EGCG上调神经细胞自噬相关蛋白Beclin-1表达改善脊髓损伤后大鼠运动功能

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脊髓损伤(SCI)大鼠神经元自噬和相关调控蛋白Beclin-1表达的影响,探讨其SCI保护机制。方法 SD大鼠90只,分为假手术组、SCI组、EGCG组(n=25)。钳夹法建立SCI模型,EGCG组和SCI组损伤后即刻和1h后分别腹腔注射EGCG (50 mg/kg)和等量生理盐水,三组大鼠于术后不同时间1d、3d、1周、2周、3周、4周(n=5),分别进行斜板试验和运动功能(BBB)评分实验,测定各组大鼠的运动功能;用结晶紫(CV)染色法和免疫组化方法,观察SCI后6h、12h、24h、3d和7d时间内,从损伤中心到头端0～5.00 mm空间范围内,EGCG对脊髓神经元存活、自噬以及相关调控蛋白Beclin-1表达的影响。结果 SCI组在各个时间点斜板角度均明显小于假手术组,EGCG组相比于SCI组,除1d和3 d组外,其余1周～4周各个时间点斜板角度明显增加。SCI后各个时间点,SCI组评分明显低于假手术组,EGCG组相比于SCI组,术后3d～4周各个时间点BBB评分明显增加;SCI后6 h～7d,在0～0.50mm空间范围内均未观察到存活的神经元;在1.00～3.50mm距离内, EGCG组和SCI组相比,存活的神经元数明显增加,4.00mm处达峰值。SCI后6h～7d,在1.05～4.55mm范围内,EGCG组和SCI组相比,Beclin-1阳性表达的神经元数明显增加,其中在3d,2.55mm,Beclin-1表达达高峰,7d时减少。结论 EGCG干预改善脊髓损伤大鼠运动功能与上调神经元自噬蛋白Beclin-1表达相关。     

mir-325-3p激活RIPK3/TFEB信号通路减轻脑出血大鼠神经元损伤

目的 探讨mir-325-3p通过调控RIPK3/TFEB通路对脑出血大鼠神经元损伤的影响。方法雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑出血组、agomir NC组、agomir-325-3p组、GSK872(RIPK3抑制剂)组、agomir-325-3p+GSK872组,每组18只。评估大鼠运动功能、肢体协调能力、改良神经功能缺损评分（mNSS）,测定大鼠脑含水量、血肿周围脑组织病理变化、神经细胞凋亡、神经元自噬、LC3与NeuN共定位、海马组织RIPK3/TFEB信号通路、自噬相关蛋白表达。结果 与假手术组相比,脑出血组CA1区神经元肿胀,排列疏松,可见大量溶酶体和自噬小体,前肢放置成功率、左侧转身百分比、TFEB下降（P<0.05）,mNSS评分、脑含水量、神经细胞凋亡率、RIPK3、Beclin-1和LC3-II/LC3-Ⅰ、LC3/NeuN强阳性个数升高（P<0.05）;agomir-325-3p、GSK872可减轻大鼠海马神经元损伤,增强自噬,且两者有协同作用。结论mir-325-3p过表达可通过调控RIPK3/TFEB促进自噬,减轻脑出血大鼠神经元损伤。     

蛇菰多糖减轻急性脊髓挫伤模型大鼠的神经元损伤

目的 探讨蛇菰多糖(BPS)对神经自噬的调节及对急性脊髓挫伤(SCI)的治疗作用。方法 将大鼠分为假手术组(sham,n=10)、模型组(SCI,n=15,用改良Allen’s脊髓撞击法)和BPS干预组(BPS,n=45,灌胃给予低、中、高3个剂量14 d);用BBB评分评价运动功能;采用HE及Nissl染色法观察形态;蛋白质免疫印迹法检测自噬相关蛋白的表达变化。结果 与sham组相比,SCI组大鼠的BBB评分-时间变化曲线明显降低,损伤程度达重度(P<0.05);SCI的脊髓背侧白质和中央灰质均损伤严重,空洞明显;神经元数量明显减少,胞体结构不完整;SCI组第1、7、14天的LC3Ⅱ/Ⅰ和p62相对表达水平上调,其中第7天表达最高(P<0.05);而Beclin 1表达整体下调,于第7天表达最低(P<0.05);与SCI组比较,BPS组大鼠BBB评分曲线呈剂量依赖性明显增高;BPS组背侧白质和中央灰质空洞缩小,神经元数量多,形态完整;BPS组Beclin 1、LC3Ⅱ表达明显回升,而p62蛋白较SCI组下调(P<0.05)。结论 蛇菰多糖对大鼠具有明确的神经保...     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤节段炎性细胞因子和自噬因子表达的影响

目的:探究脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后应用甲基强的松龙(methylprednisolone,MP)治疗对损伤脊髓节段中的炎性细胞因子IL-6、IL-10和自噬因子LC3B表达的影响。方法:采用改良Allen氏法建立大鼠脊髓(T10)损伤模型,60只SD雌性大鼠随机分为假手术组(n=20)、手术组(n=20)和MP组(n=20)。MP组于SCI后立刻经尾静脉给予MP(30 mg/kg),假手术组只打开椎板不损伤脊髓。分别于损伤后4 h、12 h、1 d、3 d和7 d取材,采用半定量RT-PCR方法检测损伤段脊髓组织中炎症因子IL-6、IL-10 mRNA和自噬因子LC3B mRNA的表达变化。结果:假手术组动物脊髓组织中IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达微弱。手术组的IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达均在损伤后4 h开始明显升高,于损伤后1 d达最高峰值,之后逐渐降低(P﹤0.05)。手术组的LC3B与IL-6和IL-10的表达呈现相似的趋势,IL-6、IL-10均与LC3B呈正相关。MP组的IL-6、IL-10、LC3B mRNA的表达在损伤后12 h开始明显受到抑制,到1 d时达最低值,7 d时LC3B mRNA的表达仍低于手术组(P﹤0.05),MP组的LC3B与IL-6和IL-10的表达也是呈现相似的趋势,IL-6、IL-10也均与LC3B呈正相关。结论:大鼠脊髓损伤后应用甲基强的松龙可以通过抑制炎症而抑制损伤节段的自噬活动。     

ERK1/2和PI3-K通路在蛛网膜下腔出血大鼠海马区对神经细胞自噬的调控作用

目的:探讨细胞外信号调节激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)和磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3-K)通路对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后神经细胞自噬的调控作用。方法:雄性SD大鼠160只,分为假手术(Sham)组、模型(SAH)组、ERK1/2抑制剂U0126组和PI3-K抑制剂LY294002组。采用二次注血法制作SAH大鼠模型,HE染色观察海马区神经细胞的形态变化;免疫组织化学染色法检测海马区磷酸化ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链(LC3)-II的表达实时荧光定量PCR检测海马区ERK1/2、PI3-K、自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白LC3的表达。结果:SAH组海马区神经细胞存活率低于Sham组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3的表达水平高于Sham组(P0.05);U0126组和LY294002组海马区神经细胞存活率均高于SAH组,ERK1/2、PI3-K、Beclin-1和LC3表达均低于SAH组(P0.05);U0126组和LY294002组两组间海马区神经细胞存活率差异无统计学意义(P0.05),U0126组ERK1/2、Beclin-1和LC3表达水平低于LY294002组(P0.05),PI3-K表达水平高于LY294002组(P0.05)。结论:ERK1/2和PI3-K通路激活共同参与SAH后神经细胞自噬的调节,且以PI3-K通路更为主要。     

自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏后大鼠海马神经元凋亡的影响

目的探讨自噬水平变化对心脏骤停心肺复苏(CA/CPR)后大鼠海马神经元凋亡的影响。方法将40只大鼠随机分为假手术组(sham)、CA/CPR模型组(model)、雷帕霉素(Rapa)组(CA/CPR+Rapa)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)组(CA/CPR+3-MA)。采用呼气末夹闭气管窒息法复制大鼠CA/CPR动物模型,分别给予自噬激动剂Rapa 0.2 mg/kg及自噬抑制剂3-MA 10 mg/kg进行干预。采用神经功能缺陷评分(NDS)评价CA/CPR大鼠神经功能;用TUNEL染色法检测大鼠海马神经元的凋亡变化;用RT-PCR和Western blotting法检测大鼠海马内微管蛋白轻链3(LC3)、Beclin-1、Bax、Bcl-2及Caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。结果与假手术组比较,CA/CPR模型组大鼠NDS评分明显降低;海马神经元TUNEL染色阳性细胞数明显增多,凋亡率显著升高;海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达上调,Bcl-2表达下调(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,CA/CPR+Rapa大鼠NDS评分明显降低,而海马神经元凋亡率明显有所增加,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显上调,而Bcl-2表达则明显有所下降;CA/CPR+3-MA大鼠NDS评分明显升高,而海马神经元凋亡率下降,海马内LC3、Beclin-1、Caspase-3、Bax表达明显下调,而Bcl-2表达则有所升高(P<0.05,P<0.01)。结论 CA/CPR后自噬水平升高促进海马神经元凋亡,自噬水平降低抑制海马神经凋亡,两者相互作用共同参与CA/CPR的病理过程。     

血管性痴呆大鼠海马神经元LC3和Beclin-1的表达

目的:在血管性痴呆(vascular dementia,VD)模型大鼠,观察自噬相关蛋白LC3和Beclin-1在海马CA1区神经元中的表达变化情况。方法:采用重复夹闭双侧颈总动脉(CCA)同时腹腔注射硝普钠溶液方法制备VD大鼠模型,在1、3、5和7 d四个时间点,分别采用Morris水迷宫检测大鼠空间学习记忆能力;HE染色观察CA1区神经元形态变化情况;免疫组化和Western Blot观察海马CA1区神经元上LC3和Beclin-1的表达情况。结果:模型组大鼠各时间点的逃逸潜伏期(escape latency,EL)比假手术组均明显延长(P0.01)。HE染色结果发现,与假手术组相比,模型组大鼠海马神经元出现严重损伤,且随时间延长逐渐加重。免疫组化和Western Blot积分光密度值测定结果显示,模型组大鼠各时间点LC3和Beclin-1的表达均比假手术组明显升高(P0.01),5 d时间点达到高峰。结论:VD模型大鼠缺血再灌注短时间内海马CA1区神经元出现严重损伤,伴有自噬相关的LC3和Beclin-1一过性表达升高。     

橄榄苦苷对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡的影响及可能机制

目的 探讨橄榄苦苷对脊髓损伤大鼠神经细胞凋亡及JNK/p38 MAPK信号通路的影响。方法 60只8周龄雌性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、脊髓损伤组(SCI)和橄榄苦苷处理组(Oleuropein),每组20只。脊髓损伤后3 d,进行BBB评分评估运动功能恢复情况;TUNEL实验检测各组大鼠脊髓组织神经细胞凋亡情况;免疫荧光方法与Western blot方法检测各组大鼠脊髓组织磷酸化JNK(p-JNK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白的表达。结果 与SCI组相比,橄榄苦苷处理组大鼠BBB评分及斜面试验结果明显升高(P<0.05),脊髓组织神经细胞凋亡率明显降低(P<0.05),脊髓组织p-JNK、p-p38蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论 橄榄苦苷能够通过抑制JNK/p38 MAPK信号通路减少神经细胞凋亡继而减轻脊髓损伤。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响及可能机制

目的观察N-乙酰半胱氨酸对大鼠脊髓损伤后运动功能恢复的影响,并探讨其可能的作用机制。方法健康成年Sprague-Dawley大鼠60只,随机分为N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)治疗(NAC组)、单纯脊髓损伤组(SCI组)和假手术组(Sham组),每组20只。采用Allen法损伤大鼠T9脊髓节段,制备大鼠脊髓损伤动物模型。造模成功后15 min,NAC组腹腔注射NAC 150 mg/kg,每日1次,共7次;SCI组和Sham组腹腔注射等体积的生理盐水。于术后1 d、3 d、7d、14d随机抽取各组动物5只,进行后肢功能BBB评分、ELISA检测脊髓组织中炎症因子IL-1β和IL-18水平,Western blot检测脊髓组织中Caspase1蛋白表达水平。结果与Sham组比较,SCI组术后各时间点BBB评分均显著降低,脊髓组织中炎症因子IL-18和IL-1β水平均显著升高,Caspase1蛋白表达水平显著升高(0.05)。与SCI组比较,NAC组术后3d、7d、14d BBB评分均显著升高,脊髓组织中IL-18和IL-1β水平显著降低,Caspase1表达水平显著降低(0.05)。结论 NAC促进脊髓损伤大鼠运动功能的恢复可能与抑制Caspase1表达降低炎症因子IL-1β和IL-18水平相关。     

鱼腥草素钠对脊髓损伤后的神经保护作用及其机制初探

目的探究鱼腥草素钠(sodium houttuyfonate,SH)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)早期的神经保护作用及与小胶质/巨噬细胞表型M1型和M2型转化的关系。方法首先,判定SH的最佳药物剂量,40只SD雌性大鼠被随机分为假手术组,实验组(根据给药质量浓度不同分为低(0.06 g·kg~(-1)·d~(-1))、中(0.12 g·kg~(-1)·d~(-1))、高(0.24 g·kg~(-1)·d~(-1))3个剂量组)和模型组。连续灌胃给药7 d,余下各组给予生理盐水对照。BBB评分检测大鼠后肢运动功能;尼氏染色及免疫染色用于观察前角神经元结构和生理功能并计数其数量;综合上述结果判定SH的最佳治疗剂量。其次,为探究其神经保护的可能机制,24只SD雌性大鼠被随机分为假手术组、SH最佳剂量组、模型组,各8只;免疫荧光及Western blot检测各组炎症因子(TNF-α、IL-1β)、P-JNK(phosphorylation c-Jun N-terminal kinase,P-JNK)、JNK、P-ERK(phosphorylation extracellular signal regulated kinase,ERK)、ERK、P-P38MAPK(phosphorylation P38 mitogen-activated protein kinase,P-P38MAPK)以及小胶质/巨噬细胞极化标志物iNOS(M1型)和Argi1(M2型)的表达。结果中、高剂量SH能无差别的改善SCI后大鼠的后肢运动功能,保留SCI处神经元的正常结构和部分生理功能和减少SCI后运动神经元的丢失;综合上述结果判定中剂量(0.12 g·kg~(-1)·d~(-1))为本实验的最佳剂量。与模型组相比,中剂量组中iNOS+细胞数量和蛋白iNOS、TNF-α、IL-1β、P-JNK/JNK、P-ERK/ERK、P-P38MAPK/P38MAPK的表达减少,而Argi+细胞数量和蛋白Argi的表达则增加。结论 SH对SCI大鼠具有一定的神经保护作用,其保护作用可能是通过抑制SCI后MAPK信号通路的激活,促进M1型小胶质/巨噬细胞向M2型转化,减轻其所介导的神经炎症反应。     

创伤后应激障碍大鼠海马神经元自噬增强

目的:观察创伤后应激障碍(PTSD)模型大鼠海马神经元自噬的改变,探讨PTSD致海马体积异常的可能机制。方法:成年健康雄性SD大鼠20只,随机被分为对照组和模型组。采用改良的单一连续应激后给予不可逃避足底电击方法制备PTSD大鼠模型;采用透射电镜技术观察海马神经元超微结构,Western blot方法检测海马微管相关蛋白轻链3(microtube-associated protein 1 light chain 3,LC-3)和Beclin-1的表达水平。结果:模型组海马神经元自噬体增多;海马组织LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值和Beclin-1表达水平高于对照组(P<0.05)。结论:PTSD模型大鼠海马神经元存在明显的细胞自噬,可能与海马体积异常变化有关。     

miR-186-5p修饰骨髓间充质干细胞通过下调FZD3对脊髓损伤大鼠具有神经保护作用

目的 探讨miR-186-5p修饰的骨髓间充质干细胞对脊髓损伤大鼠的神经保护作用及可能机制.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、脊髓损伤模型组(SCI组)、骨髓间充质干细胞移植组(BMSCs组)和miR-186-5p修饰的骨髓间充质干细胞移植组(miR+BMSCs组),每组10只;除了Sham组,其余三组通过Allen's法建立SCI大鼠模型,移植后第1、7、14、21天对各组大鼠进行运动功能(BBB)评分;HE染色观察各组大鼠脊髓损伤病理学变化;IF检测NeuN表达情况;ELISA检测NT-3含量变化;利用qRT-PCR检测各组大鼠miR-186-5p的表达;荧光素酶实验验证miR-186-5p与FZD3的关系;Western blot方法检测损伤脊髓组织中的FZD3、β-catenin、c-Myc、cyclinD1的表达水平变化.结果 与SCI组相比,BMSCs组和miR+BMSCs组的BBB评分、损伤脊髓组织中NeuN的表达、NT-3的表达以及β-catenin、c-Myc、cyclinD1的蛋白表达均明显升高(P＜0.05),FZD3的蛋白表达明显下降(P＜0.05).FZD3被预测并确认为miR-186-5p的靶基因.与BMSCs组相比,miR+BMSCs组的BBB评分、损伤脊髓组织中NeuN的表达、NT-3的表达以及β-catenin、c-Myc、cyclinD1的蛋白表达显著升高(P＜0.05),FZD3的蛋白表达呈下降趋势(P＜0.05).结论 miR-186-5p修饰的骨髓间充质干细胞移植可通过下调FZD3对SCI大鼠的神经提供保护作用.     

miR-30a通过靶向调控Beclin-1、ATG5影响食管癌细胞自噬及增殖过程北大核心CSCD

目的:探究miR-30a通过靶向调控Beclin-1、ATG5表达对食管癌细胞自噬及增殖过程的影响。方法:靶基因预测、双荧光素酶报告实验验证miR-30a对Beclin-1、ATG5的靶向调控作用。GEO、Human Protein Atlas和GEPIA在线分析TCGA数据库和GTEx项目中食管癌组织及癌旁组织miR-30a、Beclin-1、ATG5表达、患者预后生存期。免疫组化检测45例食管癌及癌旁组织标本Beclin-1、ATG5表达,并分析Beclin-1、ATG5表达与患者临床病理参数的关系。采用脂质体LipofectamineTM3000将靶向Beclin-1、ATG5的miR-30a-mimic转染至Eca-109细胞,体外常规培养并分为3组:未转染组(control组)、转染无义RNA的阴性对照组(mimic NC组)、转染miR-30a-mimic的干扰组(miR-30a组)。MTT和克隆形成实验测定细胞增殖活力;qRT-PCR检测miR-30a、Beclin-1、ATG5 mRNA表达;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭;Western blot检测Beclin-1、ATG5、LC3Ⅱ、p62蛋白表达。透射电镜观察细胞自噬泡形成情况。结果:生信分析结果显示,食管癌组织中miR-30a表达高于正常组织,Beclin-1、ATG5表达低于正常组织,且预后生存期与miR-30a表达呈负相关,与Beclin-1、ATG5表达呈正相关(P<0.05)。与control组和mimic NC组相比,miR-30a组细胞增殖、迁移和侵袭能力、p62蛋白表达明显升高,Beclin-1、ATG5、LC3Ⅱ表达、细胞自噬活力明显降低(P<0.05)。而control组与mimic NC组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-30a靶向调控Beclin-1、ATG5表达;Beclin-1、ATG5在食管癌组织和细胞中表达均降低,具有肿瘤抑制基因作用,可能通过抑制癌细胞增殖、迁移和侵袭、促进自噬发挥抑癌作用,为通过靶向调控自噬途径治疗食管癌提供了新思路。     

辛伐他汀对实验性脑出血大鼠海马神经细胞自噬的影响

目的:观察辛伐他汀治疗对实验性脑出血大鼠海马区神经细胞自噬激活的调控作用。方法:将72只健康成年SD大鼠随机分三组(n=24):假手术组(Sham组)、脑出血组(ICH组)、辛伐他汀组(SIM组)。应用胶原酶诱导法建立脑出血大鼠模型,术后动物完全苏醒后给予辛伐他汀灌胃(3 mg/kg)。采用Garcia法对各组大鼠进行神经功能行为学评分,干湿比重法测定脑组织的水含量;免疫组织化染色学方法检测各组大鼠海马自噬微管相关蛋白1轻链3(Microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)的表达及分布;Westem blot法检测各组大鼠海马自噬基因Beclin-1表达。结果:与脑出血组相比,辛伐他汀治疗明显提高神经功能学评分(P0.05),减少脑组织含水量(P0.05),下调自噬相关蛋白LC3和Beclin-1的表达(P0.05),抑制海马神经元自噬的激活。结论:辛伐他汀能够降低脑出血大鼠海马区神经细胞自噬的激活,进而减轻脑水肿,促进神经功能的恢复。     

c-Jun氨基末端激酶对蛛网膜下腔出血大鼠海马区神经细胞自噬的调节及依达拉奉的影响

目的:探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠海马区神经细胞自噬的调节及依达拉奉的影响。方法:雄性SD大鼠随机分成假手术(Sham)组、SAH组、JNK抑制剂SP600125(SP600125)组和依达拉奉组。采用枕大池2次注血法制作SAH大鼠模型;SP600125组于造模前30min行侧脑室注射SP600125溶液(3μg/μl);依达拉奉组在建模成功后经尾静脉给与依达拉奉(10mg/kg,1次/24小时)。光镜观察海马区神经细胞形态结构;采用硫代巴比妥酸法检测大脑组织丙二醛(MDA)水平;免疫印迹和实时荧光定量PCR法检测海马区磷酸化JNK和自噬标志蛋白(Beclin-1、LC3-Ⅱ)表达水平。结果:SAH组死亡神经细胞数量、MDA水平、磷酸化JNK、Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平高于Sham组;SP600125组死亡神经细胞数量、MDA水平、磷酸化JNK表达低于SAH组,Beclin-1和LC3-Ⅱ表达高于SAH组;依达拉奉组死亡神经细胞数量、MDA水平、磷酸化JNK表达低于SAH组,Beclin-1和LC3-Ⅱ表达高于SAH组;依达拉奉组死亡神经细胞数量、MDA水平低于SP600125组,两组间磷酸化JNK、Beclin-1和LC3-Ⅱ表达,差异无统计学意义。结论:JNK的活化可降低SAH大鼠海马区神经细胞自噬水平,依达拉奉可抑制JNK活化,提高SAH大鼠海马区神经细胞自噬水平,减轻SAH大鼠海马区神经细胞损伤。     

P38 MAPK在大鼠脊髓损伤后胶质瘢痕形成早期对GFAP、vimentin表达的调控作用

目的探讨在大鼠脊髓损伤(SCI)后胶质瘢痕形成早期,p38丝裂原活化蛋白激酶(P38 MAPK)对神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及波形蛋白(vimentin)表达的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham group)、模型组(model group)、P38 MAPK特异性激动剂anisomycin组(anisomycin group)和P38 MAPK特异性抑制剂SB203580组(SB203580group)。脊髓夹伤模型制作成功后即分别在损伤区硬脊膜下注射0.9%氯化钠溶液、anisomycin和SB203580各10μL,假手术组只打开椎板暴露脊髓,不做其他处理。于术后第1、3、7及14天利用BBB评分评定大鼠后肢运动功能,用Western blot和免疫荧光标记技术检测GFAP和vimentin表达。结果术后第14天,模型组BBB评分显著低于假手术组(P0.01);SB203580组大鼠BBB评分显著高于模型组(P0.05)但仍低于假手术组(P0.01),而anisomycin组则显著低于模型组(P0.05)。术后第7和14天,模型组GFAP、vimentin的表达显著高于假手术组(P0.01);SB203580组GFAP、vimentin的表达均显著低于模型组(P0.05)但仍高于假手术组(P0.05),而anisomycin组GFAP、vimentin的表达均显著高于模型组(P0.05)。结论 SCI后胶质瘢痕形成早期P38 MAPK可调控GFAP、vimentin的表达,抑制P38 MAPK可降低GFAP、vimentin的表达,减轻大鼠SCI后胶质瘢痕形成,促进神经功能的恢复。     

大鼠白介素-1β在异氟烷预处理脊髓损伤中的作用

目的:探讨白介素-1β(IL-1β)在异氟烷预处理大鼠脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)时的作用。方法:雄性成年SD大鼠75只,体重250~300 g,将大鼠随机分为3组(n=25):假手术组(S组)、脊髓损伤组(SCI组)、异氟烷预处理组(ISO组)。采用打击法制作脊髓损伤模型。ISO组吸入2%异氟烷2 h,24 h后制备脊髓损伤模型。连续7 d采用BBB评分进行神经功能缺陷评分,免疫荧光标记神经元特异性核蛋白(neuron-specific nuclear protein,NeuN)和白介素-1β的表达,其余动物处死,采用Western Blot法测定白介素-1β的表达水平。结果:与S组比较,SCI组和ISO组神经功能缺陷评分降低,NeuN和IL-1β表达增加,IL-1β蛋白表达上调(P0.05);与SCI组比较,ISO组神经功能缺陷评分增高,NeuN和IL-1β表达下降,IL-1β蛋白表达下调(P0.05)。结论:异氟烷预处理可能通过抑制IL-1β表达,从而减轻大鼠脊髓损伤。     

舒芬太尼联合右美托咪啶对脊髓损伤大鼠的治疗及可能机制

目的探讨舒芬太尼联合右美托咪啶对脊髓损伤大鼠的治疗及可能机制。方法 Allen's法建立脊髓损伤模型,将SD大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(SCI组)和舒芬太尼与右美托咪啶联合治疗组(SD组);对各组大鼠脊髓运动功能(BBB)进行评分;应用HE染色检测各组大鼠脊髓的组织病理学变化;采用ELISA检测IL-10、IL-6及TNF-α水平变化;化学方法检测各组大鼠脊髓组织中MDA、CAT、SOD、GSH-Px等蛋白的表达情况;IHC检测各组脊髓组织中的HMGB1、TLR4表达;Western blot法检测HMGB1、TLR4、Bcl-2和Bax的表达水平。结果 HE染色结果显示,两种药物的联合治疗能降低脊髓中炎症性中性粒细胞的浸润;与SCI组相比,SD组大鼠BBB评分显著升高,血清SOD、CAT、GSH-Px含量升高,MDA含量降低,脊髓组织中IL-10与Bcl-2的表达水平明显升高,TNF-α、IL-6、Bax、HMGB1及TLR的表达明显下降(P0.05)。结论舒芬太尼与右美托咪啶联合应用能够改善大鼠的脊髓损伤,其机制可能与下调HMGB1/TLR4信号通路有关。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体通过miR-210介导大鼠脊髓损伤后的神经保护作用

为探究抗凋亡miR-210是否参与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell, BMSC)来源外泌体对脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)的保护作用,采用全骨髓贴壁法培养BMSC,并通过ExoQuick外泌体提取试剂盒提取并标记BMSC-外泌体,于透射电子显微镜(transmission electron microscope, TEM)下观察BMSC-外泌体形态。将大鼠随机分为5组:假手术组(Sham)、SCI模型组、SCI+BMSC-外泌体组、SCI+外泌体-miR-210抑制剂组及SCI+外泌体-miR-210抑制剂-NC组。于大鼠SCI造模后1 h尾静脉注射BMSC-外泌体或PBS干预。于损伤后不同时间点评估各组SCI大鼠的行为学评分(Basso-Beattie-Bresnahan, BBB);尼氏(Nissl)染色观察大鼠脊髓神经元的功能状况;RT-qPCR检测BMSC miR-210表达;Western blotting检测损伤脊髓组织Bax、Bcl-2、cleaved caspase-3和caspase-3蛋...     

大鼠脊髓损伤后不同时间自噬相关蛋白beclin-1和神经元超微结构的变化

目的:观察大鼠脊髓腰段全横断损伤后beclin-1及脊髓神经元超微结构的变化。方法:雄性Wistar大鼠随机分成损伤后6 h,1、3、7、14 d和21 d及假手术组共7组。脊髓损伤组用手术刀片横切腰段。电镜观察脊髓损伤以下神经元内超微结构形态学变化,免疫印迹检测beclin-1蛋白的表达。结果:脊髓损伤早期出现自噬体和自噬溶酶体,神经元内细胞器以退行性变化为主,随着时间延长,神经元超微结构出现明显改变;脊髓损伤后6 h,1、3、7、14 d和21 d,与假手术组相比,大鼠脊髓组织中beclin-1蛋白明显增加,差异有统计学意义;脊髓损伤后3 d beclin-1蛋白表达最高,7 d开始降低,21 d降到最低。结论:脊髓腰段全横断损伤后神经元自噬活动增强,beclin-1可反映神经元自噬状态的变化。