miR-144通过靶向TIGAR调控胃癌细胞增殖与凋亡及自噬的分子机制

目的研究miR-144对胃癌细胞增殖、凋亡和自噬的影响和机制。方法将miR-144 mimics、mimics control分别转染胃癌细胞,依次标记为mimics-NC组、miR-144 mimics组。将miR-144 mimics分别与pcDNA3.1、pcDNA3.1-TIGAR共转染至胃癌细胞,依次标记为miR-144 mimics+NC组、miR-144 mimics+TIGAR组。正常培养的胃癌细胞标记为Control组。以噻唑蓝法检测细胞增殖,以流式细胞术测定细胞凋亡,以Western blot检测凋亡蛋白caspase-3和自噬蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ表达变化,以生物信息学软件预测miR-144的靶基因可能为TIGAR,利用荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。结果 mimics-NC组和miR-144 mimics组的细胞增殖能力分别为0.36±0.05,0.20±0.02,细胞凋亡率分别为3.05±0.34,13.84±1.47,caspase-3表达水平分别为0.22±0.04,0.43±0.05, Beclin1分别为0.38±0.06,0.73±0.07,LC3Ⅱ分别为0.19±0.03,0.39±0.05,差异均有统计学意义(均P<0.05)。miR-144 mimics+NC组和miR-144 mimics+TIGAR组的细胞增殖能力分别为0.21±0.04,0.32±0.03,细胞凋亡率分别为12.04±1.25,5.98±0.73,caspase-3表达水平分别为0.40±0.03,0.24±0.05,Beclin1分别为0.60±0.05,0.46±0.06,LC3Ⅱ分别为0.34±0.06,0.20±0.03,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 miR-144靶向抑制TIGAR表达降低胃癌细胞增殖能力,并诱导胃癌细胞凋亡和自噬。     

微小 RNA-15a-5p靶向蛋白质二硫键异构酶 A6前体蛋白抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的 探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)是否可通过靶向蛋白质二硫键异构酶A6前体蛋白(PDIA6)而抑制前列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭.方法 选取2018年2月至2019年3月江南大学附属医院接受治疗的前列腺癌病人50例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)与蛋白印迹法(Western blotting)分别检测前列腺癌组织、癌旁组织中miR-15a-5p、PDIA6的表达量;体外培养人前列腺癌DU145细胞,将细胞分为miR-NC组、miR-15a-5p组、si-NC组、si-PDIA6组、miR-15a-5p+pcDNA组、miR-15a-5p+pcDNA-PDIA6组;噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖;Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭;双荧光素酶报告实验验证miR-15a-5p、PDIA6的靶向关系.结果 与癌旁组织相比,前列腺癌组织中miR-15a-5p的表达水平降低[(1.00±0.17)比(0.68±0.11)],PDIA6 mRNA[(0.99±0.09)比(1.64±0.18)]和蛋白[(0.44±0.07)比(0.76±0.17)]表达水平升高;转染miR-15a-5p mimics或转染si-PDIA6可降低细胞存活率(P<0.05),减少迁移及侵袭细胞数(P<0.05);双荧光素酶报告实验证实miR-15a-5p可靶向结合PDIA6;PDIA6过表达可降低miR-15a-5p过表达对DU145细胞增殖、迁移及侵袭的抑制作用.结论 过表达miR-15a-5p通过降低PDIA6的表达对列腺癌细胞增殖、迁移及侵袭能力有抑制作用.     

长链非编码RNA FOXD3-AS1对黑色素瘤细胞增殖与侵袭的影响北大核心CSCD

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FOXD3-AS1靶向miR-128-3p/PDK1对黑色素瘤细胞增殖和侵袭的调控作用。方法转染组-1,转染组-2,转染组-3分别转染pcDNA-FOXD3-AS1、pcDNA-FOXD3-AS1与miR-128-3p mimics的阴性对照(mimic NC)、pcDNA-FOXD3-AS1与miR-128-3p mimics,以未进行转染的细胞作为对照组。用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测黑色素瘤细胞和正常人表皮黑色素细胞FOXD3-AS1和miR-128-3p的表达差异;用双荧光素酶报告基因实验验证FOXD3-AS1与miR-128-3p的相互作用;用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞的增殖能力;用Transwell小室法检测细胞的侵袭;用蛋白质印迹法检测3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)蛋白的表达水平。结果对照组、转染组-1,转染组-2,转染组-3细胞24 h的增殖率分别为(100.00±0.00)%,(168.03±15.71)%,(163.58±6.24)%,(124.62±8.93)%;侵袭的细胞数分别为(21.33±2.08),(38.33±4.89),(40.00±2.65),(25.33±2.52)个;PDK1的表达水平分别为0.36±0.02,1.19±0.08,1.24±0.11,0.48±0.03。转染组-1与对照组比较,转染组-3与转染组-2比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论FOXD3-AS1通过靶向miR-128-3p/PDK1轴,促进黑色素瘤细胞的增殖与侵袭。     

EM患者子宫内膜组织的ESCs中miR-539表达水平及其靶向MMP-9对ESCs侵袭和迁移的影响

目的探究子宫内膜异位症(EM)患者子宫内膜组织的子宫内膜基质细胞(ESCs)中miR-539表达水平,以及miR-539靶向基质金属蛋白酶9(MMP-9)对ESCs侵袭和迁移的影响。方法收集60例EM患者子宫内膜异位组织及47例正常子宫内膜组织,分离ESCs原代培养,实时荧光定量PCR检测miR-539和MMP-9 mRNA表达水平,并采用双荧光素酶报告基因检测其靶向关系。利用Lipofectamine 3000试剂转染ESCs,并将其分为miR-539 mimics组、mimics NC组、miR-539 inhibitors组和inhibitors NC组。CCK-8检测各组细胞增殖情况;划痕实验检测细胞迁移;Transwell检测细胞侵袭;Western blot法检测各组细胞中MMP-9蛋白表达水平。结果 EM组miR-539 m RNA水平显著低于对照组,MMP-9 mRNA水平显著高于对照组(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示miR-539与MMP-9具有明显的靶向关系(P<0.05)。与mimics NC组相比,miR-539 mimics组ESCs细...     

LINC00094靶向miR-19b对非小细胞肺癌增殖、侵袭的抑制作用及其分子机制

目的 探讨LINC00094对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响及其作用机制。方法 将pcDNA3.1、pcDNA3.1-LINC00094、si-NC、si-LINC00094转染至非小细胞肺癌A549细胞中;将pcDNA3.1-LINC00094分别与miR-NC、miR-19b转染至A549细胞中,分别记为pcDNA3.1-LINC00094+miR-NC组、pcDNA3.1-LINC00094+miR-19b组。采用实时荧光定量PCR检测LINC00094和miR-19b表达水平;采用蛋白质印迹法检测细胞周期蛋白和凋亡蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术和Transwell分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭能力;双荧光素酶报告实验检测LINC00094与miR-19b的靶向关系。结果 LINC00094在肺癌组织中低表达。过表达LINC00094可降低A549细胞的生存率,并抑制细胞迁移、侵袭（P<0.05）,且伴有相关蛋白表达水平的改变（P<0.05）。LINC00094靶向调控miR-19b,过表达miR-19b可逆转LINC00...     

微小 RNA-92a靶向 Kru.ppel样因子 2基因促进卵巢癌细胞侵袭的作用

目的研究微小 RNA-92a(miR-92a)靶向 Kruppel.样因子 2(KLF2)基因促进卵巢癌细胞侵袭的作用及机制。方法 2019年 1月至 2020年 3月进行本研究。培养卵巢癌细胞系 A2780、SKOV3、OVCAR-3及卵巢上皮细胞系 HOSEpiC,检测 miR-92a的表达水平; SKOV3细胞分为阴性对照( NC)组、 miR-92a抑制物组、 miR-92a组、 pcDNA组、 pcDNA+miR-92a组、 pcDNA-KLF2+miR-92a组,分别转染 NC序列、 miR-92a、miR-92a抑制物、空白 pcDNA质粒、过表达 KLF2的 pcDNA重组质粒,检测细胞侵袭数目、 KLF2表达水平,双荧光素酶报告基因验证 miR-92a靶向 KLF2基因。结果 A2780、SKOV3、OVCAR-3细胞中 miR-92a的表达水平分别为( 0.92±0.15)、(1.62±0.19)、(1.21±0.13),均高于 HOSEpiC的( 0.62±0.09)(P<0.05);与 NC组( 75.38±     

miR-155通过调节ETS1促进鼻咽癌细胞侵袭转移能力的研究

目的 观察微小RNA(micro RNA)miR-155在鼻咽癌细胞侵袭转移中的作用。方法 以鼻咽癌CEN1和5-8F细胞作为研究对象,分别转染miR-155 NC、miR-155 inhibitor、miR-155 mimics和ETS1 siRNA,运用Transwell实验检测miR-155和ETS1对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的作用,RT-qPCR检测细胞miR-155表达;蛋白印记实验检测ETS1、MMP2和MMP9蛋白表达。结果 与miR-155 NC组相比,miR-155 inhibitor组细胞侵袭[(237.33±15.63)个vs.(117.00±5.72)个]和迁移[(331.00±9.42)个vs.(262.00±11.05)个]能力均降低(P<0.05),ETS1[1.00 vs.(0.77±0.04)]、MMP2[1.00 vs.(0.58±0.05)]和MMP9[1.00 vs.(0.38±0.06)]蛋白表达均下调(P<0.05);miR-155 mimics组细胞侵袭[(134.00±8.83)个vs.(326.00±12.68)个]和迁移[...     

微小 RNA-490-3p靶向 FK506相关蛋白 14表达抑制骨肉瘤 MG63细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨微小 RNA-490-3p(miR-490-3p)对骨肉瘤 MG63细胞侵袭、迁移的影响及其机制。方法 2019年 9月至 2020年 4月,从中科院上海细胞库购买人骨肉瘤细胞株 MG63进行体外培养,分为对照组(未转染)miR-NC组(转染 miR-NC)、 miR-490-3p组(转染 miR-490-3p mimics),miR-490-3p+pcDNA组(共转染 miR-490-3p mimics与空载体、)和 miR-490-3p+FKBP14组(共转染 miR-490-3p mimics与 FKBP14过表达载体),采用 RT-PCR检测 miR-490-3p表达, Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法检测钙黏蛋白 E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、上皮间质转化因子 Twist转录因子( Twist)和 FK506相关蛋白 14(FKBP14)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-490-3p和 FKBP14的靶向关系。结果与对照组比较, miR-490-3p组细胞中 miR-490-3p表达水平明显升高( 3.68±0.37比 1.02±0.10,P<0.05),而侵袭细胞数( 33.25±2.02比     

miR-124靶向趋化素样因子超家族成员6对胶质瘤细胞的影响

目的　探究微小RNA（miR）-124靶向调控趋化素样因子超家族成员6（CMTM6）对胶质瘤细胞的侵袭、迁移的影响。方法　实时荧光定量PCR（qPCR）法检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹实验检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中CMTM6蛋白表达水平。miRTarBase预测miR-124与CMTM6的结合位点,实验设mimic NC组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组、miR-124 mimic+CMTM6组,分别转染miR-124 mimic NC、miR-124 mimic、pcDNA、pcDNA+CMTM6于各组细胞中。qPCR法检测各组细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭、迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白免疫印迹实验检测细胞中CMTM6、细胞表面程序性死亡蛋白配体1（PD-L1）蛋白表达水平。结果　与OLN93相比,SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124表达水平降低（P＜0.05）,CMTM6 mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）,选择U251细胞进行后续实验。miRTarBase预测发现miR-124与CMTM6存在结合位点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与mimic NC组和miR-124 mimic+CMTM6组相比,miR-124 mimic组和miR-124 mimic+pcDNA组细胞中miR-124表达水平升高（P＜0.05）,CMTM6 mRNA表达水平降低。培养24、48、72、96 h时细胞OD450降低,侵袭、迁移细胞数量减少,CMTM6、PD-L1蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论　上调miR-124表达可靶向下调CMTM6的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭、迁移。     

微小 RNA-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制

目的 探讨微小RNA(miR)-590对口腔鳞癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和分子机制.方法 实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测2014年1月至2017年1月菏泽市牡丹人民医院52例口腔鳞癌组织中miR-590的表达.将口腔鳞癌细胞Tca-8113分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-590抑制物(anti-miR-590)组、空载体(pcDNA3.1)组、大肿瘤抑制基因1(LATS1)过表达载体(pcDNA3.1-LATS1)组、anti-miR-590+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-590+LATS1小干扰RNA组(si-LATS1).四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)检测细胞活力,Transwell法检测细胞的迁移和侵袭数.双荧光素酶报告基因实验和蛋白质印迹法检测验证miR-590和LATS1的靶向调控关系.结果 与癌旁组织比较,口腔鳞癌组织中miR-590的表达水平显著升高[(0.73±0.07)比(0.30±0.03),P<0.05].与anti-miR-NC组比较,anti-miR-590组细胞活力[(0.40±0.04)比(0.78±0.08)]、迁移[(46±5)个比(136±13)个]和侵袭数[(42±4)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05);与pcD-NA3.1组比较,pcDNA3.1-LATS1组细胞活力[(0.49±0.05)比(0.78±0.08)]、迁移数[(56±6)个比(136±13)个]和侵袭数[(50±5)个比(128±13)个]显著降低(P<0.05).LATS1靶向负调控LATS1表达.与anti-miR-590+si-NC组比较,anti-miR-590+si-LATS1组细胞活力(0.61±0.06)比(0.40±0.04)、迁移数[(94±9)个比(45±4)个]和侵袭数[(87±9)个比(40±4)个]显著升高(P<0.05).结论 抑制miR-590通过靶向调控LATS1表达从而抑制口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭.     

阿帕替尼上调miR-324-5p表达抑制结肠癌细胞的研究

目的 探讨阿帕替尼对结肠癌细胞生物学行为的影响和机制。方法 将结肠癌细胞HCT116分为对照(NC)组,低、中、高剂量组(0.5,1.0和2.0μmol·L^-1阿帕替尼),转染1组(2.0μmol·L^-1阿帕替尼+anti-miR-NC),转染2组(2.0μmol·L^-1阿帕替尼+anti-miR-324-5p)。细胞计数试剂盒-8法检测细胞增殖率;Transwell法检测细胞迁移和侵袭;荧光定量聚合酶链反应法检测miR-324-5p表达。结果 NC组,低、中、高剂量组、转染1组、转染2组HCT116细胞增殖率分别为(100.00±2.79)%,(94.29±1.74)%,(76.48±1.65)%,(51.48±1.75)%,(51.58±0.88)%和(93.64±3.90)%;迁移细胞数分别为(206.27±9.30),(163.23±3.84),(133.83±4.26),(104.32±5.72),(107.93±3.14)和(194.51±3.96)个;侵袭细胞数分别为(153.47±4.37),(121.4...     

苦参碱通过lncRNA CASC11/miR-381-3p轴调控宫颈癌细胞的恶性生物学行为的研究

目的 探讨苦参碱是否通过调控lncRNA CASC11/miR-381-3p的表达,调控宫颈癌细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭。方法 宫颈癌细胞SiHa分别转染pcDNA3.1空载体、pcDNA3.1-lncRNA CASC11、mimics阴性对照和miR-381-3p mimics,经不同质量浓度(25、50和100 mg·L^-1)的苦参碱处理后,采用qRT-PCR试验检测细胞中lncRNA CASC11和miR-381-3p表达,CCK-8试验检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,Transwell小室试验检测细胞迁移和侵袭,双荧光素酶试验验证lncRNA CASC11和miR-381-3p的靶向关系,Western blot试验检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、Cleaved-caspase3、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达。结果 lncRNA CASC11在宫颈癌细胞中高表达,miR-381-3p在宫颈癌细胞中低表达;不同质量浓度的苦参碱均能抑制SiHa细胞增殖、迁...     

MicroRNA-129-2靶向调控SOX4抑制食管癌细胞增殖与侵袭转移的研究

目的 探讨MicroRNA-129-2(miR-129-2)在体内外抑制食管癌细胞增殖和侵袭转移的作用及可能机制,为食管癌的预后评估及靶向治疗提供新的思路.方法 将miR-129-2 mimics及miR-129-2 mimics NC基因序列分别转染到食管癌NMC109细胞中,并设为miR-129-2 mimics高表达组和miR-129-2 mimics阴性对照组(miR-129-2 mimics NC组),将非转染的NMC109细胞设为空白对照组.体外实验:运用MTT法检测3组细胞的增殖能力、Transwell法检测细胞侵袭能力、蛋白印迹法检测SOX4蛋白表达.采用裸鼠体内移植瘤形成实验检测3组细胞在体内环境下的增殖能力.结果 miR-129-2 mimics组的食管癌细胞增殖活性及侵袭能力较miR-129-2 mimics NC组及空白对照组明显减弱(P<0.001),而空白对照组与miR-129-2 mimics NC组食管癌细胞增殖性及侵袭性无明显差异(P>0.05);miR-129-2 mimics组的食管癌细胞中,SOX4的表达下调(P<0.001);miR-129-2 mimics组裸鼠移植瘤体积及重量明显减小(P<0.001),而miR-129-2mimics NC组及空白对照组无明显差异(P>0.05).结论 miR-129-2具有抑制食管癌细胞NMC109增殖和侵袭转移的作用,其作用机制可能与靶向下调SOX4基因表达有关.     

miR-199a-5p调控DDR1抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移

目的初步探究miR-199a-5p对人脑胶质瘤细胞增殖和迁移的影响。方法选取U251细胞为实验对象,构建miR-199a-5p过表达U251细胞株。实验分组:对照组(无转染的U251细胞,Control)、阴性对照组(转染空载体质粒U251细胞,NC)以及实验组(转染miR-199a-5p成熟模拟物,mimics)。实时荧光定量PCR检测各组细胞miR-199a-5p表达;CCK-8检测转染miR-199a-5p后细胞增殖;细胞划痕实验与Transwell迁移实验检测各组U251迁移情况;Western blot检测DDR1表达;构建DDR1过表达U251细胞株,检测DDR1过表达对转染miR-199a-5p的U251细胞增殖和迁移的影响。结果mimics组细胞miR-199a-5p水平高于control组(P<0.01),细胞活力降低(P<0.01),增殖能力减弱(P<0.01)。转染miR-199a-5p组细胞DDR1表达水平降低(P<0.01)。与mimins组相比,转染pcDNA3.1-DDR1组能够上调DDR1(P<0.01),增加细胞活力,促进细胞增殖(P<0.05或P<0.01)。结论miR-199a-5p能够下调DDR1表达,抑制人脑胶质瘤细胞增殖和迁移。     

miR-105-5p靶向SIRT1调控脂肪酸代谢影响胃癌细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-105-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及脂肪酸代谢的影响,阐明miR-105-5p与沉默信息调节因子1(SIRT1)基因的靶向关系。方法 选取人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌HepG2细胞,将不同质粒转染到HepG2细胞,分为miR-105-5p组(转染miR-105-5p mimic)、si-miR-105-5p组(转染miR-105-5p inhibitor)、miR-NC组(转染mimic NC)、NC组(转染inhibitor NC)、Scramble组(转染Scramble)、miR-105-5p+Scramble组(转染miR-105-5p mimic、Scramble)及miR-105-5p+sh-SIRT1组(转染miR-105-5p mimic、sh-SIRT1)。MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,ELISA检测细胞磷脂、三酰甘油含量,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-105-5p、SIRT1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞SIRT1、FASN、ACC1及FABP5表达水平。生物信息预测...     

miR-25对食管癌EC109细胞侵袭和迁移能力的 影响及临床意义

目的 探索 miR-25 对食管癌侵袭和迁移能力的影响以及作为食管癌诊断生物标志物的潜力。方法 （1）荧光定量PCR（qPCR）检测54例早期食管癌患者癌组织和癌旁组织中miR-25表达水平。（2）人食管癌细胞EC109 分为miR-25 mimic组、NC mimic组、miR-25 inhibitor组和NC inhibitor组。转染相应序列后,qPCR检测miR-25转染 效率。Transwell实验检测过表达或敲低miR-25对EC109细胞侵袭和迁移的影响。Targetscan数据库预测miR-25的 靶基因,选定靶基因盐诱导激酶1（SIK1）基因。Western blot 和双荧光素酶报告实验鉴定miR-25与SIK1的靶向关 系。（3）EC109 细胞分为 pcDNA 3.1 组、SIK1 过表达组和 miR-25+SIK1 过表达组。Transwell 实验检测 miR-25 靶向 SIK1对EC109细胞侵袭和迁移能力的影响。（4）提取食管癌患者（54例）和健康对照者（54例）的血浆外泌体,比较2 组血浆外泌体中miR-25的相对表达量,分析食管癌患者癌组织和血浆外泌体中miR-25的相关性。结果 （1）食管 癌组织中 miR-25 相对表达水平高于癌旁组织。（2）过表达 miR-25 后,EC109 细胞侵袭和迁移能力增强,而敲低 miR-25 表达后,细胞侵袭和迁移能力下降。Western blot 结果显示,过表达 miR-25 后,SIK1 蛋白表达下降;反之, 敲低miR-25后SIK1蛋白表达升高。（3）Transwell实验显示,与pcDNA 3.1组相比,SIK1过表达组EC109细胞侵袭和 迁移的细胞数量减少,而miR-25和SIK1联合作用后,EC109侵袭和迁移的细胞数量较SIK1过表达组增多。（4）食管 癌血浆外泌体样本中miR-25的表达量高于健康对照,且miR-25在食管癌组织中的表达与血浆外泌体中的相对表达 量呈正相关。结论 miR-25可能通过靶向调控SIK1来促进食管癌细胞的侵袭和迁移,且miR-25有作为食管癌早 期诊断生物标志物的潜力。     

微小 RNA-466靶向调控 Twist1影响宫颈癌 SiHa细胞增殖和迁移

目的 研究微小RNA-466(miR-466)靶向调控碱性螺旋-环-螺旋转录因子1(Twist1)对宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移的影响和机制.方法 本研究起止时间为2019年1—10月.宫颈癌Caski、SiHa、C33A细胞购自上海沪震生物科技有限公司;正常宫颈上皮End1/E6E7细胞购自上海雅吉生物科技有限公司.定量即时聚合酶链锁反应(qRT-PCR)方法测定宫颈癌细胞中miR-466表达变化.在宫颈癌SiHa细胞中转染miR-466模拟物(miR-466 mimics),噻唑蓝(MTT)方法检测细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞迁移和侵袭能力变化,蛋白质印迹法(Western blotting)检测细胞中波形蛋白(Vimentin)和上皮钙黏素(E-cadherin)蛋白表达变化.在线靶基因预测软件预测miR-466的靶基因可能为Twist1,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系.将Twist1过表达载体和miR-466 mimics共转染到宫颈癌SiHa细胞中,检测细胞增殖、迁移和侵袭能力变化.结果 正常宫颈上皮End1/E6E7细胞和宫颈癌Caski、SiHa、C33A细胞中miR-466表达水平依次为:(1.00±0.09)、(0.58±0.06)、(0.20±0.03)、(0.45±0.04);宫颈癌细胞系Caski、SiHa、C33A中miR-466表达水平低于End1/E6E7细胞,差异有统计学意义(P<0.0001).与miR-NC组比较,miR-466组SiHa细胞细胞吸光度(0.29±0.04)比(0.45±0.02)降低,细胞侵袭数目[(81.46±6.35)个比(117.95±11.62)个]和迁移数目[(90.17±7.43)个比(147.15±12.04)个]下降,Vimentin蛋白表达水平降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.001).与miR-466+pCDNA3.1组比较,miR-466+pCDNA3.1-Twist1组宫颈癌SiHa细胞吸光度(0.41±0.04)比(0.30±0.03)升高,细胞迁移数目[(127.34±10.26)个比(93.05±6.84)个]和侵袭数目[(108.94±10.24)个比(83.26±5.17)个]增加,Vimentin、Twist1蛋白表达增多,E-cadherin蛋白表达减少,差异有统计学意义(P<0.05).上调miR-466靶向抑制Twist1表达.结论 miR-466靶向抑制Twist1降低宫颈癌SiHa细胞增殖和迁移能力.     

黄芩苷对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响北大核心CSCD

目的研究黄芩苷对乳腺癌MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡中的作用及其机制。方法将乳腺癌MCF-7细胞分为4组:空白组不给予任何处置;对照组给予200μmol·L^(-1)黄芩苷处理24 h;第1转染组和第2转染组分别转染inhibitor control和微小RNA-30a-5p(miR-30a-5p)inhibitor,并添加200μmol·L^(-1)黄芩苷处理24 h。用实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-30a-5p的水平;用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖;用Transwell小室法检测细胞的侵袭;用流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果空白组、对照组、第1转染组、第2转染组细胞miR-30a-5p水平分别为0.98±0.05,2.51±0.37,2.32±0.28,1.27±0.18;增殖抑制率分别为(3.46±0.79)%,(31.65±2.38)%,(34.82±3.14)%,(12.53±1.62)%;侵袭的细胞数目分别为(53.67±3.12),(23.14±2.02),(25.67±1.87),(41.15±3.73)个;凋亡率分别为(6.72±0.48)%,(13.79±1.63)%,(12.65±0.78)%,(8.36±0.52)%。对照组与空白组比较,第2转染组与第1转染组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论黄芩苷通过上调乳腺癌细胞中miR-30a-5p的表达,抑制细胞的增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡。     

下调人类白细胞抗原复合体18靶向微小RNA-146b-5p对胶质瘤SHG44细胞迁移和侵袭的影响

目的研究下调长链非编码RNA (lncRNA)人类白细胞抗原复合体18(HCG18)靶向微小RNA-146b-5p(miR-146b-5p)对胶质瘤SHG44细胞迁移和侵袭的影响。方法以实时定量-PCR法检测胶质瘤SHG44、CHG-5和BT325细胞与正常胶质HEB细胞中HCG18基因表达,用SHG44细胞做后续实验。将SHG44细胞分成7组:空白对照组、第1转染组(转染shRNA control)、第2转染组(转染HCG18 shRNA)、第3转染组(共转染HCG18 shRNA、inhibitor control)、第4转染组(共转染HCG18 shRNA、miR-146b-5p inhibitor),第5转染组(转染mimics control)和第6转染组(转染miR-146b-5p mimics),均为100 pmol。Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化。荧光素酶报告系统鉴定HCG18和miR-146b-5p靶向关系。结果 HCG18基因在胶质瘤SHG44、CHG-5、BT325细胞中表达水平分别为3.68±0.24,2.73±0.22和1.95±0.13,均高于正常胶质HEB细胞的1.00±0.11,差异均有统计学意义(均P<0.05),且胶质瘤SHG44细胞中HCG18表达水平最高。空白对照组、第1转染组、第2转染组、第3转染组和第4转染组细胞侵袭数目分别为156.32±12.58,155.80±13.97,99.76±8.52,100.20±9.63和146.16±10.58;迁移数目分别为196.74±15.52,199.86±16.39,148.13±13.28,150.89±10.76和181.72±12.39。第2转染组的上述指标与第1转染组相比,或第4转染组的上述指标与第3转染组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。经wt处理的第6转染组和第5转染组细胞荧光素活性分别为1.00±0.11和0.41±0.04,第6转染组与第5转染组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调长链非编码RNA HCG18靶向miR-146b-5p可抑制胶质瘤SHG44细胞侵袭和迁移。     

miR-144通过TGF-β/Smad通路抑制前列腺癌细胞的增殖侵袭

摘要：目的:观察微小RNA（miR）-144对前列腺癌细胞增殖侵袭的影响及其对转化生长因子-β（TGF-β）/Smad信号通路的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测LNCaP、PC-3、SW1990人前列腺癌细胞和RWPE-1人正常前列腺上皮细胞中miR-144的表达水平;以miR-144表达量最低的PC-3细胞和表达量最高的LNCaP细胞作为研究对象,转染miR-144 mimics-NC序列为NC组,转染miR-144 mimics序列为miR-144过表达（mimics）组,荧光显微镜观察转染情况; qRTPCR检测转染后miR-144的表达水平,细胞活力检测试剂盒（CCK-8）检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞侵袭能力,生物信息学预测及荧光素酶报告基因检验miR-144的潜在靶基因,蛋白免疫吸附法（Western Blot）检测TGF-β/Smad通路蛋白表达水平。结果:与正常前列腺上皮细胞RWPE-1比较,LNCaP、PC-3、SW1990前列腺癌细胞中miR-144的表达水平均显著降低（P<0.05）,miR-144 mimics转染后细胞转染效率均达到90%以上。与NC组比较,mimics组细胞中miR-144的相对表达水平显著升高,细胞的增殖活性和侵袭能力显著降低（P<0.05或P<0.01）。与TGF-β-Wt+miR-144 mimics-NC共转染组比较,TGF-β-Wt+miR-144 mimics转染组荧光素酶活性显著降低（P<0.05）。TGF-β转录本3’UTR区域具有miR-144的潜在靶点,miR-144潜在靶基因为TGF-β,在24～120 h,与miR-144 mimics-NC组相比,miR-144 mimics、miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著降低（P<0.05）;与miR-144 mimics组相比,miR-144 mimics+TGF-β组细胞活性显著升高（P<0.05）。与NC组比较,mimics组细胞中p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平及TGF-β、TGF-βR蛋白表达水平显著降低（P<0.01）。结论:miR-144可能通过TGF-β/Smad信号通路抑制前列腺癌细胞的增殖及侵袭。