建立载脂蛋白E基因敲除小鼠骨髓髓源性生长因子缺失模型及鉴定

背景:目前关于髓源性生长因子(myeloid-derived growth factor,MYDGF)与动脉粥样硬化及代谢性疾病的研究较少,因此建立一种载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)敲除骨髓MYDGF缺失的小鼠模型对于研究MYDGF与动脉粥样硬化疾病的关系尤为重要。目的:建立ApoE敲除骨髓MYDGF特异性缺失小鼠模型并进行鉴定。方法:ApoE敲除小鼠和骨髓特异性MYDGF敲除小鼠,均购于上海南方模式生物科技股份有限公司。选取5只ApoE敲除小鼠与10只骨髓特异性MYDGF敲除小鼠进行交配,得到基因型为MYDGF^flox/+ApoE^flox/+F1子代小鼠30只,MYDGF^flox/+ApoE^flox/+互相进行交配,一共得到基因型为MYDG F^flox/floxApoE^flox/flox双敲除小鼠30只和ApoE^flox/flox小鼠子代小鼠34只。采用PCR法进行MYDGF^flox及...     

转录因子核因子E2相关因子2对长期中波紫外线照射诱导皮肤肿瘤的影响

背景：紫外线照射是引起皮肤肿瘤的重要环境因素,与其诱导氧化应激反应有关。核因子E2相关因子2是调节细胞内抗氧化应激反应的重要转录因子,胞浆蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1为其特异性受体,目前核因子E2相关因子2-胞浆蛋白Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1抗氧化系统与皮肤紫外线损伤的关系受到密切关注。 目的：观察中波紫外线照射所致皮肤DNA氧化损伤及光致癌作用,研究转录因子核因子E2相关因子2对长期中波紫外线照射诱导小鼠皮肤肿瘤形成的影响。 方法：取8周龄雌性核因子E2相关因子2基因敲除(Nrf2^-/-) BALB/c小鼠和野生型(Nrf2^+/+)BALB/c小鼠,以100 mJ/cm²剂量的中波紫外线照射小鼠背部4 h。另取Nrf2^-/-小鼠和Nrf2^+/+小鼠以300 mJ/cm²剂量的中波紫外线对小鼠背部进行长期照射,每周3次,连续36周。 结果与结论：Nrf2^-/-小鼠表皮内8-羟基脱氧鸟嘌呤核苷阳性细胞数量显著高于Nrf2^+/+小鼠(P < 0.05),Nrf2^-/-和Nrf2^+/+小鼠中波紫外线长期照射诱导皮肤肿瘤数目和发生率接近(P > 0.05),且皮肤肿瘤组织病理学改变相似,提示核因子E2相关因子2对急性中波紫外线照射所致的DNA损伤具有抗氧化防护作用,在长期中波紫外线照射致癌过程中,转录因子核因子E2相关因子2的活性可能受到多种因素的调节,其具体机制有待于进一步研究。     

敲除基因Pabpc6对雄性小鼠精子发生的影响

目的 探究小鼠细胞质多聚腺苷酸结合蛋白-6(PABPC6)在雄性小鼠精子发生中的作用。方法 利用CRISPR/Cas9靶向敲除C57BL/6J小鼠基因Pabpc6,通过PCR鉴定Pabpc6的敲除情况。通过交配繁殖得到Pabpc6^+/+、Pabpc6^+/-、Pabpc6^-/- 3种不同基因型的小鼠，进行睾丸称重、形态学观察和精子计数。RT-qPCR和Western blot检测不同组织中Pabpc6在mRNA和蛋白的表达水平；通过免疫荧光和苏木精-伊红染色观察该基因的定位以及睾丸曲细精管内部形态学变化。结果 成功鉴定出敲除Pabpc6的小鼠；Pabpc6在睾丸组织中高表达(P<0.001)。免疫荧光显示该基因主要表达于精母细胞和早期精子阶段，基因敲除小鼠与野生型小鼠相比在睾丸外形、精子形态、精子数量和曲细精管内部形态上没有明显差异。结论 Pabpc6在小鼠睾丸组织中高表达，敲除该基因后对雄性小鼠的精子发生无明显影响，说明该基因所编码的蛋白对于小鼠精子发生过程可能是非必需的。     

胰岛β细胞Metrnl基因敲除小鼠的鉴定及初步表型分析

目的：基于Cre-LoxP重组酶系统，构建胰岛β细胞Metrnl基因敲除小鼠(Metrnl-KO)，为进一步探究Metrnl基因在糖尿病疾病中的发病机制提供动物模型。方法：将雌雄基因型均为Metrnl^floxp/+的小鼠合笼杂交，筛选出基因型为Metrnl^floxp/floxp的小鼠，将该基因型小鼠与胰岛β细胞特异性表达Cre重组酶(Ins-2)工具鼠进行杂交繁育，获得基因型为Metrnl^floxp/+;Cre+的小鼠；再将Metrnl^{floxp/+；Cre+}小鼠与Metrnl^floxp/floxp小鼠杂交获得Metrnl^{floxp/floxp;Cre+}小鼠，基因型为Metrnl^{floxp/floxp;Cre+}的小鼠即为目的鼠。采用RT-q PCR检测Metrnl和胰岛素(Ins-1和Ins-2)的m RNA水平；免疫组化和免疫荧光染色观察胰岛组织Metrnl和胰岛素的蛋白表达情况；记录小鼠体重，同时测定小鼠糖耐量和胰岛素耐量。结果：...     

Tet1 对海分枝杆菌感染过程中宿主炎症反应及肥大细胞活化的影响

目的：探讨 Tet1 分子在海分枝杆菌(Mm)感染小鼠过程中对宿主炎症反应及肥大细胞活化的影响。方法：SPF 级 Tet1 野生型(Tet1^+/+)和 Tet1 基因敲除小鼠(Tet1^-/-)尾静脉接种相同数量的 Mm，建立小鼠尾静脉感染模型。观察记录小鼠尾部大体病变，取鼠尾组织匀浆铺板培养比较菌载量；HE染色观察组织病理学变化，抗酸染色检测细菌分布；甲苯胺蓝染色观察小鼠尾组织中肥大细胞的分布及形态差异；免疫组化检测肥大细胞活化标志物类胰蛋白酶和 5羟色胺(5-HT)的表达及分布差异。结果：尾静脉接种 Mm后，Tet1^+/+小鼠尾组织出现渐进性脓肿和明显溃烂，而 Tet1^-/-组小鼠尾巴仅发生散在性小面积肿胀；菌落计数发现Tet1^+/+小鼠细菌负荷逐渐增加，而Tet1^-/-小鼠菌载量显著降低(P<0.01)；组织病理学观察发现，Tet1^+/+小鼠尾组织中大量炎症细胞浸润，表皮及真皮层胶原纤维断裂，且形成肉芽肿样病变，而 Tet1...     

褪黑素对Ctnnd2敲除小鼠的自闭症样行为及突触相关蛋白的影响

目的:观察褪黑素（MT）对Ctnnd2基因敲除(Ctnnd2^-/-)小鼠自闭症样行为、丝裂原活化蛋白激酶（MEK）/细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）通路蛋白和突触相关蛋白的影响。方法:将小鼠分为四组：野生型组（WT）、Ctnnd2基因敲除组(Ctnnd2^-/-)、Ctnnd2基因敲除+10 mg/kg褪黑素组(Ctnnd2^-/-+10 mg/kg MT)及Ctnnd2基因敲除+50 mg/kg褪黑素组(Ctnnd2^-/-+50 mg/kg MT)。不同剂量MT给出生21 d Ctnnd2^-/-小鼠连续灌胃28 d,行为学实验评价小鼠的自闭症样行为，Western Blot检测MEK1/2、ERK1/2和突触素蛋白（Syn）的磷酸化水平以及突触后致密蛋白95（PSD95）的表达。接下来为了验证MT是否通过与MT-R结合进而上调体感皮层MEK/ERK通路和引起突触相关蛋白的变化，在Ctnnd2^-/-小鼠体感皮层局部微量注射褪黑素受体（MT-R）阻断剂，30 m...     

脂肪因子chemerin在饮食和运动调控小鼠骨骼肌脂质沉积中的作用

目的:探讨维甲酸受体应答基因2(retinoic acid receptor responder 2, Rarres2)编码的脂肪因子chemerin在饮食和运动调控小鼠骨骼肌脂质沉积中的作用。方法:将8周龄野生型(wild-type, WT)小鼠、脂肪特异性Rarres2基因敲除(adipose-specific Rarres2 gene knockout, adipo-Rarres2^-/-)小鼠和全身性Rarres2基因敲除(global Rarres2 gene knockout, Rarres2^-/-)小鼠随机分为普通饮食(normal diet, ND)组和高脂饮食(high-fat diet,HFD)组,即ND+WT组、ND+adipo-Rarres2^-/-组、ND+Rarres2^-/-组、HFD+WT组、HFD+adipo-Rarres2^-/-组和HFD+Rarres2^-/-组,共6组,每组6只。此外,让HFD组的3种小鼠完成6周的中等强度跑...     

NF-E2相关因子2对糖尿病模型小鼠视网膜内细胞及血管的保护作用

目的 探讨NF-E2相关因子2（Nrf2）对糖尿病视网膜细胞及血管的保护作用。方法 8周龄雄性Nrf2^+/+（野生型）和Nrf2^-/- C57BL/6小鼠60只随机分为模型组和对照组,共4组,每组各15只。模型组小鼠腹腔注射链脲佐菌素（STZ,45mg/kg）,连续注射5 d;对照组小鼠注射同体积的枸橼酸缓冲液。模型组和对照组小鼠初次注射后每周测空腹血糖及体重,至第10周取视网膜。采用免疫印迹法检测视网膜内Nrf2激活的下游蛋白血红素加氧酶-1（HO-1）的表达情况;免疫荧光染色检测具有多种剪接形式的RNA结合蛋白（RBPMS）阳性的视网膜节细胞（RGCs）及胆碱乙酰转移酶（ChAT）阳性的无长突细胞（ACs）并计数;采用过碘酸-希夫和苏木素染色,观察视网膜内无细胞毛细血管并进行定量分析。 结果 STZ诱导1周后,野生型和Nrf2^-/-模型组小鼠血糖急剧升高,体重开始显著下降,随着周龄的增长体重无明显增加;对照组小鼠血糖值无明显升高,体重呈正常缓慢增长趋势。STZ诱导糖尿病10周后,RBPMS和ChAT染色发现,Nrf2^-/-糖尿病小鼠视网膜内RGCs和ACs数量显著降低（P<0.05）;过碘酸 希夫和苏木素染色显示,Nrf2^-/-糖尿病小鼠视网膜内出现无细胞毛细血管;免疫印迹法显示,野生型小鼠模型组中Nrf2激活的下游蛋白HO-1表达升高。 结论 Nrf2对糖尿病视网膜细胞及血管具有保护作用,其可能是通过诱导HO-1上调发挥作用。     

血红素加氧酶1(HO-1)基因敲除影响小鼠肺脏免疫细胞组成平衡并加重脂多糖诱导的急性肺损伤

目的 评价血红素加氧酶1(HO-1)基因缺失对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)小鼠肺脏免疫细胞组成及炎症性损伤的影响。方法 选取C57BL/6野生型(WT)小鼠和同背景HO-1条件敲除(HO-1^-/-)小鼠,按照随机数字法分为WT对照组、 LPS处理的WT组、 HO-1^-/-对照组和LPS处理的HO-1^-/-组。LPS处理的WT组和LPS处理的HO-1^-/-组分别经尾静脉注射LPS(15 mg/kg)建立ALI模型,WT对照组和HO-1^-/-对照组经尾静脉注射同等体积生理盐水。造模12 h后,处死小鼠并收集各组肺组织。HE染色观察肺组织病理变化。PCR检测肺组织肿瘤坏死因子α (TNF-α)、白细胞介素1β (IL-1β)和IL-6 mRNA表达。流式细胞术检测肺组织中性粒细胞(CD45⁺CD11b⁺Ly6G⁺Ly6C^-)、总单核细胞(CD45⁺CD11b     

SETD4基因敲除小鼠的构建及鉴定

目的　构建并鉴定SETD4基因敲除小鼠,为研究SETD4的生物学功能提供动物模型。 方法　将引进的SETD4flox/+小鼠与EIIa-Cre小鼠进行杂交繁殖,得到基因型为SETD4+/-.EIIa-Cre的小鼠;再与C57BL/6小鼠杂交去除Cre酶,获得杂合子SETD4+/-小鼠;该小鼠自交获得纯合子SETD4-/-小鼠。通过PCR法鉴定子代小鼠的基因型;RT-PCR、荧光定量PCR方法鉴定纯合子的SETD4基因敲除小鼠SETD4 mRNA表达情况;HE染色观察小鼠肝、肺组织的形态学变化。 结果　PCR结果表明子代小鼠的基因型符合SETD4-/-;纯合子基因敲除小鼠SETD4 mRNA水平显著低于野生型小鼠;SETD4基因敲除小鼠肝、肺组织的形态学特征与野生型小鼠相比无明显差异。 结论　本研究基于Cre/loxp系统,成功构建并鉴定了SETD4基因敲除小鼠。     

Galectin-3缺失对银屑病小鼠模型中肥大细胞活化及皮肤损伤的影响

目的：探讨皮肤中半乳糖凝集素-3(Gal3)对银屑病小鼠模型中皮损处肥大细胞激活及银屑病皮炎损伤的影响及其潜在机制。方法：每日分别对SPF级Gal3野生型(Gal3^+/+)和Gal3基因敲除(Gal3^-/-)小鼠背部裸露皮肤处涂抹相同剂量咪喹莫特乳膏,连续5 d以构建银屑病小鼠模型。观察小鼠背部大体病变,并根据银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)进行评分,利用实时荧光定量PCR测定小鼠皮损组织细胞因子il-1、il-17表达,比较Gal3^+/+小鼠和Gal3^-/-小鼠银屑病炎症的严重程度;HE染色观察比较皮损组织病理学变化;甲苯胺蓝染色观察小鼠皮损组织中肥大细胞的形态和分布差异;免疫组织化学和图像分析技术检测肥大细胞活化标志物如类胰蛋白酶和5-羟色胺(5-HT)的表达、分布等差异。结果：连续应用咪喹莫特乳膏后,Gal3^-/-小鼠背部出现鳞屑、浸润斑块和红斑等典型银屑病临床表型,而Gal3^+/+小鼠背部出现细小鳞屑与少量浸润,Gal3^-/-     

RNA结合蛋白Rbm38在小鼠胚胎造血发育中的功能研究

目的：探究RNA结合蛋白Rbm38在小鼠造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)发育中的作用。方法：分析造血干细胞发育过程中连续群体的单细胞转录组数据,筛选生血内皮细胞(hemogenic endothelial cell,HEC)和/或造血干细胞前体(hematopoietic stem cell precursor,pre-HSC)阶段表达上调的RNA结合蛋白分子(RNA binding protein,RBP);利用CRISPR/Cas9技术构建基因敲除小鼠模型,将杂合型小鼠交配获得实验用胚胎,按照小鼠胚胎基因型不同将实验分为实验组和对照组,实验组为Rbm38^-/-基因型胚胎,对照组为Rbm38^+/+和Rbm38^+/-基因型胚胎;取材胚胎期11.5 d(embryonic day 11.5,E11.5)孕鼠胚胎的卵黄囊(yolk sac,YS),行体外造血细胞集落形成实验(colony forming unit-culture,CFU-C)检测主动脉-性腺-中肾(aorta-gonad-...     

髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠的构建与鉴定

目的　利用FLP/FRT、Cre/Loxp重组酶系统构建并鉴定髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为深入研究SETD4的生物学功能奠定基础。 方法　将引进的Setd4flox/+小鼠自交,筛选出子代基因型为Setd4flox/flox的小鼠;与FLP小鼠交配,得到Setd4fl/+/flp小鼠;然后分别与C57BL/6小鼠交配去除FLP酶,筛选出Setd4fl/+小鼠;与Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4fl/+/Lyz2-Cre小鼠;将得到的Setd4fl/+和Setd4fl/+/Lyz2-Cre小鼠交配,筛选出Setd4-/-/Lyz2-Cre小鼠,即髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠。利用PCR技术鉴定小鼠基因型;实时荧光定量PCR技术检测小鼠腹腔巨噬细胞及肝组织中SETD4 的mRNA表达水平验证敲除情况。 结果　髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠腹腔巨噬细胞中SETD4 mRNA水平较野生型小鼠显著降低;而在肝组织中无显著差异。 结论　利用FLP/FRT、Cre/Loxp系统成功构建髓样细胞特异性SETD4基因敲除小鼠,为后续的功能学研究提供了动物模型。     

利用CRISPR/Cas9技术制备成对框基因2敲除小鼠

目的 利用成簇规律间隔短回文重复序列（CRISPR）/重组CRISPR相关核酸酶9（Cas9）技术双切口法制备成对框基因2（Pax2）敲除小鼠,为探讨Pax2基因在多个系统发育的作用提供动物模型。方法 根据Pax2基因序列设计sgRNA,设计出的sgRNA和Cas9体外转录后显微注射到C57BL/6J 小鼠的受精卵中,F0代小鼠出生后取其基因DNA测序鉴定基因型。共获得8只F0 代小鼠,使敲除成功的F0代小鼠与野生C57BL/6J 小鼠交配,获得F1代小鼠,后均采用基因成功敲除的小鼠与C57BL/6J 小鼠进行交配,可获得稳定的Pax2基因敲除小鼠。结果 成功获得可稳定繁殖的Pax2杂合子基因敲除小鼠,其Pax2基因缺失1628 bp;组织HE染色显示,敲除小鼠的肾小球数量明显减少;Western blotting结果显示,敲除小鼠的肾皮质Pax2蛋白表达较野生型小鼠减少。结论 利用CRISPR/Cas9技术可成功构建Pax2杂合子基因敲除小鼠,为进一步研究Pax2基因的作用奠定基础。     

红细胞膜相关蛋白通过IL-6/STAT3/ROR-γt信号通路抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎中Th17细胞分化

目的 探讨小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型中，外源性和内源性红细胞膜相关蛋白(ERMAP)通过白细胞介素6/信号转录及转录激活因子3(IL-6/STAT3)/维甲酸相关孤核受体γt/(ROR-γt)信号通路对辅助性T细胞17(Th17)细胞分化的影响。方法 流式细胞术验证不同浓度ERMAP-Ig融合蛋白功能；琼脂糖凝胶电泳鉴定ERMAP基因敲除小鼠。流式细胞术检测ERMAP-Ig融合蛋白在体外对Th17细胞分化影响。40只6周龄普通C57BL/6小鼠随机分为2组建立EAE模型：对照(control)-Ig和ERMAP-Ig组，每组20只；记录临床评分；流式细胞术检测EAE小鼠体内Th17细胞分化情况。40只6周龄已鉴定的野生型和ERMAP基因敲除小鼠分为2组建立EAE模型：ERMAP^+/+和ERMAP^-/-组，每组20只。记录临床评分；脊髓HE和固蓝(LFB)染色并进行组织学半定量评分。流式细胞术检测IL-17A⁺CD4⁺ T细胞百分比；Western blotting检测IL-6、白细胞...     

PLZF调控小鼠早期T细胞发育和自我更新的功能

目的：研究PLZF调控小鼠早期T细胞发育与自我更新的功能，以及PLZF对胸腺细胞发育和自我更新的影响。方法：利用新生小鼠进行胸腺移植，以Rag2/γc^-/-小鼠为受体。首先比较PLZF^-/-与野生型(PLZF^+/+)小鼠胸腺细胞总数的差异，再通过流式细胞术和细胞分选，筛选小鼠的骨髓造血干细胞和胸腺的DN2a细胞以及PLZF^-/-小鼠的早期T细胞系前体(ETP)，以及PLZF^-/-或野生型小鼠在新生小鼠胸腺移植模型的移植物DN1细胞中的表达情况。结果：PLZF^-/-小鼠的胸腺细胞总数和早期T细胞系前体数目与野生型小鼠相比显著下降，并且细胞总数的减少不是由细胞内源性引起的。通过研究PLZF-EGFP报告基因小鼠和新生小鼠胸腺的肾移植模型，发现PLZF在Rag2/γc^-/-受体小鼠胸腺移植物的DN1(Lineage^-CD44⁺CD25^-)细胞中高表达，且供体细胞的PLZF缺失...     

Ern1调控肿瘤免疫原性机制的初步探索

目的：探讨内质网跨膜蛋白IRE1(由Ern1编码)对肿瘤细胞免疫原性和成瘤性的影响与机制。方法：挖掘肿瘤公共数据库中ERN1表达水平和患者生存的关联性。利用CRISPR-Cas9技术敲除小鼠肿瘤细胞系MCA205和TC-1的Ern1基因,借助CCK-8、流式细胞术、ELISA、荧光素酶报告系统、皮下植瘤、预免疫-再刺激等实验分析Ern1对肿瘤细胞体外增殖和体内成瘤能力、浸润肿瘤的免疫细胞比例、衣霉素诱导免疫原性细胞死亡和抗肿瘤效应T细胞活化的影响,比较Ern1^-/-肿瘤在正常小鼠和Ifnar^-/-小鼠体内生长速度的差异。结果：对多个癌种而言,肿瘤组织ERN1的表达水平与患者总生存时间呈负相关。虽然敲除Ern1不影响肿瘤细胞的体外增殖能力,但其在正常小鼠皮下的成瘤能力大幅降低,甚至会自发消退。与野生型相比,Ern1^-/-肿瘤内中性粒细胞显著增多,CD4⁺T细胞浸润减少。衣霉素诱导内质网应激后,Ern1^-/-细胞死亡更多,虽然其HMGB1释放和钙网蛋白暴露有所减少,但IFN-α/β...     

E3蛋白泛素连接酶WWP1调控TLR4介导的炎症性肠病炎性聚集中的作用

目的 探讨E3蛋白泛素连接酶WWP1调控TLR4介导的炎症性肠病炎性聚集中的作用及机制。方法 构建髓系细胞中特异性敲除E3蛋白泛素连接酶WWP1基因的小鼠，检测WPP1基因是否被敲除，随后进行分组，分为WWP敲除组(WWP1^+/+)和WWP未敲除组(WWP1^-/-)，两组小鼠再分别喂养菊聚糖硫酸钠(DSS)建立炎症性肠病模型(DSS组)和喂养生理盐水(无菌水组)，每组小鼠共10只，喂养7 d，每天检测小鼠结肠炎的临床症状，结束后处死小鼠，测量结肠长度，评估小鼠结肠炎损伤情况，Elisa检测小鼠结肠黏膜组织炎性因子IL-6、IL-10、TNF-α水平，采用RT-qPCR和Western blot检测TLR4表达水平。同时使用基因沉默方法敲除RAW 264.7细胞的WWP1基因，使用LPS刺激构建结肠炎症情况下的巨噬细胞环境，检测WWP1⁺组与WWP1^-组细胞中IL-6、IL-10、TNF-α和TLR4、WWP1表达水平。结果 WWP1^+/+组和RAW264.7细胞沉默组中WWP1...     

敲除toll样受体4基因对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

目的:研究toll样受体4（TLR4）在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）发病中的作用。方法:C57BL/6野生型（WT）和Tlr4敲除(Tlr4^-/-)小鼠注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG_35-55)建立EAE模型。定期记录神经功能评分及体重变化;苏木素-伊红（HE）和劳克坚牢蓝（LFB）染色观察脊髓组织内炎症细胞浸润及髓鞘脱失情况;免疫荧光染色检测髓鞘碱性蛋白（MBP）的表达。结果:MOG_35-55免疫后,与WT组相比,Tlr4^-/-小鼠体重下降程度较轻、发病时间延迟、神经功能评分降低、炎性细胞浸润减少、髓鞘脱失减轻、MBP表达增加。结论:敲除Tlr4可减轻EAE小鼠的病理症状。     

长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗及视网膜微血管损伤：神经鞘磷脂的可能作用

目的 探讨长期酒精暴露诱导胰岛素抵抗对小鼠血视网膜屏障的损伤以及神经鞘磷脂(SM)可能的作用。 方法 选取神经鞘磷脂合成酶
2（SMS2）基因敲除(SMS2^-/-)和野生型(WT)小鼠76只,酒精暴露建立动物模型。用血糖仪测定血糖浓度,酶联免疫法(ELISA)测定血胰岛素浓
度,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),利用免疫荧光染色、HE和电子显微镜观察血视网膜屏障的损伤。结果 长期酒精暴露引起小鼠胰岛素抵
抗 (P <0.05),并出现血视网膜屏障的损伤,如无细胞毛细血管数增多(P <0.05),星形胶质细胞数量减少(P <0.05),内皮细胞和周细胞线粒
体肿胀,嵴消失,基底膜欠清晰,呈剂量依赖性。和WT小鼠相比,SMS2^-/-小鼠胰岛素抵抗指数较小和血视网膜屏障损伤程度较轻(P<0.05),
提示SMS2^-/-小鼠有延缓胰岛素抵抗形成和减少血视网膜屏障损伤的作用。结论 长期酒精暴露可以诱导胰岛素抵抗,并造成血视网膜屏障损
伤,具有剂量依赖性;SMS2基因的缺失有延缓胰岛素抵抗的产生和减少血视网膜屏障损伤的作用。