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目的 观察高表达的β联蛋白对体外过氧化氢(H2O2)所致正常人皮肤成纤维细胞(NHSF)衰老表型的影响。方法 NHSF分别转染pcDNA3.1-β联蛋白或空载体pcDNA3.1,然后150 μmol/L H2O2处理2 h。实验分为转染H2O2处理组(NHSF + β联蛋白 + H2O2)、转空载体H2O2处理组(NHSF + 空载体 + H2O2)以及转空载体组(NHSF + 空载体)。用RT-PCR和Western印迹分析β联蛋白的表达,显微镜观察细胞形态,试剂盒检测衰老相关的β半乳糖苷酶(SA-β-gal)、细胞活性氧(ROS)以及超氧化物歧化酶(SOD)的活性。所有数据均用SPSS 13.0软件进行统计分析,多组间比较采用ANOVA检验。结果 pcDNA3.1-β联蛋白明显上调了NHSF中β联蛋白的表达。NHSF + 空载体 + H2O2组β联蛋白mRNA和蛋白水平(与GAPDH mRNA和蛋白的比值分别为0.2900 ± 0.0195和0.3130 ± 0.0171)明显低于NHSF + 空载体组(分别为0.5963 ± 0.0400和0.6190 ± 0.0090),两组比较,均P < 0.05;NHSF + β联蛋白 + H2O2组β联蛋白表达水平(0.7953 ± 0.0074)高于NHSF + 空载体 + H2O2组(P < 0.05)。SA-β-gal染色率在NHSF + 空载体组、NHSF + 空载体 + H2O2组、NHSF + β联蛋白 + H2O2组分别为(2.9667 ± 0.2517)%、(37.70 ± 0.9539)%、(29.330 ± 0.6359)%,各组比较,差异有统计学意义(P < 0.05)。NHSF + 空载体、NHSF + 空载体 + H2O2、NHSF + β联蛋白 + H2O2组ROS活性分别为(50.9963 ± 9.2688)%、(109.9190 ± 11.5215)%、(75.1063 ± 3.0138)%,SOD水平分别为(88.0856 ± 3.9181)、(35.5585 ± 3.4438)、(61.7029 ± 3.1716) U/mg,各组比较,差异均有统计学意义(P < 0.05)。结论 高表达的β联蛋白能够抑制细胞衰老相关β-半乳糖甘酶(SA-β-gal)和细胞活性氧(ROS)的表达,同时上调了SOD的活性。
【关键词】 β连环素; 过氧化氢; 成纤维细胞; 氧化性应激; 细胞衰老 相似文献
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咪喹莫特对人皮肤成纤维细胞活性和凋亡的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的:观察咪喹莫特(imiquimod)溶液对人真皮成纤维细胞(FB)细胞毒性、细胞增殖及细胞凋亡率的影响,探讨其治疗瘢痕疙瘩的可能机制。方法:分离培养人真皮成纤维细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTF)法检测不同浓度咪喹莫特溶液对成纤维细胞毒性及细胞增殖的影响:用流式细胞技术检测咪喹莫特对成纤维细胞凋亡率的影响。结果:不同浓度咪喹莫特加入成纤维细胞培养体系孵育24h后,成纤维细胞形态均有不同程度受损,且细胞增殖活性下降,尤以20mg/L浓度时细胞活性下降明显;各浓度咪喹莫特处理组细胞凋亡率均高于对照组(P〈0.05),但在不同时间点检测的细胞凋亡率差异无统计学意义(P〉0.05)。结论:咪喹莫特可以降低成纤维细胞增殖活性并增加细胞凋亡率,这些可能是其促进皮肤瘢痕组织消退的相关机制。 相似文献
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目的 建立抑制p53基因表达的人皮肤成纤维细胞(HSF),探讨抑制p53表达对HSF衰老的影响。方法 脂质体转染法将针对p53的shRNA的真核表达质粒pGCsi-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立稳定转染克隆细胞系。用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。通过SA β-gal染色法检测细胞衰老,MTT法检测细胞增殖能力。 结果 成功建立RNA干扰抑制p53表达的HSF细胞系,转染细胞中p53基因及蛋白水平明显下调(P < 0.01)。SA β-gal染色结果显示,转染组衰老细胞百分比(13.47% ± 1.01%)与对照组(18.10% ± 0.66%)相比降低(P < 0.05),MTT检测结果显示,转染组细胞增殖能力较对照组加快(P < 0.05)。结论 抑制p53表达能够延迟HSF的衰老,促进细胞增殖。 相似文献
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目的 观察β-连环蛋白在氧化应激所致的人皮肤成纤维细胞衰老中的变化,探讨其在应激诱导的皮肤衰老中可能的作用.方法 从儿童包皮分离培养原代成纤维细胞,H2O2:处理第2~4代人皮肤成纤维细胞,显微镜观察其形态学改变,β-半乳糖苷酶细胞衰老试剂盒检测β-半乳糖苷酶活性,RT-PCR、Western印迹检测β连环蛋白mRNA和蛋白表达水平.结果 150 μmol/L H2O2:处理2 h后可以诱导人皮肤成纤维细胞衰老.在应激诱导的衰老(SIPS)细胞中β-半乳糖苷酶阳性率达到(37.67±1.53)%.而对照细胞中只有(2.97±0.25)%,两组差异有统计学意义(P<0.01).RT-PCR 结果显示,在对照细胞组β连环蛋白/GAPDH mRNA比值为0.59±0.04,SIPS细胞组为0.29±0.30,对照细胞组明显高于SIPS细胞组,两组差异有统计学意义(t=10.06,P<0.01).Western印迹结果显示,对照细胞组β连环蛋白/GAPDH蛋白比值为0.62±0.03,SIPS细胞组为0.31±0.01,对照细胞组明显高于SIPS细胞组,两组差异有统计学意义(t=14.97,P<0.0).结论 150 μmol/L H2O2:处理2 h可以诱导人皮肤成纤维细胞发生衰老改变,SIPS细胞中β连环蛋白表达水平明显降低,初步推测β连环蛋白可能是调控皮肤衰老的重要靶基因.Abstract: Objective To observe the changes of β-catenin expression in human skin fibroblasts (HSFs) after induced by oxidative stress, and to explore its possible roles in oxidative stress-induced premature senescence (SIPS) of HSFs. Methods Fibroblasts were isolated from the foreskin of a child and subjected to a primary culture. The fibroblasts of second to fourth passage were treated with various concentrations of H2O2 for 2 hours to establish an optimized model of stress-induced premature senescence, β-galactosidase assay kit was used to detect the activity of β-galactosidase in H2O2rinduced HSFs, RT-PCR and Western blot to measure the mRNA and protein expressions of β-catenin in control and senescent HSFs. Results Premature senescence of HSFs could be induced by the treatment with H2O2 of 150 μmol/L for 2 hours. The proportion of β-galactosidase-positive cells was (2.97 ± 0.25)% in control HSFs and (37.67 ± 1.53)% in senescent HSFs (P< 0.01). A significant increase was observed in the β-catenin/GAPDH protein ratio and β-catenin/GAPDH mRNA ratio in control HSFs compared with the senescent HSFs (0.62 ± 0.03 vs. 0.31 ± 0.01, t = 14.97, P < 0.01; 0.59 ± 0.04 vs. 0.29 ± 0.30, t = 10.06, P < 0.01). Conclusions The two-hour treatment with H2O2 of 150 μmol/L could induce the premature senescence of HSFs, and there is a notable decrease in the expression of β-catenin in prematurely senescent HSFs induced by oxidative stress, implying that β-catenin is an important target gene for the regulation of skin aging. 相似文献
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【摘要】 目的 探讨氢气对中波紫外线(UVB)致人成纤维细胞氧化损伤的影响。方法 原代培养人成纤维细胞,分组如下:正常对照组,未经任何处理;氢气对照组,富氢培养液处理;UVB照射组;富氢培养液后处理组;富氢培养液预处理组。通过噻唑蓝(MTT)法观察细胞增殖情况,通过化学发光和酶联免疫吸附试验(ELISA)观察超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性,丙二醛(MDA)和8异前列腺素2α(8-isoPGE2α)的水平, Western 印迹观察血红素加氧酶-1(HO-1)蛋白的表达情况,采用单因素方差分析进行统计学处理。 结果 给予不同剂量的UVB照射,细胞增殖活性(A490)呈剂量依赖性降低。氢气后处理和预处理组细胞增殖活性明显高于相应UVB组(均P < 0.05)。氢气后、预处理组SOD和CAT活性以及HO-1蛋白表达水平明显高于UVB组(均P < 0.05),但MDA和8-iso-PGE2α明显低于UVB组(均P < 0.05)。 结论 氢气可以减轻UVB诱发的成纤维细胞氧化损伤。 相似文献
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紫外线辐射可造成皮肤损伤,引起皮肤出现红斑、光老化等。紫外线作用于成纤维细胞,引起细胞因子分泌及基因表达的改变,不仅能造成真皮层的损伤,还可被用来治疗某些疾病,如局限性硬皮病。从紫外线对皮肤成纤维细胞的损伤、成纤维细胞对紫外线的防御反应及紫外线的应用等方面阐述了紫外线对成纤维细胞的影响。 相似文献
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目的建立稳定过表达野生型p53基因(wtp53)的人皮肤成纤维细胞系,探讨过表达p53基因及中波紫外线(UVB)照射对人皮肤成纤维细胞(HSF)衰老的影响。方法在脂质体lipofectamine TM 2000介导下,将含有wtp53的真核表达质粒pCMV-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立转染克隆细胞系。用RT-PCR,实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。亚毒性剂量UVB照射细胞,以染色法检测SAβ-gal活性,MTT法检测细胞增殖能力。结果成功构建过表达p53的HSF细胞系,转染细胞中存在p53基因及蛋白的稳定过表达。过表达p53的细胞株不论UVB照射与否SAβ-gal活性均未见增高,过表达p53可使HSF的增殖能力减弱,但对UVB诱导的细胞生长停滞的影响并不显著。结论过表达p53不能促进HSF的复制衰老和UVB诱导的早期衰老,过表达p53引起的HSF增殖减弱可能与细胞凋亡有关而非衰老。 相似文献
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目的 探讨光老化对皮肤成纤维细胞降解胞内晚期糖基化终末产物(AGE)的影响。方法 连续长波紫外线(UVA)照射诱导成纤维细胞光老化,通过CCK8法、β半乳糖苷酶染色及细胞凋亡率检测验证模型是否构建成功。取原代成纤维细胞分为4组:光老化组(以UVA照射诱导光老化),非光老化组(不做处理),光老化 + AGE组(以UVA照射诱导光老化后加入200 mg/L AGE?BSA孵育),非光老化 + AGE组(未诱导光老化细胞中加入200 mg/L AGE?BSA孵育),孵育4 ~ 72 h后,流式细胞仪检测各组细胞内AGE?BSA荧光强度,激光扫描共聚焦显微镜定位、半定量各组细胞8 h点胞内AGE?BSA。ELISA检测各组细胞24 h内AGE?BSA浓度变化。结果 与对照组(未照射UVA)相比,UVA照射组细胞增殖活性显著下降(t = 7.559,P < 0.05),而凋亡率及β半乳糖苷酶染色阳性率显著升高(t值分别为14.075、43.524,均P < 0.05)。流式细胞仪检测示,孵育4、8、16、24、48、72 h后,光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度分别为293 ± 8.19、359.67 ± 11.59、347 ± 12.29、338 ± 12.77,334.67 ± 14.22、336.3 ± 10.21,非光老化 + AGE组分别为222.33 ± 8.74、276.33 ± 6.11、256.33 ± 5.51、243 ± 10.15,236.33 ± 1.53、240.33 ± 1.52,均分别高于相应时间点光老化组和非光老化组,差异均有统计学意义(P < 0.05)。其中光老化 + AGE组AGE?BSA平均荧光强度显著高于相应非光老化 + AGE组细胞(P < 0.05)。激光扫描共聚焦显微镜观察发现,吞入胞内的AGE?BSA主要位于溶酶体内,光老化 + AGE组AGE?BSA荧光强度显著高于非光老化 + AGE组,P < 0.05。ELISA检测发现,32 h点非光老化 + AGE组细胞AGE浓度较8 h点下降(14.6 ± 1.2)%,显著高于光老化 + AGE组(t = 6.604,P < 0.05)。结论 光老化皮肤成纤维细胞对吞入胞内AGE?BSA的降解能力下降,可能致AGE在光老化皮肤堆积。 相似文献
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目的 探讨UVB诱导的细胞衰老与肿瘤发生的关系。方法 噻唑蓝(MTT)法检测UVB辐射后的细胞增殖情况,筛选诱导衰老适宜的亚毒性剂量和照射次数。染色法检测衰老相关的β-半乳糖苷酶(SA β-gal)活性。RT-PCR检测衰老相关基因纤维结合素(FN)、骨结合素(ON)和平滑肌22(SM22)的表达。结果 以10 mJ/cm2的亚毒性剂量连续5次照射人成纤维细胞后,衰老的生物学特征得以明显表现:①MTT法检测显示细胞增生能力的减弱。②照射组具有SA β-gal活性的阳性细胞明显增加,照射组和对照组的阳性率分别为82.0%和33.7%(P < 0.01)。③3种衰老相关基因FN、ON和SM22的表达亦明显增强,分别约为对照组细胞的2.7、2.0、2.3倍(P < 0.05)。结论 反复亚毒性剂量UVB照射人成纤维细胞,初步建立一种UVB诱导的应激诱导的早期衰老(SIPS)模型。 相似文献
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目的 观察中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液对人真皮成纤维细胞增殖、老化及自噬的影响.方法 取健康青少年男子环切术后包皮进行人真皮成纤维细胞的分离培养.将中波紫外线诱导的提前衰老的成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞设为实验组,并设立对照组即正常成纤维细胞条件培养液培养成纤维细胞.处理20 d后,用CCK8法检测细胞增殖活性,EDU(5-乙炔基-2,脱氧尿嘧啶核苷)法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,β半乳糖苷酶染色计算衰老细胞百分比,吖啶橙染色检测细胞自噬,Western印迹法及间接免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3-B的表达水平.数据采用Graphpad Prism 5软件分析,两组间比较采用成组t检验.结果 实验组成纤维细胞增殖活力(0.831±0.017)明显低于对照组(0.973±0.017),但EDU染色及流式细胞仪检测结果均显示,实验组S期细胞百分比明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).β半乳糖苷酶染色显示,实验组成纤维细胞阳性率(25.710%±0.304%)高于对照组(5.257%±1.023%),差异有统计学意义(t=19.170,P<0.05).吖啶橙染色结果显示,实验组成纤维细胞红色荧光量(14.287±2.269)低于对照组(29.614±2.650).Western印迹及间接免疫荧光结果均显示,实验组成纤维细胞LC3-B表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 中波紫外线诱导的提前衰老成纤维细胞的条件培养液可降低成纤维细胞的自噬及增殖,并加速其老化. 相似文献
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机体衰老以皮肤的衰老最为直观。成纤维细胞是真皮中最重要的细胞成分,其在皮肤老化的过程中扮演着重要角色。当皮肤衰老时,成纤维细胞出现不可逆生长抑制、分泌及合成功能下降、细胞自身修复能力降低等一系列改变。随着人们生活水平的提高,西式饮食普遍化及烹饪方式多样化使得人体摄入过量的葡萄糖,从而导致非酶糖化反应(nonenzymic glycation,NEG)的增加,最终使得晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)的升高。目前有研究表明AGEs可直接或与其特定受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)相互作用加速皮肤成纤维细胞衰老。近年来,AGEs与皮肤衰老关系成为人们研究的热点,该文就此进行综述。 相似文献
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[目的]探讨不同剂量中波紫外线(UVB)照射人皮肤成纤维细胞诱导的自噬对细胞凋亡活性的影响.[方法]人皮肤成纤维细胞来自于23岁健康男性环切术后包皮的原代培养,连续传代培养后取第3~ 10代的细胞进行实验.通过单丹酰戊二胺(MDC)染色和免疫荧光标记微管相关蛋白1轻链3(LC3)的方法,确定不同剂量3-甲基腺嘌呤(3-MA)对自噬的抑制作用.UVB照射后立即加入0.5 mmol/L 3-MA孵育细胞4h作为自噬的抑制方法.Hoechst和碘化丙啶(PI)染色结合Annexin V-异硫氰酸荧光索(FITC)和PI标记细胞后流式细胞仪检测作为细胞凋亡的定性和定量方法.[结果]0.5 mmol/L 3-MA能明显抑制人皮肤成纤维细胞自噬活性(饥饿诱导组自噬细胞阳性百分数为63.037%±5.876%,3-MA孵育后下降至34.425%±5.183%).空白对照组、30、50、100mJ/cm2UVB照射组标记LC3绿色荧光信号逐渐增强,照射后立即对上述4组加入3-MA孵育4h则LC3蛋白表达差异不明显.0.5 mmol/L 3-MA对细胞活性影响最小.50 mJ/cm2 UVB照射下加入3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞增多;100 mJ/cm2 UVB照射后加3-MA孵育较未加3-MA孵育细胞强Hoechst和强PI双染细胞减少.Annexin V -FITC和PI标记细胞后流式细胞仪分析显示,在50 mJ/cm2 UVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[( 10.933±0.839)%]较未抑制细胞[(7.267±0.473)%]上升,两者之间差异具有统计学意义(t=5.20,P< 0.05);而在100mJ/cm2UVB照射下,抑制自噬的细胞中晚期凋亡水平[(7.100±0.781)%]较未抑制细胞[( 10.133±0.681)%]下降,两者之间差异具有统计学意义(t=6.29,P< 0.05).[结论]50 mJ/cm2 UVB照射诱导人皮肤成纤维细胞自噬通过抑制凋亡对细胞起到保护作用,而在100 mJ/cm2 UVB照射下发生的较高水平自噬可能诱导了自噬性细胞死亡. 相似文献
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目的 研究长波紫外线(UVA)照射对皮肤成纤维细胞组织蛋白酶G(CatG)表达和分泌的影响。 方法 原代培养的皮肤成纤维细胞来自儿童包皮,10代以内的细胞行后续实验。①以10 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24、48、72 h后提取照射组和对照组细胞蛋白和mRNA,并收集细胞上清液;②分别以10、20、30 J/cm2 UVA照射皮肤成纤维细胞,24 h后收集细胞和上清液。用RT-PCR 和Western印迹分别检测各组细胞CatG mRNA及蛋白的表达,ELISA检测细胞上清液CatG的含量。 结果 10 J/cm2 UVA照射后24、48、72 h,照射组细胞CatG mRNA表达分别为0.376 ± 0.014、0.308 ± 0.022和0.296 ± 0.032,对照组分别为0.183 ± 0.003、0.185 ± 0.005、0.182 ± 0.004;照射组细胞CatG蛋白灰度值分别为1.80 ± 0.12、1.41 ± 0.17和1.27 ± 0.09,对照组分别为0.96 ± 0.06、0.95 ± 0.22、1.00 ± 0.14;照射组细胞CatG mRNA、蛋白表达及细胞上清液CatG含量较相应的对照组升高(均P < 0.05),且以照射后24 h表达最高。10、20、30 J/cm2 UVA照射后24 h,皮肤成纤维细胞CatG mRNA表达分别为对照组的1.90、2.51、3.04倍,细胞CatG蛋白表达分别为对照组的1.88、3.97、4.72倍,细胞上清液CatG含量分别为对照组的1.36、1.50、1.66倍,均随UVA剂量的升高而增加,其差异有统计学意义(均P < 0.01)。 结论 急性UVA照射促进皮肤成纤维细胞表达和分泌CatG。 相似文献
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目的: 评价紫外线诱导衰老成纤维细胞分泌的细胞外基质对HaCaT细胞增殖的促进作用.方法: 连续UVB辐射诱导成纤维细胞发生应激性衰老(SIPS).成纤维细胞接种后,制备细胞外基质(ECM).将预处理的HaCaT细胞接种到包被ECM的平皿.流式细胞仪检测HaCaT细胞周期和凋亡,MTT法检测细胞的增殖.结果: UVB-SIPS成纤维细胞分泌的ECM对HaCaT细胞具有较强的促增殖作用,但对细胞凋亡无显著影响.结论: UVB-SIPS 成纤维细胞分泌的ECM可以更强地促进HaCaT细胞的增殖. 相似文献
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目的:探讨放射性核素在治疗瘢痕疙瘩中的作用机制.方法:取手术切除的瘢痕疙瘩组织作成纤维细胞的原代培养,传代培养后采用不同剂量的β射线进行照射,应用MTT法检测细胞的活性, 流式细胞仪测定细胞凋亡率.结果:瘢痕成纤维细胞经过不同剂量β射线照射后,细胞生长缓慢,但瘢痕成纤维细胞的凋亡率却提高了.结论:β射线能抑制体外增生性癜痕成纤维细胞的生长及促进成纤维细胞凋亡. 相似文献
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活血化瘀中药对系统性硬皮病病人皮肤成纤维细胞增殖的影响 总被引:16,自引:2,他引:16
为了探讨活血化瘀中药治疗系统性硬皮病(SS)的药理机制,以体外培养的SS病人的皮肤成纤维细胞为研究对象,采用MTT方法对21种常用活血化瘀中药的水溶性提取物对该细胞增殖的影响进行了研究。结果显示,17种药物对该细胞增殖具有抑制作用,其中以赤芍、丹参、红花、丹皮、茜草、乳香、没药、苏木、牛膝和泽兰的抑制作用显著,且分别呈剂量效应关系和时间效应关系。本研究结果可为今后SS治疗时中药组方选择药物提供依据 相似文献
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目的初步探寻红葡萄酒中主要活性成分白藜芦醇对紫外线照射皮肤保护作用的可能机制。方法白藜芦醇对UVB照射的人皮肤成纤维细胞基质金属蛋白酶(MMP)-1水平及细胞凋亡的影响。将培养的人皮肤成纤维细胞分为5组,A组:无UVB照射无干预组,B组:UVB照射无干预组,C组:UVB照射1μmol/L白藜芦醇干预组,D组:UVB照射10μmol/L白藜芦醇干预组,E组:UVB照射100μmol/L白藜芦醇干预组。UVB照射剂量均为30mJ/cm2。用免疫组织化学方法分别检测5组细胞中MMP-1水平,用磷脂酰丝氨酸外翻分析(AnnexinV法)检测细胞凋亡率。结果 A~E组5组细胞MMP-1阳性细胞评分及凋亡率差异均有统计学意义(P均<0.05)。A组评分及凋亡率均明显低于B组,两组比较差异有统计学意义(P均<0.05),B组与C,D,E组评分及凋亡率比较差异均有统计学意义(P均<0.05),C~E组3组评分及凋亡率比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论白藜芦醇可以抑制UVB照射诱导的人皮肤成纤维细胞MMP-1水平的升高,并可减少细胞因UVB照射引起的凋亡,白藜芦醇可能通过此机制对紫外线照射皮肤起到保护作用。 相似文献
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紫外线照射对皮肤成纤维细胞影响的实验研究 总被引:4,自引:1,他引:4
目的研究紫外线(UV)照射对皮肤成纤维细胞形态学、生长增殖状态、突变频率和ATPmRNA表达水平的影响。方法采用一定剂量的中长波紫外线照射培养的新生儿包皮成纤维细胞。通过细胞计数记录细胞增殖,光学显微镜观察形态学变化,次黄嘌呤磷酸核糖转移酶突变实验检测突变频率,RT-PCR法检测ATPmRNA表达水平。结果成纤维细胞经UVB照射后,形态受损,细胞增殖减缓,照射72h后细胞活性只增加了约0.2倍,而非照射组增加约2.4倍。在每106个突变克隆细胞中突变频率由20mJ/cm2的(20.4±6.7)个增加到60mJ/cm2的(97.7±7.1)个。ATPmRNA表达水平随照射剂量及照射时间增加而呈下调变化。结论UV照射可使人成纤维细胞ATPmRNA表达水平呈剂量及时间依赖性下调变化,在能量消耗条件下成纤维细胞形态异常,生长受抑,突变频率与照射剂量的增加成正相关。 相似文献
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目的 探讨黄芩苷对长波紫外线(UVA)诱导的人二倍体成纤维细胞(HDF)氧化损伤和凋亡的抑制作用及其可能机制.方法 CCK-8法检测细胞活性,筛选最佳药物浓度.将成纤维细胞分成对照组、UVA照射组、UVA+ 6.25 mg/L黄芩苷组、UVA+12.5 mg/L黄芩苷组、UVA+ 25 mg/L黄芩苷组.利用荧光显微镜和流式细胞仪检测各组细胞中活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量的变化;流式细胞仪检测线粒体膜电位和细胞凋亡率的变化.Western印迹法检测凋亡相关蛋白caspase3含量.以上多组间比较均采用单因素方差分析.结果 UVA照射组的活性氧、超氧化物阴离子和一氧化氮含量分别为813.1±30.29、353.3±19.13、107.1±11.44,较对照组(442.5±29.45、223.4±10.67、42.17±2.59)明显上升,均P<0.05);同时,UVA照射组较对照组线粒体去极化增强,凋亡率上升.与UVA组比较,各浓度黄芩苷作用组氧化产物包括活性氧、超氧化物阴离子及一氧化氮含量均有明显下降,线粒体去极化减弱,细胞凋亡率也显著下降,均P< 0.01.UVA组凋亡相关蛋白caspase3相对含量为1.2680±0.0091,明显高于对照组(0.3675±0.1115),6.25、12.5和25 mg/L黄芩苷组(0.5588±0.1705、0.5365±0.1718、0.5454±0.2083)较UVA组有显著下调(均P<0.01).结论 黄芩苷可以减轻UVA诱导的人成纤维细胞氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与清除活性基团、抑制线粒体膜去极化、阻止下游凋亡蛋白caspase3的激活和表达有关. 相似文献
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以正常人皮肤成纤维细胞滋养层培养人角质形成细胞的研究 总被引:6,自引:0,他引:6
目的探索和建立人皮肤成纤维细胞(HDF)滋养层培养人角质形成细胞的技术方法。方法在HDF滋养层制备中,对丝裂霉素C的较适浓度、同一株不同代数的HDF滋养层、滋养层的细胞密度对正常人表皮角质形成细胞(NHEK)生长的影响及NHEK的最低接种密度进行了初步的探索。结果①终浓度为10μg/mL的丝裂霉素C是制备HDF滋养层的较适浓度。②同一株1~20代的HDF滋养层对不同来源的NHEK均有较好的促生长增殖作用,1~20代HDF的培养代数与9例NHEK生长达80%融合时间(平均为11.1d)之间相关无显著性(r=-0.27,P>0.05)。③用HDF滋养层培养NHEK可减少原代培养NHEK的接种量,用NHEK最小接种密度是0.1×10 相似文献