LncRNA LUCAT1介导的miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在甲状腺乳头状癌发展中的调控作用及机制

目的 探究lncRNA LUCAT1对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和EMT的影响,并进一步探究miR-199b-5p/MAPKAPK3轴在其中发挥的作用。方法 RT-qPCR检测甲状腺乳头状癌组织及癌旁组织中LUCAT1、miR-199b-5p和MAPKAPK3表达;生物信息学预测miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3的潜在结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-199b-5p与LUCAT1或MAPKAPK3结合。将TPC-1细胞分为sh-NC组、sh-LUCAT1组、sh-LUCAT1+inhibitor NC组、sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor组和sh-LUCAT1+miR-199b-5p inhibitor+sh-MAPKAPK3组;Western blot检测各组细胞MAPKAPK3蛋白表达水平;CCK-8实验检测各组细胞增殖活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;Transwell实验检测各组细胞迁移和侵袭能力;Western blot方法检测各组细胞EMT相关蛋白表达水平。结果 甲状腺乳头状癌组织中LUCA...     

miR-124靶向调节STAT3基因对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨miR-124及STAT3在甲状腺乳头状癌组织中的表达,以及抑制或过表达miR-124对甲状腺乳头状癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 Real-time PCR法检测17例患者甲状腺乳头状癌组织及对应的癌旁组织中miR-124的表达,Western bolt法检测STAT3蛋白的表达。将miR-124 inhibitors及miR-124 mimics转染至甲状腺乳头状癌Kl细胞株,Western blot方法检测转染后STAT3蛋白的表达变化,CCK-8方法和克隆形成实验检测转染后Kl细胞的增殖和侵袭情况。结果 miR-124在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显低于癌旁组织,STAT3蛋白在甲状腺乳头状癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P0.01)。转染miR-124 inhibitors的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著升高,细胞内STAT3蛋白表达亦明显升高(P0.01);转染miR-124 mimics的K1细胞增殖侵袭能力与对照组相比显著降低,细胞内STAT3蛋白表达亦明显降低(P0.01)。结论 miR-124抑制甲状腺乳头状癌Kl细胞的增殖和侵袭可能与下调STAT3的表达相关。     

miR-206过表达对甲状腺乳头状癌细胞增殖和迁移的影响

目的:明确微小RNA-206(microRNA-206,miR-206)对人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖和迁移的影响,并初步探讨其可能的机制。方法:采用RT-qPCR技术检测各组细胞miR-206的表达水平;CCK-8实验和台盼蓝染色活细胞计数检测K1细胞的增殖能力;Transwell小室迁移实验检测K1细胞的迁移能力;利用生物信息学软件预测miR-206的靶基因;采用双萤光素酶报告基因检测法验证miR-206和c-Met的靶向关系;Western blot检测c-Met/AKT/mTOR通路中各蛋白水平的变化。结果:K1细胞瞬时转染miR-206 mimic后,RT-qPCR检测实验组K1细胞中miR-206的相对表达量较空白组和阴性对照组明显升高(P<0.01);CCK-8及台盼蓝拒染实验表明,转染miR-206mimic的实验组中K1细胞的增殖较空白组和阴性对照组明显受到抑制(均P<0.01);Transwell实验发现,实验组K1细胞的迁移数低于空白组和阴性对照组(P<0.01);双萤光素酶报告基因检测表明,miR-206可负调控靶基因c-Met的表达;West...     

甲状腺乳头状癌患者外周血miR-146a、miR-146b表达水平与预后的关系研究

目的 探讨甲状腺乳头状癌(papillary thyroid cancer,PTC)患者血清miR-146a、miR-146b的表达水平及其与临床病理特征、预后的关系.方法 采用前瞻性研究方法,选取2018年6月至2020年2月本院收治的PTC患者80例为研究对象,50例同期健康人群作为对照组.荧光定量PCR检测外周血...     

EGFR、COX-2及P63蛋白表达与甲状腺乳头状癌侵袭转移的关系

目的　探讨甲状腺乳头状癌 (PTC)中表皮生长因子受体 (EGFR)、环氧化酶 2 (COX 2 )和 p6 3蛋白的表达与肿瘤侵袭转移的关系。方法　采用免疫组化S P法检测 6 7例PTC(其中腺内侵袭 4 1例、腺外侵袭 2 6例 ;有淋巴结转移 2 9例、无淋巴结转移 38例 )、3例滤泡癌和 15例甲状腺腺瘤中EGFR、COX 2及 p6 3蛋白的表达。结果　EGFR、COX 2和 p6 3蛋白在PTC组织中的阳性表达率分别为 88 1%、82 1%和 70 2 % ,均显著高于甲状腺腺瘤 (P <0 0 5 ) ;EGFR与COX 2、COX 2与p6 3蛋白在PTC组织中的的表达呈明显正相关 (P <0 0 5 ) ;EGFR和COX 2在PTC腺外侵袭组和有淋巴结转移组阳性表达率均明显高于腺内侵袭组和无淋巴结转移组 (P <0 0 5 ) ,p6 3蛋白阳性表达率与淋巴结转移有关 (P <0 0 5 )、与浸润程度无关。结论　EGFR与COX 2在PTC组织中的高表达可能促进肿瘤的侵袭和转移 ,p6 3蛋白在PTC的高表达提示其与PTC的细胞增殖相关     

miR-107 靶向NID2 通过Notch 信号通路调控肺癌细胞的增殖侵袭

目的:miR-107 靶向NID2 调控Notch 信号通路影响肺癌的侵袭和增殖。方法:免疫组化检测NID2 在肺癌组织和正常肺组织中的表达;PCR 检测miR-107 在肺癌组织中的表达;双荧光素酶报告基因系统检测miR-107 对NID2 转录活性的影响;肿瘤细胞成球实验检测miR-107 的表达对肺癌细胞A549 的增殖能力的影响;Transwell 侵袭实验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的侵袭能力的影响;划痕试验检测miR-107 的表达对肺癌A549 细胞的迁移能力的影响;Western blot 检测过表达miR-107 后Notch 信号通路的蛋白表达水平。结果:和正常肺组织比较,NID2 在肺癌组织中表达较高;miR-107 在肺癌组织中表达明显降低;双荧光素酶报告基因系统检测结果显示,miR-107 可以直接调控NID2 的转录活性;过表达miR-107 后,肺癌细胞A549 的增殖、侵袭和迁移能力明显降低;过表达miR-107 后,Notch1、hes-1、presenilin1 蛋白表达下调。结论:miR-107靶向NID2 的表达,通过Notch 通路调控肺癌细胞的增殖和侵袭能力。     

LncRNA TUG1靶向miR-141-3p影响甲状腺癌细胞的增殖和侵袭

目的 检测LncRNA TUG1在甲状腺癌细胞中的表达,初步探讨LncRNA TUG1对甲状腺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制。方法 采用qRT-PCR法检测甲状腺癌B-CPAP、TPC-1细胞株中LncRNA TUG1和miR-141-3p的表达水平,应用生物信息学预测lncRNA TUG1和miR-141-3p的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验进行验证。将lncRNA TUG1干扰序列转染TPC-1细胞,应用qRT-PCR法检测lncRNA TUG1和miR-141-3p的表达,MTT法检测各组TPC-1细胞增殖能力,Transwell实验检测各组TPC-1细胞的侵袭能力。结果 与正常甲状腺上皮细胞相比,BCPAP、TPC-1中LncRNA TUG1表达水平明显升高（P<0.05）,miR-141-3p表达水平明显下降（P<0.05）,生物信息学分析及双荧光素酶实验结果显示,lncRNA TUG1可以靶向调控miR-141-3p。转染TUG1干扰序列能够降低TPC-1细胞lncRNA TUG1的表达,上调miR-141-3p的表达（P<0.05）;沉默lncRNA T...     

高尔基体基质蛋白130通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移

目的　探究高尔基体基质蛋白130（Golgi Matrix Protein 130,GM130）对甲状腺乳头状癌细胞侵袭和迁移能力的作用及机制。 方法　RT-PCR检测人甲状腺细胞Nthy-ori 3-1及甲状腺乳头状癌细胞BCPAP、K1、TPC-1中的GM130 mRNA水平。将细胞分为Control、scramble siRNA（si-scramble）、GM130 siRNA（si-GM130）3组。CCK8检测各组细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,Western Blot检测GM130、Ki67、增殖细胞核抗原（Proliferating cell nuclear antigen,PCNA）、基质金属蛋白酶-4（Matrix metalloproteinase-4,MMP-4）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、钙依赖性粘附蛋白E（Calcium-dependent adhesion protein E,E-cadherin）、Snail、钙依赖性粘附蛋白N（N-cadherin）及波形蛋白Vinmentin的表达,同时利用免疫荧光检测Vimentin的表达。 结果　GM130在TPC-1细胞中的mRNA水平最高,故利用TPC-1细胞进行后续实验。与Control组比较,si-GM130组中GM130表达显著下调,细胞增殖速率及Ki67、PCNA表达显著降低,细胞划痕闭合率显著下降,侵袭细胞数及MMP-4、MMP-9表达显著减少。此外,与Control组比较,si-GM130组中E-cadherin表达显著升高,Snail、N-cadherin及Vimentin表达显著降低。同时Vimentin荧光值在si-GM130组中显著降低。 结论　GM130可通过诱导上皮间充质转化促进甲状腺乳头状癌细胞TPC-1的侵袭和迁移。     

微小RNA-497抑制甲状腺乳头状癌细胞活力、侵袭和迁移

目的:研究微小RNA-497(miR-497)抑制甲状腺乳头状癌(PTC)细胞活力、侵袭和迁移的作用机制。方法:采用Target Scan 6. 0软件预测miR-497的靶基因,通过萤光素酶报告基因检测法、RT-qPCR和Western blot进行靶基因验证,再通过RT-qPCR检测PTC组织中miR-497及其靶基因的表达,并通过基因转染研究miR-497及其靶基因对PTC细胞活力、侵袭和迁移的影响。结果:Target Scan 6. 0软件预测、萤光素酶报告基因检测法、RTq PCR和Western blot均证明AKT3是miR-497的直接靶基因。此外,PTC组织中的AKT3表达水平较正常组织高(P 0. 05),且与miR-497表达呈负相关(r=-0. 573 7,P 0. 01)。下调AKT3可以抑制PTC细胞的活力、迁移和侵袭,与miR-497过表达在PTC细胞中具有相似的作用。结论:miR-497通过直接靶向调节AKT3抑制甲状腺乳头状癌细胞的活力、侵袭和迁移。     

miR-101-3p调控HMGB1影响甲状腺乳头状癌的体外转移活性

目的 探讨miR-101-3p在甲状腺乳头状癌细胞发展中的作用机制,以期为甲状腺乳头状癌的预防和治疗提供一个新思路。方法 采用q-PCR方法检测癌组织和癌旁组织中miR-101-3p和高迁移率族蛋白B1(HMGB1)的表达水平。用miR-101-3p mimic、miR NC、pcDNA3.1 HMGB1和pcDNA3.1 NC转染KAT-5细胞后,Western blotting检测HMGB1途径蛋白的表达。使用划痕实验检测细胞的迁移情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力,通过集落形成实验分析细胞的生长能力。荧光素酶报告基因实验分析miR-101-3p和HMGB1的相互作用情况。结果 miR-101-3p在甲状腺乳头状癌组织中的表达显著低于癌旁组织（分别为1.08±0.02、0.52±0.01,P<0.05）;HMGB1在人PTC中表达显著高于癌旁组织（分别为0.88±0.03、1.29±0.02,P<0.05）。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-101-3p能够靶向抑制HMGB1表达（分别为0.98±0.02、0.03±0.0l,P<0.05）。miR...     

TFF3基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨三叶因子3(TFF3)基因沉默对甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖和侵袭的影响。方法人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞分为空白对照组、阴性对照组、研究组,研究组将TFF3-shRNA重组慢病毒质粒转染至TPC-1细胞,阴性对照组将NC-shRNA重组慢病毒质粒转染至TPC-1细胞,空白对照组不转染任何序列。采用qRTPCR检测各组TPC-1细胞中TFF3 mRNA表达量,采用CCK8法检测各组TPC-1细胞增殖能力,通过Transwell小室侵袭实验检测各组TPC-1细胞侵袭能力。结果研究组TPC-1细胞中TFF3 mRNA表达量明显低于空白对照组、阴性对照组(P0.05);6 h、12 h、24 h、36 h、48 h时,研究组TPC-1细胞生长抑制率明显高于空白对照组、阴性对照组(P0.05);研究组穿过小室膜的TPC-1细胞数明显低于空白对照组、阴性对照组(P0.05);空白对照组、阴性对照组TPC-1细胞TFF3 mRNA表达量、增殖能力、侵袭能力差异无统计学意义(P0.05)。结论沉默TFF3基因表达能够抑制甲状腺乳头状癌TPC-1细胞增殖及侵袭,TFF3可能是甲状腺乳头状癌潜在的治疗靶点。     

lncRNA PURPL通过调控miR-367-3p/MTA3轴抑制肾癌细胞的增殖和侵袭

目的 观察lncRNA PURPL在肾癌组织中的表达,探讨PURPL/miR-367-3p/MTA3分子轴对肾癌细胞增殖和侵袭的影响及可能的机制.方法 采用qRT-PCR检测PURPL在肾癌组织和不同肾癌细胞系中的表达.选择PURPL表达最低的肾癌细胞系,分别感染阴性对照慢病毒(对照组)和PURPL慢病毒(PURPL组...     

姜黄素通过miR-206/BDNF通路抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭和迁移

目的 探讨姜黄素对宫颈癌HeLa细胞侵袭转移的抑制作用及其调控机制。方法 姜黄素分别以50μmol/L处理0、24、36、48、72 h干预宫颈癌HeLa细胞后,采用MTT法观察其对HeLa细胞活力的影响。应用Transwell小室检测姜黄素对HeLa细胞侵袭转移能力的抑制作用,免疫印迹实验检测其对金属基质蛋白酶-2、9(MMP-2和MMP-9)和脑源性神经营养因子（BDNF）表达水平的影响。通过RT-qPCR检测姜黄素对miR-206和BDNF表达的影响及双荧光素酶实验检测miR-206对BDNF的调控关系。结果 姜黄素可抑制HeLa细胞的活力,且呈现时间依赖性;姜黄素可显著降低HeLa细胞的侵袭和迁移能力并能够降低MMP-2和MMP-9的表达水平,同时激活miR-206的表达;双荧光素酶结果显示,miR-206通过靶向降解BDNF来抑制HeLa细胞的侵袭和迁移能力。结论 姜黄素通过激活miR-206/BDNF通路抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭和迁移。     

甲状腺滤泡癌中miR-133的表达及其诊断意义

目的探讨miR-133在甲状腺滤泡癌(follicular thyroid carcinoma, FTC)中的表达及其对FTC的诊断价值。方法选取FTC标本30例、甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma, PTC)标本30例、结节性甲状腺肿伴腺瘤标本30例。采用qRT-PCR技术检测三组甲状腺病变组织中miR-133的表达量,并分析其与临床病理特征的相关性;构建ROC曲线,分析miR-133对FTC的诊断价值。结果 FTC组的miR-133相对表达量明显低于PTC组和结节性甲状腺肿伴腺瘤组(P<0.05);miR-133在FTCⅢ+Ⅳ期组中的表达量低于Ⅰ+Ⅱ期组,差异有统计学意义(P<0.05);FTC与结节性甲状腺肿伴腺瘤组中,miR-133诊断FTC曲线下面积(area under curve, AUC)为0.723(95%CI:0.595～0.852),诊断灵敏度为63.3%,特异度为80.0%,约登指数为0.433;FTC与PTC组中,miR-133诊断FTC的AUC为0.719(95%CI:0.591～0.846),其诊断灵敏度为6...     

沉默S100A12对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的 评价沉默S100A12基因对甲状腺乳头状癌细胞K1的增殖、侵袭与迁移能力的影响.方法 用shRNA质粒转染K1细胞沉默S100A12基因,将细胞分为shRNA-NC组和shS100A12组,通过MTT实验评价细胞增殖生长趋势,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数量,Transwell实验检测细胞侵袭迁移能力,细胞划痕实验评价细胞的迁移能力,Western blot实验检测K1细胞E-cadherin,N-cadherin蛋白的表达情况.结果 与shRNA-NC组比较,shS100A12组K1细胞生长趋势明显受到抑制(P＜0.01),细胞克隆形成数量明显下降(P＜0.01),通过通透膜的细胞数量明显减少(P＜0.05),细胞的迁移速率明显减慢(P＜0.01).与shRNA-NC组比较,shS100A12组细胞E-cadherin的表达增高、N-cadherin的表达下降.结论 沉默甲状腺乳头状癌K1细胞中S100A12可以降低细胞增殖、侵袭与迁移能力,S100A12可能通过诱导EMT增强甲状腺乳头状癌细胞的侵袭与迁移能力.     

LncRNA SNHG1通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭

目的探讨LncRNA SNHG1对肾透明细胞癌细胞侵袭及转移能力的影响,并探索潜在机制。方法利用划痕实验和Transwell实验检测SNHG1对肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭能力的影响,利用双荧光素酶报告基因实验检测SNHG1是否可结合miR-199a-3p,利用实时荧光定量PCR检测SNHG1与miR-199a-3p表达的关系。结果抑制SNHG1的表达后,细胞迁移和侵袭能力均升高(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示SNHG1能够吸附miR-199a-3p(P<0.01)。实时荧光定量PCR实验结果显示抑制SNHG1的表达可促进miR-199a-3p的表达(P<0.01)。结论 SNHG1可通过吸附miR-199a-3p促进肾透明细胞癌细胞迁移和侵袭。     

负向调控miR-9抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移和侵袭*

 目的： 探讨负向调控miR-9对人鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭作用。方法: 用脂质体LipofectamineTM 2000转染合成抑制剂的方法抑制鼻咽癌细胞miR-9表达,转染抑制对照剂作为对照组。CCK-8法和流式细胞术检测细胞增殖和细胞周期变化;Transwell侵袭实验和划痕实验检测细胞侵袭和迁移能力;免疫印迹实验检测蛋白变化。结果: 抑制鼻咽癌细胞miR-9表达后,肿瘤增殖能力降低（P<0.05）,G0/G1期细胞增多［CNE2:（57.96±1.39）% vs（47.93±1.76）%,P<0.05;CNE1:（51.24±0.88）% vs（48.29±0.39）%,P<0.05］,迁移距离明显缩短［CNE2:（186.50±7.94）μm vs （247.56±15.56）μm,P<0.05;CNE1:（139.06±16.73 ）μm vs（230.66±14.27 ）μm,P<0.01］,CNE2细胞中侵袭细胞数明显减少（43.00±3.17 vs 65.80±5.20,P<0.01）,β-连环蛋白（β-catenin）表达被抑制。结论: 在鼻咽癌细胞中,负向调控miR-9可抑制鼻咽癌细胞的增殖、侵袭和迁移。     

miR-195-5p靶向调控ELMO2抑制IL-17诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移

目的:研究miR-195-5p调控吞噬细胞运动蛋白2(ELMO2)对白介素17(IL-17)诱导的胃癌细胞AGS侵袭和迁移的影响和机制。方法:以胃癌细胞AGS作为实验对象,转染miR-195-5p mimics,给予IL-17处理,qRT-PCR方法测定细胞中miR-195-5p表达;Transwell小室测定细胞侵袭和迁移能力;Western blot测定细胞中E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。生物信息学软件预测miR-195-5p的靶基因可能为ELMO2,双荧光素酶系统鉴定靶向关系。在胃癌细胞AGS中共转染miR-195-5p mimics、pcDNA3.1-ELMO2,检测细胞侵袭和迁移能力变化。结果:IL-17处理后的胃癌细胞AGS中miR-195-5p表达水平下调,细胞侵袭和迁移能力升高,细胞中E-cadherin蛋白表达水平下降,Vimentin蛋白表达水平升高。转染miR-195-5p mimics后的细胞经过IL-17处理以后,细胞中miR-195-5p表达水平升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中E-cadherin蛋白表达水平升高,Vimentin蛋...