人参皂苷Rb1对高脂血症大鼠肝脏细胞焦亡的影响及其可能机制

目的:观察人参皂苷Rb1对高脂血症大鼠肝脏细胞焦亡的影响,探讨其对肝脏脂质沉积的影响及作用机制。方法:将32只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、人参皂苷Rb1组和辛伐他汀组。除正常组给予基础饲料外,其余各组给予高脂饲料。造模4周后,灌胃给药,对照组与模型组给予相应体积的生理盐水,人参皂苷Rb1与辛伐他汀组给予相应药物。8周后全自动生物化学分析仪检测血清甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)的含量; HE染色观察肝脏组织病理变化;Western blot法与RT-qPCR法检测肝脏细胞焦亡相关因子NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18和GSDMD的蛋白及mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清TC、TG和LDL-C含量显著上升(P0.01),HDL-C含量显著降低(P0.05);肝脏脂肪变性肝细胞布满视野;NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18和GSDMD mRNA和蛋白的表达显著升高(P0.01)。人参皂苷Rb1可使血清TC、TG和LDL-C含量显著下降(P0.05),HDL-C含量显著上升(P0.01);脂肪变性程度明显减轻,脂滴少而小;NLRP3、caspase-1、IL-1β、IL-18和GSDMD mRNA和蛋白的表达显著降低(P0.05或P0.01)。结论:人参皂苷Rb1可能通过降低肝细胞焦亡相关因子的表达而减轻高脂血症大鼠肝脏损伤和脂质沉积。     

熊果酸对肝纤维化大鼠NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化的影响

目的观察熊果酸(UA)对肝纤维化模型大鼠肝内胶原沉积的改善作用及其对NADPH氧化酶2(NOX2)/活性氧簇(ROS)/NLRP3炎性小体活化的影响。方法将大鼠随机分为对照组、CCl4模型组及UA治疗组。用CCl4诱导构建SD大鼠肝纤维化模型,一半用作UA治疗组。用试剂盒检测血清ALT含量;HE染色观察肝脏病理;天狼星红染色观察肝内胶原沉积;RT-q PCR法检测Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA表达量;Western blot及免疫组化检测肝脏中NOX2、NLRP3、casepase-1 p45、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达;DCFH-DA荧光探针法检测肝脏组织内ROS水平。结果与对照组相比,CCl4模型组血清ALT水平升高(P0.05),Ishak's肝纤维化评分明显上升,胶原沉积明显增多(P0.05),Nox2、Nlrp3、Caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显上升(P0.05);NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白的表达均出现明显增加,肝组织内ROS含量增加(P0.05);与CCl4模型组相比,UA治疗组血清ALT含量下降(P0.05),肝脏Ishak's肝纤维化评分及胶原沉积减少(P0.05),Nox2、Nlrp3、caspase1及IL-1βmRNA的表达水平明显下降(P0.05),NOX2、NLRP3、caspase-1 p10及IL-1β蛋白表达明显下降,肝脏组织内ROS水平显著改善(P0.05)。结论 UA减轻肝脏炎性反应并减少肝内胶原沉积,其机制可能与其抑制肝纤维化大鼠肝内NOX2/ROS/NLRP3炎性小体活化及IL-1β的释放减少有关。     

褪黑素通过抑制NLRP3活化减轻蛛网膜下腔出血大鼠早期脑损伤

目的:研究外源性褪黑素对蛛网膜下腔出血大鼠(SAH)早期脑损伤(EBI)的影响及分子机制。方法:60只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、SAH组和褪黑素治疗组(SAH+Melatonin),用注射自体血液的方法制备SAH大鼠模型,腹腔注射方法给予褪黑素进行治疗。通过检测大鼠脑的含水量评估脑水肿程度,利用real time RT-PCR方法检测大鼠脑组织中IL-1β、IL-6和单核细胞趋化蛋白1(MCP-1) mRNA的表达,利用免疫组织化学染色法观察大脑皮层中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)的表达,利用Western Blot方法检测NLRP3和cleaved caspase-1的表达。结果:SAH大鼠皮层发生水肿,IL-1β、IL-6和MCP-1 mRNA的表达增加,NLRP3和cleaved caspase-1蛋白的表达增加。褪黑素能减轻SAH大鼠脑水肿,抑制皮层中IL-1β、IL-6和MCP-1 mRNA的表达,下调皮层NLRP3和cleaved caspase-1蛋白的表达。结论:褪黑素通过抑制NLRP3活化减轻SAH大鼠的早期脑损伤。     

对甲苯磺酰维达列汀抑制巨噬细胞焦亡和促进其凋亡的研究

目的:探讨对甲苯磺酰维达列汀(PV)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞焦亡和凋亡的影响,及其可能的抗炎机制。方法:MTT法检测RAW264.7的细胞活力;细胞流式术检测RAW264.7细胞的凋亡;Western blot检测caspase-3和caspase-1蛋白的表达;ELISA检测细胞培养上清液中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6浓度;RT-qPCR法检测NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18、caspase-11、caspase-3和Bax mRNA的表达。结果:PV显著抑制LPS刺激的巨噬细胞的活力,且呈剂量依赖性,同时促进RAW264.7巨噬细胞的凋亡(P0.01);显著减少巨噬细胞上清液释放TNF-α、IL-1β和IL-6(P0.01);减少caspase-1并增加caspase-3蛋白的表达(P0.01);下调细胞中NLRP3、caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18和caspase-11并上调caspase-3和Bax mRNA的表达(P0.01)。结论:PV可抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞发生细胞焦亡并促进其凋亡,使炎症因子释放减少。     

胰岛素处理促进糖尿病大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)表达并抑制炎症反应

目的研究胰岛素控制糖尿病(DM)大鼠血糖后, DM大鼠肾皮质骨形成蛋白和激活蛋白膜结合抑制物(BAMBI)、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)、凋亡相关的斑点样蛋白2(ASC-2)、胱天蛋白酶1(caspase-1)及炎性介质和相关纤维化指标的表达情况。方法 SD大鼠随机分为正常对照组、 DM组及胰岛素处理组。链脲佐菌素(STZ)复制DM大鼠模型,每组8只, DM成模4周后,胰岛素处理组予以皮下注射胰岛素[8 U/(kg·次)],每天3次,连续注射6周后处死大鼠。免疫组织化学染色检测肾皮质BAMBI、 NLRP3、上皮钙黏素(E-cadherin)的表达, Western blot法检测肾皮质BAMBI、 NLRP3、 ASC-2、 caspase-1、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原蛋白(Col4)蛋白的表达,实时定量PCR检测肾皮质中BAMBI、 NLRP3的mRNA水平, ELISA检测肾皮质中白细胞介素1β(IL-1β)、 IL-18的水平。采用Spearman秩相关检验对BAMBI和NLRP3蛋白表达进行相关性分析。结果与正常对照组相比, DM组肾皮质NLRP3的mRNA和蛋白水平及ASC-2、 caspase-1的蛋白水平升高,α-SMA、 FN、 Col4蛋白表达也升高,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达降低,胰岛素处理组NLRP3的蛋白和mRNA水平及ASC-2、 caspase-1的蛋白水平低于DM组,α-SMA、 FN、 Col4蛋白表达也低于DM组,而BAMBI的mRNA和蛋白水平及E-cadherin的蛋白表达高于DM组;胰岛素处理组IL-1β、 IL-18的水平较DM组降低,相关性分析显示在DM组以及胰岛素处理组中BAMBI和NLRP3的表达呈负相关。结论胰岛素处理可恢复DM大鼠肾皮质中BAMBI的表达,进而抑制NLRP3炎性体激活,减轻DM大鼠肾脏的炎症反应,阻止或延缓糖尿病肾病的病程进展。     

NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒感染继发MRSA肺炎中的表达变化

目的:探索NLRP3炎症小体在小鼠甲型流感病毒(甲流病毒)HIN1感染继发耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)肺炎中的表达变化。方法:选取C57BL/6小鼠15只,分为空白对照组、MRSA组(MRSA滴鼻感染24 h)和H1N1+MRSA组(甲流病毒H1N1滴鼻预感染6 d后联合MRSA滴鼻感染24 h)。检测小鼠肺组织NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,并检测白细胞介素1β(IL-1β)在肺组织中的mRNA水平及在血清中的浓度。观察小鼠肺组织病理并分析小鼠IL-1β血清浓度与体重下降率的相关性。结果:MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平与空白对照组比均无明显差异(P0.05),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3、caspase-1的mRNA及蛋白表达水平,及IL-1β的mRNA表达水平和血清浓度均明显高于空白对照组(P 0.01)。H1N1+MRSA组NLRP3和caspase-1的mRNA及蛋白表达水平均明显高于MRSA组(P 0.01),但IL-1β的mRNA表达水平及血清浓度均明显低于MRSA组(P 0.01)。MRSA组肺组织病理呈炎症改变,H1N1+MRSA组肺组织病理改变较MASA组更严重。MRSA组及H1N1+MRSA组小鼠体重下降率与IL-1β血清浓度均成负相关(P 0.05)。结论:MRSA感染引起IL-1β的产生和释放不依赖NLRP3炎症小体,而甲流病毒预感染虽然激活了NLRP3炎症小体,但总体降低了机体抗MRSA免疫的IL-1β的表达及分泌,该效应可能是继发于甲流病毒感染的MRSA肺炎更为严重的机制之一。     

低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及机制

目的 探究低温等离子体对胫骨骨折大鼠骨折愈合的作用及可能机制。方法 30只SD大鼠分为假手术组、模型组和低温等离子体照射组，每组10只。HE染色检测大鼠骨折处病理形态改变；ELISA检测大鼠血清ALP水平及骨组织IL-1β和IL-18水平；qRT-PCR和Western blot检测大鼠骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平；Western blot检测大鼠骨组织NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结果 低温等离子体照射促进胫骨骨折大鼠骨折愈合，增加大鼠血清ALP水平及骨组织成骨相关基因RUNX2、OCN和COL1A1 mRNA和蛋白表达水平，降低大鼠骨组织IL-1β和IL-18水平及NLRP3炎症小体相关蛋白NLRP3、cleaved-caspase1和GSDMD表达水平。结论 低温等离子体照射通过抑制NLRP3炎症小体激活促进胫骨骨折大鼠骨折愈合。     

基于NLRP3信号通路探讨活血通脉颗粒对急性心肌梗死大鼠免疫炎症紊乱的干预作用

目的探讨活血通脉颗粒对急性心肌梗死(AMI)大鼠在免疫炎症紊乱的干预作用。方法大鼠42只随机选6只为空白对照组,其余36只大鼠AMI造模。建模后存活大鼠30只随机分成5组,阳性药物对照组,AMI组,活血通脉颗粒低、中、高剂量组,每组6只。空白对照组、AMI组每天灌胃生理盐水,阳性药物对照组184 mg/(kg·d)灌胃辛伐他汀,活血通脉颗粒低、中、高剂量组按生药2.7、5.4、10.8 g/(kg·d)灌胃,每日1次,连续28d。同时建立人H9C2心肌细胞缺氧模型,缺氧处理21 h,加药处理。HE染色观察心肌组织形态学变化;MTS检测心肌细胞活力变化;ELISA检测心肌组织和心肌细胞中IL-1β、TNF-α水平;q RT-PCR检测心肌组织中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、接头蛋白ASC(ASC)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1(caspase-1)m RNA水平;蛋白免疫印迹检测心肌组织中NLRP3、ASC、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶酶原(pro-caspase-1)、caspase-1蛋白水平。结果大鼠和人心肌细胞模型中,AMI组心肌细胞破坏、死亡严重,形态及结构损害严重。随着活血通脉颗粒剂量的增加,心肌细胞坏死现象减弱,逐渐恢复形态。大鼠模型中,与空白对照组相比,AMI组心肌组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白、pro-caspase-1蛋白表达量升高(P 0.05)。与AMI组相比,活血通脉颗粒低剂量组心肌组织中ASC、pro-caspase-1、caspase-1蛋白表达量降低;活血通脉颗粒中、高剂量组心肌组织中IL-1β、NLRP3、ASC、caspase-1 mRNA和蛋白、pro-caspase-1蛋白表达量降低,并呈剂量依赖效应(P 0.05)。人心肌细胞中加药6 h时IL-1β、TNF-α的变化与大鼠模型中类似。结论活血通脉颗粒可能通过减弱NLRP3信号通路、抑制促炎因子表达,实现对AMI大鼠的保护作用。     

小白菊内酯通过抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路减轻哮喘幼年大鼠气道炎症

目的 探讨小白菊内酯（PTL）减轻哮喘幼年大鼠气道炎症的作用机制是否与Nod样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(caspase-1)/白介素（IL）-1β信号通路有关。方法 SD幼年大鼠随机分为对照组、卵清蛋白（OVA）组、PTL（低、中、高）剂量组（1、2、4 mg/kg PTL）和PTL+NLRP3激动剂组（4 mg/kg PTL和100 mg/kg尼日利亚菌素钠盐）。OVA致敏与激发构建哮喘模型。测定幼年大鼠气道反应性，分类计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中炎性细胞，检测血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，观察肺组织病理学改变，检测肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1βmRNA或蛋白表达。结果 与对照组比较，OVA组幼年大鼠气道阻力，BALF中白细胞总数、巨噬细胞、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞数量，血清、BALF中IL-1β、IL-18水平，肺组织炎症评分及肺组织中NLRP3、caspase-1、IL-1β mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）;PTL（低、中、高）剂量组可呈剂量依赖性缓解上述改变；而NLRP3激动剂可减弱PT...     

四君子汤对阿尔茨海默病大鼠中枢海马炎症因子及NLRP3小体的影响

目的 探讨四君子汤（SiJunZi Decoction, SJZD）治疗大鼠阿尔茨海默病的作用机制。方法 将60只雄性SPF级大鼠随机分为正常组,模型组,双氢麦角碱（dihydroergoline, DHE）组,SJZD低、中、高治疗组。采用Morris水迷宫实验检测大鼠记忆功能的变化;ELISA法检测IL-1β、IL-6及IL-10含量;免疫组化法检测caspase11蛋白表达变化;Western blot法检测海马组织NLRP3、caspase-1、caspase-4、caspase-5蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠潜伏逃避期时间增加（P<0.01）、穿越次数减少（P<0.01）,IL-1β、IL-6含量升高（P<0.01）,IL-10含量降低（P<0.01）,NLRP3、caspase-1、caspase-4、caspase-5、caspase-11(P<0.01)表达上调;DHE与模型组比较,潜伏逃避期减少（P<0.01）,穿越次数增加（P<0.01）,IL-1β减少（P<0.01）,NLRP3、caspase-1表达下...     

Apelin-13通过e NOS/NO促进糖尿病小鼠主动脉细胞焦亡相关蛋白的表达

目的探讨血管活性多肽apelin-13是否通过eNOS/NO途径影响糖尿病小鼠主动脉细胞焦亡相关蛋白的表达。方法以8周龄C57/BL小鼠作为对照组小鼠;以8周龄kkAy小鼠作为2型糖尿病小鼠模型。给糖尿病小鼠皮下埋植缓释泵,持续灌注apelin-13处理14 d,剂量为30μg/(kg·d)或apelin-13和L-NAME[NG-nitro-L-arginine methyl ester,L-NAME,eNOS抑制剂,剂量为10 mg/(kg·d)]共同处理14 d。用无创尾压法检测各组小鼠处理前后的血压值;取血检测血糖和糖化血红蛋白;取腹主动脉,进行HE染色,显微镜下观察血管形态学改变,免疫组织化学染色分析小鼠主动脉内eNOS和细胞焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平。结果与对照组相比,糖尿病组小鼠主动脉中eNOS含量明显升高(P<0.05),焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平升高,经过apelin-13处理后,糖尿病小鼠血管壁eNOS含量进一步升高(P<0.05),焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平也随之升高(P<0.05),给予eNOS抑制剂L-NAME之后,糖尿病小鼠主动脉eNOS含量降低(P<0.05),焦亡相关信号蛋白NLRP3、caspase-1、gasdermin D的表达水平也随之降低(P<0.05)。结论Apelin-13可能通过eNOS/NO途径促进糖尿病小鼠主动脉细胞焦亡相关蛋白的表达,导致糖尿病小鼠血管结构损伤和功能。     

延胡索总生物碱对慢性癫痫大鼠皮层NLRP3/caspase-1/GSDMD介导的细胞焦亡的影响

目的：研究延胡索总生物碱（TAC）对戊四氮（PTZ）所诱导的慢性癫痫大鼠的治疗作用，探讨其对大脑皮层核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/caspase-1/消皮素D(GSDMD)介导的细胞焦亡的影响及可能机制。方法：清洁级雄性SD大鼠30只，随机抽取6只大鼠作为正常组，其余大鼠采用PTZ(35 mg/kg)腹腔连续注射28 d复制慢性癫痫模型。将造模成功的18只大鼠随机分为模型组、低剂量TAC组和高剂量TAC组，每组6只。低、高剂量TAC组大鼠分别灌胃给予7和14 mg/kg的TAC，连续给药14 d，正常组和模型组大鼠灌胃给予等体积生理盐水。观察记录大鼠全面强直阵挛发作（GTCS）和极小阵挛发作（MCS）的潜伏期；采用HE染色观察颞叶皮层的病理学变化；TUNEL法检测神经细胞凋亡；免疫组化和Western blot法检测皮层组织核因子κB(NF-κB)、NLRP3、caspase-1和GSDMD蛋白表达；免疫组化检测脑组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素18(IL-18)和IL-1β蛋白表达；RT-qPCR检测各组NLRP3、caspase-1和GSDMD的m...     

NLRP3炎性小体促进脓毒症致急性肾损伤的机制研究

目的 探讨NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎性小体在脓毒症致急性肾损伤中的作用及其可能的机制。方法 将40只SD大鼠随机分为对照组、模型组、MCC950组和Ac-YVAD-CMK组,每组10只。采用盲肠结扎穿刺术建立脓毒症大鼠模型,MCC950组和Ac-YVAD-CMK组大鼠造模后分别腹腔注射MCC950 10 mg/kg和Ac-YVAD-CMK 5 mg/kg,对照组大鼠仅探查肓肠。ELISA法检测尿素氮、肌酐、中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）、IL-1β、IL-18含量;Western blot检测肾损伤分子-1(KIM-1)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC)、Caspase-1、消皮素D(GSDMD)和半乳糖结合蛋白Galectin-3表达;HE染色观察大鼠肾组织病理学变化;PAS染色观察大鼠肾小管损伤情况。结果 与对照组相比,模型组大鼠肾组织病理学评分、尿素氮、肌酐、NGAL、IL-1β、IL-18、糖原沉积水平及KIM-1、NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD和Galectin-3蛋白表达显著升高（P<0.05）。与...     

基于NLRP3 炎性小体通路探讨金樱子乙醇提取物对系膜增生性肾小球肾炎大鼠的保护作用

目的:探究金樱子乙醇提取物(RLM)对系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN)大鼠的保护作用,并初步探究其作用机制。方法:将SD大鼠分为假手术组(Sham),MsPGN组,金樱子乙醇提取物低、中、高剂量组(RLM-L、RLM-M、RLM-H),阳性对照组(醋酸泼尼松组,Prednisone acetate),每组12只大鼠,给药4周后收集24 h蛋白尿液处死大鼠,观察各组大鼠体重变化情况,检测血清肾功能相关指标肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)等;HE染色检测肾组织病理形态学变化;蛋白免疫印迹法(WB)、免疫组化法检测肾组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶(caspase-1)表达;ELISA法检测肾组织匀浆中IL-1β和IL-18表达。结果:与Sham组相比,MsPGN组大鼠体重降低,24 h尿蛋白、BUN、Scr水平升高,TP、ALB水平降低,肾组织损伤评分升高,肾组织中NLRP3、ASC和caspase-1蛋白表达升高,组织匀浆中IL-1β、IL-18水平升高(P0.05);与MsPGN组相比,RLM-L、RLM-M、RLM-H、Prednisone acetate组大鼠体重升高,24 h尿蛋白、BUN、Scr降低,TP、ALB水平升高,肾组织损伤评分降低,肾组织中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白表达降低,组织匀浆中IL-1β、IL-18水平降低(P0.05)。结论:RLM对MsPGN大鼠肾脏损伤具有保护作用,这种作用可能通过抑制NLRP3炎性小体通路,进而抑制通路介导的促炎性因子IL-1β和IL-18的表达,最终缓解肾损伤。     

白藜芦醇通过调节miR-223-3p/NLRP3通路发挥对幼年大鼠脑膜炎模型皮质神经元的保护作用

目的:探究白藜芦醇在大鼠细菌性脑膜炎(BM)模型中对皮质神经元的保护作用及机制。方法:通过小脑延髓池注射B族溶血性链球菌制作BM模型,经鼻滴注白藜芦醇,并经侧脑室注射微小RNA-223-3p(miR-223-3p)antagomir。HE染色观察脑膜炎组织病理结构的改变;Loeffler评分法评估神经功能;TUNEL染色检测神经元凋亡情况;免疫荧光染色检测白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18、胶质细胞原纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙结合衔接分子1(Iba1)的表达;Western blot检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18的表达水平;RT-qPCR检测miR-223-3p的表达水平;利用在线软件TargetScan查询miR-223-3p与NLRP3mRNA中是否存在互补的核苷酸序列。结果:与假手术组比较,BM模型组大鼠的脑膜增厚;神经功能评分明显降低(P0. 05);TUNEL阳性神经元数量明显增多(P0. 05);星形胶质细胞和小胶质细胞被激活;IL-1β和IL-18的免疫荧光强度明显增加(P0. 05);NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β、IL-18和miR-223-3p的表达水平明显升高(P0. 05)。与BM模型组比较,白藜芦醇治疗组大鼠神经功能评分明显升高(P0. 05);TUNEL阳性神经元数量明显减少(P0. 05);星形胶质细胞和小胶质细胞炎症反应被抑制;IL-1β和IL-18荧光强度明显减弱(P0. 05);NLRP3、cleaved caspase-1、IL-1β和IL-18蛋白表达明显降低,miR-223-3p的表达水平明显上调(P0. 05)。TargetScan查询显示miR-223-3p的部分核苷酸序列与NLRP3 mRNA 3'-UTR的核苷酸序列互补。在白藜芦醇治疗的BM大鼠脑内,与antagomir对照组比较,miR-223-3p antagomir处理组的NLRP3蛋白表达明显升高(P0. 05)。结论:在幼年大鼠BM模型中,白藜芦醇可能通过调节miR-223-3p/NLRP3通路减少皮质神经元炎性死亡,从而发挥对神经元的保护作用。     

细胞焦亡(pyroptosis)参与大鼠坏死性小肠结肠炎的致病作用

目的探讨细胞焦亡(pyroptosis)在坏死性小肠结肠炎(NEC)中的作用。方法将60只1日龄的SD大鼠随机分为正常对照组、NEC组,每组30只。NEC组采用缺氧及冷刺激的方式建立NEC模型,对照组不予处理。新生大鼠前3d观察其一般情况,测量体质量。第4天时,采用HE染色观察回盲部肠组织病理学变化并评分。采用实时荧光定量PCR检测回盲部肠组织白细胞介素18(IL-18)、IL-1β、含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)的mRNA水平,ELISA检测回盲部肠组织匀浆中IL-1β、IL-18水平,采用Western blot法检测肠组织中胱天蛋白酶1(caspase-1)、P10、P20蛋白水平。结果与正常组相比,NEC组新生大鼠一般情况较差、回盲部肠组织肠上皮损伤明显,NEC组肠组织中IL-18、IL-1β的mRNA和蛋白水平及NLRP3 mRNA水平明显增高,caspase-1蛋白水平降低,而P10及P20仅在NEC组中表达。结论细胞焦亡参与NEC发病。     

敲除PTEN改善心肌缺血再灌注大鼠心脏功能并抑制NLRP3介导的心肌细胞焦亡

目的通过敲除第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源蛋白(PTEN),探索其对大鼠心脏功能和含pyrin结构域NOD样受体家族3(NLRP3)介导的心肌细胞焦亡(pyroptosis)的影响。方法建立大鼠心肌缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠模型,分为假手术组(野生型健康大鼠)、野生型I/R组(野生型大鼠进行心肌I/R处理)、敲除PTEN(PTEN KO)的I/R组(PTEN KO大鼠进行心肌I/R处理)。反转录PCR检测PTEN mRNA水平, HE染色观察心肌病理损伤;超声心动图仪检测心率(HR)和左心室壁厚度(LVWT)并通过BL-420F生物机能实验系统记录左心室收缩压(LVSP)、左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS); ELISA检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)的含量; Western blot法检测心脏组织NLRP3、 ELAV样RNA结合蛋白1(ELAVL1)、胱天蛋白酶1(caspase-1)、白细胞介素1β(IL-1β)的蛋白表达,免疫组织化学染色法检测心肌组织中caspase-1的含量;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色观察心肌组织的凋亡。结果与假手术组相比,野生型I/R组PTEN mRNA和蛋白水平显著增加, HR、 LVSP、 LVEF、 FS和LVWT均显著降低,血清CK-MB、 Mb、 cTnI含量均显著升高, NLRP3、 ELAVL1、 caspase-1、 IL-1β蛋白表达水平均显著升高,敲除PTEN后PTEN mRNA和蛋白水平显著降低。敲除PTEN心肌细胞病理损伤减轻, HR、 LVSP、 LVEF、FS和LVWT均显著升高,血清CK-MB、 Mb、 cTnI含量显著降低。NLRP3、 ELAVL1、 caspase-1、 IL-1β蛋白水平均显著降低,凋亡心肌细胞数量显著减少。结论敲除PTEN减缓心肌病理损伤,抑制NLRP3介导的心肌细胞焦亡,表明敲除PTEN能减轻心肌I/R损伤。     

Gasdermin家族蛋白在缺血再灌注损伤大鼠肾组织中的表达变化

目的研究gasdermin家族蛋白在缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤大鼠肾组织中的表达变化,并探讨该家族各蛋白与急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的关系。方法 20只Sprague Dawley(SD)雄性成年大鼠随机分为假手术组与I/R组(n=10),分别给予假手术或肾脏缺血再灌注处理后,采集血液及肾组织标本;自动分析仪检测各大鼠血清肌酐、血清尿素氮水平,肾组织PAS染色评估损伤程度;蛋白印迹法检测肾组织中炎症因子interleukin(IL)-1β和interleukin(IL)-18、炎性半胱氨酸蛋白酶caspase-1和caspase-11的前体及活性体、gasdermin家族蛋白(GSDMA、GSDMB、GSDMC、GSDMD、DFNA5、DFNB59)前体及N端的表达水平。结果与假手术组比较,I/R组大鼠血清肌酐、血清尿素氮水平及肾小管损伤评分均显著增加(P0.000 1);肾组织中IL-1β、IL-18,caspase-1前体及活性体、caspase-11前体及活性体、GSDMD前体及N端表达水平均显著增加(P0.000 1、P0.001或P0.05),且GSDMD表达变化与肾功能损害程度、炎症因子表达变化呈显著正相关(P0.01),而GSDMA、GSDMB、GSDMC、DFNA5、DFNB59各蛋白前体及N端表达水平均无明显变化(P0.05)。结论 GSDMD蛋白前体及N端在缺血再灌注损伤大鼠肾组织中表达上调,而GSDMA、GSDMB、GSDMC、DFNA5、DFNB59前体及N端表达无明显差异,提示GSDMD蛋白可能是gasdermin家族中唯一介导AKI肾脏焦亡的成员,其他成员可能并不参与该病理生理过程。     

大鼠急性心肌梗死后NLRP3炎性体-IL-1β信号轴激活与End-MT的关系

目的:研究在急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)引发的心肌纤维化过程中,NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与内皮-间充质转化(endothelial-mesenchymal transition,End-MT)是否存在同一性。方法:30只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组(n=15)与AMI组(n=15),术后28 d采用Masson染色检测心肌纤维化水平;Western blot检测NLRP3炎性体(NLRP3、ASC、pro-caspase-1和caspase-1)、内皮细胞标志物(CD31和VE-cadherin)及间充质细胞标志物(α-SMA和FSP1)的表达;酶联免疫吸附法检测NLRP3炎性体下游因子IL-1β的表达。结果:与假手术组相比,冠脉结扎组AMI大鼠心肌纤维化水平、End-MT进展程度、NLRP3炎性体活性及caspase-1和IL-1β的表达均显著增加(P0.05)。结论:NLRP3炎性体-IL-1β信号轴的激活与End-MT进程具有显著同一性,提示NLRP3炎性体-IL-1β作为激活End-MT的潜在靶点将为研究AMI后心肌纤维化及心力衰竭提供新的理论依据。     

二氧化硅所致急性肺损伤大鼠肺部菌群的特征及相关性分析

目的：探讨二氧化硅所致急性肺损伤大鼠模型的潜在生物学机制。方法：采用随机数字表法,将SD雄性大鼠划分为正常组和二氧化硅模型组。正常组经气管灌注1 mL生理盐水,模型组经气管灌注等体积50 g/L二氧化硅混悬液。7 d后收集大鼠肺组织和血清,HE染色观察肺组织病理学特征,免疫组化检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)和消皮素D(GSDMD)蛋白表达,ELISA法检测血清炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;从肺组织中提取细菌DNA,经16S核糖体RNA基因测序描述肺部菌群组成变化,通过生物信息学分析比较正常组与模型组菌群结构差异。结果：与正常组相比,模型组大鼠体重增长率和肺指数有显著差异;模型组大鼠肺组织HE染色可见肺泡结构破坏,炎性细胞增多;模型组大鼠肺组织NLRP3和GSDMD蛋白表达水平均显著升高,血清IL-1β、IL-18和TNF-α水平均显著升高。与正常组相比,模型组丰度增加的肺部菌群为双歧杆菌（Bifidobacterium）、Clostridium sensu stricto 1和副萨特氏菌（Parasutt...