小鼠乳腺癌干细胞免疫相关分子表达和免疫浸润的分析

目的 分析小鼠乳腺癌干细胞（BCSCs）中免疫相关分子的表达和肿瘤组织中免疫细胞的浸润。方法 用成球培养的方法在体外富集小鼠乳腺癌细胞系4T1和4T07的肿瘤干细胞（CSCs）;用实时定量PCR检测BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达;用小鼠乳腺癌原位移植瘤模型和流式细胞测量术分别检测脾脏和肿瘤组织中各类免疫细胞的比例。结果 用成球培养的方法可以成功富集小鼠乳腺癌干细胞4T1和4T07;与贴壁培养的肿瘤细胞相比,小鼠BCSCs中免疫检查点和抗原递呈相关基因的表达有明显差异（P<0.05）。体内的结果表明,与贴壁肿瘤细胞来源的肿瘤组织相比,肿瘤干细胞来源的肿瘤组织中浸润更多的CD4⁺ T和CD8⁺ T细胞（P<0.05）,但是CD11b⁺ F4/80⁺的巨噬细胞浸润更少（P<0.05）。结论 小鼠BCSCs中免疫检查点与抗原递呈相关基因的表达有改变,且在体内可招募更多的T细胞到肿瘤组织中去。     

敲减抗增殖蛋白2促进非小细胞肺癌细胞系A549凋亡

目的 探讨抑制抗增殖蛋白2(PHB2)表达对非小细胞肺癌细胞系A549凋亡的影响及机制。方法 慢病毒感染非小细胞肺癌细胞系A549,建立敲减PHB2的稳转细胞株，用动力相关蛋白1(DRP1)抑制剂Mdivi-1处理敲减PHB2的A549细胞。Western blot检测PHB2、p-DRP1(Ser616)和DRP1蛋白表达水平；TUNEL染色和annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡；MitoTracker染色评估线粒体分裂情况；用相应试剂盒检测线粒体含量、柠檬酸合酶活性和细胞色素c含量。结果 与shCtrl组相比，shPHB2组A549细胞凋亡率增加(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂增加(P<0.05),ATP含量减少(P<0.05),柠檬酸合酶活性降低(P<0.05),线粒体内细胞色素c减少(P<0.05)。与shPHB2组相比，shPHB2+Mdivi-1组A549细胞凋亡率减少(P<0.05),DRP1介导的线粒体分裂减少(P<0.05),ATP含量增加(P<0.05),柠檬酸合酶活性增加(P<0.05)...     

肝癌干细胞分离及其细胞生物学特性

背景：正常干细胞和肿瘤干细胞在基因表达和依赖的细胞信号通路上应该存在不同,如何发现能选择性杀伤肿瘤干细胞的治疗手段是一个仍然需要大量研究的课题。 目的：分离人肝癌细胞系肿瘤干细胞MHCC97,分析其细胞生物学特性。 方法：采用流式细胞技术在人高转移肝癌细胞系MHCC97中筛选肿瘤干细胞,分离正常人肝脏干细胞CD133^-CD34^- MHCC97和人肝癌细胞系肿瘤干细胞CD133⁺CD34⁺ MHCC97,分别检测其表型、生长曲线、细胞周期和多系分化能力。 结果与结论：人肝癌细胞系CD133⁺CD34⁺ MHCC97肿瘤干细胞的表型为CD133⁺CD34⁺ ,人肝癌细胞系CD133⁺CD34⁺ MHCC97具有与CD133^-CD34^- MHCC97相似的细胞曲线和生长周期,可以向上皮和内皮细胞分化,并表达相应特异性的分子标志。提示人肝癌细胞系中CD133⁺CD34⁺MHCC97细胞具有肿瘤干细胞的特性,可以向内皮和上皮细胞分化,同时具有肿瘤干细胞的生物学特性,是肿瘤复发转移的根源,也是临床治疗的靶点。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

人骨骼肌源性血管外膜细胞对人脐血CD34+细胞的体外造血支持作用#br#

文题释义： 血管外膜细胞：是血管周围星状细胞,分布于全身的毛细血管和微血管的管壁,是血管周围微环境的重要核心组成成分。它们表达CD146、NG2、PDGFRβ、LepR、Nestin等标记物,而不表达内皮细胞标记物CD144、vWF、CD31及造血细胞标记物CD34、CD45、CD14。研究显示血管外膜细胞是间充质干细胞的前体细胞,其表达间充质干细胞表面标记物,具有多向分化潜能,并可支持造血。 造血干细胞微环境：是造血组织中造血干细胞赖以生存并进行自我更新、多向分化的场所。它由骨内膜微环境和血管微环境组成,前者维持造血干细胞的静止及自我更新,后者促进造血干细胞动员、增殖、分化。 背景：研究显示血管外膜细胞是间充质干细胞的前体细胞,其通过细胞接触或旁分泌效应调节造血干细胞的行为并支持造血,人骨骼肌源性血管外膜细胞对造血的支持作用有待于研究。 目的：从人骨骼肌中分离培养血管外膜细胞并进行生物学特性鉴定,研究其对脐血CD34⁺细胞的体外支持作用。 方法：①利用多参数流式细胞术从人骨骼肌中分选表型为CD146⁺CD56^-CD34^-CD144^-CD45^-的血管外膜细胞,并对其进行生物学鉴定;②建立以CD146⁺人骨骼肌源性血管外膜细胞为滋养层的脐血CD34⁺细胞体外培养体系(实验组),以人骨髓间充质干细胞为滋养层的脐血CD34⁺细胞体外培养体系为阳性对照组,共培养1,2,4周检测培养体系的细胞数量、集落形成能力及免疫表型并进行统计分析。 结果与结论：①通过多参数流式细胞术分选出CD146⁺人骨骼肌源性血管外膜细胞,回测纯度为(91.5±1.85)% (n=5);其表达间充质干细胞表面抗原CD73、CD90、CD105、CD44,不表达造血细胞及内皮细胞表面抗原CD45、CD34、CD31;经诱导培养可向骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞及肌细胞分化;②实验组与阳性对照组相比,在细胞数、集落形成能力及免疫表型方面(CD45⁺、CD34⁺CD33^-、CD14⁺、CD10⁺/CD19)差异均无显著性意义(P > 0.05,n=6);无滋养层的空白对照组培养1周时细胞数量明显减少,2周时几乎无细胞存活;③结果表明,CD146⁺人骨骼肌源性血管外膜细胞与人骨髓间充质干细胞一样对脐血CD34⁺细胞具有体外支持作用。 ORCID: 0000-0002-6768-5273(郑波) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

青藤碱对缺氧微环境诱导的甲状腺乳头状癌细胞“干性”的影响及机制研究

目的：探讨青藤碱(SME)对缺氧微环境诱导的甲状腺乳头状癌细胞“干性”的影响及机制。方法：采用不同浓度(0.25、0.5和1 mmol/L)的SME处理缺氧条件下的人甲状腺乳头状癌TPC-1细胞或采用1 mmol/L SME处理缺氧条件下小泛素相关修饰蛋白(SUMO)特异性蛋白酶1(SENP-1)基因过表达的TPC-1细胞。流式细胞术检测肿瘤干细胞亚群(CD44⁺CD24^-)比例；qRT-PCR检测肿瘤干细胞标志物Nanog、八聚体结合转录因子4(OCT4)和SRY盒转录因子2(SOX2)的mRNA表达水平；肿瘤细胞成球实验观察细胞的干性特征；Western blot检测细胞中SENP-1、SUMO1和低氧诱导因子1α(HIF-1α)的蛋白表达水平；试剂盒法检测细胞中HIF-1α蛋白SUMO化水平；免疫荧光染色检测细胞中HIF-1α蛋白分布情况。结果：SME可呈浓度依赖性降低缺氧微环境下TPC-1细胞中干细胞亚群(CD44⁺CD24^-)比例，下调肿瘤干细胞标志物Nanog、OCT4和SOX2的mRN...     

miR-486对胶质瘤干细胞的抑制作用

背景：既往研究发现,miR-486在胶质瘤干细胞(CD133⁺)中的表达水平显著低于其在胶质瘤非干细胞(CD133^-)中的表达水平,但是miR-486对CD133⁺细胞的影响尚不明确。 目的：探索miR-486对CD133⁺细胞的作用。 方法：利用流式细胞分选将U87胶质瘤细胞中分为CD133⁺和CD133^-细胞。通过脂质体转染构建miR-486过表达的胶质瘤干细胞。 结果与结论：流式细胞分选和纯化获得高比率的CD133⁺胶质瘤干细胞。实时反转录PCR检测发现miR-486在CD133⁺胶质瘤干细胞的表达水平比CD133^-胶质瘤细胞明显下降。脂质体转染成功构建miR-486过表达的胶质瘤干细胞,体外实验发现miR-486高表达抑制胶质瘤干细胞的增殖,将其阻滞于G₁/S期,并促进凋亡。提示miR-486对胶质瘤干细胞具有抑制作用。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人脐血间充质干细胞的体外成骨

背景：用免疫细胞阴性筛选法可以排除造血干细胞对于间充质干细胞生长的影响,较快的获得具有表达间充质干细胞的细胞群。 目的：探讨人脐静脉血间充质干细胞向成骨样细胞分化的能力。 方法：用免疫磁珠阳性筛选法分离脐血间充质干细胞后进行培养。取P2代细胞行成骨诱导分化。 结果与结论：人脐血间充质干细胞贴壁生长,长梭形,3周长满瓶底,传代后细胞增殖迅速。细胞表型为高表达CD44⁺,CD29⁺和CD166⁺。在成骨诱导后碱性磷酸酶染色阳性,Von-Kossa染色提示钙化结节形成。提示脐血间充质干细胞能够在体外分化为成骨样细胞。     

红景天苷负向调控TACC2表达抑制NSCLC细胞增殖及上皮间充质转化

目的 探讨红景天苷(SAL)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系增殖、凋亡以及上皮间充质转化(EMT)的影响,并明确其作用的分子机制。方法 收集22例肺癌患者的癌组织及癌旁组织;并体外培养肺癌细胞系(A549、H358、H1299、H1650);RT-qPCR分别检测肺癌组织以及肺癌细胞系中转化酸性卷曲螺旋蛋白2(TACC2)的表达。不同浓度SAL处理细胞(A549、H1299)后,流式细胞测量术、CCK-8法分别检测细胞凋亡、增殖;Western blot检测细胞(A549、H1299)内E-cadherin、N-cadherin、TACC2表达以及p38磷酸化水平。转染pcDNA3.0-TACC2质粒后,检测过表达TACC2对细胞增殖、凋亡水平以及EMT的影响。结果 肺癌组织中TACC2的相对表达量显著高于癌旁组织,肺癌细胞系TACC2表达水平显著高于人胚肺成纤维细胞系(HFL-1)(P<0.05)。不同浓度SAL处理后,细胞增殖水平显著降低,凋亡率显著上升(P<0.05)。SAL能够显著降低A549以及H1299细胞内TACC2的表达水平,细胞内E-cadherin表...     

siRNA干扰Notch1抑制肺癌干细胞脊柱转移瘤的生长

目的研究Notch受体1(Notch receptor 1,Notch1)在肺癌脊柱转移瘤中的表达,并探讨Notch1 siRNA对肺癌干细胞(lung cancer stem cells,LCSCs)迁移能力和脊柱转移瘤生长的影响。方法通过Western blotting法检测Sox2、Oct4和Notch1蛋白在肺癌脊柱转移瘤组织中的表达水平。通过lipofectamine 2000将Notch1 siRNA转染到肺癌干细胞(A549-CSC),Transwell法检测Notch1 siRNA对A549-CSC迁移能力的影响;将BALB/C裸鼠分为两组:control siRNA组和Notch1 siRNA组,分别通过左心室注射control siRNA和Notch1 siRNA转染的A549-CSC,通过Mic-CT检测小鼠脊柱转移瘤的生长。结果Western blot检测结果显示,Sox2、Oct4和Notch1蛋白在脊柱转移瘤组织中的表达显着高于癌旁对照组(P<0.01);Transwell结果显示,与control siRNA组比较,Notch1 siRNA组细胞迁移率显著降低(P<0.01);Mic-CT结果显示,与control siRNA组比较,Notch1 siRNA组小鼠脊柱转移瘤生长显著降低。结论siRNA干扰Notch1能够抑制LCSCs迁移能力,抑制小鼠肺癌脊柱转移瘤的生长。     

信号素4A对SLE患者T细胞功能的影响

目的：分析信号素4A(Sema4A)在系统性红斑狼疮(SLE)患者的表达水平，探讨Sema4A对SLE患者T细胞的影响。方法：(1)收集37例SLE患者为实验组，28例健康体检者为对照组。采用ELISA检测血浆中可溶性Sema4A的浓度，流式细胞术(FCM)分析各组外周血细胞中CD3⁺CD8^-IFN-γ⁺(Th1)、CD3⁺CD8^-IL-4⁺(Th2)、CD3⁺CD8^-IL-17⁺(Th17)细胞在Th细胞中的占比；(2)采用密度梯度离心法和免疫磁珠法分选SLE患者及健康体检者外周血CD4⁺T细胞后加入抗人CD3和抗人CD28，并在有或无人重组Sema4A蛋白/抗Sema4A抗体的条件下培养5 d后，采用FCM检测CD4⁺T细胞膜上CD25的表达；在上述相同培养体系中加入荧光染料CFSE，同样培养5 d，采用FCM检测CD4⁺...     

血红素加氧酶1在间充质干细胞上调哮喘患者外周血调节性T细胞中的作用

背景：上调CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞是目前治疗哮喘的新靶点。骨髓间充质干细胞在体外可上调正常人外周血的调节性T细胞,但机制尚未明确。 目的：观察血红素加氧酶1对间充质干细胞上调哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的影响。 方法：分别加入0,15,30,45,60 μmol/L氯化高铁血红素和0,5,10,15,20 μmol/L锌-原卟啉对骨髓间充质干细胞进行预处理,荧光定量PCR检测各组间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA的表达量。密度梯度离心法分离哮喘急性发作期患者和健康对照者的外周血单个核细胞,分别与经氯化高铁血红素预处理、经锌-原卟啉预处理、不经预处理的间充质干细胞共孵育,加入植物血凝素反应72 h,流式细胞仪检测各组CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞占CD4⁺T细胞的比例。 结果与结论：人骨髓间充质干细胞中有血红素加氧酶1表达,其表达在体外可被诱导和抑制。间充质干细胞中血红素加氧酶1 mRNA的表达量随氯化高铁血红素浓度增加而增加(P < 0.05),随锌-原卟啉浓度增加而减少(P < 0.05),具有剂量依赖性。间充质干细胞在体外可提高哮喘患者和健康对照者CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的水平(P < 0.01),诱导间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞水平提高(P < 0.01),抑制间充质干细胞中血红素加氧酶1的表达可使共孵育后CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞的水平降低(P < 0.01),但仍高于对照组(P < 0.01)。提示骨髓间充质干细胞部分通过血红素加氧酶1上调哮喘患者外周血CD4⁺CD25⁺CD127^low/-调节性T细胞。     

心脏成纤维细胞生物表型多样性

目的 探讨心脏成纤维细胞（CFs）生物表型多样性。方法 新生1～3天SD大鼠12只,胰蛋白酶/胶原酶联合消化法分离培养新60只生大鼠CFs,比较原代和传代培养细胞形态学变化,免疫组织化学学检测鉴定常见成纤维细胞标记波形蛋白（vimentin）、成纤维细胞特异性蛋白1（FSP1）和盘状结构域受体（DDR2）的表达,细胞免疫荧光检测CFs干细胞标记nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90的表达,细胞免疫荧光三标技术检测CFs干细胞标记间的共表达情况。 结果 酶联合消化法分离培养的CFs收获细胞量大,第3代细胞活力好、纯度高。Vimentin、FSP1和DDR2在CFs中均表达,但DDR2在CFs中呈强表达。部分CFs分别表达nanog、c-kit、sca-1、CD73和CD90,部分nanog阳性的CFs分别和CD73、CD90和sca-1,及其CD90和sca-1存在共表达,nanog⁺ /CD73⁺共表达阳性率最高（59.02%±8.39%）,与其他3组相比差异均有极显著性（P<0.01）;而 nanog⁺ /CD90⁺共表达阳性率与nanog⁺ /sca-1⁺之间差异无显著性（P>0.05）,但这两组与CD90⁺ /sca-1⁺相比差异均有极显著性（P<0.01）;CD90⁺ /sca-1⁺共表达阳性率均低于其他3组,差异具有极显著意义（P<0.01）。 结论 CFs是具有干细胞特征混合细胞群,在表型上具有多样性。     

补中益气汤调节肺腺癌裸鼠移植瘤GSK-3β活性表达干预顺铂耐药

目的 探讨补中益气汤调节A549/DDP荷瘤裸鼠移植瘤GSK-3β活性表达干预顺铂耐药的机制研究。方法 体外培养A549/DDP细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,8 d后成瘤,隔天开始分别给予低剂量(1.46 g·kg^-1)、中剂量(2.91 g·kg^-1)、高剂量(5.82 g·kg^-1)补中益气汤治疗25d。30只裸鼠随机分为A549/DDP荷瘤对照组(A组)、A549/DDP荷瘤+顺铂组(B组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组(C组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组(D组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组(E组),测量移植瘤质量并计算药物抑瘤率;蛋白质印迹法检测移植瘤组织中胞浆、胞核的GSK-3β、p-GSK-3β^{se r9}、p-GSK-3β^{tyr 216}蛋白表达。结果 顺铂联合补中益气汤可使移植瘤质量逐渐缩小,抑瘤率逐渐增加,呈现剂量依赖性。顺铂联合补中益气汤可显...     

老年初诊急性髓细胞白血病患者CD4+CD25+调节性T细胞的表达

背景：研究证实,很多恶性肿瘤患者体内CD4⁺CD25⁺调节性T细胞存在高表达,近期也有研究发现,急性髓细胞白血病患者外周血CD4⁺CD25⁺调节性T细胞同样表现出高比例表达。 目的：分析老年初诊急性髓细胞白血病患者CD4⁺CD25⁺调节性T细胞的表达特点。 方法：纳入初诊急性髓细胞白血病患者92例,将年龄在60岁以下者设为中青年组(n=22),年龄在60岁以上者设为老年观察组(n=70)。在老年观察组中,32例经规范化疗后完全缓解,设为完全缓解组;将余下38例设为老年组,依据FAB分型标准,分为M2 6例、M3 19例、M4 7例、M5 6例。另选择同期体检健康人群42名作为正常对照组。抽取受试者外周静脉血,检测CD4⁺CD25⁺调节性T细胞表达情况。 结果与结论：老年组、完全缓解组CD4⁺CD25^highFOXP3⁺调节性T细胞比例高于正常对照组(P < 0.01),并且老年组CD4⁺CD25^high FOXP3⁺调节性T细胞比例高于完全缓解组(P < 0.01)。老年组、完全缓解组CD4⁺FOXP3⁺T细胞比例高于正常对照组(P < 0.01),并且老年组CD4⁺ FOXP3⁺T细胞比例高于完全缓解组(P < 0.01)。老年组CD4⁺CD25^high FOXP3⁺调节性T细胞与CD4⁺ FOXP3⁺T细胞比例高于中青年组(P < 0.01)。老年组不同分型间CD4⁺CD25^high FOXP3⁺调节性T细胞和CD4⁺ FOXP3⁺T细胞比例比较差异均无显著性意义(P > 0.05)。Pearson相关性检验结果显示,老年初诊急性髓细胞白血病患者外周血CD4⁺CD25^high FOXP3⁺调节性T细胞比例和CD4⁺ FOXP3⁺T细胞比例呈正相关(r=0.87,P=0.019)。表明老年初诊急性髓细胞白血病患者CD4⁺CD25⁺调节性T细胞比例高于健康人群和中青年急性髓细胞白血病患者。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

酸性成纤维细胞生长因子与胚胎干细胞的造血分化

背景：有研究表明,在卵黄囊造血、胎肝造血和胚胎干细胞向造血干细胞分化过程中,酸性成纤维细胞生长因子可强烈表达。 目的：探讨酸性成纤维细胞生长因子对小鼠胚胎干细胞造血分化的作用,在拟胚体培养阶段施加酸性成纤维细胞生长因子,验证酸性成纤维细胞生长因子对造血形成细胞产生的调控作用。 方法：培养小鼠胚胎干细胞,将饲养层上生长状态良好的小鼠胚胎干细胞用胰酶消化成单个细胞后,利用悬滴法制备拟胚体,拟胚体继续悬浮培养,以1,2和5 μg/L酸性成纤维细胞生长因子分别培养3,5,7,9 d,通过免疫荧光法检测胚胎干细胞与拟胚体中酸性成纤维细胞生长因子的表达,流式细胞术检测Flk-1⁺与CD133⁺阳性细胞率。 结果与结论：酸性成纤维细胞生长因子在拟胚体中呈阳性表达。在5 μg/L酸性成纤维细胞生长因子作用下,Flk-1⁺细胞随时间增加表达增加,CD133⁺细胞表达模式与Flk-1⁺细胞类似。在1 μg/L时,Flk-1⁺细胞在7 d时表达达到高峰,随后下降。CD133⁺细胞表达结果类似。而在2 μg/L时,5 d时Flk-1⁺细胞表达升高,随后下降,在9 d时表达又增高。而CD133⁺细胞则总体呈现升高趋势。酸性成纤维细胞生长因子可促进Flk-1⁺与CD133⁺细胞的产生,证明酸性成纤维细胞生长因子能够有效促进拟胚体的扩增以及成血管血液干细胞的产生与增殖。     

BM-MSCs来源外泌体介导铁死亡减轻大鼠心肌细胞系H9c2缺氧/复氧损伤

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)来源外泌体对大鼠心肌细胞系H9c2缺氧/复氧(A/R)损伤的保护作用及其分子机制。方法 构建H9c2细胞A/R损伤模型；采用电镜、Western blot鉴定BM-MSCs来源外泌体(BM-MSCs-exos);PHK26红色荧光标记外泌体并观察H9c2细胞内吞现象；采用CCK-8法检测细胞活力，EdU细胞增殖实验检测细胞增殖活性；铁死亡相关检测试剂盒测定Fe²⁺、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量，流式细胞测量术检测活性氧自由基(ROS)水平。结果 成功鉴定BM-MSCs-exo并观察到H9c2细胞内吞外泌体；与A/R组比较，A/R+BM-MSCs-exo组细胞活力与增殖能力得到明显改善(P<0.05);铁死亡标志蛋白GPX4、SLC7A11升高，转铁蛋白受体1(TFR1)表达降低(P<0.05); Fe²⁺离子、MDA、ROS水平降低，GSH水平升高(P<0.05)。铁死亡诱导剂Erastin处理后，发现BM-MSCs-exo对H9c2细胞A/R损伤的保护作用显著降低(P...     

低氧微环境对非小细胞肺癌细胞系A549细胞增殖和侵袭的影响

目的探讨低氧对肺癌细胞系A549增殖和侵袭的影响及其可能的分子机制。方法将体外培养的非小细胞肺癌细胞系A549分别置于常氧和低氧环境下刺激24 h,采用CCK8法检测细胞的增殖能力;Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力;Real time-PCR和Western blot法检测细胞中Wnt/β-catenin mRNA和蛋白的表达水平;并进一步使用β-catenin特异性siRNA阻断其表达,并检测。结果体外低氧微环境可显著促进肺癌细胞系A549的增殖和侵袭,并可激活Wnt/β-catenin信号通路;而抑制Wnt/β-catenin信号通路则能有效抑制低氧介导的肺癌细胞增殖与侵袭。结论低氧微环境通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进非小细胞肺癌细胞系A549的增殖和侵袭转移。     

CD133+卵巢癌干细胞样细胞在血管内皮细胞中的分化

背景：大量研究证实,新生血管形成在肿瘤的生长、浸润以及转移过程中发挥重要作用。 目的：探讨CD133+卵巢癌干细胞样细胞向血管内皮细胞分化的特点。 方法：通过无血清培养方法从卵巢癌A2780细胞株中成功诱导出CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞,在体外接种于铺或不铺Matrigel基质胶的96孔板内,观察不同时间点CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞形成管腔样结构能力。通过裸鼠皮下移植实验,免疫荧光法观察CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞在卵巢癌血管新生中的作用。 结果与结论：CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞和人脐静脉内皮细胞(阳性对照)在未铺 Matrigel基质胶上并不能形成相应的管腔结构,且不表达内皮细胞标志物CD31,在Matrigel基质胶上能够形成相对稳定的管腔结构,CD31表达明显。CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞接种裸鼠皮下成瘤后,可观察到肿瘤组织中有人源性CD31的表达。结果表明CD133⁺卵巢癌干细胞样细胞能够分化为血管内皮细胞,参与肿瘤血管重建。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

小鼠骨髓来源Flk-1+间充质干细胞分离制备与生物学特点

背景：骨髓间充质干细胞具有广泛的应用前途,其三系分化的能力和免疫诱导特性使其具有再生医学的应用前景。 目的：从小鼠骨髓中研究分离制备Flk-1⁺间充质干细胞的新方法,检测了这类细胞的生物特性。 方法：以小鼠骨髓为研究对象,分离单个核细胞,体外培养并 扩增原始间充质干细胞,检测它们的细胞周期、表型和多系分化的能力。 结果与结论：小鼠来源的骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G₀/G₁期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,小鼠骨髓来源Flk-1⁺间充质干细胞在光镜下均呈成纤维样或多角型贴壁生长,在体外相应的诱导液环境中均可以向三系分化。提示小鼠骨髓来源Flk-1⁺间充质干细胞具有多向分化潜能。     

磁珠分选U251细胞系中的CD133+细胞及其生物学特性

背景：脑肿瘤干细胞理论认为,脑肿瘤干细胞是脑肿瘤细胞中“种子”细胞,是脑肿瘤发生、浸润和复发的关键细胞。 目的：观察人多形性胶质母细胞瘤U251细胞系中CD133⁺细胞的增殖、分化及体内致瘤性等生物学特性。 方法：运用磁珠分选技术分选U251细胞系中的CD133⁺和CD133^-细胞亚群;MTT法绘制两个亚群细胞的生长曲线;单克隆形成率实验检测2个亚群细胞的增殖能力;免疫荧光检测CD133⁺细胞亚群的多向分化能力;裸鼠移植实验检测2个亚群细胞在裸鼠体内致瘤性的差异。 结果与结论：U251细胞系中只有约4.5%的CD133⁺细胞;分选后的CD133⁺细胞能增殖形成典型的脑肿瘤干细胞球,生长曲线显示CD133⁺细胞增殖能力明显强于CD133^-细胞;单克隆形成率实验显示CD133⁺细胞能形成脑肿瘤干细胞球的细胞比率达到78.5%~92.4%,而CD133^-细胞仅有0.8%~2.4%;CD133⁺细胞能分化为具有GFAP和NeuN成熟表型的肿瘤细胞;CD133⁺的致瘤率为71.42%,而CD133^-细胞无致瘤性。提示U251细胞系中存在少量具有增殖、多向分化与体内致瘤能力的CD133⁺细胞,CD133⁺细胞是符合肿瘤干细胞定义的细胞亚群。