)和(51.08±6.75)U·m L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在脑缺血再灌注损伤中,miR-146b-5p靶向TXNIP促进细胞存活,抑制炎症反应和氧化应激改善脑缺血再灌注损伤。     

miR-144通过靶向TIGAR调控胃癌细胞增殖与凋亡及自噬的分子机制

目的研究miR-144对胃癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响和机制。方法将miR-144 mimics、mimics control分别转染胃癌细胞,依次标记为mimics-NC组、miR-144 mimics组。将miR-144 mimics分别与pcDNA3.1、pcDNA3.1-TIGAR共转染至胃癌细胞,依次标记为miR-144 mimics+NC组、miR-144 mimics+TIGAR组。正常培养的胃癌细胞标记为Control组。以噻唑蓝法检测细胞增殖,以流式细胞术测定细胞凋亡,以Western blot检测凋亡蛋白caspase-3和自噬蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达变化,以生物信息学软件预测miR-144的靶基因可能为TIGAR,利用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果 mimics-NC组和miR-144 mimics组的细胞增殖能力分别为0.36±0.05,0.20±0.02,细胞凋亡率分别为3.05±0.34,13.84±1.47,caspase-3表达水平分别为0.22±0.04,0.43±0.05, Beclin1分别为0.38±0.06,0.73±0.07,LC3Ⅱ分别为0.19±0.03,0.39±0.05,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-144 mimics+NC组和miR-144 mimics+TIGAR组的细胞增殖能力分别为0.21±0.04,0.32±0.03,细胞凋亡率分别为12.04±1.25,5.98±0.73,caspase-3表达水平分别为0.40±0.03,0.24±0.05,Beclin1分别为0.60±0.05,0.46±0.06,LC3Ⅱ分别为0.34±0.06,0.20±0.03,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miR-144靶向抑制TIGAR表达降低胃癌细胞增殖能力,并诱导胃癌细胞凋亡和自噬。     

MiR-497-5p对紫杉醇耐药乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨miR-497-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞的影响,并探讨其作用机制。方法取乳腺癌紫杉醇耐药细胞系MCF-7/紫杉醇。将MCF-7/紫杉醇细胞,分别转染miR-497-5p模拟物(miR-497-5p mimics组)、miR-497-5p模拟物阴性对照(miR-NC组)、miR-497-5p抑制剂(miR-497-5p inhibitor组)及miR-497-5p抑制剂阴性对照(NC组)。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-497-5p表达,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用蛋白质印迹(Western blot)法检测程序性死亡配体1(PD-L1)蛋白的表达。结果miR-497-5p在MCF-7/紫杉醇细胞中表达水平0.44±0.02,显著低于MCF-7细胞的0.73±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。转染48 h后miR-NC组、miR-497-5p mimics组、NC组及miR-497-5p inhibitors组细胞增殖抑制率分别为(19.67±2.08)%,(46.33±5.86)%,(17.33±1.53)%,(9.33±3.51)%;细胞凋亡率分别为(4.18±0.07)%,(16.37±1.10)%,(5.56±0.41)%和(2.44±0.13)%,以上指标,miR-NC组与miR-497-5p mimics组相比,NC组与miR-497-5p inhibitors组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-497-5p mimics组中PD-L1蛋白表达显著较miR-NC组低;miR-497-5p in-hibitor组中PD-L1蛋白表达显著较NC组高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论miR-497-5p通过调控PD-L1表达抑制乳腺癌紫杉醇耐药细胞增殖并促进细胞凋亡。     

miR-149-3p调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎性反应的影响

目的 探讨miR-149-3p通过调控JNK/p38 MAPK信号通路对髓核细胞凋亡、自噬和炎症反应的影响。方法 体外分离大鼠髓核细胞,用IL-1β浓度为10 ng/ml建立模型组,细胞分为Con组(空白对照)、IL-1β组(IL-1β处理)、IL-1β+miR-NC组(IL-1β处理,转染miR-NC)、IL-1β+miR-149-3p组(IL-1β处理,转染miR-149-3p)、IL-1β+miR-149-3p+Anisomycin组(IL-1β和通路激活剂Anisomycin处理,转染miR-149-3p)。采用qRT-PCR检测miR-149-3p相对表达水平;MTT、流式细胞术实验检测细胞增殖和凋亡;Western blot检测Bax、Bcl-2、Beclin 1、LC3II/LC3I、JNK/p38 MAPK信号通路相关蛋白表达;ELISA检测TNF-α、IL-6、IL-8表达水平。结果 IL-1β组内miR-149-3p相对表达量、细胞活性、Bcl-2蛋白表达明显低于Con组,凋亡率、Bax、Beclin 1、LC3II/LC3I蛋白表达、TNF-α、IL-6、IL-8...     

番茄碱通过AMPK/COX-2通路调控食管癌细胞凋亡的机制研究北大核心CSCD

目的探究番茄碱通过单磷酸腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/环氧合酶-2(COX-2)通路抑制食管癌凋亡的机制研究。方法将人食管癌EC9706细胞随机分为对照组、低剂量实验组、中剂量实验组、高剂量实验组、高剂量+抑制药组;对照组细胞不做处理,低、中、高剂量实验组细胞分别给予1.0、2.0和4.0μmol·L^(-1)的番茄碱处理细胞48 h,高剂量+抑制药组使用4.0μmol·L^(-1)番茄碱和10μmol·L^(-1)AMPK抑制药Dorsomorphin共同处理细胞48 h。用细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测细胞存活率;用流式细胞术和TUNEL法检测细胞凋亡情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞相关蛋白表达情况。结果对照组,低、中、高剂量实验组及高剂量+抑制药组细胞TUNEL阳性细胞率分别为(3.73±0.60)%、(12.48±1.05)%、(17.03±1.29)%、(33.04±2.25)%和(13.99±1.12)%,Ki67蛋白表达水平分别为0.98±0.09、0.79±0.07、0.59±0.09、0.33±0.03和0.71±0.07,胱天蛋白酶(Cl-caspase-3)蛋白表达水平分别为0.30±0.04、0.59±0.05、0.75±0.07、1.00±0.06和0.54±0.05,p-AMPK蛋白表达水平分别为0.28±0.05、0.56±0.06、0.73±0.04、1.09±0.10和0.69±0.04;COX-2蛋白表达水平分别为1.13±0.08、0.74±0.07、0.57±0.07、0.39±0.04和0.72±0.07。低、中、高剂量实验组上述指标与对照组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量+抑制药组上述指标与高剂量实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论番茄碱可通过激活AMPK/COX-2信号通路抑制食管癌细胞增殖、诱导凋亡。     

微小 RNA-335-3p靶向小鼠双微体基因调控骨髓瘤细胞的增殖和凋亡

目的 探讨微小RNA(miR)-335-3p对骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 2018年5月至2019年1月,培养正常骨髓细胞MNC和骨髓瘤细胞KM3和U266,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-335-3p表达水平.将KM3细胞分为miR-NC组(转染模拟对照序列)、miR-335-3p组[转染miR-335-3p模拟物(miR-335-3p mimics)]、pcDNA3.1+miR-335-3p组(共转染空载体和miR-335-3p mimics)和pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组[共转染小鼠双微体基因(MDM2)过表达载体和miR-335-3p mimics],MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡的影响,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(P21)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白和Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.双荧光素酶报告基因实验验证KM3细胞中miR-335-3p与MDM2调控关系.结果 骨髓瘤细胞KM3和U266中miR-335-3p表达水平分别为0.24±0.01、0.38±0.02,显著低于正常骨髓细胞MNC中的miR-335-3p表达水平0.77±0.03(均P<0.05).与miR-NC组比较,miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.60±0.03)比(0.99±0.06);72 h:(0.82±0.05)比(1.67±0.07)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均降低(均P<0.05),细胞凋亡率[(24.31±0.99)％比(8.13±0.83)％]、细胞中P21和Bax蛋白表达均升高(均P<0.05).miR-335-3p在KM3细胞中负调控MDM2表达.与pcDNA3.1+miR-335-3p组比较,pcDNA3.1-MDM2+miR-335-3p组KM3细胞吸光度[48 h:(0.80±0.05)比(0.63±0.04);72 h:(1.28±0.06)比(0.88±0.05)]、细胞中cyclin D1和Bcl-2蛋白表达均升高(均P<0.05),凋亡率[(15.34±0.66)％比(23.98±1.41)％]、细胞中P21、Bax蛋白表达均降低(均P<0.05).结论 miR-335-3p可能通过下调MDM2表达抑制骨髓瘤细胞的增殖,并诱导细胞凋亡.     

川芎嗪对子宫内膜异位症细胞侵袭和凋亡的影响北大核心CSCD

目的 探讨川芎嗪调控长链非编码RNA(lncRNA)UBOX5-AS1对子宫内膜异位症细胞侵袭、凋亡和基质金属蛋白酶9(MMP-9)/基质金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)信号通路的影响。方法 分离人子宫内膜异位症细胞,分成对照组、实验低剂量组(12μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验中剂量组(24μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量组(48μmol·L^(-1)川芎嗪处理)、实验高剂量+NC组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、阴性对照载体处理)、实验高剂量+UBOX5-AS1组(48μmol·L^(-1)川芎嗪、UBOX5-AS1过表达载体处理)。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测UBOX5-AS1表达,以细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞增殖情况,以流式细胞术测定细胞凋亡情况,以蛋白质印迹法检测B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)、上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、MMP-9、TIMP-3蛋白表达,以Transwell小室检测细胞侵袭。结果 对照组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、实验高剂量+NC组、实验高剂量+UBOX5-AS1组子宫内膜异位症细胞中UBOX5-AS1表达水平分别为1.00±0.07,0.84±0.14,0.67±0.05,0.45±0.06,0.44±0.06和0.92±0.09;细胞存活率分别为(100.00±4.38)%,(83.87±5.45)%,(68.86±2.85)%,(52.17±4.64)%,(51.15±3.54)%和(79.92±5.99)%;凋亡率分别为(2.41±0.27)%,(9.60±0.93)%,(14.89±1.15)%,(17.54±0.96)%,(17.27±1.71)%和(9.75±1.28)%;Bax蛋白表达水平分别为0.26±0.04,0.33±0.03,0.40±0.02,0.53±0.03,0.54±0.04和0.34±0.03;细胞侵袭数目分别为105.32±5.66,79.05±7.80,64.59±4.09,51.50±3.28,50.61±5.13和72.08±9.37;上述指标之间比较,实验低、中、高剂量组和对照组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验高剂量+UBOX5-AS1组与实验高剂量+NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 川芎嗪下调UBOX5-AS1抑制子宫内膜异位症细胞侵袭,诱导细胞凋亡,抑制MMP-9/TIMP-3信号激活。     

miR-187通过靶向胰岛素生长因子 -1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100和不同乳腺癌细胞中miR-187的表达水平.在MDA-MB-231细胞中分别转染miR-187 mimics(miR-187组)或阴性对照mimics-NC(miR-NC组),以未转染的MDA-MB-231细胞为空白对照(空白对照组).采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测转染后细胞中miR-187和IGF-1R蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况.Western blot检测与增殖和凋亡相关蛋白表达水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-187与IGF-1R靶向调控关系.结果 与人正常乳腺上皮细胞HBL-100(1.00±0.10)相比,乳腺癌细胞中miR-187表达水平明显降低(P<0.05),在MDA-MB-231细胞中表达水平最低(0.11±0.01).与miR-NC组和空白对照组相比,miR-187组的miR-187表达水平明显上调[(0.98±0.09)、(1.00±0.11)比(3.18±0.33),P<0.05],IGF-1R蛋白表达水平明显下调[(0.28±0.03)、(0.27±0.03)比(0.09±0.01),P<0.05],细胞增殖活力OD值[(0.79±0.08)、(0.82±0.08)比(0.43±0.04)]和PCNA表达水平[(0.39±0.04)、(0.40±0.04)比(0.20±0.02)]均显著降低(P<0.05),凋亡率[(5.02±1.13)％、(4.61±1.01)％比(20.38±3.44)％]和Cleaved Caspase-3表达水平[(0.09±0.02)、(0.08±0.02)比(0.58±0.07)]显著升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验显示miR-187与IGF-1R基因3'非编码区(UTR)存在靶向关系.结论 miR-187对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制与靶向抑制IGF-1R基因表达有关.     

银杏内酯B对MPP+诱导的帕金森病SH-SY5Y细胞模型中α-synuclein表达的影响北大核心CSCD

目的探讨银杏内酯B(ginkgolide B,GB)对1-甲基-4苯基-吡啶离子(N-methyl-4-phenylpyridiniumiodide,MPP^(+))诱导的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)SH-SY5Y细胞模型的α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)表达的影响和潜在的机制。方法将SH-SY5Y细胞分为溶媒(DMSO)对照组、MPP^(+)组(1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、MPP^(+)+GB组(用50μmol·L^(-1)的GB处理1 h后,再用1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、第1转染组(转染miR阴性对照物)、第2转染组(转染miR-207模拟物)、第3转染组(转染miR-207抑制剂)、MPP^(+)+GB+第2转染组(细胞转染miR-207模拟物后,用50μmol·L^(-1)的GB处理1 h,再用1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、MPP^(+)+GB+第3转染组(细胞转染miR-207抑制剂后,用50μmol·L^(-1)的GB处理1 h,再用1.0 mmol·L^(-1)MPP^(+)孵育48 h)、第4转染组(先转染miR-207模拟物,再转染p CMV6-XL5)和第5转染组(先转染miR-207模拟物,再转染p CMV6-XL5-LAMP2A)。结果与MPP^(+)组(3.51±0.23)比较,MPP^(+)+GB组miR-207的相对表达量(2.07±0.26)的差异有统计学意义(P<0.05)。第1转染组、第2转染组和第3转染组α-syn基因相对表达量分别为1.03±0.09,1.56±0.13,0.78±0.09;α-syn蛋白相对表达量分别为1.02±0.08,1.81±0.20,0.53±0.23;与第1转染组比较,第2转染组和第3转染组α-syn表达的差异均有统计学意义(均P<0.05)。第2转染组和第5转染组α-syn基因相对表达量分别1.03±0.12,0.71±0.10;α-syn蛋白相对表达量分别为1.09±0.07,0.22±0.11;与第2转染组比较,第5转染组α-syn表达的差异均有统计学意义(均P<0.05)。MPP^(+)+GB组、MPP^(+)+GB+第2转染组和MPP^(+)+GB+第3转染组α-syn基因相对表达量分别为1.02±0.09,1.62±0.15,0.71±0.12;α-syn蛋白相对表达量分别为1.02±0.10,2.01±0.35,0.63±0.14;与MPP^(+)+GB组比较,MPP^(+)+GB+第2转染组和MPP^(+)+GB+第3转染组α-syn表达的差异均有统计学意义(均P<0.05)。LAMP2A是miR-207的靶基因。结论在MPP^(+)诱导的PD SH-SY5Y细胞模型中,GB能通过介导miR-207/LAMP2A信号轴来降低α-syn的表达。     

长链非编码 RNA母系表达基因 8靶向微小 RNA-497-5p调控血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡

目的 探讨长链非编码RNA母系表达基因8(MEG8)靶向微小RNA(miR)-497-5p对血管瘤血管内皮细胞的增殖和凋亡的影响.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测河南中医药大学第一附属医院2017年1月至2018年6月收集的52例血管瘤组织和与其对应的瘤旁正常皮肤组织中MEG8和miR-497-5p的表达水平.血管瘤血管内皮细胞HemEC分为si-NC组、si-MEG8组、miR-NC组、miR-497-5p组、si-MEG8+anti-miR-NC组、si-MEG8+anti-miR-497-5p组.四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和P21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl相关X(Bax)蛋白的表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证MEG8和miR-497-5p的靶向关系.结果 与瘤旁正常皮肤组织相比,血管瘤组织中MEG8表达水平[(0.82±0.08)比(0.33±0.03)]升高(P<0.05),miR-497-5p表达水平[(0.34±0.03)比(0.84±0.08)]降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-MEG8组HemEC细胞存活率[(39.61±4.06)％比(103.50±11.04)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(26.57±2.73)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).与miR-NC组比较,miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(48.87±5.09)％比(104.11±10.64)％]、cy?clin D1和Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),凋亡率[(21.26±2.45)％比(8.33±0.85)％]、P21和Bax蛋白表达升高(P<0.05).MEG8和miR-497-5p直接特异性结合.与si-MEG8+anti-miR-NC组比较,si-MEG8+anti-miR-497-5p组HemEC细胞存活率[(86.10±8.81)％比(40.23±4.35)％]、cyclin D1和Bcl-2蛋白表达升高(P<0.05),凋亡率[(15.32±1.67)％比(26.81±2.94)％]、P21和Bax蛋白表达降低(P<0.05).结论 抑制MEG8通过靶向miR-497-5p能够抑制血管瘤血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,进而遏制血管瘤的发生发展.     

微小RNA-137对人肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的影响北大核心CSCD

目的探究微小RNA-137(miR-137)通过磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路对人肾小管上皮细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的影响。方法取人肾小管上皮细胞HK-2,将其随机分为对照组和模型组。对照组细胞常规培养,模型组细胞缺氧4 h、复氧2 h以构建H/R模型。将HK-2细胞转染miR-137模拟物或阴性对照寡核苷酸,随后构建H/R损伤模型,分别命名为miR-137 mi组和miR-NC组。用原位末端标记(TUNEL)法检测各组细胞的凋亡率;用丙二醛(MDA)检测试剂盒、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测定试剂盒及超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测各组细胞MDA、GSH-PX和SOD的含量;用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、白细胞介素-1β(IL-1β)的含量;用蛋白质印迹(Western blot)法检测磷酸化PI3K(p-PI3K)蛋白及磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达水平。结果对照组、模型组、miR-NC组和miR-137 mi组的细胞凋亡率分别为(5.06±0.10)%,(13.74±1.39)%,(11.75±1.20)%和(8.32±0.76)%;MDA的含量分别为(38.37±2.33),(45.38±3.02),(45.95±3.27),(33.49±1.78)nmol·mg^(-1);GSH-PX的含量分别为(573.17±5.15),(204.46±2.77),(205.39±1.72),(415.80±4.48)U·mg^(-1);SOD的活性分别为(11.42±1.84),(4.92±0.20),(5.01±0.34),(7.93±0.57)U·mg^(-1);MCP-1的含量分别为(1.57±0.13),(4.78±0.38),(4.30±0.14),(2.95±0.62)ng·mL^(-1);ICAM-1的含量分别为(0.18±0.05),(0.56±0.09),(0.53±0.04),(0.25±0.09)ng·mL^(-1);IL-1β的含量分别为(23.62±2.85),(43.83±1.70),(44.07±2.33),(31.86±1.67)pg·mL^(-1),以上指标,对照组和模型组相比,miR-NC组和miR-137 mi组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-137可减少人肾小管上皮细胞H/R损伤模型细胞凋亡、降低氧化应激以及炎症反应,其作用机制与PI3K/AKT信号通路有关。     

Apelin-13对高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用北大核心CSCD

目的探讨Apelin-13对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护机制是否与沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)相关。方法实验分组分为4部分。实验Ⅰ,将HUVECs分为6组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、各实验组(分别用1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。实验Ⅱ,将HUVECs分为4组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1)糖)、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、对照组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)糖)。实验Ⅲ,将HUVECs分为2组,分别为空载质粒组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)和APJ低表达组(1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)。以上3个实验均用Western blot法检测高糖环境下SIRT1蛋白的表达水平。实验Ⅳ,将HUVECs分为5组,分别为空白组(5.5 mmol·L^(-1))、模型组(33 mmol·L^(-1)高糖)、实验组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖)、抑制剂组(33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)、干预组(用1×10^(-8)mol·L^(-1)Apelin预处理+33 mmol·L^(-1)高糖+1×10^(-5)mol·L^(-1)EX527)。用流式细胞术检测HUVECs的凋亡率。结果实验Ⅰ,空白组、模型组和1×10^(-9),1×10^(-8),1×10^(-7)和1×10^(-6)mol·L^(-1)Apelin实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.51±0.06,0.30±0.05,1.02±0.07,1.12±0.10,1.14±0.10和1.05±0.10,模型组的SIRT1蛋白相对表达量与4个实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅱ,空白组、模型组、对照组和实验组的SIRT1蛋白相对表达量分别为0.82±0.09,0.59±0.05,0.77±0.05和0.72±0.06;模型组的SIRT1蛋白相对表达量与实验组和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。实验Ⅲ,空载质粒组和APJ低表达组的SIRT1蛋白表达水平分别为0.94±0.13和0.71±0.17,差异有统计学意义(P<0.05)。实验Ⅳ,空白组、模型组、实验组、抑制剂组和干预组的细胞凋亡率分别为(13.60±0.92)%,(24.63±1.25)%,(12.73±1.00)%,(25.68±1.42)%和(10.25±2.30)%。模型组的细胞凋亡率与空白组和实验组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);抑制剂组的细胞凋亡率与干预组相比,差异有统计学意义(P<0.05);干预组的细胞凋亡率与实验组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论Apelin-13减轻高糖诱导的脐静脉内皮细胞凋亡的机制与SIRT1信号通路无关。